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目的:探讨胰腺癌细胞分泌的外泌体(exosome)对胰岛β细胞存活率和功能的影响及作用机制。方法:采用外泌体提取试剂盒提取小鼠胰腺癌细胞Pan02和MPC-83上清液外泌体,经磷钨酸染色后于透射电镜下鉴定形态;外泌体经荧光标记后与小鼠胰岛瘤MIN6细胞共孵育48 h,检测外泌体分泌水平和MIN6细胞的摄取水平;MTT和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)实验分别检测各组细胞的存活率和胰岛素分泌功能;q PCR检测微小RNA-204(miR-204)和Bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和细胞色素C(Cyt-C)的表达。结果:透射电镜结果显示2种胰腺癌细胞均能分泌外泌体,且Pan02细胞分泌更多。荧光标记的外泌体与胰岛β细胞共孵育结果显示,β细胞能够大量摄取胰腺癌细胞分泌的外泌体。MTT和GSIS实验结果显示,外泌体处理组的MIN6细胞存活率和高糖刺激的胰岛素分泌量显著低于未处理组(P0.01)。q PCR结果显示胰腺癌细胞分泌的外泌体富含miR-204,且外泌体处理后的MIN6细胞内Bcl-2的mRNA表达显著下调(P0.01)。Western blot结果显示,外泌体处理的MIN6细胞内Bcl-2蛋白表达显著下调(P0.05),Bax、cleaved caspase-3和Cyt-C蛋白表达显著上调(P0.01)。结论:胰腺癌细胞能够分泌外泌体,且该外泌体能够被胰岛β细胞摄取。胰腺癌细胞分泌的外泌体可以降低β细胞存活率和β细胞胰岛素的分泌功能,其机制可能通过外源性上调β细胞内miR-204的表达,进而抑制Bcl-2的mRNA和蛋白表达,最终激活β细胞内线粒体凋亡信号通路。 相似文献
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目的:分离、培养及鉴定大鼠腹膜源肥大细胞外泌体。方法:提取8~10周龄SPF级雌性SD大鼠腹腔灌洗液,使用Percoll密度梯度分离法分离灌洗液中的肥大细胞,通过甲苯胺蓝染色鉴定肥大细胞,在细胞培养板中加入白细胞介素3和干细胞生长因子诱导肥大细胞成熟,收集细胞上清液,采用超速离心法分离上清液中的外泌体,通过透射电镜,纳米流式细胞仪从外泌体形态、粒径和表面标志蛋白三个方面鉴定外泌体。结果:分离得到的肥大细胞被甲苯胺蓝染成蓝紫色,分离的肥大细胞外泌体呈典型盘状,粒径分布范围为30~150 nm,平均粒径为75.33 nm,外泌体表面标志蛋白CD9和CD81呈阳性表达。结论:Percoll密度梯度分离法联合超速离心法分离大鼠腹腔灌洗液中肥大细胞外泌体的方法是可行的。 相似文献
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何尤夫 《国际病理科学与临床杂志》2017,37(2)
外泌体富含各类蛋白及遗传物质,其介导细胞间的信息交流及信号转导.大量研究表明各类干细胞源的外泌体可通过其内富集的各类特异性蛋白及以microRNA为首的各类遗传物质参与各类心血管疾病,并对其治疗具有深远的临床意义.对此,本文就外泌体与缺血性心脏疾病的关系展开综述,从各类干细胞源外泌体的microRNA、蛋白、离子通道及其他方面,探讨外泌体在缺血性心脏疾病中发挥的功能和作用. 相似文献
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细胞总是在不断的分泌各种不同类型的微泡到细胞外液,包括一些小分子和大分子,其中之一就是外泌体.最近研究表明其在细胞间通讯以及肿瘤中具有重要作用,因此得到了广泛的关注.在肿瘤形成过程中,外泌体能够利用自身的结构、组成优势调节免疫系统功能,形成利于肿瘤形成的微环境,诱发肿瘤恶性行为,外泌体研究也为肿瘤诊断和治疗提供了新方向. 相似文献
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外泌体是一种由多种细胞分泌,直径在40~100 nm左右的微小囊泡,其间包含了丰富的蛋白质, miRNA以及RNA片段,能够参与细胞之间的物质转导和信号交流。本文将从外泌体的形成、分泌、构成,以及与肿瘤,心血管疾病,神经系统疾病的关系等方面进行综述。 相似文献
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骨再生是复杂的、受精密调控的生理过程,除正常的骨代谢平衡外,骨再生亦发生于骨损伤或骨疾病后的修复过程中。临床上,骨缺损的治疗往往需要通过干预来诱导骨再生,实现的技术手段包括骨移植、生长因子给药、牵引成骨术等。作为近年来新兴的研究领域,外泌体在包括骨缺损在内的一系列适应证中均取得了显著的治疗效果。然而,由于外泌体复杂的化学组成 (由磷脂双分子层包裹的一系列核酸及蛋白质),其机理研究、样品制备和临床应用均存在一系列障碍。特别是在骨缺损治疗中,外泌体如何通过受体蛋白进入细胞并在细胞内发挥作用,仍存在较多尚未阐明的科学问题。 本篇综述将简要介绍骨缺损相关治疗方法及外泌体相关的基本概念,讨论干细胞来源外泌体在骨缺损治疗中的分子机理, 并介绍 CRISPR-Cas 基因编辑技术等前沿技术手段在研究骨缺损的外泌体治疗中的作用,最后对本领域的未来趋势进行展望。 相似文献
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随着社会老龄化不断发展,骨性关节炎已严重影响着老年人的生活质量。大量研究表明,利用间充质干细胞分泌的外泌体治疗骨性关节炎可有效修复关节软骨,促进软骨组织再生。外泌体可通过蛋白质以及核酸等生物大分子的转运来介导细胞信号转导,并将其所携带的生物活性物质释放,减轻炎症反应并改善关节软骨周围微环境,从而发挥治疗骨性关节炎的作用。本文就当前在外泌体领域对骨性关节炎以及软骨修复的最新实验结果进行讨论,并提供一些新观点和设想。 相似文献
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肿瘤及其微环境来源的外泌体miRNAs可以促进肿瘤细胞增殖和侵袭运动;通过介导肿瘤细胞与免疫细胞、转移靶器官间的信息交流促进肿瘤细胞定向转移;诱发肿瘤细胞对顺铂和吉西他滨等的耐药;同时针对肿瘤患者血清和唾液中外泌体miRNAs的检测显示出应用于肿瘤诊断和预后判断的潜在重要价值。 相似文献
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<正>心血管疾病(cardiovascular diseases,CVD)是全球高发性疾病,其中冠心病(coronary heart disease,CHD)是世界范围内的主要死亡原因,在老年人群中死亡率和发病率不断上升[1],与微小RNA(microRNA,miRNA,miR)的调节密切相关[2]。研究报道,miRNA调节大量信号通路,可通过外泌体(exosome)实现细胞间传递,参与细胞间的信息交流[3],其严格 相似文献