汉黄芩素对人口腔鳞状细胞癌细胞生长和侵袭的影响

目的:探讨汉黄芩素对人口腔鳞状细胞癌SCC-4细胞生长和侵袭的影响及其作用机制。方法:使用不同浓度(0、20、40、60、80和100 mg/L)的汉黄芩素处理SCC-4细胞不同时间,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路的活化。结果:汉黄芩素呈剂量及时间依赖性地抑制细胞生长,同时诱导细胞大量凋亡,抑制细胞的侵袭。汉黄芩素明显抑制了细胞中β-catenin的活化,同时其下游靶分子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达水平降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加。用Wnt/β-catenin通路激动剂Li Cl处理后,汉黄芩素抑制的Wnt/β-catenin通路分子活化明显增强,同时细胞生长能力明显增强,而凋亡能力降低,还明显减弱了汉黄芩素对细胞侵袭能力的抑制作用。结论:汉黄芩素主要通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来调控口腔鳞状细胞癌细胞的生长及侵袭进程,具有一定的抗口腔鳞状细胞癌发展的作用,可成为临床上口腔鳞状细胞癌防治的潜在药物。     

CD168 对口腔鳞状细胞癌增殖、 侵袭的作用机制研究

目的 探究 CD168 对口腔鳞状细胞癌增殖、 侵袭的作用机制。 方法 比较人正常口腔角质细胞 系 HOK 与不同口腔鳞癌细胞株间 CD168 表达差异, 选择 HN13 细胞株作为研究对象, 感染慢病毒 shRNA 载体后, 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 和 Western 印迹法检测 CD168 基因和蛋白表达检测干预效果, CCK-8 法检测细胞增殖情况, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, Transwell 试验检测细胞侵袭情况, Western 印迹 检测细胞增殖、 凋亡、 侵袭以及 CXCL12-CXCR4 / CXCR7 信号轴相关蛋白表达。 结果 选择 HN13 细胞和 CD168-shRNA2 慢病毒载体进行后续实验 (P< 0. 05); 沉默 CD168 可使 HN13 细胞增殖、 侵袭数量减少, 细胞凋亡率升高 (P< 0. 05), VEGF、 PCNA、 MMP-2、 MMP-9、 CXCL12、 CXCR4、 CXCR7 蛋白表达量降低 (P< 0. 05), Bax / Bcl-2 比值升高 (P< 0. 05), shRNA-NC 组变化无统计学意义 (P> 0. 05)。 结论 靶向沉 默 CD168 可抑制口腔鳞状癌细胞 HN13 增殖、 侵袭, 促进其凋亡, 可能与 CXCL12-CXCR4 / CXCR7 信号轴 有关。     

大蒜素对人皮肤基底细胞癌A431细胞的放疗增敏作用研究

目的 探讨大蒜素(Allicin)是否能增加人皮肤基底细胞癌A431细胞的放疗敏感性及其作用机制.方法 MTT法检测Allicin对A431细胞的生长抑制率,筛选出半数抑制浓度(IC50);将细胞分为对照组、照射组(IR组)、Allicin组和IR+Allicin组.采用流式细胞仪检细胞自噬水平.结果 MTT结果显示大蒜素作用A431细胞24、48、72 h后IC50分别为35.47、18.64、6.56 mmol/L(F =22.54、18.94和21.63,P＜0.05).和对照组相比,Allicin组和Allicin+ IR组A431细胞的自噬水平均增加(F=30.15、28.36,P＜0.05),以Allicin+ IR组升高最显著.结论 Allicin通过上调人皮肤基底细胞癌A431细胞的自噬水平来增加其放疗敏感性.     

