生物素胺（神经生物素~（TM））细胞内染色法与辣根过氧化物酶逆行标记法的结合──研究神经元通路的一个可靠方法

本文阐明了利用细胞内神经生物素（Ｎｅｕｒｏｂｉｏｔｉｎ）染色与ＨＲＰ逆行追踪相结合的方法，研究大鼠三叉神经本体感觉的传导通路．首先将ＨＲＰ分别注射于或微电泳亚对侧丘脑腹后内侧核和后核群，同侧颈髓Ｃ２～Ｃ４平面；同侧闭口肌或同侧三叉神经运动核。２４～４８小时后，用电生理的方法鉴定１～５根闭口肌肌梭传入轴突，分别于细胞内注射神经生物素。ＨＲＰ用ＴＭＢ成色并以钨酸钠作为稳定剂，神经生物素用免疫组化的方法显示．待ＨＲＰ和神经生物素呈色后光镜下发现；在三叉神经运动核，三叉神经感觉核簇和邻近网状结构的ＨＲＰ逆行标记细胞被神经生物素细胞内染色的肌梭传入终扣紧密相贴（Ａｐｐｏｓｉｔｉｏｎ）．这些紧密相贴的结构在电镜下证实为细胞内染色的终扣和ＨＲＰ逆行标记细胞的胞体和的突之间的突触联系．因此，这些ＨＲＰ标记的神经元分别中继来自闭口肌肌梭的三叉神经本体感觉信息至丘脑、颈髓和三叉神经运动核等，分别形成三叉－丘脑和三叉－颈髓的本体感觉传导通路以及与三叉神经运动核之间的直接联系．细胞内神经生物素注射与ＨＲＰ逆行追踪相结合的方法提供了一种追踪中枢神经系统神经环路和神经通路的可靠手段．本方法优越于亲神经病毒追除、原癌基因表达以及神经元溃?     

猫后索核—丘脑—皮质通路在丘脑水平的突触联系

应用顺行溃变和ＨＲＰ逆行追踪相结合的方法对猫内侧丘系与丘脑皮质投射神经元在丘脑腹后外侧核内的突触联系组合型式进行了研究。电损毁一侧后索核后将ＨＲＰ注射于对侧皮质躯体感觉颈、躯干、四肢代表区，电镜下在注射区同侧的丘脑腹后外侧核内可见到下列七种突触形式；（１）溃变的内侧丘系轴突终末与ＨＲＰ标记树突形成的轴－树突触，较多；（２）溃变的内侧丘系轴突终末与ＨＲＰ标记的神经元体形成的轴－体突触较少；（３）溃变     

猫丘脑腹后外侧核内皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元…

用ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，对猫丘脑腹后外侧核内的来自大脑皮质体感Ｉ区的皮质－丘脑纤维终末与丘脑－皮质投射神经元之间的突触连接进行了电镜观察。向猫大脑皮质体感Ｉ区内注射ＣＢ－ＨＲＰ５ｈ后，电解损毁原注射部位，术后动物存活４ｄ。电镜下发现丘脑腹后外侧核内存在５种突触连接方式：（１）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记神经元胞体形成轴－体突触；（２）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成轴－树突     

家兔皮质脊髓束向脊髓长下行固有束神经元的投射—HRP逆行…

用成年家兔１１只，在脊髓腰膨大部注射ＨＲＰ或麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶，逆行追踪长下行脊髓固有束神经元在颈髓和部分髓的分布，其中５例动物在腰膨大注射ＨＲＰ的同时进行大脑皮质脊髓束起始区的损毁，电镜观察皮质脊髓束在颈髓的溃变末梢与ＨＲＰ逆行标记神经元的关系，结果表明，长下行脊髓固有束神经元在脊髓灰质内可分为背腹两群，背侧群主要集中在Ｖ层，细胞较少；腹侧群位于Ⅶ、Ⅷ层，细胞数较多，电镜下可观察与标     

