自噬基因Beclin1过表达骨肉瘤中Ki-67和P53的表达及相关性

目的探讨Beclin1过表达骨肉瘤组织中Ki-67、P53的表达及相关性。方法采用回顾性研究方法,选取我院诊治的骨肉瘤患者70例,所以患者均经免疫组化检测Beclin1的表达,根据Beclin1是否阳性表达进行分组比较,同时检测组织Ki-67、P53的表达,分析Beclin1过表达骨肉瘤中Ki-67、P53的表达差异性和相关性。结果在成骨性骨肉瘤、成纤维性骨肉瘤和成软骨性骨肉瘤3种骨肉瘤中Beclin1的表达差异无统计学意义(P0.05),总阳性率为62.86%,在Beclin1阳性组织中,P53的表达阳性率为52.27%,Ki-67表达阳性率为43.18%,与Beclin1阴性组比较差异具有统计学意义(P0.05);进一步相关分析显示,Beclin1的过表达与P53呈正相关(r=0.653,P=0.001),而与Ki-67呈负相关(r=-0.741,P=0.001)。结论自噬基因Beclin1过表达骨肉瘤组织中Ki-67、P53的表达状态存在差异性,Beclin1过表达状态可能与下调Ki-67而抑制细胞增殖和促进P53的表达上调而促进细胞凋亡有关,最后对肿瘤发挥抑制作用。     

siRNA沉默TAp73对骨肉瘤细胞的增殖和侵袭力的作用研究

目的　探讨通过siRNA沉默细胞TAp73蛋白表达对骨肉瘤Saos-2细胞的增殖、周期以及侵袭力的作用研究。 方法 以骨肉瘤Saos-2细胞系为研究对象,设计合成沉默TAp73的siRNA片段,转染入Saos-2细胞,用Western-blot法检测干扰后TAp73蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力。 结果 Western-blot检测显示siRNA对TAp73蛋白表达有显著下调作用;CCK-8检测实验组细胞增殖明显(P<0.05);细胞周期检测显示细胞处于DNA合成期（S期）的细胞比例上升;穿过人工基底膜的细胞数量也明显增加,由（84.17±1.35）增加为（92.67±2.80 ）(P<0.05)。 结论 抗癌基因TAp73在骨肉瘤的增殖、凋亡和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为控制肿瘤增殖和转移的关键性因素。     

食管鳞状细胞癌中Beclin1表达及其对增殖的影响

目的探讨Beclin1在食管鳞状细胞癌(esophagus squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及意义,分析其过表达对人ESCC细胞株TE1体外生长活性的影响。方法分别采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测57例ESCC及癌旁正常食管黏膜组织中Beclin1蛋白及mRNA的表达;利用基因转染、RT-PCR及Western blot法观察外源性Beclin1过表达对ESCC细胞株TE1的影响;MTT法分析外源性Beclin1过表达对TE1细胞增殖的影响;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡;在荧光显微镜下观察转染后肿瘤细胞的自噬。结果免疫组化染色结果示,在ESCC中Beclin1蛋白的阳性率为29.82%(17/57),明显低于癌旁正常食管黏膜组织100%(57/57)(P<0.00),Beclin1蛋白的表达与ESCC患者的分化程度(χ2=6.158,P=0.046)、淋巴结转移(χ2=5.664,P=0.017)有关;与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度无关;RT-PCR检测结果示,在ESCC中Beclin1 mRNA的表达量(0.168±0.038)明显低于癌旁正常食管黏膜组织(0.280±0.052)(P<0.00)。pCMV6-Entry-Beclin1脂质体法转染TE1细胞后,在mRNA和蛋白水平Beclin1的表达均高于TE1PE组及TE1组。在TE1细胞中过表达Beclin1后可抑制肿瘤细胞的体外生长,抑制率为57.21%。FCM检测pCMV6-Entry-Beclin1转染后G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制;凋亡率为5.91%,高于TE1PE组和TE1组(P<0.05)。在荧光显微镜下见TE1Beclin1组中MDC标记的自噬囊泡数量明显增加。结论自噬相关基因Beclin1 mRNA及蛋白在ESCC中表达下调,自噬活性的降低可能与ESCC的发生、发展及侵袭转移有关;Beclin1过表达可抑制人ESCC细胞株TE1的增殖,并诱导其自噬和凋亡,利用自噬基因Beclin1对ESCC基因治疗也许具有可行性。     

自噬相关基因Beclin 1与肿瘤

自噬性细胞死亡是一种不同于凋亡、不依赖于caspase的程序性细胞死亡。研究发现自噬活性的变化、自噬性细胞死亡与恶性肿瘤的发生、发展有关。某些癌基因、抑癌基因参与了自噬活性的调节，其中对Beclin1研究较多，它作为自噬相关基因参与调节自噬活性，从而在肿瘤的发生、发展中发挥作用。现对Beclin1、自噬与肿瘤发生、发展关系的最新进展作一综述。     

PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症的表达和临床意义

目的 考察PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症的表达和临床意义.方法 采用免疫组化法测定40例子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜和20例正常对照的PTEN与Beclin1表达水平.并考察不同病理资料与两者表达水平关联.结果 正常对照、在位内膜、异位内膜三者的PTEN与Beclin1表达水平均逐渐下降(P＜0.05).其中PTEN在正常对照、在位内膜和异位内膜的增生期、分泌期表达均无显著差异(P＞0.05).但Ⅲ-Ⅳ期表达率低于Ⅰ-Ⅱ期患者(P＜0.05).Beclin1在在位内膜和异位内膜的增生期、分泌期表达均无显著差异(P＞0.05),却在正常对照中具有显著差异(P＜0.05),同时Ⅲ-Ⅳ期表达率低于Ⅰ-Ⅱ期患者(P＜0.05).PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症组织中表达水平正相关.结论 PTEN与Beclin1的低表达与子宫内膜异位症的发生和发展相关,但其具体作用机制值得进一步深入研究.     

大肠癌中Beclin1、LC3和mTOR的表达及意义

目的：探讨Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的表达及意义。方法采用免疫组化EnVision法、Western blot和RT-PCR技术检测Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果 Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的阳性率分别为90．50%、87．19%和46．28%,均明显高于癌旁组织( P<0．05),且LC3蛋白在中+低分化大肠癌中的表达(91．34%、89．58%)高于高分化大肠癌(77．61%),在有淋巴结转移组的表达(95．41%)高于无淋巴结转移组(80．45%), mTOR在有淋巴结转移组的表达(57．80%)高于无淋巴结转移组(35．33%)(P<0．05),Beclin1过表达与大肠癌分化程度和淋巴结转移均无关(P>0．05)。 LC3与Beclin1在大肠癌中表达呈正相关(rs =0．593,P<0．01),与mTOR表达呈负相关(rs =-0．165,P<0．01),Beclin1和mTOR表达之间无明显相关性(P>0．05)。 Kaplan-Meier生存分析显示,Beclin1和LC3均阳性、mTOR阴性、无淋巴结转移的大肠癌患者5年生存率高于Beclin1和LC3均阴性、mTOR阳性及有淋巴结转移的患者。多因素分析显示,LC3、mTOR和淋巴结转移是影响大肠癌预后的独立因素。 RT-PCR和Western blot检测结果显示：Beclin1、LC3和mTOR mRNA和蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P<0．05)。结论自噬相关基因Beclin1、LC3和mTOR的异常表达可能与大肠癌的发生、发展及预后相关;联合检测Beclin1、LC3和mTOR在大肠癌中的表达有助于评估进展程度和预后判断。     

骨肉瘤中c-kit的表达及其临床意义

目的探讨骨肉瘤中c-kit的表达与肿瘤生物学行为及预后的关系,检测c-kit基因的突变状态,为临床判断预后及靶向治疗骨肉瘤提供依据。方法采用免疫组化EnVision两步法检测c-kit蛋白在40例普通型骨肉瘤组织中的表达,结合临床资料分析其与肿瘤生物学行为的关系,并应用单链构象多态性分析c-kit基因第11、17外显子的突变情况。结果c-kit在普通型骨肉瘤中表达阳性率为62.5%(25/40);c-kit高表达者更易局部复发,术后生存时间显著低于c-kit低表达组。未在38例普通型骨肉瘤标本中检测到SSCP银染异常条带,进一步测序证实无基因突变。结论c-kit在普通型骨肉瘤中的表达与骨肉瘤的生物学行为有关,对评价患者的预后有一定参考价值。c-kit外显子的突变在骨肉瘤中是低概率事件,不能成为酪氨酸激酶抑制剂的治疗靶点。     

IMP3蛋白在骨肉瘤组织中的表达与临床意义

目的:探讨IMP3蛋白在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义.方法:选取骨肉瘤患者68例,以骨软骨瘤患者术后石蜡切片20例作为对照,应用SP免疫组化方法检测IMP3蛋白的表达,以分析其在骨肉瘤、骨软骨瘤组织中阳性表达的差异性及与预后的关系.结果:骨肉瘤组织中IMP3阴性、弱、中、强的表达依次为4.41%(3/68)、 22.06%(15/68)、 22.74%(19/68)、 45.59%(31/68),与骨软骨瘤组织相比,IMP3在骨肉瘤的表达存在显著上调( P <0.01).骨肉瘤中IMP3 表达与骨肉瘤患者术后3年存活率呈负相关( P < 0.01).结论:IMP3与骨肉瘤的发生、发展及预后有关,可作为新的骨肉瘤标记物,具有重要的临床意义.     

