基因打靶技术在构建人源体细胞基因敲除或敲入细胞系中的应用

基因打靶技术能够帮助人们认识某些动物个体或细胞表型异常的遗传基础，利用该技术构建的模式生物（例如基因敲除小鼠）已经广泛地应用于人类基因的研究，截至1999年就已经报道了800多个模式小鼠种系。同源重组介导的基因打靶技术（基因敲除或敲入）是判定基因功能的强有力工具。与基因敲除小鼠相比，人类体细胞基因敲除或敲入细胞系构建的报道相对较少，但该项技术在细胞水平上对某些人源基因参与的生化或生理途径的分析是不可替代的。基因打靶技术最常见的应用是通过使所有等位基因连续失活建立基因敲除细胞系；     

共转录因子CITED1在小鼠骨代谢中的调控作用

目的在体研究CITED1在骨代谢即成骨/破骨平衡中的调节作用,为骨质疏松的治疗提供相应的理论基础。方法利用野生型小鼠(WT小鼠)和构建的CITED1基因敲除小鼠(KO小鼠),显微电子计算机断层扫描(CT)定量测量WT小鼠和KO小鼠股骨长度、骨量和骨皮质以及骨松质厚度等骨骼表型。用ELISA检测骨代谢的血液学相关指标。用RT-qPCR检测骨标志基因的表达,从分子水平探究骨代谢改变的原因。结果 KO小鼠颅骨成骨细胞中CITED1表达极少,表明敲除成功。KO小鼠股骨长度、骨量和骨皮质以及骨松质厚度显著高于WT小鼠。KO小鼠外周血血清中I型原胶原肽(P1NP)、骨钙素(OC)和骨碱性磷酸酶(BALP)浓度均显著高于WT小鼠,而抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的浓度显著低于WT小鼠。RT-qPCR结果显示,KO小鼠颅骨成骨细胞中OC和BALP基因表达较WT小鼠显著增加(P<0. 001);同时,KO小鼠颅骨成骨细胞中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的表达较WT小鼠显著降低(P<0. 05)。结论小鼠CITED1敲除后可以通过上调OC和BALP基因表达,下调TRAP基因的表达,促进骨形成,抑制骨吸收。     

METTL14基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构和骨密度及氧化应激的影响

目的 研究人甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构、骨密度及氧化应激的影响。方法 12只野生型小鼠随机分为对照组和模型组，每组6只。对照组小鼠切除卵巢附近脂肪组织；模型组小鼠切除双侧卵巢构建骨质疏松小鼠模型；另取6只切除双侧卵巢的METTL14基因敲除小鼠作为敲低组。术后8周，使用micro-CT扫描仪测量小鼠右股骨骨密度和骨微结构相关指标，使用ELISA检测小鼠血清中PINP、CTX、MDA和SOD水平。结果 模型组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。此外，敲低组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。模型组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于对照组，敲低组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 METTL14基因敲除可抑制骨质疏松小鼠骨密度，破坏骨微结构，并促进氧化应激。     

Runx3敲减抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs向成骨分化

目的研究Runx3敲减对BMP9诱导的小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs成骨分化的作用。方法 BMP9腺病毒感染iMEFs,用Western blot检测内源性Runx3蛋白的表达。Runx3干扰腺病毒ad-siRunx3和BMP9条件培养基共同处理iMEFs,用碱性磷酸(ALP)染色和活性定量测定检测成骨早期指标ALP;用茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;用RT-PCR检测成骨相关基因Id1、Id2、Id3和Runx2,用Western blot检测成骨相关蛋白Dlx5;用SBE荧光素酶报告质粒检测smad1/5/8的转录活性。结果 BMP9可以使Runx3表达降低(P0.05);干扰Runx3可以抑制早期成骨指标ALP活性(P0.05)和晚期成骨指标钙盐沉积;ad-siRunx3抑制BMP9诱导的成骨相关转录因子Id1、Id2、Id3和Runx2基因的表达(P0.05)及DLX5蛋白的表达(P0.05)。结论敲减Runx3可以抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞向成骨分化。     

