SU11248干预白血病细胞HL-60对P27KIP1和cyclin G蛋白表达的影响

目的:探讨SU11248对人髓系白血病细胞株HL-60的效应及其对HL-60细胞表达P27KIP1和cyclin G蛋白改变的影响.方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;采用Western blot检测SU11248干预HL-60细胞前后P27KIP1和cyclinG蛋白表达水平的变化及其相关性.结果:不同浓度(0.5、 1.0、 2.0、 4.0、 8.0 mg/L)SU11248作用HL-60细胞24 h、 48 h、 72 h、 96 h后, SU11248可抑制HL-60细胞增殖, 抑制作用呈现剂量和时间依赖性, 半数抑制浓度(IC50)约为2.0 mg/L.2.0 mg/L SU11248作用HL-60细胞72 h时抑制率达到最高.2.0 mg/L SU11248作用HL-60细胞后cyclinG蛋白表达呈时间依赖性降低, 而P27KIP1蛋白表达呈时间依赖性升高.两蛋白各时间组的改变与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论:SU11248具有抑制HL-60细胞增殖的生物效应, 在HL-60细胞及SU11248干预HL-60细胞过程中, P27KIP1 基因可能对cyclinG基因及细胞周期发挥负性调控作用.SU11248通过上P27KIP1、下调cyclin G而干扰细胞周期可能是其发挥抑制肿瘤细胞分裂的环节之一.     

SU11248对骨髓瘤细胞U266增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨SU11248对骨髓瘤细胞U266的生物学效应的影响及其作用机制.方法:应用MTT法检测SU11248对U266细胞增殖能力的影响;用流式细胞技术检测细胞的DNA倍体及细胞周期变化、用凝胶电泳分析DNA片段化、用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测SU11248对U266细胞凋亡的影响;以RT-PCR法检测3.0 μg/ml SU11248作用U266细胞后c-myc、hTERT、Bcl-2、Bax mRNA表达变化.结果:SU11248可明显抑制U266细胞增殖(P＜0.05),呈现剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为3.0 μg/ml.SU11248可将U266细胞阻滞于G0/G1期,并呈现剂量依赖性;能诱导U266细胞呈现典型的DNA梯状带;促进细胞原位凋亡.3.0 μg/ml SU11248作用后,U266细胞c-myc、hTERT、Bcl-2 mRNA表达水平呈时间依赖性降低,而Bax mRNA表达水平呈时间依赖性增强.结论:SU11248能抑制U266细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调U266细胞Bcl-2、c-myc和hTERT的表达及上调Bax的表达有关.     

SU11248对骨髓瘤细胞U266作用机制的研究

目的:探讨SU11248抑制骨髓瘤细胞U266增殖及促凋亡作用的机制。方法:MTT法检测以IC50为3.0μg/ml的SU11248作用不同时间后U266细胞的增殖情况;免疫蛋白印迹技术(Western blot)检测3.0μg/ml SU11248处理U266细胞不同时间后人Akt、p-Akt、p73、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达变化。结果:SU11248可明显抑制U266细胞增殖,且呈现时间依赖性;免疫印迹技术检测显示,3.0μg/ml SU11248处理U266细胞不同时间后Akt无明显变化,p-Akt、Bcl-2、Caspase-3前体蛋白表达呈时间依赖性降低,而p73蛋白、Caspase-3剪接体蛋白表达呈时间依赖性增强。结论:SU11248抑制U266细胞增殖及诱导其凋亡作用与抑制Akt蛋白磷酸化、下调Bcl-2蛋白的表达、上调p73蛋白及Caspase-3蛋白的活化有关。     

SU11248诱导K562白血病细胞凋亡的分子机制研究

目的:研究SU11248(舒尼替尼)诱导慢性骨髓性白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法:采用CCK-8比色检测SU11248对K562细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测K562细胞周期变化;间接免疫荧光检测凋亡相关蛋白的表达及定位;免疫印迹检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:CCK-8比色显示SU11248可明显抑制K562细胞增殖(P<0.05),呈现剂量和时间依赖性。FCM显示该药可阻滞K562细胞于G0/G1期。间接免疫荧光染色可见SU11248组细胞色素C(Cyto C)在胞质中呈弥散或粗块状分布,而p53、p73及NF-κB p65均主要定位于胞质,较对照组表达差异不明显。免疫印迹显示,随时间延长,SU11248组较对照组Bcl-2表达呈下降趋势,Bax和Cyto C表达呈增加趋势,同时有Caspase-9和Caspase-3的激活,而p53、p73及NF-κB p65表达变化不明显。结论:SU11248可通过阻滞细胞周期进程及激活内源性线粒体凋亡通路诱导K562细胞调亡。     

Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制。方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48 h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48 h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达。结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达。结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用。     

SU11248对鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响及其机制

目的 研究苹果酸舒尼替尼(SU11248)对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 用SU11248处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-2,采用MTT法检测SU11248对CNE-2细胞增殖能力的影响;经2.5pg/mL SU11284作用不同时间后采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测CNE-2细胞中P27KIP1、cyclin G1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 SU11248可抑制CNE-2细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.5 μg/mL.SU11248作用CNE-2后cyclin G1 mRNA和蛋白呈时间依赖性降低(P＜0.05),而P27KIP1 mRNA和蛋白呈时间依赖性升高(P＜0.05).结论 SU11248能明显抑制CNE-2细胞增殖,可能通过上调P27KIP1、下调cyclin G1而发挥作用.     

8-硝基白杨素抑制HL-60细胞系增殖及促凋亡

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞株 HL-60 细胞增殖和诱导凋亡作用。方法 用MTT法检测HL-60细胞增殖活性;胎盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;DNA凝胶电泳观察HL-60细胞凋亡;流式细胞术检测HL-60细胞凋亡率。结果 NOChR对HL-60细胞增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;NOChR能有效地诱导HL-60细胞凋亡,呈浓度依赖性。结论 NOChR具有抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

背景：海洋珍珠生物提取液中富含锗、硒等微量元素。 目的：观察海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。 方法：MTT法检测0,6,30,45,60,75,150 mg/L海洋珍珠生物提取液对Hela细胞增殖的影响;0,6,30,60 mg/L海洋珍珠生物提取液干预Hela细胞后,流式细胞仪Annexin V和PI双染检测细胞凋亡率,PI单染法测定细胞周期,RT-PCR法测定细胞株内bcl-2,bax基因表达。 结果与结论：6~45 mg/L海洋珍珠生物提取液对Hela细胞增殖有抑制作用,表现出浓度依赖性和时间依赖性(P < 0.05),在60~150 mg/L范围内只表现出了浓度依赖性(P < 0.05),无时间依赖性。6~60 mg/L海洋珍珠生物提取液呈浓度依赖性促进Hela细胞凋亡,使细胞阻滞在G1期;30,60 mg/L海洋珍珠生物提取液可降低细胞内bcl-2 mRNA表达,升高bax mRNA表达。说明海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性的方式抑制Hela细胞增殖,并通过降低bcl-2 mRNA,升高bax mRNA来诱导细胞凋亡。关键词：海洋珍珠生物提取液;宫颈肿瘤;细胞增殖;细胞凋亡;bcl-2;bax doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.033     

尼美舒利对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长调控作用的研究

目的 研究尼美舒利(nimesulide,NIM)体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长抑制和诱导凋亡的作用,对其机制做进一步探讨.方法 MTT法检测不同浓度、时间NIM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制率;流式细胞技术分析细胞周期变化,计算细胞凋亡率;免疫组织化学检测bcl-2,bax,cox-2蛋白表达变化;RT-PCR半定量检测COX-2 mRNA表达改变;ELISA法检测PGE2水平变化.结果 NIM可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,呈浓度、时间依赖性;不同浓度NIM处理48h后,细胞内Bcl-2、COX-2蛋白及COX-2mRNA表达水平均明显降低,Bax蛋白水平明显升高(P＜0.05).结论 NIM可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和荆量依赖性.其机制与抑制COX-2有关外,还可能与调节bcl-2、bax等表达有关.     