虫草素对胶质瘤细胞的增殖及侵袭作用的影响及机制研究

目的:探讨虫草素对胶质瘤细胞增殖及侵袭作用的影响,并初步探讨其机制。方法:将虫草素配置成不同浓度(100、200和400μg/ml)作用于胶质瘤细胞,对照组不加入药物。使用CCK8法检测细胞不同时间点和不同药物浓度增殖情况,采用Transwell实验检测不同药物浓度作用下细胞侵袭情况,通过Western blot和q-PCR法检测Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA的表达水平。结果:100μg/ml虫草素对U87细胞增殖和侵袭无明显影响(P 0. 05)。200和400μg/ml虫草素可明显抑制U87细胞增殖,呈剂量和时间依赖性(P0. 05)。200和400μg/ml虫草素可明显抑制U87细胞侵袭,呈剂量依赖性(P0. 05)。U87细胞经不同浓度虫草素(100、200、400μg/ml)处理24 h后,发现200和400μg/ml虫草素处理后Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA水平明显降低(P0. 05),100μg/ml虫草素处理后对Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA水平的抑制作用不明显(P 0. 05)。结论:虫草素能抑制U87细胞的增殖和侵袭,其机制可能与下调Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin的表达有关。     

lncRNA COLCA1/miR-423-5p/FAM172A分子轴对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)COLCA1在皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC)组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响、分子机制.方法 采用qRT-PCR法检测COLCA1在正常皮肤组织和CSCC组...     

汉黄芩素对人NK细胞杀伤胃癌MKN45细胞的影响及其机制研究

目的探讨汉黄芩素对人NK细胞杀伤胃癌MKN45细胞的影响及作用机制。方法淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC),在体外经rhIL-2诱导培养NK细胞;不同浓度的汉黄芩素分别作用于NK细胞24 h、48 h及72 h后CCK8法检测NK细胞增殖情况;不同浓度汉黄芩素作用NK细胞48 h后:流式细胞术(FCM)检测NK细胞GraB、IFN-γ、PFP、CD107a的表达;Western blot检测NK细胞p-Akt、β-catenin、Bcl-2、p-ERK的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对胃癌细胞株MKN45的杀伤活性。结果 0.2~50μg/ml的汉黄芩素作用NK细胞24 h、48 h及72 h后,NK细胞的增殖率增高;同一质量浓度汉黄芩素作用48 h后的NK细胞的增殖率最高且在12.5μg/ml时达最高峰;汉黄芩素3.1~12.5μg/ml作用NK细胞48 h后:NK细胞的GraB、IFN-γ、PFP、CD107a表达增加、NK细胞的p-Akt、β-catenin表达增加、NK细胞对胃癌MKN45细胞的杀伤活性增高。结论汉黄芩素能够促进NK细胞的增殖,其促进NK细胞的增殖可能与Wnt信号传导通路及PI3K/Akt信号通路有关;汉黄芩素增加NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性可能与汉黄芩素上调NK细胞GraB、PFP、IFN-γ及CD107a的表达有关。     

NQO1生物活性药物β-Lapachone抑制皮肤鳞状细胞癌A431增殖、诱导周期阻滞及ROS生成

目的 探讨NQO1蛋白在皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma, CSCC）组织中的表达及β-Lapachone在CSCC中的抗肿瘤作用。方法 采用免疫组化法检测76例CSCC组织和13例正常皮肤组织中NQO1的表达;分析NQO1表达与CSCC临床病理特征的关系;体外常规培养A431细胞,通过克隆形成、流式细胞术及免疫荧光染色法检测β-Lapachone对细胞增殖、周期进程以及活性氧（reactive oxygen species, ROS）生成的作用,并通过Western blot检测相关分子和信号通路。结果 免疫组化：NQO1蛋白在CSCC中的阳性率（85.5%,65/76）高于正常皮肤组织（46.2%,6/13,P<0.05）。χ²检验：NQO1蛋白表达与肿瘤大小有关（P<0.05）,与患者年龄、性别、分化和临床分期均无相关性。MTT和克隆形成实验：β-Lapachone可抑制A431细胞的增殖能力。流式细胞术检测：β-Lapachone诱导A431细胞发生周期阻滞。β-Lapachone可促进细胞生成...     

