低密度脂蛋白诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性的研究

目的：研究低密度脂蛋白（LDL）与巨噬细胞髓过氧化物酶（MPO）活性的关系。方法：LDL诱导培养的小鼠腹水巨噬细胞，用MPO催化底物邻联二茴香胺氧化的方法测定MPO活性；以逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法检测MPO基因的表达，借此观察LDL和MPO活性的关系。结果：LDL可以促进巨噬细胞内及分泌的髓过氧化物酶活性升高，但远比细菌脂多糖（LPS）的作用小；氧化型低密度脂蛋白（OX－LDL）没有此作用；随着LDL作用时间的延长巨噬细胞内及分泌的髓过氧化物酶活性逐渐升高，但随着LDL浓度的增加髓过氧化物酶基因的表达达到最大值后便维持该水平而不再随LDL浓度的变化而变化。结论：LDL非特异性地诱导巨噬细胞MPO活性升高以及分泌增强，加强自身的氧化吸收；MPO活性升高的原因可能主要为巨噬细胞内酶活性的激活及分泌增强而非基因表达的增强。     

髓过氧化物酶及其多态性与疾病的研究进展

髓过氧化物酶与很多疾病有关联，其功能和遗传变异可引起很多疾病，如炎症、肺癌、白血病和心血管疾病。另外，对髓过氧化物酶基因多态性的研究表明，其基因多态性可降低很多疾病的易感性。但是，髓过氧化物酶与疾病发生关系的机制仍不清楚，本综述了近年来有关髓过氧化物酶与疾病关系的研究进展。     

抗凝剂对髓过氧化物酶检测结果影响的分析

目的 探讨不同的血液采集方式对血中髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）含量的影响.方法 同时采集50例普通患者的含肝素钠、EDTA-K2两种抗凝剂的血浆标本和血清标本,分别检测各种标本中的MPO含量,并对各组结果进行配对t检验统计分析和相关性分析.结果 同一患者含肝素钠和EDTA-K2两种不同抗凝剂的血浆标本MPO含量之间均存在显著性统计学差异;含肝素钠抗凝剂的血浆标本与不含抗凝剂的血清标本之间也存在显著性统计学差异.同时,肝素钠组与其余两组间有一定相关性,但不呈高度相关性.结论 不同的血液采集方式对血液中髓过氧化物酶（MPO）含量的检测结果影响较大,建议检测时采用肝素抗凝的血浆样本.     

髓过氧化物酶及其多态性与疾病的研究进展

髓过氧化物酶与很多疾病有关联,其功能和遗传变异可引起很多疾病,如炎症、肺癌、白血病和心血管疾病.另外,对髓过氧化物酶基因多态性的研究表明,其基因多态性可降低很多疾病的易感性.但是,髓过氧化物酶与疾病发生关系的机制仍不清楚,本文综述了近年来有关髓过氧化物酶与疾病关系的研究进展.     

巨噬细胞髓过氧化物酶与低密度脂蛋白氧化关系的研究

目的 从低密度脂蛋白（ＬＤＬ）诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性升高的角度探讨体内ＬＤＬ氧化的可能机制,为动脉粥样硬化（ＡＳ）的抗氧化治疗提供新的思路。方法 以体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞为模型,通过髓过氧化物酶活性、ＬＤＬ的氧化产物和细胞内胆固醇含量的测定,研究巨噬细胞髓过氧化物酶生变化与ＬＤＬ氧化及细胞内胆固醇积累的相关性。结果 ＬＤＬ作用于巨噬细胞,能促进巨噬细胞内分及分泌的髓过氧化物酶活性升高,且有浓度依赖性;随着髓过氧化物酶活性的升高,ＬＤＬ的氧化增强,且在血红素毒性剂叠氮钠的作用下,髓过氧化物酶活性受到抑制,同时ＬＤＬ的氧化减弱;次氯酸的清除剂牛磺酸可防止ＬＤＬ的氧化和巨噬细胞内胆固醇的积累。结论 ＬＤＬ诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性升高从而加强自身的氧化吸收。     

