S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用。方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6, rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和05 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt, t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt, p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。 结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P<005）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P<005）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降103%～697%,细胞迁移率下降379%～416%,差异均有统计学意义（P<005）。 结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

miR-30a抑制人骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力

目的探讨miR-30a对人骨肉瘤细胞143B侵袭、迁移和细胞活力的影响。方法过表达或抑制miR-30a分别处理人骨肉瘤细胞143B。划痕实验观察细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测143B细胞迁移和侵袭能力;MTT实验检测细胞活力;定量PCR实验确认过表达miR-30a腺病毒有效性并且检测RUNX2 mRNA表达;Western blot检测细胞中RUNX2总蛋白表达。结果过表达miR-30a抑制了骨肉瘤细胞143B迁移和侵袭(P0.05),在72 h时,miR-30a明显抑制细胞活力(P0.01);抑制miR-30a的内源性表达后,143B细胞的迁移和侵袭能力增加(P0.05),细胞活力也表现出上升水平(P0.01);同时过表达miR-30a可以抑制RUNX2的蛋白表达,抑制内源性miR-30a后RUNX2蛋白水平表达增加(P0.05)。荧光素酶活性检测,miR-30a可以靶向于RUNX2(P0.01)。结论 miR-30a抑制骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力,其作用可以能是通过抑制RUNX2的表达来实现。     

腺病毒介导的BMP9过表达抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖与迁移

目的 探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)过表达对人骨肉瘤细胞系143B的生物学行为的影响.方法 用RTPCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系中BMP9的内源性表达,用表达BMP9的腺病毒重组体(adBMP9)感染内源性表达BMP9相对较低的骨肉瘤细胞系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕愈合实验检测细胞迁移,MTT法和结晶紫染色法检测细胞的增殖,Hoechst 33258染色法检测凋亡,平板集落形成实验检测集落形成能力.结果 adBMP9可以明显减弱骨肉瘤细胞系143B的增殖、迁移、侵袭及集落形成能力(P＜0.05),并促进细胞凋亡.结论 adBMP9能抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖和迁移,促进细胞凋亡.     

人S100A6对人骨肉瘤细胞系β-catenin的作用

目的 研究人S100A6对人骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中β-catenin的作用。方法 分别用携带人S100A6及其siRNA基因的重组腺病毒AdS100A6和AdSiS100A6感染MG63和U2OS,分别使细胞中S100A6表达上调和下调;RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测细胞中β-catenin mRNA和蛋白表达。结果 上调骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中S100A6后, β-catenin mRNA和蛋白表达均增加（P＜0.05）,蛋白的增加以胞核更明显。下调S100A6则使细胞中β-catenin mRNA及蛋白表达减少（P＜0.05）,蛋白的减少也以胞核更甚。结论 增加Wnt信号途径活性可能是S100A6参与肿瘤发生发展的机制之一。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

乔松素抑制人胃癌细胞系AGS增殖、迁移和侵袭

目的 探讨乔松素(pinocembrin)对人胃癌细胞系AGS增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 将AGS细胞分为不同浓度乔松素组(50、100、200和400μmol/L)、NC组、200μmol/L pinocembrin+anti-miR-NC组、200μmol/L pinocembrin+anti-miR-34a-5p组;采用CCK-8法及流式细胞测量术检测AGS细胞增殖及凋亡;采用Transwell小室法及蛋白质免疫印迹法检测AGS细胞增殖及凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-34a-5p表达水平。结果 不同浓度乔松素降低AGS细胞的增殖活性(P<0.05),且G₀/G₁期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,MMP2、MMP9、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达降低,细胞迁移和侵袭数量减少,miR-34a-5p的表达水平升高(P<0.05)。抑制miR-34a-5p表达减轻乔松素对AGS细胞增殖,迁移和侵袭的抑制作用。结论 乔松素可通过调控miR-34a-5p抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-499通过靶向TGF-α抑制人骨肉瘤细胞系Saos2迁移和促凋亡

目的 探索miR-499靶向TGF-αmRNA蛋白水平调控人骨肉瘤细胞系Saos2细胞迁移和凋亡参与骨肉瘤的发病机制。方法 RT-qPCR检测miR-499和TGF-α在骨肉瘤组织中的表达差异;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-499和TGF-α靶向关系;Transwell小室法和TUNEL凋亡实验检测Saos2细胞迁移和凋亡;构建骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,检测miR-499/TGF-α轴在体内实验中的调控机制。结果 骨肉瘤组织,miR-499表达降低(P<0.01),而TGF-αmRNA高表达(P<0.01)。miR-499靶向负调控TGF-αmRNA蛋白表达(P<0.01)。转染miR-499模拟物能抑制Saos2细胞迁移和促进凋亡(P<0.01),而TGF-α则促进细胞迁移和抑制凋亡(P<0.01),同时miR-499能抑制TGF-α的促癌效果。结论 miR-499抑制TGF-αmRNA蛋白水平从而抑制骨肉瘤细胞的生物学功能,提示miR-499可能具有抑制骨肉瘤发展的作用。     

