各种自然杀伤细胞细胞毒测定方法的进展

目前用于检测自然杀伤细胞毒的方法有许多种,但是每一种都有其缺点。形态法简单易行,适合于临床定性。同位素法与酶释放法(比色法)可以定量,因此是实验室的常规方法。荧光法特异性好,又可定量,可做为替代同位素法的常规方法。单细胞毒法虽然能提供上述所有方法均不能提供的信息,但在一定程度上又被流式细胞仪分析法所取代。本文对每种方法所用不同标记物的优缺点进行了综合评价。     

辅酶Q对血管内皮细胞及心肌细胞的保护作用

辅酶Q(CoenzymeQ,CoQ)又名泛醌、癸烯醌 ,是一种存在于动植物细胞中的小分子醌类化合物 ,主要参与线粒体内膜呼吸链的组成,并作为一类递氢体参与细胞的氧化磷酸化过程 ,在ATP合成中具有重要作用,与机体的能量代谢密切相关。此外 ,CoQ还具有生物膜稳定作用和抗氧化的特性 ,在生理和病理状态下发挥重要的生物学功能。近年来CoQ在内皮细胞及心肌细胞相关疾病的治疗方面日益受到人们的关注。1CoQ的概述1.1CoQ的发现CoQ首先由FrederickCrane于1957年在牛的心肌细胞线粒体中分离并提取,同年 ,Morto从缺乏维生素的小鼠肝脏中得到同一种物…     

儿茶酚胺抗体的制备

儿茶酚胺(CA)是生物体内具有重要作用的交感神经活性递质。但由于CA在体内含量少,用一般常用的方法,如液相色谱法和荧光法,在特异性、敏感性及操作方面都有一定的局限。因此我们在参考文献的基础上将目前常用方法加以改进,对CA抗血清的制备进行了研究,现将结果报告如下。     

一种新的同位素相对测定人血白细胞体外释放组胺方法

分离人血白细胞同时,以~3H一组氨酸掺入,使其在嗜碱细胞内脱羧,转化为~3H一组胺重新释放,从而得到相对的释放率.应用于变应原触发的人白细胞组胺释放模型,表现出典型剂量及动力学曲线;与临床诊断的符合率达70%以上;与荧光法测定结果密切相关(r0.71);批内RER0.0388;5ml全血可供测定3个抗原的各3个浓度(20管).除灵敏及操作简便外,由于本法不受荧光干扰物影响,在Ⅰ型变态反应研究中可能有更广泛应用.     

荧光法研究免疫试验抗体包被过程

目的:以荧光法作为定量和示踪手段,研究免疫试验中抗体在固相载体上包被的行为及意义。方法:以异硫氰酸荧光素(FITC)标记后的抗体包被固相载体,构建化学发光免疫分析(CLIA)体系。通过荧光光度计精确测定包被前后包被液中游离抗体的浓度,定量抗体的包被量,并研究其包被量对免疫反应的影响。结果:抗体包被量与CLIA发光值非线性相关;间接法较直接吸附法包被更有利于保持抗体活性;热处理后化学发光系统发光值降低与包被抗体脱落有关。结论:荧光法为构建有效CLIA体系提供了一种研究方法。     

用髂外静脉搭桥的脾-肾分流术

改良脾-肾分流术全称为:用髂外静脉搭桥的无需脾胰分离的具有选择性的脾-肾分流术(Modified distal splenorenal shunt, modified,DSRS)。传统DSRS手术操作复杂,需要结扎和分离许多丛胰到脾静脉的分支,这样手术难度较大,并且术后效果不好易复发,因此在临床上没有得到广泛应用。改良DSRS不用将脾胰分离,直接用髂外静脉搭桥,手术操作简单,术后选择性分流无复发。作者认为改良DSRS是目前治疗门脉高压引起的胃、食道静脉曲张破裂出血的最好外科手术方法。     

流式荧光法检测NSE的应用评价

建立流式荧光法定量检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的正常参考值,评估其在肺癌诊断中的应用价值。采用流式荧光法检测176例临床血清样本的NSE水平,并与罗氏Elecsys电化学发光法检测结果进行比较,确定两种方法之间的可比性。进一步采用流式荧光法检测668例健康者血清NSE水平,建立健康人群的NSE正常参考值。最后,以流式荧光法检测242例肺癌患者、108例肺部良性疾病者和147例健康者血清NSE水平,评价流式荧光法检测NSE的应用。结果显示,176例临床样本的检测结果表明流式荧光法和电化学发光法相关性良好(Y=0.9746X-0.2075,R2=0.9653),二者具有可比性。根据668例健康者检测结果的第95%百分位数(17.07ng/ml)确定流式荧光法的NSE正常参考值,与罗氏Elec-sys 2010电化学发光法的相似。以NSE>17.07ng/ml判断为阳性,NSE在小细胞肺癌患者中的阳性率显著高于肺鳞癌、肺腺癌患者(P<0.01)。建立了流式荧光法检测NSE的正常参考值,并初步评估了流式荧光法检测NSE在肺癌诊断中的应用,为流式荧光法检测NSE的合理应用和广泛推广奠定了基础。     

