miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论 miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-486调控PTEN影响LPS诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨微小RNA-486(miR-486)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡的影响和机制。方法:以LPS处理肺泡上皮细胞,RT-qPCR测定miR-486表达变化。在肺泡上皮细胞中转染miR-486模拟物(miR-486 mimics),RT-qPCR检测LPS条件下的转染效果。流式细胞术测定凋亡变化,Western blot检测细胞中cleaved caspase-3(C-caspase-3)和C-caspase-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)可能是miR-486的靶基因,利用萤光素酶报告载体鉴定靶向关系。在肺泡上皮细胞中共转染pcDNA 3.1-PTEN和miR-486 mimics,检测上调PTEN对miR-486 mimics调控LPS诱导的A549细胞凋亡的作用。结果:LPS处理后的肺泡上皮细胞中miR-486的表达水平显著下降(P0.05)。miR-486 mimics可以显著上调LPS条件下肺泡上皮细胞中miR-486的表达水平(P0.05)。LPS处理后的肺泡上皮细胞凋亡率及C-caspase-3和C-caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.05);上调miR-486可以显著下调LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡(P0.05)。miR-486靶向负调控PTEN的表达。pcDNA 3.1-PTEN可以显著提高miR-486 mimics转染后LPS诱导的肺泡上皮细胞中PTEN的表达,促进细胞凋亡和细胞中C-caspase-3和C-caspase-9蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-486靶向抑制PTEN的表达,减少LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡。     

过氧化氢处理的脐静脉血管内皮细胞miR-125b-5p水平降低但Smad4表达增加

目的探讨miR-155、miR-125b-5p、miR-210及其靶基因蛋白在氧化应激血管内皮细胞中的表达和作用。方法分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并通过免疫荧光染色法检测内皮细胞Ⅷ因子相关抗原、流式细胞术检测CD31的表达进行鉴定;将分离的HUVEC进行原代培养,采用子痫前期患者血清和H2O2建立氧化应激的血管内皮细胞的模型,实验分为正常妊娠血清组、子痫前期血清组、0μmol/L H2O2组、100μmol/L H2O2组;实时定量PCR检测造模后24 h细胞内miR-155、miR-125b-5p、miR-210的水平;Western blot法检测细胞内miR-125b-5p靶基因Smad4蛋白的水平;免疫荧光染色法检测细胞内Smad4蛋白的表达;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与0μmol/L H2O2组相比,100μmol/L H2O2处理的内皮细胞miR-125b-5p显著降低、Smad4蛋白显著增加、细胞凋亡率和坏死率显著增加。与正常孕妇血清组相比,子痫前期血清处理的内皮细胞凋亡率和坏死率显著增加,但miR-125b-5p及Smad4蛋白变化不明显。结论 H2O2处理的HUVEC miR-125b-5p降低,Smad4蛋白增加。     

miR-33a-5p 靶向SMAD7 对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外 基质降解的影响

目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响。方法:生物信息学预测靶向关系,荧光素实验进一步验证靶向关系,RT-PCR检测miR-33a-5p和SMAD7的表达,CCK-8法检测VSMC的增殖,流式检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、 Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:PDGF-bb处理能够增强血管平滑肌细胞增殖,抑制miR-33的表达;miR-33a-5p与SMAD7在3′UTR区存在结合位点,miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p过表达抑制SMAD7的表达;miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、下调增殖标记蛋白PCNA和Ki67表达,促进细胞凋亡、上调凋亡标记蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达,降低伤口愈合率、抑制细胞迁移,下调MMP-2和MMP-9的表达(P0.01)。结论:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质的降解,并促进凋亡。     

miR-137通过TWIST1调控乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移及凋亡

目的:探讨微小RNA-137(miR-137)对乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响和分子机制。方法:在乳腺癌MDA-MB-231细胞中转染miR-137模拟物(miR-137 mimics),RT-qPCR检测miR-137表达量,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、cleaved caspase-3(C-caspase-3)和Bax的蛋白水平。生物信息学软件预测TWIST1可能是miR-137的靶基因后用萤光素酶报告基因鉴定。Western blot检测miR-137 mimics对TWIST1蛋白表达影响。在乳腺癌细胞中共转染TWIST1过表达载体和miR-137 mimics,测定细胞凋亡、侵袭、迁移及MMP-9、C-caspase-3、Bax蛋白水平的变化。结果:转染miR-137 mimics后的乳腺癌细胞中miR-137水平升高,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,C-caspase-3和Bax的蛋白水平增高,MMP-9蛋白表达减少(P0.05)。萤光素酶报告载体鉴定显示miR-137靶向调控TWIST1,并且miR-137 mimics能够抑制乳腺癌细胞中TWIST1表达。与共转染阴性对照载体和miR-137 mimics的细胞比较,TWIST1过表达载体和miR-137 mimics共转染后的乳腺癌细胞TWIST1和MMP-9蛋白表达水平升高,C-caspase-3和Bax蛋白水平减少,细胞凋亡率降低,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05)。结论:miR-137靶向TWIST1抑制乳腺癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

