小鼠肝纤维化形成过程中肝内巨噬细胞的表型转换

目的研究小鼠肝纤维化形成的过程中巨噬细胞表型的表达变化。方法用四氯化碳诱导Balb/C小鼠肝纤维化模型,分别在造模的第0 d(正常对照)、5、10、20 d和40 d取材,HE染色和Mallory染色观察纤维化进程中的病理变化;生物化学法检测血清ALT水平观察肝细胞损伤情况;流式细胞术分析纤维化形成过程中M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞表型改变情况;荧光定量PCR法分析M1型巨噬细胞标志物CD11c mRNA水平、M2型巨噬细胞标志物CD206、Arg-1 mRNA水平。结果HE染色结果显示,随着造模时间延长,肝小叶结构逐渐被破坏,肝纤维化逐渐形成。Mallory染色显示,胶原纤维逐渐增生。血清ALT先升高后降低。流式细胞术结果显示M2/M1比值在纤维化进展中的变化为先减小而后增大。M1型标志物CD11c mRNA先升高后降低,而M2型标志物CD206、Arg-1 mRNA轻微下降后逐渐升高。结论随着纤维化的进展,巨噬细胞表型由M1型为主导向M2型为主导转换,形成“M2-skewed”巨噬细胞。     

肝肺综合征大鼠血浆和肺组织ET-1的动态变化及其基因表达

目的 :探讨ET 1在肝肺综合征 (HPS)发生机制中的作用。方法 :采用Wistar大鼠行胆总管结扎术 (CBDL)制备HPS动物模型 ,抽取动脉血进行血气分析 ,使用放射免疫方法检测血浆和肺组织中ET 1水平 ,采用RT PCR方法检测肺组织中ET 1前体原 (ppET 1)mRNA的表达。结果 :CBDL组大鼠血浆和肺组织ET 1含量随时间延长而逐渐升高 ,CBDL各组血浆ET 1水平与假手术组 (Sham组 )比较差异有显著意义 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;CBDL5周组肺组织ET 1含量及肺组织ET 1前体原 ( ppET 1)mRNA与Sham组比较差异有显著意义 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;相关分析表明 ,血浆和肺组织中ET 1与肺泡动脉氧分压差A aDO2 显著相关 (P <0 .0 1)。结论 :在HPS形成过程中 ,血浆和肺组织中ET -1水平升高参与了HPS的发生     

M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析

通过对M1和M2型巨噬细胞表型相关指标的比较分析,评价各鉴定巨噬细胞类型的表型指标及其意义。按常规方法以IFN-γ及LPS将骨髓来源巨噬细胞诱导成M1型巨噬细胞,以IL-4诱导出M2型巨噬细胞。分别以RT-PCR和酶活性定量方法检测精氨酸代谢相关酶的表达和活性;以ELISA检测IL-12和IL-10的分泌;以FACS检测巨噬细胞膜分子的表达。结果显示:M1型巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达和活性水平较未刺激组明显升高,IL-12产生显著增加,CD16/32表达上调;而M2型巨噬细胞I型精氨酸酶(arginase 1,Arg-1)的表达水平和酶活性较未刺激巨噬细胞显著提高,IL-10分泌轻度增加,并且表达高水平的CD206和DECTIN-1。表型比较分析结果表明,iN-OS表达和活性、IL-12的分泌和膜蛋白CD16/32可用于鉴定M1型巨噬细胞,而Arg-1、CD206和DECTIN-1是鉴定M2型巨噬细胞较为理想的表型指标。     

miR-210通过MMP-2下调M2/M1巨噬细胞比例抑制肺癌细胞生长

目的研究miR-210通过MMP-2调控M2/M1巨噬细胞比例对肺癌细胞生长的影响及对相关机制进行初步探讨。方法将小鼠Lewis lung carcinoma (LLC)-1细胞皮下植入C57BL/6小鼠构建小鼠肺癌模型,荧光定量PCR检测miR-210表达。进一步取40只肺癌建模成功的小鼠,并随机分为4组:对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210腺相关病毒; AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210+AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210和AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒。所有小鼠注射腺相关病毒滴度为108TU,病毒注射时间为4周。检测4组小鼠肿瘤大小变化,WGA染色检测4组小鼠肺癌细胞大小变化。另外,取生长融合至80%的LLC1细胞,并随机分为2组:WT组转染包含野生型MMP-2 3’-UTR的构建物,Mut组转染突变型MMP-2 3’-UTR的构建物。细胞转染48 h后,荧光素酶实验检测m...     