免疫比浊法测定血清结合球蛋白

<正> 目前国内外测定血清结合珠蛋白(Haptoglobin;HP)采用的方法主要有电泳法、比色法、免疫法等。前两种方法虽然不需要特殊仪器、设备,但准确性欠佳。我们参考有关资料,建立了血清HP免疫比浊测定法,操作简单、快速、结果满意,现报道如下。 材料和方法 一、仪器:NB Ⅱ型浓度比色计(上海医疗器械三厂)。 二、试剂:①150mmol/L NaCl溶液。②     

液相色谱法分离纯化单克隆抗体的进展

本文介绍了近年来国内外液相色谱法(包括常压液相色谱法和高效液相色谱法)在单克隆抗体分离纯化中的应用。由于单克隆抗体分子的特殊性,其分离纯化的方法也多种多样,各种不同分离原理的液相色谱法:离子交换色谱,凝胶过滤色谱,疏水性相互作用色谱,亲和色谱,羟基磷灰石吸附色谱,以及新近发明的亲硫吸附色谱和混合态色谱都在单克隆抗体分离纯化中有着程度不同的应用。这些液相色谱方法可适用于分离纯化腹水或杂交瘤细胞培养上清液中的小鼠、大鼠和人源的不同类型及亚类的单克隆抗体。本文还就各种不同方法的应用范围,及纯化结果的纯度、活性回收率、纯化周期、每批可纯化样品量、纯化成本等方面作了比较和讨论。     

介绍一种分离血小板的方法——凝胶过滤血小板

自从1971年Tangen等用凝胶过滤法从血浆的非吸附分子中分离血小板以来,由于操作简便、迅速,除了需要层析柱和琼脂糖(sepharose 2B)外,没有特殊的设备要求,十多年来,在国外人们已经广泛地应用这种制备对血小板进行研究。     

一种快速简便的血浆脂蛋白分离方法

目前 ,较常用的血浆脂蛋白分离方法有固定角头密度梯度超速离心和甩头等密度超速离心 2种方法。但其缺点较多 ,如步骤繁琐 ,不宜操作 ,费时 (长达 2 4～ 72ｈ) ,也不经济 ,尤其对微量血浆中各种脂蛋白成分的分离和定量受到限制。我们用的血浆脂蛋白分离方法与国际上大多数实验室分离血浆脂蛋白所用的序列超离心法相比有以下不同 :将 2种密度梯度液简化成只用 1种液体 ;将 70 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,4ｈ的离心条件简化为只用 1 0 0 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,2ｈ ;同时 ,最小上样量由原来的3ｍｌ缩小到 6 μｌ,因此更简便、快速和经济。一、材料和方法1 .材…     

利用羧化纳米磁株抽提微量DNA及荧光定量检测方法的研究

利用实验室制备的表面修饰有羧基的Fe3O4纳米磁珠对DNA的分离进行了研究,确立了快速、高效、安全、经济的分离纯化方法。利用荧光染料Sybr GreenⅠ对微量DNA进行定量检测,具有灵敏度高、重复性好及操作简单的优点。     

色谱特点及抗体的分析和制备

传统上,杂交瘤发酵培养液的分析及杂交瘤的选择筛选过程要采用各种免疫学方法;凝胶电泳、凝胶过滤、离子交换色谱分析,甚至要采用氨基酸分析或其它间接方法。这些方法慢而繁索,只有一些半定量结果和/或需要复杂的仪器设施。作者建立了一种改良的快速色谱法,作为一种敏感的定量分析(<1μg/ml),对单克隆抗体和多克隆抗体均适用。这种方     

聚焦层析——一种分离蛋白质的新方法

按蛋白质的等电点利用两性电解质来分离蛋白质的等电聚焦方法是大家所熟悉的,虽然有效,但方法繁琐,不适用于大量制备。近年来,瑞典Pharmacia公司设计了一种新的分离技术,叫做聚焦层析(Chromatofocusing),值得注意,它有三个优点:1.有聚焦作用,洗脱的蛋白峰尖、带狭,带宽度为0.04～0.05 pH单位,所以分辨率高;2.在柱内自动形成pH梯度,不需要pH梯度装置;3.操作方便。     