miR-23b-3p靶向XIAP调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)靶向X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用RT-qPCR检测体外培养的RA滑膜成纤维细胞中miR-23b-3p和XIAP的表达水平。通过TargetScan预测分析miR-23b-3p与XIAP的靶向关系,并使用双萤光素酶报告基因实验进行验证。采用脂质体法将miR-23b-3p模拟物和抑制物转入细胞中,RT-qPCR法检测miR-23b-3p和XIAP表达水平的变化;CCK-8法和细胞流式术分别检测miR-23b-3p对细胞活力和细胞凋亡的影响;Western blot检测Ki67和Bcl-2蛋白表达量的变化。结果:类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中miR-23b-3p表达显著下调,XIAP表达显著上调(P0.05)。转染miR-23b-3p模拟物促使XIAP表达显著下调(P0.05),并且显著抑制细胞活力,促进细胞凋亡(P0.05),同时Ki67和Bcl-2显著下调(P0.05);转染miR-23b-3p抑制物的效果与之相反。结论:miR-23b-3p通过靶向XIAP抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖,促进其凋亡。     

LncRNA FGD5⁃AS1靶向miR⁃106a⁃5p减轻ox⁃LDL诱导的HUVECs损伤

目的 探讨lncRNA FGD5-AS1对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其对miR-106a-5p的调控作用。方法 Ox-LDL诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)建立细胞损伤模型，pcDNA-FGD5-AS1、anti-miR-106a-5p及其阴性对照分别转染至HUVECs后加入ox-LDL处理细胞，pcDNA-FGD5-AS1分别与miR-NC、miR-106a-5p mimics共转染至HUVECs后加入ox-LDL处理细胞；RT-qPCR检测FGD5-AS1、miR-106a-5p的表达量；试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的水平；流式细胞测量术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告基因实验检测FGD5-AS1与miR-106a-5p的靶向关系；Western blot检测cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达量。结果 Ox-LDL诱导的HUVECs中FGD5-AS1 mRNA的表达量降低(P<0.05),而miR-106a-5p mRNA的表达量升高(P<...     

circITCH靶向miR-106b-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞IL-6、TNF-α表达和细胞凋亡的影响

目的探讨cirITCH对高糖(HG)诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子IL-6、TNF-α表达和凋亡的影响和可能机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,RT-qPCR法检测细胞中cirITCH和miR-106b-5p表达。分别转染cirITCH过表达载体、miR-106b-5p抑制剂或共转染cirITCH过表达载体与miR-106b-5p模拟物至HK-2细胞后,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-6和TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证cirITCH和miR-106b-5p调控关系。结果 HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中circITCH表达降低,而miR-106b-5p表达升高。上调cirITCH或下调miR-106b-5p可减少高糖诱导的HK-2细胞分泌IL-6和TNF-α,并降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达,而增加Bcl-2蛋白表达。circITCH靶向负调控miR-106b-5p表达,上调miR-106b-5p...     

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.     

miR-143-3p靶向IL-6R/STAT3通路抑制IL-6诱导的人肺微血管内皮细胞血管生成

目的探究miR-143-3p在IL-6诱导的人肺微血管内皮细胞(HLMVEC)血管生成中的作用和机制。方法首先使用100 ng/ml重组IL-6蛋白处理HLMVEC细胞,管腔形成实验分析IL-6对细胞管腔形成数目的影响,Real-time PCR检测IL-6对miR-143-3p和VEGF mRNA表达的影响。Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。然后使用miR-143-3p mimics过表达miR-143-3p,按照上述方法检测miR-143-3p对IL-6诱导的管腔形成数目、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。此外,使用双荧光素酶报告基因检测法分析miR-143-3p和IL-6R的关系,Real-time PCR检测miR-143-3p过表达对IL-6R mRNA表达的影响,Western blot检测IL-6R、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平的变化。结果 IL-6能够增加管腔形成数目和VEGF的表达,降低miR-143-3p的表达。过表达miR-143-3p能够抑制IL-6诱导的管腔形成、VEGF、IL-6R和p-STAT3的表达水平,但是不影响STAT3的表达。此外还发现IL-6R是miR-143-3p的一个靶基因。结论 miR-143-3p能够抑制IL-6诱导的内皮细胞血管生成,这可能是通过抑制IL-6R/STAT3通路发挥作用的。     