血清淀粉样蛋白A对骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力以及MAPK信号通路的影响

目的:探讨沉默血清淀粉样蛋白A(SAA)的表达对骨肉瘤细胞活力、凋亡、转移能力以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:通过小干扰RNA(siRNA)特异性沉默SAA在骨肉瘤U2OS细胞中的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和实验组,阴性对照组和实验组分别转染阴性对照siRNA和SAA-siRNA,空白对照组不做任何处理。MTT法观察细胞的活力变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡率,Transwell小室法分析细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测细胞中SAA、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白水平。结果:SAA-siRNA可显著降低SAA在骨肉瘤U2OS细胞中的表达(P 0. 05);与空白对照组相比,SAA-siRNA组细胞的活力显著降低(P 0. 05),凋亡率显著升高(P 0. 05),侵袭和迁移能力显著降低(P 0. 05)。SAA-siRNA组细胞中p-p38 MAPK和p-JNK的蛋白水平显著低于对照组(P 0. 05),而总JNK和p38蛋白表达量的差异无统计学显著性。结论:沉默SAA的表达可抑制骨肉瘤细胞活力,诱导其凋亡,降低细胞的转移能力,其作用可能与调控MAPK信号通路的活性有关。     

TLK2促进人乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的 探究Tousled样激酶2(TLK2)对乳腺癌细胞的影响及其可能的机制.方法 用免疫组织化学和Western blot检测TLK2在乳腺癌组织和细胞系中的表达.用RT-qPCR检测乳腺癌组织和细胞系中TLK2 mRNA以及miR-622的表达.用CCK-8、BrdU和Transwell小室法检测TLK2过表达质粒...     

miR-195-5p表达上调抑制肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨miR-195-5p对肺癌细胞系A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测肺癌组织及肺癌细胞系中miR-195-5p的表达;通过脂质体介导将miR-195-5p模拟物作用于A549细胞,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭; Western blot检测细胞内上皮间质转化标志物及ZEB1的表达。结果相对于癌旁组织及人正常肺上皮细胞,miR-195-5p在肺癌组织及肺癌细胞系中低表达(P0. 001);过表达miR-195-5p可显著抑制A549细胞的迁移和侵袭(P0. 001),伴随E-cadherin蛋白表达的上调,N-cadherin和vimentin蛋白表达的下调(P0. 01);过表达miR-195-5p可抑制A549细胞ZEB1的表达(P0. 001)。结论 miR-195-5p可能通过下调ZEB1的表达,抑制肺癌细胞迁移和侵袭。     

敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

目的 研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法 HeLa、 U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、 MitoSOX^TM Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、 ATG2B、 ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^TM实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果 下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明...     

沙利度胺抑制骨肉瘤细胞U2OS迁移和侵袭

目的观察沙利度胺对人骨肉瘤细胞U2OS迁移和侵袭的作用,并初步探讨其作用机制。方法分别用不同浓度沙利度胺处理人骨肉瘤细U2OS,采用划痕实验检测沙利度胺对细胞迁移的影响,Transwell小室检测沙利度胺对细胞侵袭的影响,q RT-PCR检测不同浓度沙利度胺作用于细胞后VEGFA、HIF1α和OPN基因的变化,蛋白免疫印迹检测沙利度胺对细胞VEGF、HIF1和OPN蛋白的作用。结果 50、100、200μg/m L沙利度胺作用于U2OS后,划痕实验中沙利度胺组细胞迁移距离明显少于对照组,沙利度胺作用12 h,其迁移距离分别为24 h对照组的(62.36±12.41)%、(57.89±11.23)%和(49.47±6.90)%;作用24 h,其迁移距离分别为24 h对照组的(62.36±12.41)%、(57.89±11.23)%和(49.47±6.90)%。侵袭实验中显示沙利度胺组穿膜细胞数量对比对照组减少,其比率分别为(83.49±2.10)%、(70.64±2.86)%和(50.46±1.59)%。q RTPCR显示50、100、200μg/m L沙利度胺作用于U2OS 24 h后VEGFA、HIF-1α和OPN表达与对照组比较降低,VEGFA m RNA表达量分别为(2.50±0.25)%、(11.75±0.2)%和(6.51±0.01)%;HIF-1αm RNA表达量分别为(34.33±0.42)%、(46.33±1.06)%和(42.60±1.46)%;OPN表达量分别为(86.33±1.8)%、(52.07±1.29)%和(40.06±1)%。蛋白免疫印结果显示VEGFA、HIF-1α和OPN表达与对照组比较降低:与对照组VEGFA表达量1.06±0.06相比,药物组分别为0.88±0.01、04±0.02和0.62±0.01;与对照组HIF-1α表达量0.71±0.01对比,药物组分别为0.69±0.01、0.49±0.01和0.39±0.01;与对照组OPN表达量1.07±0.01对比,药物组分别为1.04±0.01、0.96±0.01和0.6±0.01。结论沙利度胺抑制骨肉瘤细胞U2OS迁移侵袭,其机制与降低细胞内VEGFA、HIF-1α和OPN有关。     

