免疫磁珠技术在分离人外周血树突状细胞中的应用

近年来细胞分离技术的发展十分迅速，分离主要根据各种细胞的不同的物理性状及表面受体或抗原的差异而采取不同的分离技术。免疫磁珠(Immunomag-netic bead，IMB)技术是由20世纪70年代起步，80年代兴起的国内外应用较多的一种新技术。其应用范围日趋广泛，尤其是在免疫学的检测、细胞的分离以及蛋     

人外周血树突状细胞的分离与鉴定

应用细胞分层剂密度梯度离心辅以细胞贴壁和花环沉降法，分离和纯化人外周血树突状细胞，通过Ｅｔ花环形成细胞测定，荧光染色镜检和ＦＡＣＳ分析表明，分离的细胞纯度可达４０％￣６０％，残留的其他细胞多为ＮＫ细胞，单核细胞和Ｔ细胞，ＦＡＣＳ分析还显示：所分离的细胞表面ＭＨＣⅡ类抗原的阳性率达９７．３４％，扫描电镜观察可见独特的细胞形态，将此类细胞加入体外淋巴细胞增殖反应体系则呈现明显促进作用，提示：分离的细胞     

人外周血及脐血树突状细胞的体外分离培养

取正常人外周血或脐血,经淋巴细胞分离液分离,取中间白膜层,培养板中进行粘附,粘附细胞加培养液和细胞因子（外周血加GM－CSF和IL－4,脐血加GM－CSF和TNF－α）培养,对其形态、表型和功能分别进行鉴定和测定。结果表明约经过1周左右培养,悬浮细胞表现为典型的DC形态,带有毛刺样凸起,经DC单克隆抗体染色后用流式细胞仪测定脐血72％为DC,外周血93％为DC,并且可以刺激同种异体淋巴细胞的增殖反应。所以通过这样的不同细胞因子组合可以从人外周血和脐血中诱导培养出大量的DC细胞,为其进一步的研究奠定了基础。     

人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞

目的：探讨树突状细胞—肿瘤细胞融合细胞的形态特性，为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法：将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合，瑞氏—姬姆萨染色观察；扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果：树突状细胞与MCF细胞按10：1比例融合后，一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合；扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起，树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论：树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。     

人外周血树突状细胞的研究现状

人外周血树突状细胞(DC)是一种独特的细胞,其形态、组织化学、免疫细胞化学反应和超微结构均与单核细胞不同。无吞噬能力,也无单核细胞、淋巴细胞和NK细胞所特有的标志。它是T细胞免疫反应的主要辅助细胞。并参与多种自身免疫疾病、免疫缺陷病、肿瘤和某些炎症反应的病理过程。观察外周血中DC的质和量的变化,将为了解这些疾病的发生、发展和预后提供有价值的参数。     

钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用

目的研究钙离子载体(CI)能否诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)，并初步探讨其信号转导途径。方法分离健康献血者的PBMC，在体外用CI(A23187)或人重组粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和CI培养40h，或rhGM-CSF和白细胞介素4(IL-4)培养7d，部分PBMC预先用W-7或CsA或K35926处理30min后，再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83等分子的表达，MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果健康献血者的PBMC经CI培养40h，或rhGM—CSF与CI培养40h，或rhGM-CSF与IL-4培养7d，均可获得DC的典型形态和表面分子的表达，包括CD14表达下调、共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用；CI诱导的DC其CD14分子的下调及CD83分子的上调更明显，刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强；rhGM-CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM—CSF及CI处理的PBMC，其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力，均受到W-7或CsA或KT5926不同程度的抑制；而rhGM-CSF及IL-4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。结论CI可快速诱导PBMC向DC分化，其分化过程可能受控于Ca^2 /钙调蛋白及其下游的多个细胞信号转导途径的调节。     

滤泡树突状细胞在免疫应答中的作用

ＦＤＣ是存在于次级淋巴组织的一种特殊细胞群体，在正常机体中，ＦＤＣ能捕获以免疫复合物形式存在的抗原，并能将抗原较长时间（数月）地保存在细胞表面，因此，ＦＤＣ作为外来抗原的储存库在诱发维持免疫记忆中起着重作用，本文主要介绍了ＦＤＣ如何捕获和处理免疫复合物形式存在的抗原并信息传递各免疫活性细胞，诱导免疫应答的过程。     

