缺糖损伤的PC12细胞中grp75基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时应激基因葡萄糖调节蛋白(grp75)的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR、Western blot 和细胞免疫化学法分析缺糖损伤时grp75的表达情况.结果 RT-PCR结果显示细胞缺糖损伤3h起grp75基因转录水平已显著增高,并在缺糖后3～24h间持续上升;蛋白印迹法和细胞免疫化学法证实grp75在细胞缺糖过程中蛋白水平的表达明显高于对照组,且随着缺糖时间推延而进一步升高.结论缺糖损伤时,细胞中的应激基因grp75特异性上调表达.     

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase-3活力检测等方法，了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF、和RPMI1640作对照。结果 培养细胞的突起生长数量和长度、M1TT微量比色的A值、AnnexinV—PE／7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标，在NRF组和NGF组问无明显差异；而与窄白对照组间差异有显著性意义。结论 神经再生素对低血清培养下PCI2细朐的凋亡有抑制作用。     

PC12细胞缺糖损伤过程中凋亡相关基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时凋亡相关基因bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR法分析PC12细胞有糖和无糖条件下bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达情况.结果细胞缺糖损伤6-16hbcl-2基因、bcl-xl基因、c-myc基因表达量显著增高,此后表达量逐渐下降.结论缺糖损伤早期,凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xl、c-myc上调表达产生细胞应激保护效应.     

肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞进行分组：正常对照组;损伤组;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠;肌肽保护组,同损伤组的制备,但予先加入肌肽。用MTT法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH活性,观察了细胞形态和蛋白电泳等。结果表明：在保护组,MTT的测定结果高于损伤组,LDH低于损伤组,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。     

星形神经胶质细胞对PC12细胞生长发育的影响

在神经系统的生长发育过程中 ,星形胶质细胞对神经元生长发育的作用是一项重要的研究课题。本文以体外培养的 SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞与 PC12神经元按不同细胞数目比例 ( 5 0∶ 1～ 1∶ 1)共同培养 ,并用其制备的条件培养液培养 PC12细胞 ,用快速灵敏的 MTT比色法测定 PC12神经元的细胞活力 ,用光学相差显微镜观察 PC12细胞形态学变化。结果显示 ,星形胶质细胞条件培养液可增强 PC12细胞活力 ( MTT测定的 OD值由 0 .2 5 5± 0 .0 12提高到 0 .5 10± 0 .0 3 6,P<0 .0 0 1,且细胞折光性较对照组强 ) ,却不能促使 PC12神经元突起的生出。将星形胶质细胞与 PC12细胞按 3 0∶ 1～ 1∶ 1的比例共同培养时 ,既可提高 PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长 ;如按 5 0∶ 1～ 40∶ 1的比例共同培养时 ,只观察到提高 PC12细胞折光性和光晕 ,而无促使其突起生长发育的作用。本文结果提示 ,PC12神经元细胞活力的提高与星形胶质细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关 ,而 PC12神经元突起生长发育可能是和与星形胶质细胞的直接接触以及二者的细胞数目比有关。     

阿米洛利对PC12细胞的保护作用及其对LAMP2a表达影响

目的研究阿米洛利对PC12细胞的保护作用,及其对LAMP2a表达水平的影响。方法 pH 6.0的酸性培养液诱导PC12细胞损伤,同时给予阿米洛利进行干预,四甲基偶氮唑盐(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)和流式细胞技术检测细胞存活率、损伤程度及凋亡率,Western blot检测LAMP2a表达水平。结果酸性培养液处理24 h,细胞存活率降低至(67.2±5.1)%,上清液中的LDH增多至(407.9±11.1)U/L,凋亡率升高至(27.8±2.6)%。阿米洛利(100μmol/L)提高PC12细胞的存活率至(84.9±2.2)%,LDH降低至(314.1±5.2)U/L,细胞凋亡率降低至(17.8±1.3)%,与pH 6.0组相比(P<0.001)。酸处理导致LAMP2a表达升高,而阿米洛利能够显著抑制LAMP2a的表达(P<0.05)。结论阿米洛利通过下调LAMP2a的表达发挥神经保护作用。     

