携带甲胎蛋白基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默效率

目的构建携带甲胎蛋白（AFP）基因小干扰RNA（siRNA）的慢病毒载体并转染肝癌细胞,评价其对AFP基因的沉默效率。方法设计和构建针对AFP基因的阳性siRNA及不针对任何已知基因的阴性siRNA,将其分别插入携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组慢病毒载体,然后转染到表达AFP基因的人肝癌细胞HepG2并筛选阳性表达细胞株,分别为慢病毒转染阳性siRNA组和慢病毒转染阴性siRNA组。同时设立脂质体转染阳性siRNA组、脂质体转染阴性siRNA组以及加AFPsiRNA而未用转染试剂的siRNA组、空白对照组。荧光显微镜观察评估转染效率,荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组HepG2细胞APFmRNA及蛋白的相对表达量,比较不同转染方法对AFP基因表达的抑制率。结果慢病毒能够有效地转染siRNA到HepG2细胞内。荧光定量PCR显示慢病毒转染siRNA对AFPmRNA表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA（92．1％比74．3％,P〈0．05）。免疫印迹亦显示慢病毒转染siRNA对AFP蛋白表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA（88．2％比63．7％,P〈0．05）。结论慢病毒转染AFPsiRNA能够更有效地抑制HepG2细胞内AFP基因表达。     

二氢杨梅素对绒毛膜癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨二氢杨梅素（DMY）对绒毛膜癌（绒癌）JEG-3及JAR细胞增殖和迁移能力的影响。 方法 MTT法检测不同浓度的二氢杨梅素(0 mg/L, 20 mg/L, 40 mg/L, 60 mg/L, 80 mg/L)作用一定时间后,对绒癌JEG-3和JAR细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验和Transwell法检测不同浓度二氢杨梅素(0 mg/L, 40 mg/L, 60 mg/L, 80 mg/L)分别作用绒癌JEG-3细胞及JAR细胞一定时间后,对其迁移能力的影响;Real-time PCR和Western blotting方法分别检测不同浓度二氢杨梅素(0 mg/L, 40 mg/L, 60 mg/L, 80 mg/L)作用绒癌JEG-3及JAR细胞后,基质金属蛋白酶2（MMP-2）mRNA和蛋白表达水平的影响。 结果 不同浓度二氢杨梅素作用绒癌JEG-3和JAR细胞24 h和48 h后,随着二氢杨梅素浓度增加,对JEG-3和JAR细胞增殖抑制作用增强（P＜0.05）。二氢杨梅素作用绒癌JEG-3及JAR细胞后,显著抑制细胞迁移能力,且具有浓度依赖性（P＜0.05）。不同浓度二氢杨梅素作用JEG-3和JAR细胞后,MMP-2 的mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。 结论 二氢杨梅素能够抑制JEG-3及JAR细胞的增殖能力且具有浓度依赖性,同时二氢杨梅素可能通过下调绒癌JEG-3及JAR细胞中MMP-2 mRNA和蛋白的表达,抑制绒癌细胞的侵袭迁移。     

siRNA抑制PPARγ表达对绒癌细胞JEG-3侵袭力的影响

目的: 采用小分子干扰RNA(siRNA)技术特异性地抑制绒癌细胞株JEG-3中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达,研究PPARγ影响JEG-3细胞侵袭力的机制。方法: 将实验设为实验组(转染 PPARγ 基因的特异性siRNA)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)和空白对照组(不转染任何siRNA片段,其它试剂与另两组相同),采用实时定量PCR技术从mRNA水平检测PPARγ及黏蛋白-1(MUC1)的表达;利用Transwell侵袭实验观察siRNA转染JEG-3细胞后细胞侵袭力的变化。结果: siRNA使PPARγ mRNA的表达水平下调了(75.0±0.8)% (P<0.05),MUC1mRNA的表达水平下调了(65.0±1.3)% (P<0.05),JEG-3细胞侵袭Matrigel的能力显著增强(P<0.05)。结论: PPARγ表达水平的下降能相应下调MUC1的表达水平,并增强滋养细胞的侵袭能力,推测PPARγ可能通过调节 MUC1 基因影响滋养细胞的侵袭能力,从而参与了子痫前期等病理妊娠的发生。     