NT-3促进脂多糖诱导的M1型巨噬细胞向M2表型极化

目的探讨神经营养素-3(NT-3)能否促进脂多糖(LPS)诱导的M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞株,分为LPS组和LPS+NT-3组。用脂多糖(100 ng/ml)刺激12h后,撤掉LPS培养基,冲洗,分别加入基础培养基和含有NT-3(40 ng/ml)的基础培养基,培养24 h后,全部置换成基础培养基培养24 h,收集上清与细胞。固定后的细胞分别做CD68/CCR7(M1型细胞标记物)、CD68/CD206(M2型细胞标记物)、CD68/Trk C免疫荧光双标染色。用酶联吸附试验(ELISA)检测上清中TNF-α和IL-10水平。结果免疫荧光细胞化学染色显示,LPS刺激后的巨噬细胞表达NT-3的受体Trk C。LPS组可观察到较多的M1型细胞和较少的M2型细胞。LPS+NT-3组可观察到M1型细胞数减少,而M2型细胞数增多。与LPS组比较,LPS+NT-3组的M1型巨噬细胞比例降低,同时M2型巨噬细胞比例增加(P<0.01)。ELISA结果显示,与LPS组比较,LPS+NT-3组上清中TNF-α的水平明显下降(P<0.01),IL-10的水平相对升高但是差异不明显(P>0.05)。结论 NT-3促进M1型巨噬细胞向M2型极化可能通过与其受体Trk C结合发挥作用,进而减少促炎因子TNF-α的分泌。     

严重创伤合并感染后肝肺组织巨噬细胞CD14和清道夫受体的表达及意义

为了研究创伤感染后CD14和清道夫受体(scavengerreceptor,SR)的表达变化在失控性炎症反应中的作用.本研究选取健康昆明种小鼠84只,雌雄不限,体重18-22g,随机分为正常对照组、创伤组、创伤感染组.创伤组及创伤感染组又分为创伤后2、4、6、9、13h组,每组4只.创伤组小鼠采用乙醚吸入法麻醉完全后,以自制折骨器在小鼠膝关节上1cm处夹断双侧股骨,伴软组织损伤及少量血肿形成.创伤感染组动物于骨折后lh,经尾静脉以5mg/kg剂量注射内毒素(E.coli026B6).至相应时间点活杀动物取肝、肺组织,采用免疫组化SP法和常规病理HE染色法,观察了骨折及骨折合并内毒素血症小鼠肝、肺组织巨噬细胞CD14和SR在伤后2,4,6,9,13h的动态变化.结果显示肝、肺组织巨噬细胞CD14和SR在创伤后分别呈上调和下调趋势,创伤合并感染后,CD14表达上调和SR表达下调与正常对照组、创伤组相比更加显著(P＜0.01),并与肝、肺组织病变进行性加重及死亡率递增呈平行关系,相关分析显示CD14和SR表达呈显著负相关关系,而且创伤感染组肺脏CD14IOD值在伤后9h高于肝脏CD14IOD值(P＜0.05),而肺脏SRIOD值在伤后显著低于肝脏SRIOD值(P＜0.01),这表明肝脏枯否细胞释放的大量细胞因子和炎症介质,经过肝静脉回流至肺,与肺脏巨噬细胞释放大量炎症介质共同上调CD14的表达及下调SR的表达,肝脏炎症反应级联在肺脏得以放大,肺脏因此成为受损最重的靶器官,多脏器功能障碍综合症发生过程中,肺脏往往最先受累,表现为急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合症可能与此有关.研究结果表明创伤后,一定程度的CD14上调和SR下调可能是自限性炎症反应的表现.细菌内毒素的继发感染引起炎症反应级联迅速扩大,导致CD14的显著上调、SR的显著下调,表明以巨噬细胞CD14和SR双向调变为标志的炎症反应渐由"自限性防御阶段”转化为"失控性效应阶段”.因此,有效桔抗CD14和SR的双向调变策略对于脓毒症的治疗具有重要意义.     