增加过氧化物酶DAB显色效果的实验研究

本文报告在免疫组织化学的ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２呈色反应时，加入硫酸铜、氯化铁和氯化金溶液处理，结果显示，３种金属盐的增强效果各有不同，尤以氯化金为显著。本文对金属盐与ＤＡＢ呈色的原理进行了探讨。作者认为，应用增强剂除对呈色较弱的切片可提高显色效果外，还可适当提高一抗的稀释度，而节约试剂的消耗。     

颈动脉狭窄程度及血浆髓过氧化物酶水平对缺血性脑卒中的影响

目的：分析不同颈动脉狭窄程度、不同血浆髓过氧化物酶（myeoloperoxidase,MPO）水平对狭窄侧颈动脉供血区发生缺血性脑卒中的影响。方法：对颈部血管彩色超声证实的120例单侧颈动脉狭窄病变行头颅CT扫描,以明确每个病例狭窄侧颈动脉供血区中有无梗死灶。将病例分为MPO水平升高组（n=57）和正常组（n=63）,分析两组中梗死灶发生率的差异。根据颈部血管彩色超声检查测量值计算狭窄程度,将上述病例按狭窄程度又分为≤50％组（n=68）、51％～69％组（n=36）和≥70％组（n=16）,分析狭窄程度与病变同侧梗死灶发生率的关系,同时分析相同狭窄程度时不同MPO水平与梗死灶发生率的关系。结果：MPO升高组57例中,有梗死灶的患者为43例,占75．43％;MPO正常组63例中,有梗死灶者33例,占52．38％;两组间梗死灶的发生率差异有统计学意义（P〈0．05）。狭窄程度≤50％组、51％～69％组和≥70％组梗死灶的发生率分别为63．23％,63．89％和62．50％,三组间差异无统计学意义（P〉0．05）。颈动脉狭窄程度≤50％组的68例中,MPO升高32例,正常36例,分别有26例（26／32,81．25％）和17例（17／36,47．22％）发生梗死灶,梗死灶的发生率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：在颈动脉狭窄病例中,MPO升高组在狭窄侧颈动脉供血区发生缺血性脑卒中的风险较MPO正常组更大,而颈动脉狭窄程度与缺血性脑卒中无明显关系。     

增加过氧化物酶DAB显色效果的实验研究

增加过氧化物酶ＤＡＢ显色效果的实验研究黄进钱源澄孙桂勤作者单位：南京军区南京总医院病理科，南京２１０００２作者简介：黄进，女，４１岁，主管技师，全军病理技术专业组委员。主要研究方向：免疫组化及分子生物技术钱源澄，男，７２岁，主任技师辣根过氧化物酶是免...     

局部应用胰岛素对小鼠创面髓过氧化物酶及丙二醛的影响

目的观察小鼠创面局部应用小剂量胰岛素对创面髓过氧化物酶、丙二醛的影响,从对炎症调控角度探索胰岛素促进创面愈合的机制。方法48只C57BL／6J小鼠背部两侧对称部位造成两个全层皮肤缺损创面。按自身对照方法,每只小鼠背部两个创面随机分为胰岛素组和对照组。伤后即刻及伤后每24h,胰岛素组创面局部应用0．03U胰岛素（20μl生理盐水配置）,对照组应用20山生理盐水。随机选取12只小鼠用药至创面愈合,观察愈合时间和速率。余36只小鼠于伤后1、2、3d分别处死12只后取创面及创周5mm组织,免疫印记化学发光法检测创面髓过氧化物酶（MPO）、生化方法检测丙二醛（MDA）含量。结果胰岛素组创面愈合时间显著短于对照组（P〈0．05）;伤后第5、7天胰岛素组的创面愈合百分率显著高于对照组（P〈0．05）。伤后第2、3天胰岛素组和对照组创面MPO含量分别为1．52±0．37、1．95±0．53和1．2±049、1．25±0．39,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。胰岛素组与对照组创面MDA含量在伤后1、2、3d比较,差异均无统计学意义。结论胰岛素在增强创面杀菌功能的同时减轻细胞损伤,可能是胰岛素促进创面愈合的机制之一。     

两种免疫分析系统对甲状腺过氧化物酶抗体的一致性评价

目的 评估国产和进口两种化学发光法免疫分析系统检测血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)结果的一致性,探讨国产化学发光法免疫分析系统(MAGLUMI 4000PLUS全自动化学发光法免疫分析系统)检测TPOAb的可行性和实用性.方法 用两种方法检测130份血清样本TPOAb水平,比较两种检测方法的相关性、符合率,并对国...     