BMP9通过Orai1途径促进小鼠骨髓间充质干细胞骨向分化

目的探索钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的作用。方法贴壁法分离BMSCs,取第3代BMSCs加入10~(-5)mol/L BMP9在不同时间点观察Orai1 mRNA表达;Orai1基因敲减后利用RT-qPCR和Western blot检测转染效果;利用茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色观察BMP9诱导BMSCs骨向分化效果,RT-qPCR检测骨性标志物RUNX2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)基因表达。将细胞复合在骨组织工程支架材料羟基磷灰石/聚乳酸/壳聚糖(hydroxyapatite/PLA/chitosan)植入裸鼠皮下,4周后通过HE染色和Masson染色观察体内成骨效果。结果 BMP9诱导第5天开始Orai1 mRNA表达逐渐升高(P0.05);基因敲减后Orai1基因和蛋白表达显著降低(P0.05);Orai1基因敲减后成骨效果显著下降(P0.05),并且骨性标志物RUNX2、OPN和OCN基因表达显著下降(P0.05);过表达BMP9能显著提高体内BMSCs异位成骨能力,Orai1敲减后显著抑制了这一效果(P0.05)。结论 BMP9促进BMSCs骨向分化,可能是通过调控Orai1发挥效应。     

白细胞介素6与钙感应性受体基因多态性对青春期女童骨量增长的交互作用

目的 探讨白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)与钙感应性受体(calcium sensing receptor,CASR)基因多态性对青春期女童骨量增长的交互作用.方法 选择228名9-11岁半未月经初潮的健康女童进行两年追踪,采用双能X线骨密度仪检测对象追踪前后全身、左侧近端股骨(包括股骨颈、大转子、粗隆间和华氏三角区)和L1-L4腰椎骨矿含量(bone mineral content,BMC)和骨密度(bone mineral density,BMD),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测IL-6-634C/G位点多态性,等位基因特异性突变分离扩增-PCR技术检测CASR A986S位点多态性.结果 176名女童完成整个研究.IL-6基因-634C/G和CASR基因A986S位点多态性与青春期女童骨量增长有关联,IL-6基因-634C/G位点CG+GG基因型女童全身和股骨大转子BMD较CC基因型分别低25.7%和20.6%,CASR基因A986S位点AS+SS基因型女童L1.L4腰椎BMC和华氏三角区BMD增长率较AA基因型分别低14.9%和51.3%,差异有统计学意义(P＜0.05).交互作用分析发现,同时具有IL-6基因-634C/G位点G等位基因和CASR基因A986S位点S等位基因的女童,其股骨颈和L1-L4腰椎BMC增长率最低.结论 同时具有IL-6基因-634C/G位点G等位基因和CASR基因A986S位点S等位基因的女童,可能是低骨量增长的危险人群.     

利用GAD67-GFP基因敲入方法显示小鼠脊髓内表达GFP的GABA能神经元的分布(英文)

γ-氨基丁酸 (GABA)是脊髓背角、前角内主要的抑制性神经递质。为了更好地观察脊髓背角内 GABA能神经元的形态和功能 ,本研究使用了两种谷氨酸脱羧酶 67-绿色荧光蛋白 (GAD67-GFP)基因敲入小鼠 ,并观察了敲入小鼠脊髓内的 GFP表达状况。用免疫荧光组织化学双标记方法显示脊髓内所有的 GF P阳性神经元基本上都呈 GAD67和 GABA阳性 ;GFP阳性神经元在脊髓背角的 ～ 层最为密集 ,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布 ,而在脊髓背角其它部位及前角则呈散在分布。脊髓内 GFP阳性神经元的分布与 GABA能神经元的分布一致。本文作者等还进一步在 GAD67-GFP敲入小鼠中观察了 GFP和神经元标志物神经元核蛋白 (Neu N )的共存状况。脊髓背角内 GFP阳性神经元分别占 、 和 层的 Neu N阳性神经元的 3 1.5 %、3 3 .3 %和 44 .7% ,与以往的 GABA免疫组化研究结果基本一致。本研究表明 GAD67-GFP基因敲入小鼠脊髓内的 GFP在GAD67启动子的调节下正确地表达于 GABA能神经元 ,该基因敲入小鼠可用于脊髓 GABA能神经元的形态学特征和生理学特性及其发育规律等方面的研究     