成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用促进细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达

目的研究成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用对二者表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的影响,初步探讨肿瘤-基质相互作用在结肠癌侵袭转移中的作用。方法结肠癌SW480细胞与HELF成纤维细胞以RPMI1640培养液分别共培养0、12、24、48h,通过RT-PCR和免疫细胞化学方法检测SW480和HELF细胞中EMMPRIN的表达。结果共培养组SW480细胞EMMPRINmRNA和蛋白的表达均明显升高,HELF细胞本来不表达EMMPRIN,与SW480细胞共培养12、24、48h后检测到EMMPRIN表达,且随时间延长而表达增加。结论成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用上调SW480细胞EMMPRIN的表达,并诱导HELF细胞表达EMMPRIN,有可能在结肠癌侵袭转移中发挥重要作用。     

survivin的siRNA靶向干扰膀胱癌的实验研究

目的实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对膀胱癌生物学行为的影响。方法设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA，用脂质体转染T24膀胱癌细胞株。采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡；荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达；用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6、1／Neo-survivin。结果脂质体转染T24细胞后的转染效率为92．3％；survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达，呈时间和剂量依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时survivin表达水平下调了75．91％，并显著地抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率亦增至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P〈0．01）。用限制性内切酶将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-survivin。结论siRNA．survivin能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平，促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，可能成为膀胱癌基因治疗的新工具。成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。     

RNAi沉默HIF-1α基因抑制滋养细胞TGF-3β表达的实验研究

目的构建缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）基因的短发夹状干扰RNA（short hair-pin RNA,shRNA）表达质粒,探讨其在低氧条件下对BeWo细胞转化生长因子3β（transforming growth factor3β,TGF-3β）基因表达的抑制作用。方法根据小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）设计原则,针对HIF-1α基因设计并合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒,应用脂质体将重组质粒转染BeWo细胞。缺氧培养后,应用Western blot法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3β蛋白表达水平,应用real time PCR法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3βmRNA表达水平。结果成功构建HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染BeWo细胞。低氧条件下,细胞HIF-1α蛋白和mRNA表达下降;同时细胞TGF-3β蛋白和mRNA表达也降低。结论构建的HIF-1α基因shRNA表达质粒在低氧条件下明显抑制滋养细胞TGF-3β基因的表达。     

下调MARCH8基因的表达对宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移与增殖的影响

目的：研究下调MARCH8基因表达对人宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移、增殖以及克隆的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：构建特异性针对MARCH8基因的siRNA片段,并将其通过脂质体介导转染至宫颈癌Siha细胞,同时设立转染无义序列的阴性对照组。分别采用Real-time PCR法与蛋白质印迹法检测转染后,细胞中MARCH8在mRNA和蛋白水平上的表达改变。通过Transwell小室实验、划痕实验检测MARCH8表达下调对细胞侵袭、迁移能力的影响,通过CCK-8法、细胞平板克隆实验检测MARCH8表达下调对细胞增殖、克隆形成能力的影响,并采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调对基质金属蛋白酶9（MMP9）,波形蛋白（Vimentin）以及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。最后采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调,对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin以及E钙黏蛋白（E-cadherin）表达的影响。结果：与转入siRNA-NC组相比,转入siRNA-MARCH8组细胞MARCH8在 mRNA和蛋白表达水平上均明显降低,细胞的侵袭、迁移以及增殖和克隆形成能力明显被抑制（P<0.05）,且侵袭标记蛋白MMP9,Vimentin以及增殖标记蛋白PCNA的表达也明显下降。MARCH8基因表达成功下调后,转入siRNA-MARCH8组细胞中β-catenin蛋白的表达水平较阴性对照组明显下降（P<0.05）,而E-cadherin蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）。结论：下调MARCH8基因的表达可以抑制宫颈癌Siha细胞的侵袭、迁移、增殖和克隆能力,其机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。     