鼠源性髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体的制备及鉴定

采用鼠源性髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）与弗氏佐剂混合注射的方式制备小鼠MPO特异性抗中性粒细胞胞质抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibody, ANCA）,并予以定性及定量检测。使用B6.129X1-Mpo^tm1Lus/J小鼠（即MPO敲除小鼠）,将mMPO与完全/不完全弗氏佐剂混合,通过腹腔注射方式诱导小鼠产生适应性免疫应答。采用定性ELISA以及间接免疫荧光法检测小鼠血清ANCA水平;采用肌酐检测试剂盒（肌氨酸氧化酶法）检测小鼠血清肌酐水平以评估其肾功能。ELISA检测结果显示,实验组小鼠血清MPO-ANCA的光密度D（450 nm）值较对照组显著升高（P<0.001）,约为对照组的5.6倍;间接免疫荧光法结果提示,实验组中性粒细胞胞质有较强的荧光信号,与MPO-ANCA的核周型特点相一致;H-E染色示部分肾小球囊壁层上皮细胞过度增殖;实验组与对照组小鼠血清肌酐水平检测结果差异不显著（P>0.05）。由此,注射MPO与弗氏佐剂混合液诱导MPO^-/-小鼠产生了抗MP...     

不同的标本保存条件、溶血情况对髓过氧化物酶检测的影响

目的 探讨同一患者不同的标本保存方式、保存时间、溶血情况对血液标本中髓过氧化物酶（MPO）含量的影响.方法 30例患者每人采集3管肝素钠抗凝静脉血,第一管30min内分离血浆,检验MPO含量做为基准值,其余两管分两组放常温（22℃）和2 ～8℃冰箱4h后检验,计算变化率（％）,组间采用配对t检验,评价常温和冰箱短时间内保存样本对MPO含量的影响;同时筛选不同MPO含量的15例患者,将其第一管血浆,分装保存于2～8℃和-20℃冰箱,分别于1天后、3天后、5天后测定MPO含量,计算下降率（％）,组间采用配对t检验,评价长时间内冰箱保存样本,冷藏和冷冻保存对MPO含量的影响.另外,对做完基准值的血样,人为造成溶血后测其MPO值,计算溶血的干扰偏差.结果 常温和冰箱短时间内保存4h,样本中MPO含量变化呈上升趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.冷藏和冷冻的新鲜血浆样本长时间保存,MPO含量变化呈下降趋势,组间差异具有统计学意义（P＜0.01）,随着保存时间延长,含量下降越明显.标本不同程度的溶血均对测定MPO造成严重干扰.结论 MPO血浆样本采集后,要及时检验,在常温和2～8℃冰箱保存4h分离检测,对结果有影响,但影响较小,差异无统计学意义.分离新鲜血浆长时间冰箱保存,对结果影响差异有统计学意义,冷冻优于冷藏保存.不同程度的标本溶血均对测定MPO造成严重干扰.     

髓过氧化物酶胶乳增强免疫比浊检测法的建立

目的 建立一种可用全自动生化分析仪定量检测血浆中髓过氧化物酶浓度的胶乳增强免疫比浊法,用于心脑血管疾病的预测和辅助急性冠脉综合症诊断.方法 针对三个厂家的7株单克隆抗体,采用每株抗体单独与胶乳颗粒交联,逐一配对的方法,筛选出最佳的两株单克隆抗体组合.进一步对胶乳颗粒的粒选、反应体系进行筛选和优化.评价本方法的重复性,线性,灵敏度,抗干扰能力和回收率,并进行了大量的样本检测.结果 筛选到两株最适单克隆抗体,使单克隆抗体与胶乳颗粒通过化学交联的模式连接,建立了用于髓过氧化物酶检测的胶乳增强免疫比浊法.该方法的灵敏度：LoB＝4ng/mL,LoD=6ng/mL,LoQ=12ng/mL;批内变异系数（CV）：2.85％;批间变异系数（CV）：3.45％;平均回收率：100.0％±1.2％;参考值范围：54～266ng/ml.结论 本法可用全自动生化分析仪定量检测髓过氧化物酶,具有较高的灵敏度和稳定性,操作简单,在心脑血管疾病的预测和辅助诊断中有很好的应用前景.     