人外周血树突状细胞在LAK抗HPBALL细胞中作用的研究

为探讨树突状细胞（ＤＣ）在ＬＡＫ抗ＨＰＢＡＬＬ细胞中的作用，采用多因素、多水平的杀伤试验，同时以光镜、电镜观察ＤＣ、ＬＡＫ、ＨＰＢＡＬＬ相互作用的形态特征及ＤＮＡ断端标记法检测瘤细胞是否凋亡。结果表明：（１）ＤＣ无直接杀伤ＨＰＢＡＬＬ作用。（２）５×１０５～１×１０７／ＬＤＣ有增强不同Ｅ／ＴＬＡＫ杀伤活性的趋势，而１×１０７～５×１０７／ＬＤＣ对ＬＡＫ活性有抑制趋势。（３）ＤＣ、ＬＡＫ杀伤ＨＰＢＡＬＬ的最佳组合条件为：ＤＣ培养４ｄ、浓度５×１０６／Ｌ，ＬＡＫＥ／Ｔ＝１０／１，ｒＩＬ－２＝０。（４）光镜、电镜下均可见ＤＣ的突起与ＬＡＫ、ＨＰＢＡＬＬ细胞紧密接触形成细胞簇。（５）ＤＮＡ断端标记法显示瘤细胞呈末端脱氧核糖核酸转移酶阳性反应。结论：ＤＣ对ＬＡＫ杀伤ＨＰＢＡＬＬ活性具有双向调节作用     

人外周血单核细胞来源树突状细胞的成熟诱导

目的：探讨诱导树突状细胞成熟的最优方法。方法：以细胞因子GM-CSF和IL-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞，分别采用CD40L、LPS、TNF-α、细胞因子鸡尾酒法（TNF-α、IL-6、IL-1β、PGE2）诱导成熟，24小时后收获DCs以流式细胞仪检测其成熟表型CD80、CD83、CD86、HLA-DR和FITC-Dextran的内吞能力，ELISA法检测其IL-12的分泌，MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果：CD40L、LPS、TNF-α、鸡尾酒法均可诱导DCs的成熟，其中以鸡尾酒法诱导成熟的效果最优，CD83的表达率为66.91%（P〈0.05）；成熟DCsFITC-Dextran的内吞能力明显下降；成熟DCsIL-12分泌量明显高于未成熟DCs，其中鸡尾酒法诱导成熟的DCs的IL-12分泌量最高，成熟的DCs有较强的刺激淋巴细胞增殖能力。结论：细胞因子鸡尾酒法是诱导DCs成熟的最佳方法。     

人外周血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响

从人外周血中分离出树突状细胞，体外观察了其对ＬＡＫ细胞活性的影响。发现：５×１０２～１×１０４／ｍｌ树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起增强作用，而５×１０４～１×１０５／ｍｌ树突状细胞却抑制ＬＡＫ杀伤活性。这说明人外周血树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起双相性调节作用。     

人外周血分离树突状细胞关体分离培养及其分化成熟过程中生物特征 …

用从人外周血分离。纯化，扩增树突状细胞的方法，对树突状细胞成熟过程中的功能化作初步探讨。以酵母菌，ＨＲＰ吞噬实验测试树突状细胞的内吞能力；以同种混合淋巴细胞反应检测细胞的免疫刺激能力。     

树突状细胞与肿瘤免疫及其在肿瘤免疫中应用

DC是功能最强的专职抗原呈递细胞，其首要的功能是诱导机体产生初次免疫应答。近年来由于在细胞活化中共刺激机制的阐明，免疫细胞与肿瘤细胞之间的信号转导及抗原呈递过程研究的深入，使得DC在肿瘤的生物治疗方面的研究取得了较大的进展。本文综述了DC与肿瘤预后的关系，DC抗肿瘤机制，DC疫苗的制备以及DC疫苗的临床试验等方面。     

树突状细胞在人巨细胞病毒感染中的作用

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中感染率极高,通过多种免疫逃避机制,实现在宿主体内的长期潜伏感染。树突状细胞(dendritic cells,DC)是重要的抗原提呈细胞,在诱导和维持特异性免疫应答中发挥重要的作用。人体内的DC根据来源、表型分为两群:髓系DC(myeloid DC,mDC)和浆细胞样DC(plasmacytoid DC,pDC),大量研究证实HCMV介导的多种免疫逃避机制中,部分是通过影响DC功能实现的。HCMV不仅可以感染mDC,影响mDC表型、迁移、分泌细胞因子、激活T细胞功能,而且还可以抑制pDC分泌干扰素水平及激活T细胞能力,并且激活过度的B细胞反应,导致机体抗病毒细胞免疫反应的抑制和体液免疫紊乱,实现病毒长期潜伏感染。本文主要讨论HCMV是如何改变两种DC亚型的功能以实现免疫逃避目的。     