低剂量LPS对PC12细胞抗氧化能力的影响

目的:探讨低剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞抗氧化能力的影响。方法:分别以浓度为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1μg/μl的LPS刺激PC12细胞24小时,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的安全剂量;采用安全剂量刺激PC12细胞24小时,收集培养基上清和细胞,采用试剂盒检测上清中的总抗氧化能力(T-AOC),细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的表达,Western blot检测细胞内Bcl-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca2+)的平均荧光强度。结果:LPS浓度小于0.1μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P>0.05);采用0、0.01、0.025、0.05、0.1μg/μlLPS分别刺激PC12细胞24小时,培养上清中T-AOC呈下降趋势,以0.05、0.1μg/μl组明显(P<0.01),细胞内SOD呈上升趋势(0.05μg/μl组,P<0.05;0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内Bcl-2表达逐渐升高(0.025~0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内ROS呈下降趋势(0.1μg/μl组,P<0.01),钙离子未见明显变化(P>0.05)。结论:低剂量LPS处理PC12 24小时具有剂量依赖性增强细胞抗氧化能力,并可能藉此参与应激耐受。     

稳定表达的人GDNF基因对PC12细胞的分化作用研究

目的　利用自行构建的 BHK- h GDNF基因工程细胞 ,研究 GDNF是否具有促进大鼠嗜铬细胞瘤细胞系 PC12细胞分化的作用。　方法　从人胎儿脑组织中提取总 RNA,用 RT- PCR的方法克隆人 GDNF基因 ;利用L ipofecam ine将构建的真核表达载体 p TARGET/ h GDNF(± )转染 BHK- 2 1细胞 ,在含有 G418的选择培养基中筛选出稳定表达人 GDNF的 BHK- h GDNF基因工程细胞。用免疫组织化学的方法检测 BHK- h GDNF基因工程细胞中人 GDNF的表达。并且用 BHK- h GDNF基因工程细胞培养的上清液培养 PC12细胞 ,观察 GDNF是否具有促进大鼠嗜铬细胞瘤细胞系 PC12细胞分化作用。　结果　构建的正向和反向真核表达载体 p TARGET/ h GDNF(± )的酶解消化和测序结果正确 ;用正向真核表达载体 p TARGET/ h GDNF( )转染 BHK- 2 1细胞后免疫组织化学的结果证明 BHK- h GDNF细胞能够表达人 GDNF;BHK- h GDNF基因工程细胞培养上清液可以促进 PC12细胞分化。　结论　构建的 BHK- h GDNF基因工程细胞中表达的人 GDNF可以促进 PC12细胞分化     

H2O2对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响

为观察H2O2对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响,采用终浓度分别为0、100、200和400nmol／L的H2O2处理PC12细胞8h,用RT-PCR检测par-4基因mRNA表达变化,Western blot检测蛋白表达的变化。结果表明,随着H2O2剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,且par-4 mRNA表达及蛋白表达亦增加,提示在H2O2诱导PC12细胞凋亡过程中Par-4可能起重要作用。     

高频电刺激对PC12细胞中泛素-蛋白酶体的影响

目的:研究电刺激对PC12细胞内泛素-蛋白酶系统(UPS)的作用,以期了解细胞外电刺激作用于神经细胞的作用机制.方法:通过细胞实验,对PC12细胞株分0μA、500μA、2mA、8mA进行不同电流强度电刺激每天3h,连续4d;分0、10、130Hz进行不同电流频率电刺激每天3h,连续3d.之后采用噻唑蓝(MTT)检测存活率、酪氨酸羟化酶(TH-16)免疫组织化学检测细胞的新陈代谢,以及免疫印迹法检测细胞内泛素化蛋白量的改变.结果:随着电流的增强,电刺激对PC12细胞的生长有抑制趋势;高频电刺激对PC12细胞生长有抑制作用,对PC12细胞的酪氨酸羟化酶的合成代谢有抑制作用;高频电刺激使细胞内泛素化蛋白数量发生改变.结论:高频电刺激引发局部神经元兴奋性降低和细胞内UPS功能障碍,改变了原来信号转导通路,可能是临床上深部脑刺激治疗帕金森病的机制.     