尼美舒利对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长调控作用的研究

目的研究尼美舒利（nimesulide,NIM）体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长抑制和诱导凋亡的作用,对其机制做进一步探讨。方法 MTT法检测不同浓度、时间NIM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制率;流式细胞技术分析细胞周期变化,计算细胞凋亡率;免疫组织化学检测bcl-2,bax,cox-2蛋白表达变化;RT-PCR半定量检测COX-2mRNA表达改变;ELISA法检测PGE2水平变化。结果 NIM可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,呈浓度、时间依赖性;不同浓度NIM处理48h后,细胞内Bcl-2、COX-2蛋白及COX-2mRNA表达水平均明显降低,Bax蛋白水平明显升高（P〈0.05）。结论 NIM可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。其机制与抑制COX-2有关外,还可能与调节bcl-2、bax等表达有关。     

齐墩果酸诱导人白血病HL-60细胞凋亡及细胞周期阻滞

目的：探讨齐墩果酸诱导HL-60细胞凋亡作用及其对细胞周期的影响。方法：以HL-60细胞为研究对象，以不同剂量的齐墩果酸处理HL-60细胞12 h、24 h、48 h、72 h后，用MTT法观察HL-60细胞的生长抑制率；琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带；流式细胞仪分析HL-60细胞细胞周期的变化；同时用Western blotting 检测凋亡途径最终执行者caspase-3的表达。结果：齐墩果酸对HL-60细胞生长具有明显的抑制作用，其中80 μmol/L齐墩果酸作用48 h对HL-60细胞的抑制率达到50%以上，齐墩果酸诱导细胞凋亡呈明显的时间和剂量依赖性； HL-60经齐墩果酸处理48 h出现典型的DNA梯形条带；以80 μmol/L的齐墩果酸处理HL-60细胞12 h即可以使caspase-3的前体procaspase-3断裂为有活性的caspase-3；流式细胞技术检测结果表明HL-60细胞经齐墩果酸处理后细胞周期阻滞于G₁期，其中48 h和72 h分别达到63.24%和67.90%。结论：齐墩果酸可以诱导HL-60细胞凋亡，并使细胞阻滞于G₁期。     

白血病细胞TGF-β1含量减少及外源性TGF-β1基因对HL-60细胞的作用

目的：研究白血病细胞是否存在转化生长因子β1（TGF-β1）量的异常以及这种异常在白血病发病机制中的可能作用。 方法： 应用ELISA法检测白血病细胞株和原代白血病细胞培养上清TGF-β1水平，进一步应用脂质体介导基因转移法将TGF-β1基因转染HL-60细胞，采用有限稀释法及G418筛选得到抗性细胞，应用RT-PCR、白血病细胞集落培养、裸鼠移植瘤成瘤试验、片段化DNA分析、流式细胞术检测HL-60细胞内TGF-β1、bcl-2、端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的表达变化等方法了解外源性TGF-β1基因对HL-60细胞体内外增殖、凋亡的影响。 结果： 白血病细胞株和原代白血病细胞培养上清TGF-β1水平明显低于正常对照组(P<0.01)，转染TGF-β1基因后，HL-60细胞内TGF-β1 mRNA表达上调，bcl-2、hTERT mRNA表达下调，细胞体外增殖受抑制，集落形成抑制率达78.3%，裸鼠移植瘤生长受抑制，荷瘤鼠生存期延长，细胞呈现凋亡特征性的梯形条带，凋亡比例达73.4%。 结论： 内源性TGF-β1水平降低是白血病的发病机制之一,外源性TGF-β1基因能够抑制HL-60细胞增殖，诱导细胞凋亡,该基因通过下调bcl-2、hTERT mRNA的表达而发挥作用。     

硼替佐米上调fas、bcl2l12、caspase-9和caspase-3基因表达

目的： 探讨硼替佐米诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡及新基因bcl2l12在其中的作用。方法: MTT比色法观察硼替佐米对K562细胞的生长抑制作用;Annexin-V标记和线粒体跨膜电位（Δψm）分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12和24 h fas、bcl2l12、bcl-2、 bim、bax、caspase-3和caspase-9基因表达变化。结果: 硼替佐米抑制K562细胞生长呈时间和剂量依赖性,24 h和48 h半数抑制浓度分别为161.41 nmol/L和96.33 nmol/L;硼替佐米诱导K562细胞凋亡,12 h Annexin-V阳性细胞就开始增高,并呈时间依赖性,Δψm减低;RT-PCR显示fas、bcl2l12、caspase-3和caspase-9表达增高,但bcl-2、bim和bax表达无明显改变。结论: 硼替佐米可以抑制K562生长并诱导凋亡,上调fas、bcl2l12,使线粒体膜电位下降,激活caspase-9和caspase-3基因,促使DNA发生断裂可能是其诱导凋亡的机制之一。     