以HRP及氚水作示踪剂研究脑脊液的回流途径

目的 研究脑脊液（ＣＳＦ）的正常回流途径。方法 将ＨＲＰ氚水作为示踪剂分别缓慢注入两组大白鼠侧脑室。应用光，电镜技术和液闪，放射自显影技术对ＨＲＰ和氚水脑组织中分布状况进行观察。结果 在脑室周围器官及脑室周围室管膜，软脑膜层有ＨＲＰ反应产物的聚集，在鼻中隔的鼻粘膜下组织间隙，嗅丝周围间隙及静脉周围和管腔也可见到ＨＲＰ反应产物；     

大鼠下丘脑交叉上核的肽能传出投射

用ＨＲＰ逆行追踪术观察了大鼠下丘脑交叉上核的传出投射，并进一步通过ＨＲＰ逆行追踪结合免疫组化的方法观察了交叉上核投射神经元的性质。     

大鼠前嗅核至伏核的P物质能投射—HRP法和PAP法联合研究

采用ＨＲＰ塑行追踪和ＰＡＰ免疫细胞化学相结合的方法，对大白鼠前嗅核至伏核的纤维投射进行了研究。结果表明：前嗅核外侧部、内侧部和背侧部均有物质能神经元向伏核投射，ＨＲＰ－ＳＰ双标记细胞占ＨＲＰ阳性细胞的６０％。     

大鼠红核酪氨酸羟化酶,生长抑素和亮啡吠能神经元至延髓外侧网状？…

用ＨＲＰ逆行追踪和免疫细胞化学ＡＢＣ法相结合研究了红核内酪氨酸羟化酶，生长抑素和亮啡肽免疫活性神经元至延髓外侧网状核的投射。结果表明，红核内ＨＲＰ标记细胞为对侧性，主要分布于其尾侧２／３，同时，还可见酪氨酸羟化酶、生长抑素、亮啡吠单标细胞及ＨＲＰ／酪氨酸羟化酶、ＨＲＰ／生长换素、ＨＲＰ／亮啡肽双标细胞，其中ＨＲＰ／酪氨酸羟化酶双标细胞约占ＨＲＰ单标细胞２５．２％，ＨＲＰ／生长抑素双标细胞约占２１．     

纯化蝎毒素Ⅳ对神经损伤康复的促进作用

实验用大鼠２０只，结扎坐骨神经以造成神经慢性机械压迫－痛觉过敏动物模型。实验组从手术后第２天开始经腹腔注射纯化蝎毒素Ⅳ，每日注射６００ｍｇ／ｋｇ，持续用药，选用辐射热测痛．本实验用电生理学方法结合ＨＲＰ逆行追踪技术进行研究。结果显示，纯化蝎毒素Ⅳ对神经损伤后形态和功能的恢复以及对神经损伤性痛觉过敏的解除都具有促进作用．     

猫丘脑腹后外侧核内皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元之间的突触连接

用ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，对描丘脑腹后外侧核内的来自大脑皮质体感Ⅰ区的皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元之间的突触连接进行了电镜观察。向猫大脑皮质体感Ⅰ区内注射ＣＢ－ＨＲＰ５ｈ后，电解损毁原注射部位，术后动物存活４ｄ。电镜下发现丘脑瓜后外侧核内存在５种突触连接方式；（１）溃变的轴突终未与ＨＲＰ标记神经元胞体形成轴－体突触；（２）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成轴—树突触；（３）溃变的轴突终末和其它突触前成分共同与中央树突形成汇聚型的突触复合体；（４）溃变的轴突终末与未标记树突形成的轴—树突触；（５）正常的轴突终末与ＨＲＰ标记神经元形成对称型的轴—体突触。     