PRDX6过表达增强肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨PRDX6过表达对肺癌细胞系A549迁移性及侵袭性的影响。方法 1)体外培养人肺癌细胞系A549,分为空白组、转染PRDX6组、转染空质粒组。2)Western blot检测细胞PRDX6蛋白表达;3)Transwell小室法检测细胞的迁移性及侵袭性。结果 1)转染PRDX6组PRDX6蛋白表达较空白组及转染空的质粒组明显增高(均P0.05);2)转染PRDX6组迁移性及侵袭性较空白组及转染空质粒组显著增高(P0.05)。结论 PRDX6的高表达增强肺癌细胞系A549的迁移性及侵袭性。     

莪术醇抑制人骨肉瘤细胞系的增殖和促凋亡

目的 探究莪术醇对人骨肉瘤细胞系MG-63和U2OS体外增殖、凋亡的影响和作用机制。方法 将MG-63细胞和U2OS细胞分为对照组、莪术醇20、40、80和160μmol/L干预组;MTT法检测MG-63、U2OS细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞测量细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、caspase和β-catenin的mRNA和蛋白表达。结果 莪术醇呈浓度依赖性地抑制MG-63和U2OS细胞增殖,IC₅₀值分别为128.03μmol/L、117.95μmol/L。与对照组相比,莪术醇显著抑制MG-63、U2OS细胞的体外迁移和侵袭(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,莪术醇组促进Bax、caspase 3表达,抑制Bcl2表达(P<0.05),MG-63、U2OS细胞内β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达均被显著抑制(P<0.05)。结论 莪术醇显著抑制人骨肉瘤细胞系MG-63、U2OS增殖,诱导细胞凋亡。     

miR-129-5p靶向调控VCP抑制骨肉瘤细胞体外迁徙侵袭

目的 探讨miR-129-5p是否靶向调控VCP基因抑制骨肉瘤细胞迁徙侵袭.方法 构建miR-129-5p过表达及低表达的慢病毒载体,转染骨肉瘤细胞U2-OS;采用实时荧光定量PCR检测上调及下调miR-129-5p的U2-OS细胞中miR-129-5p的表达量;采用RT-PCR和Western blot技术检测VCP mRNA和蛋白表达;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁徙、侵袭情况.结果 实时荧光定量PCR结果显示U2-OS细胞中miR-129-5p表达被明显上调或下调;RT-PCR和Western blot检测结果显示:miR-129-5p上调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照细胞组(阴性慢病毒转染);miR-129-5p下调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照细胞组;miR-129-5p上调U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著低于阴性对照细胞,miR-129-5p下调的U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著高于阴性对照细胞.结论 miR-129-5p靶向调控VCP的表达而抑制骨肉瘤细胞迁徙和侵袭能力.     

高转移性人成骨肉瘤细胞系在裸小鼠体内的筛选和维持

目的：筛选人成骨肉瘤高转移细胞并探讨维持其高转移性状的方法。方法：采用低转移性成骨肉瘤细胞系在裸小鼠腹腔内连续传代和体外培养肺转移灶筛选高转移亚系,通过体内、外交替传代维持其高转移性状,并用流式细胞仪、染色体分析等方法,研究该高转移亚系的细胞周期、形态、增殖等生物学特性。结果：筛选所得腹水型高转移亚系自发性肺转移率达100％。在细胞形态、增殖速度、染色体数目等方面与母系有较大差别,经体内、外交替传代高转移性状得以维持,且出现较高比例的脑、骨、肌肉转移。结论：腹腔连续传代培养转移灶和体内、外交替传代是筛选和维持高转移细胞的可靠方法。     

PDGF-C促进体外培养人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的增殖和迁移

目的观察血小板衍生生长因子-C(PDGF-C)对体外培养的卵巢上皮癌细胞系A2780和人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3的影响。方法采用培养的人类上皮性卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,应用CCK8检测法评价细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期;利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果PDGF-C能明显刺激A2780和SKOV3增殖,增加两种细胞S期细胞的比例,对SKOV3的促增殖作用在20μg/L达高峰,A2780的促增殖作用在30μg/L达高峰。同时,PDGF-C促进A2780和SKOV3的迁移能力。结论 PDGF-C可促进培养的A2780和SKOV3的增殖与迁移能力。     

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论 miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-655-3p靶向KIF20A抑制人肺腺癌细胞系A549迁移及侵袭

目的 探讨miR-655-3p靶向驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 RT-qPCR检测人肺腺癌细胞系H460、A549、HCC-2935、H1299细胞中miR-655-3p的表达;取对数增殖期的A549细胞,分为:空白组、miR-NC组、miR-655-3p mimics...