靶向VEGF的shRNA对皮肤鳞癌A431细胞的作用

 目的 构建靶向VEGF的shRNA（psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shRNA,VEGF-s2）干预皮肤鳞癌细胞（A431）的一系列生物学行为,探讨VEGF-s1和VEGF-s2干预作用的意义。方法 构建psVEGF-shRNA真核表达质粒干预体外培养的A431细胞, 同时构建含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shrank,T-off)。RT-QPCR,western blot 和ELISA检测细胞内VEGFmRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8法检测细胞活性;流式细胞仪检测癌细胞增殖周期细胞百分比与细胞凋亡;划痕试验和Transwell小室试验别检测癌细胞二维和三维空间的迁移能力;FN黏附试验检测癌细胞的黏附潜能。结果 A431细胞转染psVEGF-shrank后活性降低,细胞周期发生阻滞,与对照组相比细胞在G1期比率显著增加(P<0.05),在S期比率明显降低,细胞调亡增加(均P<0.05),细胞内VEGFmRNA和蛋白表达水平下降,细胞迁移和黏附潜能均受到抑制。结论 VEGF是人皮肤鳞癌细胞生长相关的重要基因,干扰VEGF基因能有效抑制人皮肤鳞癌细胞的生物学行为。     

汉黄芩素对胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的抑制作用及机制

目的探讨汉黄芩素对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭的影响及其相关机制。方法 U87细胞随机分为对照组(加入20μL的培养液)、(0、50、100)μmol/L汉黄芩素处理组;细胞培养48h,应用MTT法检测细胞增殖情况,通过TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,荧光实时定量PCR测定ezrin mRNA表达,Western blot法检测ezrin、Bcl-2、Bax蛋白表达及ezrin蛋白磷酸化水平,用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果与0μmol/L汉黄芩素组以及对照组相比,(50、100)μmol/L汉黄芩素组细胞增殖抑制率增加,且100μmol/L汉黄芩素组细胞增殖抑制率明显高于50μmol/L汉黄芩素组。随着汉黄芩素浓度的增加,平均穿膜细胞数以及ezrin mRNA、ezrin蛋白、ezrin蛋白磷酸化水平、Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低,而Bax蛋白表达水平、AI逐渐增加;0μmol/L汉黄芩素组与对照组相比,无显著性差异。结论汉黄芩素能够减少胶质瘤U87细胞增殖、侵袭,下调ezrin蛋白表达和磷酸化活性,并诱导细胞凋亡。     

食管鳞状细胞癌中Beclin1表达及其对增殖的影响

目的探讨Beclin1在食管鳞状细胞癌(esophagus squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及意义,分析其过表达对人ESCC细胞株TE1体外生长活性的影响。方法分别采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测57例ESCC及癌旁正常食管黏膜组织中Beclin1蛋白及mRNA的表达;利用基因转染、RT-PCR及Western blot法观察外源性Beclin1过表达对ESCC细胞株TE1的影响;MTT法分析外源性Beclin1过表达对TE1细胞增殖的影响;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡;在荧光显微镜下观察转染后肿瘤细胞的自噬。结果免疫组化染色结果示,在ESCC中Beclin1蛋白的阳性率为29.82%(17/57),明显低于癌旁正常食管黏膜组织100%(57/57)(P<0.00),Beclin1蛋白的表达与ESCC患者的分化程度(χ2=6.158,P=0.046)、淋巴结转移(χ2=5.664,P=0.017)有关;与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度无关;RT-PCR检测结果示,在ESCC中Beclin1 mRNA的表达量(0.168±0.038)明显低于癌旁正常食管黏膜组织(0.280±0.052)(P<0.00)。pCMV6-Entry-Beclin1脂质体法转染TE1细胞后,在mRNA和蛋白水平Beclin1的表达均高于TE1PE组及TE1组。在TE1细胞中过表达Beclin1后可抑制肿瘤细胞的体外生长,抑制率为57.21%。FCM检测pCMV6-Entry-Beclin1转染后G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制;凋亡率为5.91%,高于TE1PE组和TE1组(P<0.05)。在荧光显微镜下见TE1Beclin1组中MDC标记的自噬囊泡数量明显增加。结论自噬相关基因Beclin1 mRNA及蛋白在ESCC中表达下调,自噬活性的降低可能与ESCC的发生、发展及侵袭转移有关;Beclin1过表达可抑制人ESCC细胞株TE1的增殖,并诱导其自噬和凋亡,利用自噬基因Beclin1对ESCC基因治疗也许具有可行性。     

circAGFG1在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及其对SCC13细胞增殖、迁移的影响