GAD67-GFP精神分裂症小鼠行为学改变及海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元的表达

目的:探讨谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠制备精神分裂症模型后学习与记忆功能的改变及海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元的表达。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)鉴定GAD67-GFP基因敲入小鼠,MK-801连续腹腔注射2周制备精神分裂症动物模型,通过悬尾实验、Morris水迷宫实验、免疫荧光标记技术等,观察GAD67-GFP基因敲入小鼠的学习与记忆功能的改变及GABA能神经元在海马齿状回颗粒细胞层的表达。结果:停药后实验组与对照组比较:(1)实验组体重增加明显低于对照组(P0.05);(2)行为学改变:1悬尾实验:实验组不动时间明显小于对照组(P0.05);2Morris水迷宫实验:定位航行实验中实验组逃避潜伏期,游泳总路程明显长于对照组(P0.05),而其平均游泳速度与对照组没有明显差异(P0.05);空间探查实验中实验组经过平台所在点的次数和在平台所在象限的时间明显小于对照组(P0.05);(3)在海马齿状回颗粒细胞层中实验组的GFP阳性细胞明显多于对照组(P0.05)。结论:通过对GAD67-GFP基因敲入小鼠进行腹腔注射MK-801制备精神分裂症模型后,其学习与记忆功能显著下降,且海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元明显增加。提示精神分裂症后学习记忆功能减退可能与GABA能神经元的表达有关。     

下调骨细胞TGF-β/Smad4信号可抑制小鼠BMSCs成骨及破骨分化

目的检测骨细胞TGF-β/Smad4信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和破骨分化的作用,并初步探讨其相关机制。方法用条件性基因敲减Cre/loxp技术特异性敲减骨细胞Smad4,获得下调骨细胞TGF-β/Smad4信号通路的小鼠;体外分离骨细胞并与野生型小鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(alizarin red)染色检测早期成骨分化和晚期钙盐沉积,酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞;real-time PCR检测成骨分化特异标志物Runx2、Osterix(OSX)、ALP、osteocalcin和破骨分化特异标志物RANKL和OPG的mRNA表达水平。Western blot检测成骨分化特异标志物Runx2和osteocalcin和破骨分化特异标志物RANK蛋白表达水平。结果下调骨细胞TGF-β/Smad4信号能够抑制BMSCs成骨转录因子Runx2、Osterix(P0.01)、成骨分化特异标志物ALP和osteocalcin(P0.01)以及破骨分化特异标志物RANK(P0.01)的表达;增加破骨分化抑制物OPG的表达(P0.05);而RANKL的表达无明显变化;最终下调了RANKL/OPG的比值(P0.05)。结论终末分化的骨细胞调控骨的代谢,下调其TGF-β/Smad4信号可抑制BMSCs成骨和破骨细胞的分化。     

小鼠Rb基因突变的效应

Rb是视网膜母细胞瘤敏感基因,在目前不断发现与增多的肿瘤抑制基因中,人们对它了解最深。在许多人类肿瘤发生过程中Rb都突变或失活状态,在儿童散发性视网膜母细胞瘤的发生中,由于体细胞突变,Rb基因的双拷贝同时失活。然而,最近有不少报道认为Rb基因在个体的早期发生中起着十分重要的作用。为进一步阐明Rb的功能及其突变的影响,作者构建了Rb的一个等位基因已被破坏的小鼠模型,结果显示这种杂合体动物不易患视网膜母细胞瘤,但有些     