转染miR-17-5p对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响

目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:对照组与空载组Bcl-2、Bax蛋白表达无显著性差异,miR-17-5p组与空载组比较,Bcl-2蛋白表达明显减少(P0.01),而Bax蛋白表达明显增多(P0.01),Western blot检测其凋亡相关蛋白表达变化与免疫组化结果一致。电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无明显差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;miR-17-5p转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集。结论:miR-17-5p基因过表达能引起PC12细胞促凋亡的Bax蛋白表达增多,抗凋亡的Bcl-2蛋白表达减少,导致PC12细胞形态学损伤。     

用细胞原位杂交方法检测NPY mRNA在PC12细胞中的表达

目的：建立ＮＰＹ ｍＲＮＡ物细胞原位杂交检测方法,并以ＮＧＦ为诱导因子研究Ｄｅｘ对大鼠嗜铬细胞瘤ＰＣ１２细胞中ＮＰＹｍＲＮＡ表达的影响。方法：采用细胞原位杂交方法。方法：ＮＧＦ具有诱导ＮＰＹ基因表达的生物学效应且呈剂量效应关系;Ｄｅｘ对ＮＰｘＲＮＡ表达具有双相调节效应,即早期（〈８ｈ）可促进ＮＧＦ的诱导作用,而晚期（〉１６ｈ）则具有抑制作用（Ｐ〈０．０１）,但单独Ｄｅｘ对ＮＰＹｍＲＮＡ表达无显著影     

iPSC-MSCs对CoCl_2诱导的PC12细胞损伤时线粒体功能的影响

目的:观察诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞(i PSC-MSCs)对氯化钴(Co Cl2)诱导的PC12细胞损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:用Co Cl2处理PC12细胞建立化学损伤模型,加入i PSC-MSCs共培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)比色法检测细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡比率,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,免疫荧光观察i PSC-MSCs向PC12细胞转移线粒体的情况。结果:用Co Cl2(400μmol/L)处理PC12细胞24 h可使其凋亡明显增多,线粒体膜电位明显下降。与i PSC-MSCs共培养能减轻PC12细胞的凋亡,使其膜电位恢复。i PSC-MSCs可以与PC12细胞间形成隧道纳米管并向PC12细胞转移线粒体。结论:i PSC-MSCs可以减轻Co Cl2诱导的PC12细胞损伤,机制可能与其向PC12细胞转移线粒体有关。     

鱼藤酮对PC12细胞多巴胺相关转运体的影响

探讨鱼藤酮对PC12细胞多巴胺转运体(DAT)和突触囊泡单胺转运体2(VMAT2)的影响。我们将PC12细胞经不同浓度的鱼藤酮处理24h后,利用HE染色观察PC12细胞的形态学变化;利用免疫组织化学法观察不同浓度的鱼藤酮对PC12细胞酪氨酸羟化酶(TH),DAT和VMAT2蛋白表达的影响;利用RT-PCR法检测鱼藤酮对PC12细胞DAT和VMAT2基因表达的影响;通过生化实验检测Na+/K+-ATP酶活性。实验结果显示:鱼藤酮浓度为1.0mmol/L时,PC12细胞出现了明显的形态学改变,胞浆染色不均、胞体呈圆形、细胞核形状不规则、核浆比例增加;TH蛋白阳性细胞数量减少;DAT蛋白和基因表达增加;VMAT2蛋白和基因表达降低,与对照组比较均具有统计学意义(P<0.05),且随着鱼藤酮浓度的增加,变化趋势更为明显。鱼藤酮浓度为1.0mmol/L时,Na+/K+-ATP酶活力与对照组比较显著降低(P<0.05)。因此,DAT和VMAT2的表达异常可能参与了毒性作用。     