荧光免疫层析定量检测髓过氧化物酶方法的建立

目的：通过荧光免疫层析技术初步建立MPO荧光免疫层析定量检测方法。方法：采用羧基荧光微球,利用EDC一步法偶联标记抗体,对过程中EDC量、标记蛋白量与标记时间、保护液进行研究,选出最佳条件,并对线性范围、灵敏度、精密性等进行性能评价。结果：确定偶联过程中EDC 160 μg,标记蛋白125 μg、标记1.5 h;线性范围3.125~600 ng/ml,最低检出限0.9 ng/ml;精密性质控品(高、中、低)批内、批间变异系数均小于10%;通过与国外试剂盒（ELISA法）检测比对45份临床血清,相关性良好,R2=0.979 5。结论：成功建立荧光免疫层析快速定量检测MPO的方法,为冠心病的辅助诊断提供一种技术手段。     

血浆髓过氧化物酶水平与冠状动脉狭窄程度的相关性分析

目的探究血浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平与冠状动脉狭窄程度的相关性。方法选取2013年7月至2015年12月在云南省楚雄彝族自治州人民医院心内科住院接受冠状动脉造影(coronary angiogram,CAG)的710例患者作为研究对象,分为冠状动脉综合症(arteria coronaria,ACS)组,稳定型心绞痛(stable Angina,SAP)组,冠状动脉造影结果正常人员作为对照组,观察血浆髄过氧化物酶水平与冠状动脉狭窄程度相关性。结果三组入选对象在高血压患者所占比重、血糖水平、尿素氮、肌酐等指标上进行对比差异均无统计学意义(P> 0. 05); ACS组与其他两组MPO水平对比差异较为明显,具有统计学意义(P<0.05);SAP与对照组在MPO水平上进行对比,差异无统计学意义(P>0.05);无狭窄者MPO水平为14.25±3.26μg/L,明显低于其他组患者,差异具有统计学意义(P <0.05);重度狭窄患者MPO水平为41.58±10. 64μg/L,明显高于其他组患者,差异具有统计学意义(P <0.05);血浆MPO水平与冠状动脉狭窄程度呈正相关关系(r=0.534,P=0.235)。结论冠状动脉狭窄程度越高则相应的血浆MPO水平越高,可将血浆髓过氧化物酶作为冠状动脉病变的辅助诊断指标。     

ELISA测定中细胞内源性碱性磷酸酶与过氧化物酶的抑制方法

本文介绍一种抑制细胞内源性碱性磷酸酶和过氯化物酶的新方法,用生理盐水配制的20mM抗坏血酸在37℃下作用细胞30分钟后,细胞内的碱性磷酸酶和过氧化物酶同时被抑制,而且细胞表面抗原性不受影响。这种方法可应用于ELISA等其它需要排除细胞内源性碱性磷酸酶及过氯化物酶干扰的实验中。     