巨噬细胞极化在心血管疾病中的作用

心血管病,尤其是急性心肌梗死和收缩性心功能衰竭已成为西方国家患者死亡的主要原因,在发展中国家也呈明显上升趋势.缺血性的心脏病已经成为普遍现象,是引起病人死亡的主要原因.尽管早期血管再建和药物治疗能够明显提高心肌梗死后的生存率,但仍有大量病人发展成心力衰竭.巨噬细胞除了具有免疫防御和维持组织稳态功能,还在心肌梗死诱导的病理生理过程中发挥重要作用.巨噬细胞的亚群已被证实参与心血管疾病(动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血、心肌纤维化)的发生和发展,在心脏损伤和心肌重塑中有重要作用,研究基于巨噬细胞调控治疗心血管疾病的治疗策略很有价值.     

miR-486通过调控巨噬细胞表型分化抑制AngⅡ诱导的病理性心肌肥大

目的 探讨miR-486通过调控NLRP3/IL-1β信号通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏巨噬细胞M1/M2表型分化的影响及相关机制。方法 取40只C57BL/6小鼠随机分为2组,对照组常规饲养小鼠,不给予任何特殊处理;AngⅡ组小鼠皮下埋入AngⅡ渗透泵。另取40只皮下埋入AngⅡ渗透泵的小鼠随机分为2组,对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;过表达miR-486组小鼠尾静脉注射OE-AAV9-miR-486腺相关病毒;同时,取40只C57BL/6小鼠皮下埋入AngⅡ泵并随机分为2组：对照组小鼠心肌层注射DMSO,NLRP3/IL-1β信号通路抑制组小鼠心肌层注射CY-09。荧光定量PCR检测心钠肽（atrial natriuretic peptide, ANP）和脑钠肽（brain natriuretic peptide, BNP）的表达变化,WGA染色检测心肌细胞大小变化,荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞标志基因iL6和iNOS以及M2型巨噬细胞标志基因Arg1和CD206表达变化。另外,取生长融合至80%的心脏巨噬细胞,并随机分为2组：WT组转染包含野生型N...     

巨噬细胞极化在过敏性哮喘中的作用

过敏性哮喘(allergic asthma,AA)是常见的慢性呼吸道疾病,严重危害人们的身体健康.巨噬细胞是存在于肺组织中最丰富的免疫细胞群,参与了过敏性哮喘的发病过程.在受到不同变应原刺激后,巨噬细胞表现出不同的活化状态,并发挥不同的免疫功能,这一过程称之为巨噬细胞极化(mac-rophge polarization).这里主要讨论巨噬细胞及巨噬细胞极化在过敏性哮喘发病过程中的作用,以及巨噬细胞极化过程中表观遗传学变化的新概念,包括miRNAs、DNA甲基化和组蛋白修饰等,它们可能通过调节细胞信号和标志基因的表达来调控巨噬细胞极化,从而影响了过敏性哮喘发病过程,为过敏性哮喘的免疫治疗策略提供了新的见解.     

大鼠肺纤维化形成中肺巨噬细胞增殖和凋亡的变化

目的:观察肺纤维化形成过程中,肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化。方法:气管内滴注平阳霉素(BLMA₅)(5mg/kg),观察注后14d和30d组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化以及细胞的MTT活力。结果:(1)BLMA₅14d组和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数分别多于sham14d和30d组,(分别P＜0.01,P＜0.05);但BLMA₅30d组的细胞数明显少于BLMA₅14d组(P＜0.05);(2)BLMA₅14d组巨噬细胞增殖指数高于sham14d组(P＜0.05),而BLMA₅30d组增殖指数低于sham30d组(P＜0.05);(3)BLMA₅14d和30d组凋亡细胞数分别多于sham14d和30d组(均P＜0.01),但BLMA₅14d组少于BLMA₅30d组(P＜0.05);(4)BLMA₅14d和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数MTT活力分别高于sham14d和30d组,分别P＜0.01,P＜0.05。结论:在肺纤维化形成过程中,肺巨噬细胞增殖能力先增强后减弱;而肺巨噬细胞凋亡始终增加,上述变化是导致肺巨噬细胞数量和功能变化的因素之一。     