RhBMP-2/D,L-PLA泡沫复合人工骨异位诱导成骨的实验研究

将研制的聚乳酸 ( D,L- PLA)泡沫材料与基因重组人骨形成蛋白 - 2 ( rh BMP- 2 )复合 ,形成新型复合人工骨 ,并通过小鼠异体骨诱导实验验证复合人工骨异体成骨能力。结果表明 ,复合人工骨在小鼠异位具有较强的诱骨活性     

20S蛋白酶体β5亚单位对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:体外分离培养新生BALB/c小鼠(P0)的NSCs,应用免疫荧光染色观察PSMB5在NSCs中的表达与分布;利用real time RT-PCR方法检测PSMB5 mRNA的表达;荧光分光光度法测定PSMB5相关的糜蛋白酶活性的变化;应用PSMB5-siRNA抑制P0 NSCs中PSMB5基因的表达;使用含有PSMB5基因的重组慢病毒((lentiPSMB5))感染成年小鼠(P90) NSCs。利用CCK-8试验检测PSMB5对NSCs增殖能力的影响,利用BrdU和Tuj1染色观察PSMB5基因敲低和过表达对NSCs增殖及分化能力的影响。结果:PSMB5主要分布于NSCs的胞浆,P0的NSCs分化后,PSMB5 mRNA的表达下调。成年和老年小鼠NSCs中糜蛋白酶体活性较新生小鼠显著降低。PSMB5敲减后NSCs增殖能力和向神经元分化能力减弱,PSMB5过表达后NSCs增殖能力和向神经元分化能力增强。结论:PSMB5可能参与小鼠NSCs增殖及分化的调控。     

汉族、壮族人群人类粒细胞抗原HNA-1~5的基因多态性分布

目的通过人群的HNA基因多态性的调查,了解人群各HNA抗原的分布情况,推测该人群中可能参与免疫性粒细胞减少症的主要HNA抗原。方法本研究采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对无血缘关系的647名健康汉族人和328名健康壮族人进行HNA-1~5的基因分型和多态性研究,调查了解汉族和壮族人群中HNA-1~5的基因频率多态性分布。结果在HNA-1系统,HNA-1a是汉族(0.6893)和壮族(0.7454)人群的高频率等位基因,与欧洲、南美洲、非洲等以HNA-1b为高频率等位基因的地区人群有着明显的差异,汉族和壮族人群中均未发现HNA-1c等位基因个体存在;在HNA-2 SNP 42C/G中,42C是汉族(0.697 1)和壮族(0.724 1)人群中频率较高的等位基因;在HNA-3,HNA-3a和3b基因频率在汉族和壮族人群中分别为0.687 0/0.313 0和0.739 3/0.260 7,汉、壮族人群的HNA-3等位基因频率分布与德国及土耳其等人群无差异;在HNA-4中,HNA-4b是汉族(0.007 0)和壮族(0.019 8)人群的罕见基因,在这2个人群中均未发现HNA-4bb纯合子基因型个体;在HNA-5中,HNA-5a和5b等位基因频率在汉族和壮族人群分别为0.819 9/0.180 1和0.783 5/0.216 5。汉族与壮族人群HNA各等位基因频率分布比较,除HNA-2,-5的等位基因频率分布无差别外,HNA-1,-3,-4的各等位基因频率分布均不同。结论与其它地区人群比较,汉族、壮族人群HNA基因频率分布均有着各自的独特特征,本研究数据将有助于我们了解汉族和壮族人群中HNA的免疫学特征。     

死亡受体5介导的促动脉粥样硬化形成作用

<正>死亡受体4/5(DR4/5)是肿瘤坏死因子大家族成员TRAIL的受体。和人类不同,小鼠只有DR5基因而没有DR4基因。以往研究证实敲除TRAIL基因加重动脉粥样硬化的形成,提示TRAIL具有血管保护作用。然而DR5在介导TRAIL对动脉粥样硬化调节作用中的角色尚不清楚。我们培育了ApoE/DR5双敲小鼠。我们意外发现,敲除DR5基因并没有复制TRAIL敲除     