酒精促PC12细胞凋亡及对神经鞘磷脂合酶表达和活性的影响

目的 观察酒精诱导PCI2细胞凋亡及其凋亡过程中神经鞘磷脂合酶活性和mRNA表达量的变化.方法 MTr法测定酒精对PCI2细胞增殖的抑制作用.Hoeelmt33258染色荧光显微镜观察PCI2细胞凋亡形态学变化.DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡梯状DNA条带.RT-PCR法检测酒精对PCI2细胞SMSI和SMS2 mRNA表达的影响.薄层层析法测定SMS的活性.结果 PCI2细胞去血清培养24 h,酒精浓度在100、200、400和800 mmoL/L时,细胞存活率分别是单纯去血清的87.54%、70.73%、57.89%和51.70%,表现出较强的细胞增殖抑制作用(P<0.05);细胞核形态学变化显示酒精处理组凋亡细胞增多,表现染色质凝集,细胞核变小、核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化,凋亡率随着酒精浓度的增大而升高,去血清组的酒精浓度为100、200和300 mmol/L时,细胞凋亡率呈剂量依赖关系;琼脂糖凝胶电泳可见酒精处理组有不同程度的DNA断裂,显示凋亡细胞典型的梯状DNA.RT-PCR检测酒精对PCI2细胞SMS转录水平结果显示,不同浓度酒精作用于PCI2细胞0.5 h,SMSI表达量无显著变化,当作用时间达1h和2 h,SMSl表达量显著增加,并呈剂量依赖性,而SMS2的mRNA表达则不受酒精作用的影响;薄层层析法检测细胞总SMS活性显示,不同浓度酒精作用2 h,细胞SMS活性随酒精浓度增加而升高.结论 酒精可导致PCI2细胞凋亡并与酒精浓度呈正相关.酒精致PCI2细胞凋亡过程中SMSl的mRNA表达量增高,酶活性增强,提示酒精致PCI2细胞凋亡作用与鞘磷脂循环有关.     

小鼠Sim2真核表达载体的构建及其对PC12细胞周期的影响

目的：构建小鼠Sim2（mSim2）真核表达载 体，并观察其对PC12细胞周期的影响，以初步阐明Sim2基因在Down综合征发病机制中的作用 。方法：以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从新生小鼠大脑中扩增mS im2全长阅读开放框(ORF)，定向克隆入真核表达载体pcDNA3中。以脂质体法瞬时转染PC12细 胞；RT-PCR方法检测mSim2基因在PC12细胞的表达；流式细胞仪观察mSim2对细胞周期的影响 。结果：DNA测序结果表明，mSim2成功克隆入真核表达载体pcDNA3中。R T-PCR结果显示，瞬时转染的PC12细胞中有明显的mSim2表达。流式细胞仪检测发现，转染mS im2后，处于G0/G1期的PC12细胞百分比明显升高（P<0.01），而G2/M期百分比 明显低于对照组和空载体组（P<0.01）。结论：Sim2基因可能通过 抑制神经元前体细胞的增殖参与Down综合征的发生；Sim2真核表达载体的构建为进一步研究 该基因的功能奠定了良好的基础。     

过表达miR-122对异氟烷致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨miR-122在异氟烷导致的PC12细胞损伤中的作用.方法 将PC12细胞分为对照组、异氟烷组、阴性对照组(NC组)和miR-122过表达组,除对照组外,其余组细胞均用2％异氟烷+21％O2+5％CO2处理6h,miR-122过表达组和NC组在用异氟烷处理前通过脂质体2000将miR-122 mimic和mi...     