脂多糖在肝肺综合症发生中的作用

目的：探讨肠源性内毒素血症在肝肺综合征发生中的作用。 方法： 用复合因素复制大鼠肝硬化模型。腹腔内一次性注射小剂量内毒素以加重肝硬化动物的内毒素血症。另设正常动物注射内毒素组和甘氨酸拮抗内毒素组加以对照。 结果： 实验第8周末的肝硬化大鼠发生了肝肺综合征。小剂量内毒素一次性腹腔内注射后肝硬化动物肺脏的病理变化加剧；甘氨酸在在体和离体实验中均可明显拮抗内毒素的生物学效应，减轻肝肺综合征的各种病理变化。 结论： 肝硬化动物所伴之肠源性内毒素血症很可能在肝肺综合征发病机制中起重要作用；内毒素直接和其诱导产生的TNF-α等细胞因子在肝肺综合征发病机制中起作用。     

乳化氟碳结合川芎嗪对肝肺综合征猪肝移植围手术期肺部炎症的影响及其机制研究

目的:探讨乳化氟碳结合川芎嗪对肝肺综合征(HPS)猪肝移植围手术期肺部炎症的影响及其机制。方法:采用慢性胆管结扎复制猪肝肺综合征模型,随机分为2组:(1)乳化氟碳结合川芎嗪(PFCL)组:肺内灌以20mL/kg的全氟碳乳剂(PFC)及川芎嗪(20mg/kg,气管内滴注),机械通气下进行原位肝移植;(2)机械通气对照(MV)组:常规MV下,进行原位肝移植。实验观察5h,实验结束后处死动物,取肺脏进行分析。结果:PFCL组肺脏的湿/干比值、肺通透指数及支气管肺泡灌洗液中白细胞计数均显著降低,与MV组比较差异显著(P0.05);PFCL组肺组织及支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素(IFN)-γ含量均显著低于MV组(P0.05)。免疫组化染色发现,PFCL组肺组织炎症和上皮细胞核内NF-κBp65的含量明显低于MV组。结论:乳化氟碳结合中药川芎嗪可以有效地减少中性粒细胞浸润,抑制炎性细胞NF-κB的活化和细胞因子TNF-α与IFN-γ的表达,减轻HPS引起的肺损伤。     

葡萄糖调节蛋白78在大鼠肝肺综合征肺微血管重构中的作用

 目的：探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)引发大鼠肝肺综合征（HPS）肺微血管重构的机制。方法：Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并HPS模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。免疫组化染色法观察肺组织GRP78、Ⅷ因子相关抗原(FⅧ-RAg)C/EBP 同源蛋白(CHOP)/生长阻滞及DNA损伤诱导蛋白153(GADD153)、caspase-12、Bcl-2和核因子(nuclear factor,NF)-κB的表达。RT-PCR和Western blotting法检测肺组织血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白表达水平。结果：模型组动物肺组织中GRP78、FⅧ-RAg及VEGF蛋白的表达随HPS进展逐步增高,CHOP/GADD153及caspase-12的表达随HPS进展逐步降低,Bcl-2和NF-κB随病程进展表达逐渐增加,NF-κB尤以胞核表达增高明显。GRP78与FⅧ-RAg及VEGF蛋白水平呈明显正相关(P<0.01),而与CHOP/GADD153及caspase-12的表达呈明显负相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物肺组织GRP78和FⅧ-RAg显著高于正常对照组;VEGF蛋白和mRNA均显著高于正常对照组;而CHOP/GADD153及caspase-12 的表达均低于正常对照组(P<0.05)。结论：GRP78可能通过促进血管内皮细胞增殖和抑制其凋亡,促进肺微血管重构,导致HPS的发病。     