新疆维吾尔族阿尔茨海默病患者脑啡肽酶基因与载脂蛋白E基因多态性的关联分析

目的 探讨脑啡肽酶(neprilysin,NEP)基因rs3736187位点突变及其与载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因相互作用在新疆维吾尔族人群散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer disease,SAD)发病机制中的作用.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法 检测了111例维吾尔族SAD患者和117名维吾尔族正常老年人NEP基因和ApoE基因多态性分布特征.结果 (1)NEP基因T等位基因频率在AD组高于对照组(x2=5.005,P＜0.05),携带T等位基因个体出现AD的危险性高于携带C等位基因的个体.(2)ApoE基因ε4等位基因频率AD组高于对照组(x2=4.218,P＜0.05),携带ε4等位基因个体出现AD的危险性高于未携带ε4等位基因的个体.(3)NEP基因的T等位基因与SAD发病相关且不受ApoE基因型影响.结论 NEP基因和ApoE基因的基因多态性与新疆维吾尔族SAD发病有关联.NEP基因可能是新疆维吾尔族SAD发病独立的易感基因.     

骨密质来源间充质干细胞对小鼠T细胞增殖、分化及其表面趋化因子受体表达的影响

目的:观察同种异基因骨密质来源间充质干细胞(CB-MSCs)对小鼠T细胞增殖和分化的影响,探讨其发挥免疫调解作用的分子机制。方法:在体外建立骨密质来源MSCs与异基因小鼠脾淋巴细胞(SP)共培养体系,用MTS/PES法和流式细胞术观察MSCs对SP增殖、凋亡和细胞周期的影响。此外,我们也检测了MSCs共培养对SP中调节性T细胞(Treg)比例以及趋化因子受体CCR5、CCR7和CXCR3表达的影响。结果:异基因骨密质来源MSCs能明显抑制PHA刺激的小鼠SP增殖,其抑制能力呈剂量依赖性;MSCs能够明显抑制共培养体系中SP细胞自发凋亡,并诱导细胞周期G0/G1期阻滞;MSCs与SP共培养后,能明显提高SP中Treg的比例(P0.01);显著下调T细胞表面CCR5和CXCR3的表达以及明显上调CCR7的表达。结论:异基因CB-MSCs可以明显抑制SP细胞增殖,其机制主要涉及细胞周期G0/G1阻滞而并非诱导凋亡。此外,CBMSCs能通过上调Treg比例和调控趋化因子受体表达等多种途径,来发挥免疫调节作用。     

ClC-3基因过表达对小鼠骨量和骨结构的影响

 目的: 研究过表达电压门控氯通道家族蛋白成员3(voltage-gated chloride channel family protein 3,ClC-3)基因对小鼠骨骼的影响。方法: 3月龄雄性FVB小鼠用鼠尾基因检测法确定基因型后分为2组:野生型(WT)组和ClC-3过表达(ClC-3 transgene)组,每组各8只。分别测量2组小鼠体重,右侧胫骨长度和重量。取胫骨上段和中段进行脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色后,采用骨形态计量学分析胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分数(percent trabecular area,%Tb.Ar)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁宽度(trabecular width,Tb.Wi)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)和胫骨中段皮质骨的骨组织总面积(total tissue area,T.Ar)、皮质骨面积(cortical area,Ct.Ar)、皮质骨面积百分数(percent cortical area,%Ct.Ar)、骨髓腔面积(marrow area,Ma.Ar)、骨髓腔面积百分数(percent marrow area,%Ma.Ar)。结果: 小鼠经鼠尾基因检测后确认为野生型或ClC-3过表达型。与WT组相比,ClC-3 transgene组小鼠体重及胫骨长度重量均减小(P<0.05);松质骨的%Tb.Ar和Tb.Wi均减小(P<0.05),Tb.Sp增大(P<0.05),Tb.N的变化无统计学意义;皮质骨的T.Ar、Ct.Ar和%Ct.Ar均减小(P<0.05),%Ma.Ar增大(P<0.05),Ma.Ar的变化无统计学意义。结论: ClC-3过表达导致小鼠的皮质骨和松质骨骨量减少,骨结构变差,提示ClC-3可能参与了骨形成和/或骨吸收。     