目的：探讨circAGFG1在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及其对SCC13细胞增殖、迁移的影响及其可能作用机制。方法：收集2018年3月至2020年5月江南大学附属医院收治的46例皮肤鳞状细胞癌患者的癌组织及其相应癌旁组织标本,qRT-PCR法检测circAGFG1、miR-653-5p的表达量;采用Pearson法分析皮肤鳞状细胞癌组织中circAGFG1与miR-653-5p表达量的相关性;体外培养人皮肤鳞状细胞癌细胞SCC13,随机分为：si-NC组、si-circAGFG1组、miR-NC组、miR-653-5p组、si-circ-AGFG1+anti-miR-NC组、si-circAGFG1+anti-miR-653-5p组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成及迁移;双荧光素酶报告实验检测circAGFG1与miR-653-5p的靶向关系。结果：与癌旁组织比较,皮肤鳞状细胞癌组织中circAGFG1的表达量升高（P<0.05）,miR-653-5p的表达量降低（P<0.05）;circAGFG1与miR-653...     

子宫颈鳞状细胞癌中DIAPH3表达对细胞迁移和侵袭的作用及分子机制

目的 探讨Diaphanous相关成蛋白3(diaphanous-related formin 3, DIAPH3)对子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma, CSCC)细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法 收集30例CSCC石蜡包埋组织及配对癌旁组织,应用生物信息学与免疫组化分析CSCC组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理相关性分析。采用分子生物学与肿瘤迁移相关实验分析DIAPH3对CSCC细胞迁移和侵袭的作用及机制。结果 仙桃学术数据库分析显示：DIAPH3 mRNA在CSCC组织(2.37)中表达比癌旁组织(0.25)明显升高(P<0.05);DIAPH3高表达患者的无复发生存率明显降低(P=0.031)。免疫表型：CSCC组织中DIAPH3的阳性率为70.00%(21/30),高于癌旁组织(30%,9/30);DIAPH3的阳性率在不同肿瘤分化程度(P=0.032)和有无淋巴结转移(P=0.018)组间差异有统计学意义。siRNA干扰DIAPH3组：CSCC细胞的迁移率(28.33%,P=0.002)、穿过小室的细胞数(2...     

RNA 干扰抑制BAG-1 基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响研究

目的:探讨抑制BAG-1(Bcl-2-associated athanogene-1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响。方法:采用LipofectamineTM2000 将BAG-1 的siRNA 转染皮肤鳞状细胞癌A431,转染后48 h,RT-PCR 检测BAG-1 的mRNA 表达,Western blot 检测BAG-1 的蛋白表达;CCK8 和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot 检测B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2)家族促凋亡蛋白Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Wnt/β-catenin 信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、Survivin 的蛋白表达;ELISA 试剂盒检测白介素6 (IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与空白组和阴性对照组比较,转染BAG-1 的siRNA 可明显抑制BAG-1 在转录和翻译水平上的表达;与空白组较,BAG-1-siRNA 组细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax 蛋白表达上调, β-catenin、Survivin 蛋白表达下调,IL-6、VEGF 含量均显著降低(P<0.05)。结论:BAG-1 表达沉默可降低皮肤鳞状细胞癌增殖,促进细胞凋亡,上调Bax 及下调Wnt/ β-catenin 信号通路表达,降低IL-6、VEGF 因子的分泌。     

熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制

目的 探讨熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制.方法 体外培养A549细胞,分别以0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L熊果酸处理48h后,平板克隆实验与MTT实验检测肺癌A549细胞的增殖能力;流式细胞术检测肺癌A549细胞的凋亡率;Transwell实验检测A549...     