葡萄糖调节蛋白78在复合致病因素诱导的大鼠肝肺综合征中的作用

目的: 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肝肺综合征发病中的作用及其与肠源性内毒素血症的关系。方法: Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并肝肺综合征(HPS)模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。采用HE染色观察肺组织病理变化;测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、TNF-α和肺组织匀浆中的TNF-α、丙二醛(MDA)的含量。Western blotting和RT-PCR法检测肺组织标本中GRP78蛋白和mRNA表达水平。结果: 模型组动物血浆内毒素含量随病程进展逐渐增高;肺组织中GRP78蛋白和mRNA的表达随HPS进展逐步增高,且各时点间的表达有显著差异(P<0.05);血浆内毒素与升高的GRP78蛋白水平间呈高度正相关(P<0.01)。血浆ALT和TNF-α含量以及肺组织匀浆中TNF-α和MDA含量随病程进展逐渐增高;血浆内毒素含量以及肺组织中GRP78蛋白分别与血浆TNF-α和肺组织中TNF-α、MDA的含量呈高度正相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物血浆TNF-α含量、肺组织匀浆TNF-α、GRP78蛋白及mRNA均显著高于正常对照组(P<0.05)。在第6周和第8周,模型组动物血浆内毒素和ALT的含量以及肺组织匀浆中MDA的含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。结论: 肝硬化时形成的肠源性内毒素血症作为内质网应激的重要应激原,通过氧化应激激活肺组织的内质网应激反应导致GRP78表达增高,很可能是HPS发病的重要机制。     

Lactic acid in alternative polarization and function of macrophages in tumor microenvironment

In developing tumor, macrophages are one major immune infiltrate that not only contributes in shaping up of tumor microenvironment (TME) but also have the potential of determining the fate of tumor in terms of its progression. Phenotypic plasticity of macrophages primarily channelizes them to alternative (M2) form of tumor associated macrophages (TAM) in the TME. One of the key tumor derived components that plays a crucial role in TAM polarization from M1 to M2 form is lactic acid and has prominent role in progression of malignancy. The role of lactic acid as signalling molecule as well as an immunomodulator has recently been recognized. This review focuses on the mechanism and signalling that are involved in lactic acid induced M2 polarization and possible therapeutic strategies for regulating lactic acidosis in TME.     

Improved severe hepatopulmonary syndrome after liver transplantation in an adolescent with end-stage liver disease secondary to biliary atresia

Hepatopulmonary syndrome (HPS) is a serious complication of end-stage liver disease, which is characterized by hypoxia, intrapulmonary vascular dilatation, and liver cirrhosis. Liver transplantation (LT) is the only curative treatment modality for patients with HPS. However, morbidity and mortality after LT, especially in cases of severe HPS, remain high. This case report describes a patient with typical findings of an extracardiac pulmonary arteriovenous shunt on contrast-enhanced transesophageal echocardiography (TEE), and clubbing fingers, who had complete correction of HPS by deceased donor LT. The patient was a 16-year-old female who was born with biliary atresia and underwent porto-enterostomy on the 55th day after birth. She had been suffered from progressive liver failure with dyspnea, clubbing fingers, and cyanosis. Preoperative arterial blood gas analysis revealed severe hypoxia (arterial O₂ tension of 54.5 mmHg and O₂ saturation of 84.2%). Contrast-enhanced TEE revealed an extracardiac right-to-left shunt, which suggested an intrapulmonary arteriovenous shunt. The patient recovered successfully after LT, not only with respect to physical parameters but also for pychosocial activity, including school performance, during the 30-month follow-up period.     