RNA干扰SHBG基因表达对滋养细胞增殖的影响

目的探讨RNA干扰技术抑制SHBG基因表达对滋养细胞增殖的影响。方法在体外通过RNA干扰技术,将SHBG si RNA转染至原代培养的人绒毛滋养细胞中,MTT法检测滋养细胞增殖情况。结果成功将SHBG si RNA转染人绒毛滋养细胞;转染后24、48、72h,SHBG si RNA转染组的细胞生长速度显著减缓,正常对照组(未经转染的细胞)、空白对照组(只转染脂质体,无si RNA)和阴性对照组(转染非特异性si RNA)的组间比较差异均无统计学意义(P0.05);转染组(SHBG si RNA-I,SHBG si RNA-II,SHBG si RNA-III)之间差异均无统计学意义(P0.05),各转染组分别与各对照组的组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 si RNA可以有效干扰人绒毛滋养细胞SHBG基因的表达,抑制滋养细胞增殖的增殖活性。     

RNA干扰survivin基因提高淋巴瘤细胞对阿霉素的敏感性

目的：探讨RNA 干扰下调Burkitt淋巴瘤Daudi细胞系凋亡抑制基因survivin的表达对阿霉素敏感性的影响。方法：构建survivin发夹RNA（shRNA）真核表达载体, 脂质体介导转染Daudi细胞。多重RT-PCR 检测 survivin mRNA 表达；Western blotting 检测Survivin蛋白表达；流式细胞仪（FCM）检测干扰前后细胞凋亡率；MTT 法检测干扰前后细胞对化疗药物阿霉素（adriamycin,ADR）敏感性变化。结果：与无功能control-shRNA处理组和PBS处理组比较，转染survivin-shRNA 细胞的survivin mRNA和蛋白表达率显著降低，抑制率分别为62.32% 和61.88% (P<0.05)；FCM结果示转染组细胞凋亡指数（apoptosis index, AI) 显著高于两对照组(P<0.05)； MTT结果显示，转染组细胞的阿霉素半数抑制浓度(IC50)为（0.25±0.43） μmol/L，显著低于无功能control-shRNA处理组（0.87±0.21） μmol/L和PBS处理组(0.91±0.36) μmol/L,P<0.05；相同剂量ADR对转染细胞的生长抑制率明显高于PBS组和control组。结论： 发夹RNA干扰survivin基因可显著提高Daudi细胞凋亡率和对化疗药物阿霉素的敏感性。     

CXCR4-siRNA表达载体的构建及其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的 构建趋化因子受体（CXCR4）小分子干扰RNA ( siRNA) 表达载体,研究其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法 选择CXCR4高表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞株,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的2条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pGE-1-U6/kna中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染MDA-MB-231细胞,用Western blot分析CXCR4蛋白表达,transwell 小室检测细胞的侵袭能力。结果 成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,瞬时转染乳腺癌细胞后能显著降低CXCR4的蛋白表达,可有效抑制人类乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力。结论 CXCR4- siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制人类乳腺癌细胞的侵袭能力,有望为乳腺癌转移的基因治疗开辟新途径。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995     

侧脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元突触的影响

为观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)双侧侧脑室注射对大鼠海马神经元突触的影响,本研究将Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,模型组大鼠分别于第1、3d双侧侧脑室重复注射STZ3mg/kg,对照组以人工脑脊液代替STZ。21d后,取大鼠海马,免疫组织化学染色及Western blotting方法观察突触素、活性调节细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeletal-associatedprotein,Arc)的表达;电镜观察海马CA1区神经元突触超微结构的改变。结果显示:与对照组相比,模型组大鼠海马内突触素蛋白表达显著减少,而Arc蛋白表达显著增多;模型组海马CA1区神经毡内突触结构异常,突触小泡聚集增多。以上结果提示:脑室注射STZ可影响大鼠海马突触相关蛋白的表达,引起突触超微结构异常,干扰了神经元突触信号的传导。     