外源性FHIT基因对人皮肤癌细胞系A431细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT)对皮肤癌细胞株A431增殖与凋亡作用的影响，探讨FHIT基因在皮肤肿瘤发生发展中的作用。方法 脂质体介导的质粒pcDNA3-FHIT转染到有FHIT基因表达异常的皮肤癌细胞株A431，用G418 对转染后细胞进行筛选，获得G418 抗性的细胞用免疫细胞化学方法进行FHIT基因表达鉴定。用MTT法、克隆形成试验及流式细胞仪观察转染前后细胞生长特性的变化。结果 转染FHIT基因的A431细胞FHIT蛋白表达阳性,其增殖活性减弱、克隆形成能力降低、凋亡率增加,且与对照组差异均有统计学意义。结论 导入外源性FHIT基因可以抑制皮肤肿瘤细胞A431的增殖,诱导细胞凋亡。     

人鳞状细胞癌细胞株(A431)中NET-1基因对癌细胞增殖和浸润的影响

目的 探讨小分子干扰核酸(siRNA)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)细胞株(A431)中NET-1基因的抑制作用,及其基因对癌细胞增殖、浸润的影响.方法 构建针对人NET-1基因的siRNA NET-1真核表达载体(pU6H1-GFP-siRNA NET-1),转染A431细胞后通过半定量RT-PCR检测细胞中NET-1 mRNA水平以筛选较有效的siRNA NET-1.同时设置针对NET-1的正、反义真核表达载体和随机序列对照组siRNA表达载体,体外瞬时转染A431细胞,RT-PCR、Western blot分别检测癌细胞内NET-1 mRNA和蛋白的表达,经免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察NET-1蛋白在细胞内的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪分别榆测A431细胞增殖与占不同细胞周期中细胞增殖指数(PI);划痕试验和Transwell迁移试验分别检测A431细胞的迁移和侵袭能力.结果 测序证实编码NET-1序列的siRNA已经插入载体pU6H1-GFP中U6和H1两个启动子之间,其他载体测序结果 符合设计要求.pU6H1-GFP载体转染A431细胞后其转染率达到80%.转染siRNA NET-1和反义NET-1后分别与未转染组比较,A431细胞中NET-1 mRNA分别减少72%和62%(t值分别为-36.01,-17.65;均P<0.05)和蛋白表达水平分别减少61%和69%(t值分别为-21.13,-33.14;均P<0.05);在转染48 h后能显著抑制A431细胞的增殖、迁移和浸润(均P<0.05).在转染对照组siRNA后并未见到明显的抑制效果.转染正义NET-1后,能分别增加细胞内52%NET-1 mRNA和49%蛋白表达水平(t值分别为12.49,13.98,均P<0.01).结论 靶向NET-1的siRNA真核表达载体能特异、有效的下调NET-1基因蛋白的表达,并抑制A431细胞增殖、迁移和浸润.进而证明内源性NET-1基因的功能与A431细胞增殖、迁移、浸润有关.靶向NET-1的siRNA显示基因抑制效率比反义核酸技术更好.     

RhoC基因沉默对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的：分析RhoC对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法：利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平。按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组。RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动。最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证。结果：RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大。RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高（P<0.01）;RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、M...     

芹菜素对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的探讨芹菜素对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法 MTT法检测不同浓度的芹菜素(0、20、40、80μmol/L)对喉癌Hep-2细胞增殖的影响。40μmol/L芹菜素处理Hep-2细胞48h后,Transwell实验检测Hep-2细胞体外迁移和侵袭能力变化;实时PCR和Western blot检测Hep-2细胞Wnt1、β-catenin、环氧合酶2(COX2)与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白与mRNA的表达水平。结果芹菜素抑制喉癌Hep-2细胞增殖,并呈时间浓度依赖性;40μmol/L芹菜素处理Hep-2细胞48h能够有效抑制Hep-2细胞的迁移和侵袭能力,降低Wnt1、β-catenin、COX2与MMP-2 mRNA相对表达量和蛋白表达水平。结论芹菜素抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力与抑制喉癌Hep-2细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关。