类风湿关节炎小鼠关节浸润的T细胞克隆型分析

目的 :对一种自发性类风湿关节炎 (RA)小鼠 (SKG小鼠 )四肢足关节浸润的T细胞克隆型进行分析 ,以了解T细胞克隆型与RA的关系。方法 :采用RT PCR与单链构象多态性分析 (SSCP)相结合的方法。结果 :在SKG小鼠的四肢足关节Vβ2和Vβ8 2T细胞克隆型的一致率比较高 (分别为 6 8 1%和 5 9 2 % ) ,并且在被检测的所有小鼠的四肢足关节中都具有一致的Vβ2和Vβ8 2克隆型 (10 0 % )。DNA测序表明在SSCP中显示的来源于不同关节样品的共同的DNA带是相同的T细胞克隆型。T细胞转移试验表明关节聚集的T细胞克隆与RA的病变形成有关。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8 2的T细胞可能在SKG小鼠的RA中具有重要作用。     

类风湿关节炎小鼠关节聚集的T细胞克隆型变化的分析

目的 :通过对类风湿性关节炎 (RA)小鼠模型发病不同时期的四肢足关节聚集的T细胞克隆型的分析 ,了解T细胞克隆型与RA病变的关系。方法 :用RT PCR/SSCP法 ,对一种自发性RA小鼠模型 (SKG小鼠 )发病初期与后期四肢足关节聚集的T细胞克隆型进行比较分析。结果 :在发病后期 ,四肢足关节中一致的Vβ2和Vβ8.2T细胞克隆型均明显升高 (分别为 72 .3%和 6 0 .2 % )。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8.2的T细胞克隆 ,可能对于SKG小鼠RA的发展起重要作用     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体(TCR)Vβ 24个亚家族基因CDR3长度,可确定T细胞的克隆性.对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR Vβ T细胞出现倾斜性分布和克隆性生长的情况.肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR Vβ T细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖.这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的,对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用,探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗,清除肿瘤患者微小残留病变,具有重要的意义.     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体（TCR）Vβ24个亚家族基因CDR3长度，可确定T细胞的克隆性。对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR VβT细胞出现倾斜性分布和克隆生长的情况。肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR VβT细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖，这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的，对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗，清除肿瘤患者微小残留病变，具有重要的意义。     

大鼠TCR Vβ8.2基因真核表达质粒的构建及表达

目的：构建含大鼠TCR Vβ8．2基因的重组真核表达质粒，并检测其在体内外的表达。方法：以RT-PCR法分离Lewis大鼠脾淋巴细胞中的TCR Vβ8．2基因片段，插入到真核表达载体pTARGET中，构建重组表达载体pTARGET-TCR Vβ8．2，并转化E．coli JM109，经蓝白斑筛选阳性菌落，进行菌落PCR和测序鉴定。将重组质粒以肌注法免疫BALB／c小鼠，采集注射部位股四头肌处的肌肉，用RT-PCR及免疫组化染色法检测TCRVB8．2基因在注射部位的转录和表达：通过脂质体介导，将再组质粒导入COS-7细胞中进行瞬时表达，用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达。结果：测序鉴定证实，TCR Vβ8．2基因已被正确插入到pTARGET载体中，并检测到在肌肉组织和COS-7细胞内重组蛋白的表达。结论：成功地构建重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ8．2，并在体内体外均可检测到其转录和表达，为进一步进行TCR VβDNA疫苗的研究奠定了基础。     

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的：了解急性髓细胞白血病M1亚型（AML－M1）患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法：采用RT－PCR扩增9例M1患者外 周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因，分析其TCR Vβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果：不同标本中可检测到2－5个Vβ亚家族T细胞，以Vβ2、Vβ3、Vβ17和Vβ19为常见，并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ19中发现克隆性生长T细胞。结论：M1病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况，这可能与M1细胞相关抗原有关，且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。     

CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病(CML)细胞诱导T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况，及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法，利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖，用RT-PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3)，了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达8～11个TCR Vβ亚家族，经MLTC后，2～3个Vβ亚家族呈克隆性增殖，CML细胞诱导的自体T细胞的TCR Vβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCR Vβ优势利用和克隆性增殖，诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。     

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.     