Effect of conditions of culture on quantitative assessment of viability of living tissues

The viability of tissue explants of mouse kidneys, estimated quantitatively by growth in plasma-free culture, was shown to depend on several factors connected with the conditions of culture. The effect of methods of treatment of the serum, pH of the medium, and the character of distribution of the tissue explant during culture, the size of the explants, and the firmness of attachment of the tissue fragments to the substrate on this index was demonstrated.Problem Laboratory, Arkhangel'sk Medical Institute. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. P. Avtsyn.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 86, No. 11, pp. 629–631, November, 1978.     

社区精神分裂症病人照料者的生活质量研究

通过对９３名精神分裂症患者的家庭照料者与１００名对照者比较研究表明，照料者的躯体功能、心理功能、社会功能与经济状况都显著差于对照者。照料者的生活质量与被照料者的病期、病情严重度、整体功能、药物副作用有关；同时，照料者身份为患者母亲者其生活质量受影响最大。     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Evaluation of fungicidal activity of extracellular filtrates of cyanobacteria--possible role of hydrolytic enzymes

A set of seventy axenised and unicyanobacterial isolates belonging to the genus Anabaena were evaluated for biocidal activity against a set of phytopathogenic fungi. Among them, 35 Anabaena strains showed zone of inhibition against one or more fungi. The extracellular filtrates from 4 and 8 weeks old cultures of these Anabaena strains were further evaluated in terms of hydrolytic enzymes, proteins and IAA employing standard methods. Significant differences were also observed among the strains in terms of their FPase, chitosanase and xylanase activity, while low and relatively similar values of CMCase, cellobiase and protease activity were recorded in the strains analyzed. IAA production was also observed in all the strains. Comparative evaluation of activity of hydrolytic enzymes and antifungal activity revealed that such enzymes may contribute to the fungicidal activity of the cyanobacterial strains, besides other bioactive compounds, including IAA, which are established promising traits for biocontrol agents. This study is a first time report on the production of hydrolytic enzymes by these oxygenic photosynthetic prokaryotes, which can be potential candidates for the development of biocontrol agent(s) against selected phytopathogenic fungi.     

Pathways of the realization of immunomodulating effects of neurotransmitters

Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 115, N ^o 4, pp. 401–404, April, 1993     

Characterization of sterols of three digenetic trematodes of buffalo

Sterols of three digenetic trematodes were isolated and characterized by infrared and 1H nuclear magnetic resonance spectroscopies, and gas-liquid chromatography and gas chromatography-mass spectrometry. Sterols identified were cholesterol, cholestanol, 24-methylcholesterol, 24-methylcholestanol, 24-ethyl-22-dehydrocholesterol, 24-ethyl-22-dehydrocholestanol, 24-ethylcholesterol and 24-ethylcholestanol.     

Mechanisms of generation of slow components of bioelectric activity in diagnostics of functional state of the gastrointestinal tract

New electrophysiologic devices were used for the diagnostics of the state of excitable structures in the gastrointestinal tract and correction of their motor functions. Bioelectrical and biomechanical activities form the basis of functioning of internal organs. The mechanisms of generation of slow bioelectrical activity that are important for clinical and physiological studies are described. One of these mechanisms is a capacitance parametric transducer converting the energy of contractions into specific electric signals reflecting muscle functions. Another mechanism results from slow oscillations of resting potentials of interrelated excitable cells in large neuromuscular structures of internal organs. The elaborated procedure is efficient for preventing early postoperative paresis of the gastrointestinal tract. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 128, No. 10, pp. 448–452, October, 1999