急性肾衰竭家兔脾组织形态以及髓过氧化物酶和细胞膜泵活性的变化

目的:观察急性肾功能衰竭(ARF)家兔脾组织形态以及髓过氧化物酶(MPO)和细胞膜泵(ATPase)活性的变化,探讨脾在ARF免疫功能紊乱发病学中的作用。方法:42只家兔均分为对照组、HgCl2组、甘油组。其中HgCl2组以皮下注射1%HgCl2(1.3mL/kg)、甘油组以肌肉注射50%甘油(10mL/kg)分别复制ARF模型,均分为12h、24h、48h3个亚组。在不同时点,所有动物颈总动脉插管放血备检,测定血清反映肾功能的生化指标;制备脾组织切片,观察脾组织形态;并制备10%脾组织匀浆,检测MPO和ATPase活性。结果:模型组各时点的脾组织均有不同程度的淤血、脾小梁增多。HgCl2组与甘油组各时点的脾组织匀浆MPO活性均显著高于对照组,2组24h的MPO活性高于组内12h及48h;HgCl2组与甘油组在多个时点的Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性均显著低于对照组,且随时间延长,各ATPase有逐渐降低的趋势,除甘油组的Mg2+-ATPase外,各组48h的ATPase均低于12h。结论:家兔ARF发展过程中,脾脏有组织学损伤,且存在中性粒细胞扣押、细胞膜泵活性降低,这可能是脾作为免疫器官导致ARF免疫功能紊乱的原因之一。     

纳米硒对断奶仔猪肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和脱碘酶I活性的影响

研究了纳米硒和亚硒酸钠对断奶仔猪肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和脱碘酶活性的影响。将纳米硒和亚硒酸钠2种硒源分别以0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0 mg/kg 6个硒水平添加到基础日粮中,配制成12种试验日粮,基础日粮作对照,饲养“杜长大”断奶仔猪(8.3 kg左右)。结果表明:以亚硒酸钠形式添加的硒浓度为1.0 mg/kg时,仔猪生长性能和GSH-Px活性显著低于0.2~0.4 mg/kg硒添加水平(P<0.05),纳米硒添加浓度为1.0 mg/kg,仔猪生长性能和GSH-Px活性仍然保持在高峰平台;硒源添加浓度为0.10~0.40 mg/kg时,两种硒源对GSH-Px活性的影响无显著差异(P>0.05);在0.50和1.0 mg/kg硒添加水平上,纳米硒组GSH-Px活性显著高于亚硒酸钠组(P<0.05)。基础日粮组肝脏脱碘酶活性显著低于各硒源的添加水平(P<0.05),硒源和硒添加水平对脱碘酶活性没有显著影响(P>0.05)。上述结果提示:纳米硒的Weinberg剂量-效应的最适剂量范围宽于亚硒酸钠。     

纳米硒对断奶仔猪肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和脱碘酶Ⅰ活性的影响

研究了纳米硒和亚硒酸钠对断奶仔猪肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和脱碘酶Ⅰ活性的影响。将纳米硒和亚硒酸钠2种硒源分别以0．1、0．2、0．3、0．4、0．5、1．0mg／kg6个硒水平添加到基础日粮中，配制成12种试验日粮，基础日粮作对照，饲养“杜长大”断奶仔猪（8．3kg左右）。结果表明：以亚硒酸钠形式添加的硒浓度为1．0mg／kg时，仔猪生长性能和GSH-Px活性显著低于0．2～0．4mg／kg硒添加水平（P〈0．05），纳米硒添加浓度为1．0mg／kg，仔猪生长性能和GSH-Px活性仍然保持在高峰平台；硒源添加浓度为0．10～0．40mg／kg时，两种硒源对GSH-Px活性的影响无显著差异（P〉0．05）；在0．50和1．0mg／kg硒添加水平上，纳米硒组GSH-Px活性显著高于亚硒酸钠组（P〈0．05）。基础日粮组肝脏脱碘酶Ⅰ活性显著低于各硒源的添加水平（P〈0．05），硒源和硒添加水平对脱碘酶Ⅰ活性没有显著影响（P〉0．05）。上述结果提示：纳米硒的Weinberg剂量一效应的最适剂量范围宽于亚硒酸钠。     

冰冻切片免疫过氧化物酶染色法在抗细胞性单克隆抗体筛选和鉴定中的应用

本文介绍一种快速准确地筛选和鉴定抗细胞性单克隆抗体(单抗)的冰冻切片免疫过氧化物酶染色技术。它既能筛选融合后的大量单抗(一般在3小时以内能筛选200～400孔杂交瘤细胞上清液);又可根据组织固有结构及细胞分区分布的特性,作为全面鉴定单抗的重要方法。我们运用此法从12次融合中,筛选并经克隆化获得291个单抗,进一步全面鉴定后得到抗T细胞等101个单抗。此外还讨论了消除非特异性染色的体会。