脐血中TCRVβ亚家族T细胞的分布和克隆性分析

目的:了解正常脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的分布和克隆性。方法:利用RT-PCR分别扩增13例正常脐血单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3,了解各Vβ亚家族的表达情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性。10例正常人外周血和T细胞株Molt-4及Jurkat作为对照。 结果:正常脐血T细胞仅选择性表达24个Vβ亚家族的38.78%±16.26%,以Vβ3、5、8、9和13为多见,而正常人外周血T细胞则表达全部24个Vβ亚家族。基因扫描显示正常脐血和正常人外周血的全部PCR产物均呈多峰图象。结论:正常脐血存在不完全TCR Vβ亚家族T细胞,所有TCR Vβ亚家族T细胞均呈多克隆性。     

胶原诱导性关节炎大鼠淋巴细胞的过继转移

目的：探讨类风湿性关节炎（RA）发病的免疫学机制以及II型胶原在疾病发生过程中的作用。方法：用鸡II型胶原（CCII）加完全佛氏佐剂（CFA）免疫Wistar大鼠建立胶原诱导性关节炎（CIA）模型，分别用发病大鼠的T淋巴细胞和血清进行过继转移，以ELISA检测外周血中抗CCII抗 体的水平；用病理组织学方法对炎性关节进行分析。结果：成功建立了CIA大鼠模型，发病率为90％，用T淋巴细胞转移的大鼠，可见明显CIA症状，发病率为40％，实验组大鼠外周血中的抗CCII抗体的水平虽较对照组高，但并无显著性意义（P＞0．05），以血清过继转移的大鼠无一发病，但该组外周血中抗CCII抗体的水平明显高于对照组（P＜0．05），组织学鉴定结果可见炎性部位呈典型的CA病变，结论：CIA可以通过淋巴细胞过继转移，机体对I原产生的特异性细胞免疫应答在CIA发生过程中起着重要的作用。为采用T细胞介导的免疫治疗RA提供了实验基础。     

TCR Valpha14 natural killer T cells function as effector T cells in mice with collagen-induced arthritis

Natural killer (NK) T cells are a unique, recently identified cell population and are suggested to act as regulatory cells in autoimmune disorders. In the present study, designed to investigate the role of NKT cells in arthritis development, we attempted to induce arthritis by immunization of type II collagen (CIA) in Jalpha281 knock out (NKT-KO) and CD1d knock out (CD1d-KO) mice, which are depleted of NKT cells. From the results, the incidence of arthritis (40%) and the arthritis score (1.5 +/- 2.2 and 2.0 +/- 2.7) were reduced in NKT-KO and CD1d-KO mice compared to those in respective wild type mice (90%, 5.4 +/- 3.2 and 2.0 +/- 2.7, P < 0.01). Anti-CII antibody levels in the sera of NKT-KO and CD1d-KO mice were significantly decreased compared to the controls (OD values; 0.32 +/- 0.16 and 0.29 +/- 0.06 versus 0.58 +/- 0.08 and 0.38 +/- 0.08, P < 0.01). These results suggest that NKT cells play a role as effector T cells in CIA. Although the cell proliferative response and cytokine production in NKT-KO mice after the primary immunization were comparable to those in wild type mice, the ratios of both activated T or B cells were lower in NKT-KO mice than wild type mice after secondary immunization (T cells: 9.9 +/- 1.8% versus 16.0 +/- 3.4%, P < 0.01, B cells: 4.1 +/- 0.5% versus 5.1 +/- 0.7%, P < 0.05), suggesting that inv-NKT cells contribute to the pathogenicity in the development phase of arthritis. In addition, IL-4 and IL-1beta mRNA expression levels in the spleen during the arthritis development phase were lower in NKT-KO mice, while the IFN-gamma mRNA expression level was temporarily higher. These results suggest that inv-NKT cells influence cytokine production in arthritis development. In conclusion, inv-NKT cells may promote the generation of arthritis, especially during the development rather than the initiation phase.     