小鼠骨髓源性巨噬细胞极化的体外诱导方法探究

目的:探究小鼠骨髓前体细胞体外诱导成为不同极化状态(M1和M2)巨噬细胞的优化方法。方法:健康C57BL/6小鼠麻醉处死,收集其股骨和胫骨腔内容物,经筛网过滤、红细胞裂解后,在RPMI-1640完全培养基中培养16h,收集未贴壁的骨髓前体细胞重新接种于6孔板。根据培养基中所加刺激剂的种类、剂量不同进行实验分组,于不同时点收集细胞,光镜下观察各组细胞形态学变化,流式细胞术及RT-qPCR检测不同极化状态巨噬细胞的相应标志物。结果:(1)小鼠骨髓前体细胞经50μg/L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激72 h后,CD11b阳染率达到90%以上;刺激96 h后,F4/80的阳染率达到95%以上。40μg/L的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激96 h后,CD11b阳染率也达到了90%以上,F4/80阳染率至144 h达到峰值(58.2%);(2)在M-CSF刺激所得单核-巨噬细胞的基础上,给予M1型巨噬细胞诱导剂(25μg/L LPS和10μg/L IFN-γ)刺激24 h,可见CD86的阳染率大于90%;给予M2型巨噬细胞诱导剂(20μg/L IL-4和IL-13)刺激后CD206的阳染率始终处于较低水平(10%左右);(3)在GM-CSF刺激的基础上,给予M1型巨噬细胞诱导剂刺激24 h,可见CD86的阳染率大于90%;而当细胞接受M2型巨噬细胞诱导剂刺激96 h,CD206的阳染率达68.98%;(4)RT-qPCR结果显示在给予相应极化诱导剂刺激后,M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12,以及M2型巨噬细胞标志物:几丁质酶3样蛋白3(Chi3l3/Ym1)、甘露糖受体(MR)和精氨酸酶1(Arg-1)的mRNA表达均明显高于对照组(P<0.01)。结论:(1)C57BL/6小鼠骨髓前体细胞受到M-CSF或GM-CSF诱导后90%以上细胞均可向单核细胞分化,M-CSF可诱导90%以上的细胞为成熟巨噬细胞,GM-CSF可诱导58%的细胞为成熟巨噬细胞;(2)在M-CSF前期诱导的基础上,联合LPS和IFN-γ易于诱导出M1型巨噬细胞,但联合IL-4和IL-13难以获得M2型巨噬细胞;(3)在GM-CSF前期诱导的基础上,联合LPS和IFN-γ易于诱导出M1型巨噬细胞,联合IL-4和IL-13也可将大部分细胞诱导成为M2型巨噬细胞。     

小鼠骨髓源性巨噬细胞极化的体外诱导方法探究

目的:探究小鼠骨髓前体细胞体外诱导成为不同极化状态(M1和M2)巨噬细胞的优化方法。方法:健康C57BL/6小鼠麻醉处死,收集其股骨和胫骨腔内容物,经筛网过滤、红细胞裂解后,在RPMI-1640完全培养基中培养16h,收集未贴壁的骨髓前体细胞重新接种于6孔板。根据培养基中所加刺激剂的种类、剂量不同进行实验分组,于不同时点收集细胞,光镜下观察各组细胞形态学变化,流式细胞术及RT-qPCR检测不同极化状态巨噬细胞的相应标志物。结果:(1)小鼠骨髓前体细胞经50μg/L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激72 h后,CD11b阳染率达到90%以上;刺激96 h后,F4/80的阳染率达到95%以上。40μg/L的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激96 h后,CD11b阳染率也达到了90%以上,F4/80阳染率至144 h达到峰值(58.2%);(2)在M-CSF刺激所得单核-巨噬细胞的基础上,给予M1型巨噬细胞诱导剂(25μg/L LPS和10μg/L IFN-γ)刺激24 h,可见CD86的阳染率大于90%;给予M2型巨噬细胞诱导剂(20μg/L IL-4和IL-13)刺激后CD206的阳染率始终处于较低水平(10%左右);(3)在GM-CSF刺激的基础上,给予M1型巨噬细胞诱导剂刺激24 h,可见CD86的阳染率大于90%;而当细胞接受M2型巨噬细胞诱导剂刺激96 h,CD206的阳染率达68.98%;(4)RT-qPCR结果显示在给予相应极化诱导剂刺激后,M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12,以及M2型巨噬细胞标志物:几丁质酶3样蛋白3(Chi3l3/Ym1)、甘露糖受体(MR)和精氨酸酶1(Arg-1)的mRNA表达均明显高于对照组(P<0.01)。结论:(1)C57BL/6小鼠骨髓前体细胞受到M-CSF或GM-CSF诱导后90%以上细胞均可向单核细胞分化,M-CSF可诱导90%以上的细胞为成熟巨噬细胞,GM-CSF可诱导58%的细胞为成熟巨噬细胞;(2)在M-CSF前期诱导的基础上,联合LPS和IFN-γ易于诱导出M1型巨噬细胞,但联合IL-4和IL-13难以获得M2型巨噬细胞;(3)在GM-CSF前期诱导的基础上,联合LPS和IFN-γ易于诱导出M1型巨噬细胞,联合IL-4和IL-13也可将大部分细胞诱导成为M2型巨噬细胞。