关于探讨HBV DNA测定的影响因素

乙型肝炎病毒核酸（HBVDNA）的定量测定在乙型肝炎患者临床用药，治疗监测及判断预后具有重要意义。目前，匀BV DNA测定方法主要用于荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR），该方法具有操作简单，定量范围宽，结果重复性好等优点。但因其敏感高，卫生部临检中心对方法中各个环节制定了规范性的要求，以消除除PCR本身外的外界影响因素。1资料与方法
　　1.1试剂和仪器HBV DNA荧光定量PCR试剂盒及DN7600荧光定量PCR扩增仪均由广州中山大学达安基因公司提供。     

食品理化检验技术及其影响因素研究

食品理化检验技术是研究各类食品组成成分的检测方法及其理论，进而评定食品品质的一门技术性学科。它的任务是运用物理、化学、生物化学等学科的基本理论及各种科学技术，对食品工业生产中的物料(原料、半成品、成品等)的质量进行分析与检测。本文探讨食品理化检验技术与检验中重量法、容量法等化学分析方法的原理和基本实验操作技能；了解和掌握荧光光谱法、比色法、原子吸收光谱法、气相色谱法、液相色谱法等仪器分析方法在食品理化检验技术与检验中具体运用。     

目测比色法配制高锰酸钾坐浴溶液在直肠肛管疾病患者术后护理中的应用体会

目的 探讨目测比色法配制高锰酸钾坐浴溶液在直肠肛管疾病患者术后中的应用和护理体会.方法 41例直肠肛管手术后患者应用目测比色法配制的0.02％（1∶5000）高锰酸钾溶液坐浴,观察手术创面及肛周皮肤、黏膜损伤情况.结果 41例直肠肛管术后患者使用由目测比色法配制的1∶5000浓度的高锰酸钾溶液坐浴,达到预期疗效,未发生皮肤溃破、黏膜损伤等不良反应.结论 目测比色法配制高锰酸钾坐浴溶液安全有效,操作便捷,易于推广.     

高效液相色谱法测定聚乳酸中乳酸单体残留量

目的通过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定聚乳酸材料中乳酸单体的残留量,完善此类材料的质量评价方法。方法用三氯甲烷溶解聚乳酸材料样品后,加入等体积磷酸二氢钾水溶液(20 mmol/L,pH=2.87)涡旋振荡,静置分层后取上清液,采用C18 Synergi4u Hydro-RP 80A色谱柱,进样20μL,以流速0.6 m L/min,磷酸二氢钾水溶液为流动相,柱温30℃,紫外检测波长210 nm,外标法定量并进行方法学研究,包括液相色谱系统适应性、线性范围、检出限、定量限、回收率。结果本方法中理论塔板数为10660,拖尾因子为1.32,分离度为3.81,重复性相对标准偏差为0.54%(n=5),乳酸在浓度1.05~105μg/m L范围内与峰面积保持良好的线性关系(r=0.999979),检出限为0.42μg/m L,定量限为1.05μg/m L,萃取平均回收率为94.76%(n=6),其相对标准偏差为3.04%。聚乳酸样品中乳酸单体平均残留量为144.17μg/g。结论高效液相色谱法测定聚乳酸中乳酸单体残留量具有良好的线性范围,准确度高,重复性好,萃取回收率较高且操作简单,可用于聚乳酸材料中乳酸单体残留量测定。     

基于数学形态学方法的心电图波形分离技术

讨论了一种基于数学形态学的心电图波形分离方法。使用这种方法,无须检测QRS波群,利用一系列形态学运算,便可以直接去除心电信号中的QRS波群,检出P波和T波的起止点,实现波形的定性和定量分离。定性分离效果甚佳,定量分离结果的方差较小。此外,心电信号的滤波、基线矫正等处理,也完全由类似的形态学算法实现。     

用间接抗球蛋白花环试验检测人外周血T细胞及其亚群的初步探讨

<正> 用单克隆抗体检测人T细胞亚群常用间接免疫荧光方法(简称荧光法)。除一般实验室不一定配备荧光显微镜外,有时又因荧光较弱且易退减使结果多少带有主观性。为此,本文探索抗鼠球蛋白花环试验(简称花环法)以检测已与单克隆抗体结合的T细胞及其亚群,同时与间接荧光方法进行比较。