口腔癌患者中 SOX9、 Beclin1 的表达与预后转归的关系

目的 探讨口腔癌患者中性别决定基因盒 9 ( sex-determining region Y box 9, SOX9)、 自噬基因 (Beclin1) 的表达与预后转归的关系。 方法 选取 2017 年 5 月至 2018 年 5 月河北省保定市第一中心医院口 腔科收治的 38 例口腔癌患者, 取其口腔癌组织标本 38 份和癌旁组织标本 30 份, 检测患者口腔癌组织中 SOX9、 Beclin1 的表达情况。 分析 SOX9、 Beclin1 阳性表达与临床病理因素的关系, 采用 COX 分析影响口腔 癌预后转归的危险因素, 分析 SOX9、 Beclin1 与预后转归的关系。 结果 口腔癌组织中 SOX9 和 Beclin1 阳 性表达率显著高于癌旁正常组织 (P< 0. 05), SOX9、 Beclin1 阳性表达与年龄、 性别无关 (P > 0. 05), 与 肿瘤分期、 分化程度和淋巴转移相关 (P< 0. 05)。 对口腔癌预后影响因素采取 Cox 逐步回归分析, 结果显 示肿瘤分期、 淋巴转移、 SOX9、 Beclin1 是影响口腔癌患者预后转归的独立危险因素 (P< 0. 05)。 SOX9 阳 性及阴性表达患者无进展生存期分别为 10 ~ 18 月 [平均 (12. 5 ± 2. 4) 月]、 14 ~ 23 月 [平均 (17. 5 ± 3. 1) 月]; Beclin1 阳性及阴性表达患者无进展生存期分别为 11 ~ 18 月 [平均 (13. 7 ± 2. 4) 月]、 13 ~ 22 月 [平均 (15. 7 ± 3. 1) 月]。 SOX9、 Beclin1 阳性表达患者无进展生存期显著低于阴性表达患者 (c²=7.969、3.315,P＜0.05）。结论 口腔癌患者中 SOX9、 Beclin1 呈阳性表达, 其表达与预后转归密切相关, 口腔癌患者 SOX9、 Beclin1 表达越高预后转归越差。     

Establishment of an oligoasthenospermia mouse model based on TAp73 gene suppression

BackgroundOligoasthenospermia is one of the main causes of male infertility. Researchers usually use chemical drugs to directly damage germ cells to prepare oligoasthenospermia models, which disregards the adhesion and migration between spermatogenic cells and Sertoli cells. TAp73 is a critical regulator of the adhesin of germ cell; thus, we sought to explore a novel oligoasthenospermia model based on TAp73 gene suppression.MethodsMice in the Pifithrin‐α group were injected intraperitoneally with 2.5 mg/kg Pifithrin‐α (TAp73 inhibitor) daily for 30 consecutive days. Reproductive hormone levels and epididymal sperm quality, as well as the network morphology of Sertoli cells were tested.ResultsSperm density, motility, and the relative protein and mRNA expression of TAp73 and Nectin 2 were obviously decreased in the Pifithrin‐α group compared with the normal control group. No significant distinction was observed in the relative mRNA and protein expression of ZO‐1. Furthermore, the tight junctions (TJs) and apical ectoplasmic specialization (ES) were destroyed in the Pifithrin‐α group.ConclusionThe above results indicate that we successfully established a new oligoasthenospermia mouse model. This study provides a foundation for further exploration of the roles of TAp73 genes during spermatogenesis and provides new research objects for further oligospermia research and future drug discovery.     

Expression and clinical significances of Beclin1, LC3 and mTOR in colorectal cancer

Autophagy is related to cancer and other diseases, and compromised autophagy could promote chromosome instability associated with carcinogenesis and tumor progression. The role of autophagy in the growth and metastasis of colorectal cancer (CRC) remains poorly understood. Beclin1 mediates autophagic initiation, and LC3 is a specific marker for autophagy. Inactivation of mTOR caused by cellular hypoxia or energy deficiency induces autophagic activity. This study aims to examine the expression and clinical significance of these proteins in CRC. Immunohistochemistry results showed that the positive expression rates of Beclin1, LC3, and mTOR in cancer tissues were 90.50%, 87.19%, and 46.28%, respectively, which were higher than those in adjacent tissues (P < 0.05). Differentiation degree and lymph node metastasis were associated with LC3 overexpression (P < 0.05) but not with Beclin1 (P > 0.05). Lymph node metastasis was also related to mTOR. Spearman analysis results showed that LC3 expression was positively correlated with Beclin1 but negatively correlated with mTOR (r = 0.593 and -0.165, respectively; P < 0.01). Beclin1 expression was also not associated with mTOR (P > 0.05). Survival analysis further indicated that LC3, mTOR, and lymph node metastasis were independent prognostic factors in CRC. Real-time PCR results and Western blot indicated that Beclin1, LC3, and mTOR expression in CRC was significantly higher than that in adjacent tissues (P < 0.01). The aberrant protein expression may be associated with the development and progression of CRC. The LC3 and mTOR genes must be simultaneously detected to evaluate progression and prognosis of CRC.     