miR-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因PD-L1参与卵巢癌增殖和侵袭的机制研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)参与卵巢癌增殖和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-195-5p靶向STAT3。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+STAT3组和STAT3组。通过质粒转染技术过表达miR-195-5p和STAT3。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞活力、侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证过表达miR-195-5p对肿瘤生长、STAT3和PD-L1的影响。结果 miR-195-5p直接靶向STAT3。过表达miR-195-5p抑制STAT3 mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),过表达STAT3显著逆转miR-195-5p对STAT3的抑制作用(P0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P0.05),STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P0.05),并且mimic+STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于mimic组(P0.05)。荷瘤裸鼠实验显示miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著低于对照组(P0.05)。miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤组织中STAT3和PD-L1蛋白水平显著低于对照组(P0.05)。结论 miR-195-5p可通过靶向STAT3抑制PD-L1的表达并抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和免疫抑制反应。     

miR-19b-3p 靶向LRIG1 调控喉癌细胞凋亡和放射敏感性分子机制研究

目的:探讨miR-19b-3p是否通过靶向调控富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域(LRIG1)表达从而对喉癌细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法:喉癌Hep2细胞分为anti-miR-19b-3p组、anti-miR-NC组、pcDNA-LRIG1组、pcDNA组、anti-miR-19b-3p+si-LRIG1组、anti-miR-19b-3p+si-NC组、miR-19b-3p组、miR-NC组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测miR-19b-3p、LRIG1表达水平;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组细胞的放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验验证LRIG1是否为miR-19b-3p的靶基因;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3的表达。结果:miR-19b-3p在喉癌组织及细胞系中表达水平显著升高,而LRIG1表达水平显著降低;转染anti-miR-19b-3p或pcDNA-LRIG1后可显著增强喉癌细胞凋亡能力并降低细胞存活分数从而增强细胞的放射敏感性,促进Bax、cleaved-caspase3表达,抑制Bcl-2表达;双荧光素酶报告实验证实LRIG1是miR-19b-3p的靶基因;抑制LRIG1表达逆转了抑制miR-19b-3p表达对喉癌Hep2细胞凋亡和放射敏感性的作用。结论:沉默miR-19b-3p表达可上调LRIG1表达从而诱导喉癌细胞凋亡并增强其放射敏感性。     

miR-101-3p 靶向 TRAF6 对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡 的影响

目的 探究微小 RNA-101-3p (miR-101-3p) 靶向肿瘤坏死因子受体相关因子 6 ( tumor necrosis factor receptor-associated factor 6, TRAF6) 对肺炎链球菌 (Streptococcus pneumoniae, SP) 诱导的肺泡上皮细 胞凋亡的影响。 方法 培养 A549 细胞, 双荧光素酶报告基因检测 miR-101-3p 与 TRAF6 靶向关系。 实时荧 光定量逆转录聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测 miR-101-3p 和 TRAF6 mRNA 表达, Western 印迹检测 TRAF6、 活化型半胱天冬酶-3 (C-caspase-3) 和 C-caspase-9 蛋白水平, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, 酶联免疫吸附 (ELISA) 法检测白细胞介素-6 ( IL-6) 和 IL-10 含量。 结果 miR-101-3p 靶向负调控 TRAF6 (P< 0. 05)。 SP 诱导后 miR-101-3p 表达降低, TRAF6 表达升高; IL-6 含量增高; IL-10 含量降低; 细胞凋亡率和 Ccaspase-3、 C-caspase-9 水平均升高 (P< 0. 05)。 过表达 miR-101-3p 可改善 SP 引起的 A549 细胞损伤; 过表 达 TRAF6 部分逆转 miR-101-3p 过表达对 SP 诱导的 A549 细胞的保护作用 (P< 0. 05)。 结论 miR-101-3p 靶向 TRAF6 保护肺泡上皮细胞免受 SP 诱导的细胞凋亡和炎性损伤。     

miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬

目的探讨miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬。方法运用TargetScan在线分析miR-302b-3p与SQSTM1的相关性;将SQSTM1的3′UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用luciferase assay检测miR-302b-3p是否靶向调控SQSTM1;用RNA转染试剂转染miR-302b-3p mimics或miR-302b-3p inhibitor进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测SQSTM1的表达量和乳腺癌MCF7细胞自噬标志蛋白表达情况。单丹磺酰尸胺染色检测细胞自噬发生水平。结果 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR的584-590的位置;过表达miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显下降(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显上升(P<0.05),MCF7自噬发生水平降低(P<0.05);敲低miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显上升(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显下降(P<0.05),MCF7自噬发生水平升高(P<0.05)。结论 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR后降低SQSTM1的蛋白水平,最终抑制乳腺癌细胞MCF7的自噬。     