大鼠中缝痛核接触脑脊液神经元化学性质的研究

用ＣＢ－ＨＲＰ追踪与免疫细胞化学结合的方法，对大鼠中缝背核接触脑脊液神经元的化学性质进行了研究。将ＣＢ－ＨＲＰ注入第三脑室后，中缝背核内观察到ＣＢ－ＨＲＰ标记细胞，标记细胞分布于哟经核的背部和腹侧部。在ＣＢ－ＨＲＰ与Ｐ物质或５－羟色胺免疫细胞化学结合的切片上，中缝背核内出现三种标记细胞：ＨＲＰ单标细胞，Ｐ物质或５－羟色胺免疫反应阳性单标细胞?ＨＲＰ／ＳＰ或ＨＲＰ／５－ＨＴ双标细胞，双标细胞为中，小     

大鼠延髓至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的FOS表达

用ＨＲＰ注入下丘脑室旁核逆行追踪与抗Ｆｏｓ和抗酪氨酸羟化酶（ＴＨ）双重免疫细胞化学相结合的三重标记方法，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元对胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察，发现孤束核和延髓腹外侧区有７种不同的标记细胞：ＨＲＰ、Ｆｏｓ、ＴＨ单标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ、Ｆｏｓ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。上述７种标记细胞主要分布在延髓中、尾段孤束核的内侧亚核、连合亚核和延髓腹外侧区以及两者之间的网状结构。ＨＲＰ标记细胞以注射侧为主，对侧有少量分布。本文结果证明，大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核投射的部分儿茶酚胺能神经元可能参与胃伤害性刺激的传导和调控。     

家兔皮质脊髓束向脊髓长下行固有束神经元的投射──HRP逆行追踪结合顺行溃变技术的光镜和电镜研究

用成年家兔１１只，在脊髓腰膨大部注射ＨＲＰ或麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶（ＷＧＡ－ＨＲＰ），逆行追踪长下行脊髓固有束神经元在颈髓和部分胸髓的分布。其中５例动物在腰膨大注射ＨＲＰ的同时进行大脑皮质脊髓束起始区的损毁，电镜观察皮质脊髓束在颈髓的溃变末梢与ＨＲＰ逆行标记神经元的关系。结果表明，长下行脊髓固有束神经元在脊髓灰质内可分为背腹两群，背侧群主要集中在Ｖ层，细胞较少；腹侧群位于ＶＩＩ、ＶＩＩＩ层，细胞数较多。电镜下可观察到与标记神经元相突触的终扣多为圆形含圆形和混合型小泡。演变末梢有些与标记神经元的胞体或树突形成突触，也有些通过未标记的终扣间接与标记神经元相联系。本研究表明，家兔皮质脊髓束可能通过多种下行通路控制腰部运动，其中，胞体位于颈髓的长下行脊髓固有束神经元肯定与这一下行运动控制机制有关。     

树Qu下丘脑视交叉上核传入联系的研究

用ＨＲＰ逆行追踪技术，探讨了“灵长类原宗”树Ｑｕ下丘脑视交叉上核的传入联系。证明向单侧视交叉上核微电泳ＨＲＰ后，至少在２３个脑区出现标记细胞，而且大多出现在注射同侧，发现了过去未见报道过的新的标记区：（１）扣带前回皮质，（２）伏隔核；（３）丘脑连结核；（４）视交外侧区；（５）下丘脑外侧区，（６）无名质。     

大鼠脑干内向杏仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的FO…

本文应用ＨＲＰ逆行追踪与ＦＯＳ免疫组化结合的方法，观察了脑干内枵仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的ＦＯＳ表达，结果在脑干内到ＦＯＳ样免疫反应阳性，ＨＲＰ标记和ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反是性的细胞，它们分布在延髓的孤束核，腹外侧区及两者之间的网状，脑桥臂旁核，中脑导水管周围灰上侧区，中缝背核和被美国背侧核等区域。ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性细胞占ＨＲＰ标记细胞总数的３２．７％。脑干内检出ＦＯＳ／ＨＲＰ     