树突状细胞与自然杀伤细胞在免疫应答中的相互作用

树突状细胞(dendritic cells,DC)是专职的抗原提呈细胞,它们在免疫应答中发挥的作用越来越受到重视。NK细胞是固有免疫中的一种重要的效应细胞。当两者共培养后,在免疫应答中具有互惠作用。现就两者的生物学活性以及在免疫应答中相互作用的机制等方面作一综述。     

树突状细胞在肠道黏膜免疫稳态中的作用

<正>树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是抗原提呈作用最强的专职抗原提呈细胞,被认为是连接特异性免疫应答和非特异性免疫应答的桥梁,并且可决定机体特异性免疫应答的类型,在肠道黏膜稳态中扮演着极其重要的角色。肠道DCs具有多种类型,不同类型的DCs功能不同。DCs与周围环境中的多种细胞因子相互作用影响肠道的免疫应答和免疫耐受。DCs在肠道疾病中起关键作用,影响肠道疾病     

树突状细胞在结节病免疫发病机制中的作用

结节病是一种病因未明的累及全身的系统性肉芽肿性疾病,其主要发病机制是某种未知抗原在具有遗传易感性的宿主引起的异常免疫反应。树突状细胞(DC)是目前已知的功能最强大的抗原递呈细胞,目前很多研究证实DC在结节病的免疫发病和肉芽肿形成中起到了十分重要的作用,DC及其亚型在结节病患者外周血、肺泡灌洗液、皮肤及淋巴结的分布、含量、发育成熟阶段及免疫刺激功能的变化与结节病的免疫发病密切相关。本文就近年来有关DC在结节病免疫发病机制中的作用的研究进展进行综述。     

人外周血树突状细胞递呈可溶性肿瘤抗原触发抗瘤免疫的体外研究

考察人外周血树突状细胞递呈可溶性肿瘤抗原激发抗瘤免疫作用,应用改良Ｓｔｅｉｎｍａｎ法分离纯化人外周血ＤＣ,同时将ＭＤＡ,３ＡＯ及Ｗｉｓｈ三种瘤细胞制成可溶性肿瘤抗原,将二者于体外共育,分析ＤＣ表面标记的改变及某些细胞因子产生的水平,并检测其对肿瘤细胞杀伤作用的影响。     

外周血树突状细胞的快速募集及其体外抗肿瘤免疫效应

目的：在外周血中快速募集树突状细胞（DC）,研究其诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肿瘤细胞的体外杀伤效应.方法：B6小鼠尾静脉注射灭活的痤疮丙酸杆菌（P.acnes）,分选出外周血B220^-CD11c^＋细胞,以GM-CSF、IL-4及mTNF-α培养5～6天,检测其表型和混合淋巴细胞反应;对荷载肿瘤抗原的B220^-CD11c^＋细胞,测定其诱导T细胞对靶肿瘤细胞的杀伤效应.结果：注射P.acnes后小鼠外周血中出现了大量的B220^-CD11c^＋细胞,经诱导可成为成熟DC.当荷载肿瘤抗原后,可致敏CD3＋T细胞在与靶肿瘤细胞反应中产生高水平的INF-γ并特异性地杀伤肿瘤细胞.结论：注射P.acnes可以直接快速动员B220^-CD11c^＋ DC前体细胞进入小鼠外周血,这些DC前体细胞可诱导强烈的体外杀伤肿瘤效应.     

人外周血树突状细胞对LAK杀伤活性的影响

树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ，ＤＣ）是重要的抗原呈递细胞之一，人外周血中ＤＣ约占有核细胞，总数的１％，由在组织中受到刺激后迁往淋巴器官的成熟ＤＣ和从骨髓往组织中迁移的ＤＣ前体细胞组成（Ｉｍ－ｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，８２：４８７）。我们从外周血中分离出ＤＣ，观察了其对ＬＡＫ活性的影响。用Ｆｉｃｏｌｌ分离液（比重１．０７７～１．０７８）分离出入浓缩白细胞组分中单个核细胞，继之用不连续Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心，取５０％Ｐｅｒｃｏｌｌ层细胞，培养３６小时后，收集非贴壁细胞，即为富ＤＣ组…     

人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究

目的 探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞，肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。方法 用PEC法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合，瑞氏一姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构，SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达。结果 分离的树突状细胞能高表达HIJA—DR分子，而LTEP78细胞则不表达；将树突状细胞与ITEP78细胞按10：1比例融合后，两者的细胞膜、细胞质依次融合，获得的融合细胞仍能表达HLA-．DR分子。结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程，通过将两者融合，人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA-DR分子，从而增强了其免疫原性，为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础。