小脑发育过程中Atoh1时空表达模式

目的 探究小脑发育过程中转录因子Atoh1 mRNA及其蛋白的时空表达模式。方法 取不同发育阶段的小鼠小脑冷冻切片，RNA scope技术分析Atoh1 mRNA在小脑中的时空表达模式，每组n=3。同时，使用Atoh1转基因和基因敲入两种不同遗传学策略的报告小鼠，采用免疫荧光染色技术分析Atoh1在蛋白水平的时空表达，每组n=3。结果 Atoh1 mRNA在胚胎小脑菱唇和外颗粒细胞层中呈高表达；Atoh1-3^*V5-P2A-tdTomato/+基因敲入小鼠染色结果显示，Atoh1主要表达在菱唇和有增殖能力的外颗粒细胞层的外层；Atoh1-Cre; tdTomato/+转基因小鼠显示，Atoh1阳性细胞在菱唇和整个颗粒细胞发育过程中包括外颗粒细胞层和内颗粒细胞层中均呈高表达。结论 小脑发育过程中，Atoh1 mRNA和蛋白在胚胎期的菱唇和出生后的外颗粒细胞层中高丰度表达；但在蛋白水平上，基因敲入小鼠和转基因小鼠Atoh1在菱唇和外颗粒细胞层中的表达略有不同。     

微小RNA-7敲减对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响

目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组织病理学变化;血清学方法检查血清中谷丙转氨酶(ALT)的水平;ELISA法检测血清中细胞因子IL-4和IFN-γ的水平;流式细胞术检测肝脏组织中CD4~+T细胞的比例及其相关的细胞因子IL-4和IFN-γ的表达变化。结果:与对照组相比,miR-7敲减后急性肝损伤小鼠的肝脏组织颜色变浅,重量减轻,重量指数明显增加(P0.05);HE染色显示miR-7KD小鼠血清炎症细胞浸润显著增多;血清学方法检测发现急性肝损伤小鼠血清ALT的水平明显上升(P0.05);ELISA法检测显示miR-7KD小鼠血清中IFN-γ水平明显升高(P0.01),而IL-4的表达水平则明显降低(P0.01);流式细胞术检测结果显示,miR-7KD小鼠肝脏中CD4+T细胞比例显著升高(P0.01),其相关的细胞因子IFN-γ的表达水平也显著上调(P0.01),而IL-4的水平没有发生明显变化。结论:敲减miR-7基因可明显促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤。     

转录因子Ikzf1促进小鼠胎肝来源红系细胞终末分化

目的 通过分析单细胞转录组数据,挖掘红系终末分化过程中潜在的转录因子Ikzf1,并探究其在终末红系分化中的功能。方法 利用SCENIC方法对人和小鼠红系细胞的单细胞转录组数据进行转录因子预测,从bulk转录组数据获取所预测因子Ikzf1在红系终末分化过程中的表达情况并在小鼠胎肝红系分化体系中进行RT-qPCR验证。在小鼠胎肝来源的红系细胞中利用短发夹RNA (shRNA)干扰技术敲低Ikzf1,流式分选GFP阳性的成功转染细胞,RT-qPCR验证其敲低效率,流式细胞术分析Ikzf1敲低后对红系分化和脱核的影响。结果 SCENIC预测Ikzf1是人与小鼠红系终末分化共同的转录因子,转录组及RT-qPCR分析显示其在终末分化较早期的原红和早幼红细胞阶段表达量较高。将小鼠胎肝来源红系细胞中Ikzf1基因的表达成功敲低,流式细胞术检测发现Ikzf1敲低导致红细胞分化阻滞在早幼红细胞时期,细胞脱核率显著降低(P<0.05)。结论 转录因子Ikzf1在红系终末分化早期高表达并参与促进红系终末分化和脱核。