低剂量亚硝酸钠预适应对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用

目的:研究亚硝酸钠(NaNO2)预适应对过氧化氢(H2O2)损伤鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的保护作用。方法:分别以系列浓度的NaNO2作用PC12细胞24h,细胞的增殖活性采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和活细胞计数法,用Hoechst 33258染色计数凝集和碎核细胞占细胞总数的百分比为细胞凋亡率。以3mmol/L浓度的NaNO2预适应细胞24h后,加或不加一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo),再用1.1mmol/L H2O2暴露6h,细胞存活率检测用MTT、凋亡检测用流式细胞术和Hoechst 33258/PI染色。比色法测定丙二醛(MDA)含量和酶活性。结果:NaNO2对PC12细胞增殖作用呈典型的β型曲线,最大低促效应出现在第24h,最大低促效应剂量为1.4mmol/L,最大促增殖效应为对照组的156%,未观察到不良效应水平(NOAEL)为6mmol/L,细胞增殖半数抑制率(IC50)值为45mmol/L。用3mmol/L NaNO2预适应24h,然后用1.1mmol/LH2O2暴露6h,细胞增殖活性比单纯H2O2组明显升高(P0.05)。用1.1mmol/L H2O2暴露6h,非预适应组细胞凋亡率为44.9%;3mmol/L NaNO2预适应组细胞凋亡率为19.1%,差异显著(P0.05),这种现象可以被一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo)所抑制。3mmol/L NaNO2预适应组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平升高,MDA含量降低(P0.05)。结论:低于6mmol/L NaNO2暴露能够引起PC12细胞的低促效应。低浓度NaNO2预适应,通过降低细胞脂质过氧化,提高抗氧化酶活性,保护过氧化氢毒害的PC12细胞。亚硝酸盐还原为一氧化氮在细胞保护过程中起关键作用。     

CEPO对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用及其可能机制。方法借助CCK8、流式细胞(Flow cytometry,FCM)、Western-blotting和逆转录PCR(RT-PCR)技术检测PC12模型细胞相关指标的变化,实验数据以SPSS15软件统计分析。结果 CCK8结果显示6-O-HDA处理能够显著降低PC12模型细胞的存活率,而CEPO处理对其变化显示抑制作用;FCM技术探察结果显示,6-OHDA处理能够明显诱导PC12模型细胞的损伤与凋亡,而CEPO预处理能够减轻PC12模型细胞的损伤与凋亡(P<0.05);借助Western-blotting技术探察显示6-OHDA+CEPO处理组的PC12细胞的Cleaved caspase-3蛋白表达量显著低于6-OHDA处理组(P<0.05);RT-PCR结果显示,6-OHDA处理明显降低PC12模型细胞的Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)以及上调PC12模型细胞的Bax mRNA的表达(P<0.01),而CEPO处理明显上调Bcl-2 mRNA的表达水平(P<0.05)以及抑制Bax mRNA的表达(P<0.05)。结论CEPO处理能够显著抑制6-OHDA所诱导的PC12细胞的损伤及凋亡,其作用机制可能与其上调Bcl-2,并下调Bax和Caspase-3的表达有关。     

壳聚糖-镁膜与PC12细胞在体外的生物相容性

目的 研究壳聚糖镁膜与PC12细胞体外生物相容性，初步探讨壳聚糖/镁复合物作为组织工程材料的可行性。方法 合成壳聚糖-镁膜，应用扫描电镜观察复合膜的表面形态，并用X线能谱仪分析壳聚糖-镁复合膜中镁的含量；在体外将复合膜与PC12细胞共培养，用MTT方法检测细胞活力。光镜及扫描电镜观察PC12细胞在材料上的形态学变化。结果 单纯壳聚糖(CS)与壳聚糖镁膜(CM)组相比，前者表面较为光滑致密，而复合膜中可见均匀排列的小孔；络合物中镁元素的含量与投入的硫酸镁量呈一定的剂量依赖。形态学观察表明，PC12细胞在CM上生长良好，至7d时，可见微绒毛丰富并有较长突起，部分细胞之间形成突触状结构；MTT检测结果表明，培养5d后实验组细胞活力超过对照组（p<0.05）。结论 壳聚糖/镁膜与PC12细胞在体外有良好的生物相容性。