大鼠腰髓缩胆囊肽,亮啡肽和血管活性肠肽至外侧网状核的投射

用ＨＲＰ逆行追踪和免疫细胞化学ＡＢＣ法相结合研究了腰髓内缩胆囊肽、亮啡肽和血管活性肠肽能神经元至延髓外侧网状核的投射。结果表明，腰髓内ＨＲＰ标记细胞主要为对侧性，以Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ层为其集中部位；缩胆囊肽免疫反应细胞及ＨＲＰ／缩胆囊肽双标细胞主要集中在Ⅷ、Ⅹ层；亮啡肽免疫反应细胞及ＨＲＰ／亮啡肽双标细胞主要集中在Ⅷ、Ⅹ层；血和活性肠肽免疫反应细胞及ＨＲＰ／血管活性肠肽双标细胞主要集中在Ｘ层、。其中，ＨＲ     

大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑外侧区的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的FOS表达

将ＨＲＰ注入下丘脑外侧区进行逆行追踪，并将之与抗ＦＯＳ和抗酪氨酸羟化酶双重免疫组织化学方法相结合，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑外侧区的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察．光镜下见到孤束核和延髓腹外侧区出现七种不同的反应阳性细胞，即：ＨＲＰ、ＦＯＳ、ＴＨ单一反应阳性细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双重反应阳性细胞和ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三重反应阳性细胞．七种反应阳性细胞中以ＦＯＳ、ＴＨ单一反应阳性细胞和ＦＯＳ／ＴＨ双重反应阳性细胞数量较多，其余的各类均较少．ＨＲＰ阳性细胞主要见于注射侧，对侧偶见。上述七种阳性细胞主要分布在延髓中、尾段的孤束核内侧亚核和延髓腹外侧区，两者之间的网状结构中少见．本文结果证明大鼠孤束核和延髓腹外侧区儿茶酚胺能神经元有少量向下丘脑外侧区投射，其中少部分儿茶酚胺能神经元参与了胃伤害性刺激的传导或调控．     

大鼠下丘脑弓状核神经元的神经支配

用ＨＲＰ逆行追踪和免疫细胞化学与电镜结合法研究了下丘脑弓状核神经元的神经支配。结果表明，室旁核向弓状核投射的神经元中，有一部分为催产素免疫反应阳性，一部分为后叶加压素免疫反应阳性，视上核也有部分ＯＴ免疫反应阳性神经元发出纤维投射至弓状核。将零乱毒素Ｂ亚单位结合ＨＲＰ注入第三脑室后，可见弓状核内有逆行标记细胞，电镜观察发现弓状核内的脑啡肽免疫反应阳性的树突接受ＨＲＰ反应阳性的触液神经元的轴突形成突触     

大鼠“延髓内脏带”向杏仁核投射的儿茶酚胺神经元对内脏伤害性…

本文通过建立ＨＲＰ逆行追踪结合抗ＦＯＳ和抗酷氨酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学三重标记技术，在延髓见到以下七种标记细胞：ＦＯＳ，ＨＲＰ，ＴＨ单标细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ，ＦＯＳ／ＴＨ，ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。这些细胞主要分布于延髓中、尾段由孤束核、腹外侧区以及在两者之间的网状结构共同组成的弧形带状区－“延髓内脏带”。本文结果表明大鼠“延髓内脏带”向杏仁核直接投射的儿茶酚胺能神     

蒙古种沙土鼠背海马胆碱能投射来源

应用ＨＲＰ逆行追踪乙酰胆碱酯酶（Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ ＡｃｈＥ）组化技术，研究了２５例蒙古沙土鼠背海马的胆碱能投射来源。将ＨＲＰ引入背海马后行ＡｃｈＥ－ＨＲＰ联合反应，在同侧内侧隔核、斜角带核、视前大细胞核等处（基底大细胞核）出现ＡｃｈＥ－ＨＲＰ双标记神经元胞体，并在背海马局部发现广泛存在着ＡｃｈＥ纤维和末梢，而未见强染色的ＡｃｈＥ阳性胞体。以上结果提示：沙土鼠背海马的乙酰胆碱