AML-M5患者外周血naive T细胞水平和TCR Vβ谱系利用特点

目的了解急性髓性白血病M5亚型(AML-M5)患者 T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量和TCR Vβ基因谱系利用和克隆性,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCR Vβ亚家族T细胞增殖特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.利用RT-PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因表达和克隆性.9例正常人外周血作为对照.结果 M5患者外周血中TRECs含量为0.76±1.21/1000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平(6.84±4.71/1000 CD3+细胞,p<0.05).5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族(2-16个).基因扫描分析显示4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞, Vβ1,Vβ15和Vβ21克隆性T细胞均分别见于3例病人中.结论率先报道了AML-M5型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,尽管整体T细胞免疫功能低下,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示其具有一定地对白血病细胞相关抗原产生特异性免疫反应的能力.     

Therapy against murine collagen-induced arthritis with T cell receptor V beta-specific antibodies.

Immunization with native type II collagen (CII) of susceptible strains of mice (H-2q) induces a rheumatoid arthritis-like disease. Collagen-induced arthritis (CIA) is an experimental model for T cell-mediated autoimmune disease. To investigate the T cell receptor (TcR) repertoire involved in the pathogenesis of CIA, CII-primed DBA/1 mice were treated with various TcR V beta-specific monoclonal antibodies (mAb) using a protocol resulting in a long-term elimination of the target T cells. In vivo treatment with anti-CD4 mAb led to nearly complete protection against CIA. Mice injected with anti-V beta 8.1, 2 or anti-V beta 5.1, 2 mAb had a reduced incidence of arthritis (respectively 28.6% and 50% vs 84.6% for the control group). Administration of anti-V beta 2 mAb delayed the onset of the disease whereas injection of anti-V beta 6 or anti-V beta 11 mAb did not alter CIA. Moreover, the combined treatment with anti-V beta 2 and anti-V beta 5 mAb efficiently reduced the development of CIA. The humoral response to CII was down-regulated only in the groups of mice that were improved by the treatment. In vitro proliferative response to CII of lymph node cells from primed DBA/1 was partially blocked by addition of several anti-V beta mAb. Thus, our findings suggest that the overall T cell response to CII may be polyclonal while the T cell clones involved in the pathogenesis of CIA express a limited number of V beta chains.     

Protective Effects of Overexpression TCR Vβ5.2-HSP70 and TCR Vβ8.2-HSP70 against Collagen-Induced Arthritis in Rats

Collagen-induced arthritis （CIA） is an animal model, which closely resembles human rheumatoid arthritis （RA） in pathogenesis and pathology. Evidence suggests that the inhibition of T lymphocytes or their functions can alleviate the progression of arthritis. So the administration of arthritogenic T cell receptor （TCR） variable region peptide or DNA vaccines encoding pathogenic TCR Vβ variable region may provide useful information for designing specific immunotherapies against autoimmune diseases. Heat shock proteins （HSPs） have the function of raising antigenic immunogenicity and HSP70 has a protective effect against arthritis. We previously demonstrated the presence of pathogenic predominant T cell receptor Vβ5.2 and Vβ8.2 clonotypes in the joints of CIA rats. In this study, we constructed the recombinant eukaryotic expression vectors pTARGET-TCR Vβ5.2/8.2-HSP70, and evaluated their protective effects on CIA rats. Protective effects were observed in CIA rats by injecting these recombinant DNA vaccines, which could alleviate arthritis index, decrease the levels of IFN-~ and anti-CII antibody in serum, and increase the levels of IL-4. Pathological changes were not as serious as those observed in control CIA rats. The rat injected with two combined vaccines showed better protective effects than CIA rats administered with individual vaccine. These results showed that recombinant DNA vaccines pTARGET-TCR Vβ5.2-HSP70 and pTARGET-TCR Vβ8.2-HSP70 could significantly alleviate the arthritic symptoms of CIA rats, and better protective effects could be achieved if these two vaccines were used in combination. Cellular ＆ Molecular Immunology.