胸苷激酶1（TK1）在骨肉瘤中的表达及其临床病理意义

目的　探讨骨肉瘤肿瘤细胞胸苷激酶1（TK1）的表达状况及骨肉瘤患者血清TK1的水平,分析其临床病理意义。 方法 采用免疫组化MaxVision法检测40例骨肉瘤和20例骨巨细胞瘤组织标本中TK1的表达;点印迹免疫酶化学发光法检测20例骨肉瘤患者和20例骨外伤患者血清TK1的水平。 结果　骨肉瘤肿瘤细胞TK1阳性信号位于胞浆及胞核,高级别骨肉瘤阳性率显著高于低级别骨肉瘤（P<0.05）;骨肉瘤肿瘤细胞TK1阳性率亦显著高于骨巨细胞瘤（P<0.05）;骨肉瘤患者血清TK1的水平(2.95±1.33)pmol/L（0.97~7.25 pmol/L）高于外伤除外肿瘤患者(0.89±0.51) pmol/L (0.32~2.58 pmol/L),两者差异具有显著性统计学意义（P<0.05）。 结论　TK1在骨肉瘤与骨的良性病变的鉴别诊断中具有一定的意义。此外,TK1在骨肉瘤患者血清中可被检测到较高的水平,是一项检测骨肉瘤增殖活性较灵敏的指标。     

骨肉瘤干细胞生物标志物CD117和Stro-1的表达及其临床意义

目的 探讨骨肉瘤干细胞生物标志物CD117和Stro-1在骨肉瘤组织中的表达及其与骨肉瘤临床病理因素、患者无瘤生存期的关系。方法 采用回顾性研究方法。纳入2014年8月-2017年11月上海交通大学附属第六人民医院手术切除并经病理学检查确诊的58例患者的骨肉瘤切除标本为骨肉瘤组,其中男36例、女22例,年龄10～67(23.16 ± 13.47)岁;另取其中13例患者的瘤旁骨组织标本作为骨组织组。取两组组织蜡块构建组织芯片,采用免疫组织化学法检测组织芯片中骨肉瘤干细胞生物标记物CD117和Stro-1蛋白在骨肉瘤组、骨组织组中的表达情况。在骨肉瘤组织中,分析CD117和Stro-1蛋白表达的相关性;CD117、Stro-1蛋白表达及CD117/Stro-1蛋白双阳性表达与骨肉瘤患者临床病理因素、患者无瘤生存期的关系。结果 CD117和Stro-1在骨肉瘤组的阳性表达率分别为51.72%(30/58)和48.28%(28/58),在骨组织组的阳性表达率均为6/13,差异均无统计学意义(P值均> 0.05)。在骨肉瘤组中,CD117蛋白与Stro-1蛋白的表达呈正相关(r_n=0.864, P＜0.01)。CD117蛋白阳性、Stro-1蛋白阳性及CD117/Stro-1蛋白双阳性表达在Enneking外科分期差异均有统计学意义(χ²=6.501、7.374、6.130, P值均＜0.05),而与不同年龄、性别间差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。CD117蛋白阳性30例患者的无瘤生存期中位数为360.00 d,少于阴性28例患者的1 260.00 d;Stro-1蛋白阳性28例患者无瘤生存期中位数为330.00 d,少于阴性30例患者的900.00 d;CD117、Stro-1蛋白双阳性27例患者无瘤生存期中位数为360.00 d,少于非双阳性31例患者的900.00 d:差异均有统计学意义(χ² = 5.770、4.638、5.391, P值均＜0.05)。结论 在骨肉瘤组织中,CD117和Stro-1的阳性表达呈正相关,无论哪种蛋白阳性表达,患者临床分期更高,无瘤生存期更短。CD117和Stro-1有望成为预测骨肉瘤患者术后预后情况的重要指标。     

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其下调凋亡因子caspase-9效应的研究

构建自噬基因Beclin 1的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,脂质体包裹后体外转染人宫颈癌HeLa细胞株,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响,并检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡情况以及凋亡因子caspase-9 mRNA及蛋白表达的变化。结果表明shRNA真核表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染后细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低,并伴有caspase-9 mRNA及蛋白量的显著下调。因此,Beclin 1不仅与自噬调控通路有关,而且可以调控凋亡的发生,同时参与两种程序性细胞死亡的过程。