慢病毒介导的caspase-3沉默对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响

 目的：探讨沉默caspase-3对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染MSCs,通过real-time PCR和Western blotting 在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果。采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。Real-time PCR检测bcl-2和bax mRNA的表达。Hoechst荧光染色法检测细胞的凋亡情况。结果：Real-time PCR和Western blotting结果均表明成功建立稳定转染shRNA-caspase-3的大鼠MSCs细胞株。沉默caspase-3使MSCs的增殖率明显提高（P＜0.05）,且S期细胞百分比明显增多,为（52.66±0.30）%。沉默caspase-3后bcl-2 mRNA表达上调,bax mRNA表达下调,bcl-2/bax比值升高（P＜0.05）。转染组的细胞凋亡率为（15.01±1.73）%,低于空载体组的（25.67±3.05）%和空白对照组的（23.67±1.16）%（P＜0.05）。结论: 沉默caspase-3能调控MSCs的细胞周期,促进细胞增殖,减少细胞凋亡。     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

黄芩苷抑制CA46细胞增殖和诱导凋亡的作用机制探讨

目的： 研究中药黄芩苷（baicalin）对人Burkitt淋巴瘤细胞株CA46细胞增殖、凋亡的影响并探讨其可能作用机制。 方法：应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对CA46细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、细胞DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法检测黄芩苷诱导CA46细胞凋亡的能力;RT-PCR法检测黄芩苷作用前后c-myc、bcl-2 mRNA表达水平的变化,Western blotting法检测c-Myc、Bcl-2、procaspase-3(caspase-3前体)、PARP(多聚ADP核糖聚合酶)蛋白水平的变化。结果：细胞生长曲线结果显示黄芩苷能明显抑制CA46细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)约为10 μmol/L;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术早期凋亡的检出、TUNEL晚期凋亡细胞的检出和细胞DNA片段化凋亡梯带的检出,均证实黄芩苷能有效诱导CA46细胞凋亡,细胞凋亡率呈现浓度依赖性递增。黄芩苷作用后CA46细胞c-myc、bcl-2 mRNA和c-Myc、Bcl-2、procaspase-3、PARP(116 kD)蛋白的表达呈现时间依赖性递减,而PARP(85 kD)表达呈现时间依赖性递增。结论：黄芩苷能有效抑制CA46细胞增殖,诱导其凋亡;c-Myc、Bcl-2表达水平下调和caspase-3激活可能参与了这一作用过程。     

抗人DR5单克隆抗体诱导HL-60细胞凋亡机制

探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡的可能机制。MTT法检测mDRA-6对HL-60细胞的生长增殖的影响,以及Caspase 8、10、3抑制剂对mDRA-6抑制HL-60细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测HL-60细胞DNA片断化降解;Western blot检测mDRA-6对HL-60细胞Caspase 8、10、3的激活改变。结果发现,mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制HL-60细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用HL-60细胞6 h、8 h和10h,细胞增殖抑制率分别为23.96%、44.10%和50.28%;琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6 h,HL-60细胞呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,mDRA-6作用HL 60细胞不同时间,Caspase 8均只有酶原条带出现,无激活片段产生,而Caspase 10和Caspase 3显示明显裂解片段产生,并随mDRA-6作用时间延长而增多;预先使用15μmol/L的Caspase 10及Caspase 3抑制剂孵育细胞1 h,能够使mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率分别降低64.15%(t=10.13、P<0.01)和53.69(t=8.93、P<0.01)%,而预先使用15μmol/L的Caspase 8抑制剂孵育细胞1 h,mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率仅降低4.40%(t=0.52、P>0.05)。以上实验结果提示,mDRA-6通过激活Caspase 10启动凋亡信号分子,诱导白血病HL-60细胞凋亡。