雷公藤红素通过miR-17-5p和miR-155-5p靶向抑制cyclin D1阻滞A549细胞周期的研究

目的:研究雷公藤红素对人肺腺癌A549细胞周期的影响,并探讨其机制。方法:梯度浓度的雷公藤红素作用于人肺腺癌A549细胞后,MTT法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,筛选出雷公藤红素的半数致死浓度;而后用半数致死浓度的雷公藤红素作用于A549细胞,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达水平; real-time PCR检测微小RNA(miR)-17-5p和miR-155-5p表达的变化;生物学信息软件预测miR-17-5p和miR-155-5p与cyclin D1的相关性;将miR-17-5p mimics和miR-155-5p mimics以及各自的突变体mutant-miR-17-5p和mutant-miR-155-5p分别与pcDNA-GFP-cyclin D1-3'UTR共转染至A549细胞后荧光显微镜和流式细胞术检测GFP表达;最后将miR-17-5p mimics和miR-155-5p mimics转染至A549细胞后,real-time PCR检测miR-17-5p和miR-155-5p表达水平的变化,Western blot检测cyclin D1的表达水平。结果:随雷公藤红素作用浓度的增大,A549细胞的活力抑制率逐渐增高,细胞凋亡率逐渐增加(P0.01),提示雷公藤红素可以有效抑制A549细胞的生长,诱导其凋亡,其中3μmol/L最接近半数致死浓度;应用该浓度雷公藤红素作用于A549细胞后,细胞被阻滞在G_1期,cyclin D1表达水平显著降低(P0.01),miR-17-5p和miR-155-5p的表达水平显著升高(P0.01)。生物学信息软件预测提示cyclin D1的3'UTR存在miR-17-5p和miR-155-5p的结合位点。GFP检测结果显示,miR-17-5p mimics/miR-155-5p mimics和pcDNA-GFP-cyclin D1-3'UTR共转染至A549细胞后,GFP的表达水平降低(P0.05),提示miR-17-5p和miR-155-5p能直接靶向cyclin D1的3'UTR发挥作用;将miR-17-5pmimics/miR-155-5pmimics转染A549细胞后,miR-17-5p/miR-155-5p的表达水平显著升高(P0.01),cyclin D1表达水平均显著降低(P0.01)。结论:雷公藤红素可阻滞A549细胞于G_1期,进一步导致了细胞生长抑制和凋亡增加,其机制可能是通过上调miR-17-5p和miR-155-5p的表达而导致了cyclin D1的靶向抑制。本研究为雷公藤红素作为临床非小细胞肺癌的治疗药物提供新的理论依据。     

miR-195-5p 靶向调控ELMO2 抑制IL-17 诱导的胃癌细胞AGS 侵袭和 迁移

目的:研究miR-195-5p调控吞噬细胞运动蛋白2(ELMO2)对白介素17(IL-17)诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移的影响和机制。方法:以胃癌细胞AGS作为实验对象,转染miR-195-5p mimics,给予IL-17处理,qRT-PCR方法测定细胞中miR-195-5p表达;Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力;Western blot测定细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。生物信息学软件预测miR-195-5p的靶基因可能为ELMO2,双荧光素酶系统鉴定靶向关系。在胃癌细胞AGS中共转染miR-195-5p mimics、pcDNA3.1-ELMO2,检测细胞侵袭和迁移能力变化。结果:IL-17处理后的胃癌细胞AGS中miR-195-5p表达水平下调,细胞侵袭和迁移能力升高,细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降,Vimentin蛋白表达水平升高。转染miR-195-5p mimics后的细胞经过IL-17处理以后,细胞中miR-195-5p表达水平升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin蛋白表达水平降低。miR-195-5p靶向负调控ELMO2表达。pcDNA3.1-ELMO2能够提高转染miR-195-5p mimics后的细胞侵袭和迁移能力。结论:miR-195-5p靶向负调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移。     

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-195-5p调控弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞活性北大核心CSCD

目的:探讨FGD5-AS1靶向miR-195-5p调控弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞增殖及凋亡的分子机制。方法:qRTPCR检测B淋巴母细胞IM-9与弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-Ly1、OCI-Ly4、OCI-Ly10中FGD5-AS1、miR-195-5p表达;si-NC、si-FGD5-AS1、miR-NC、miR-195-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-195-5p、si-FGD5-AS1+anti-miR-NC、si-FGD5-AS1+antimiR-195-5p分别转染OCI-Ly1细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告基因实验检测FGD5-AS1与miR-195-5p的靶向关系,Western blot检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、β-catenin蛋白表达。结果:与IM-9细胞比较,弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-Ly1、OCI-Ly4、OCI-Ly10中FGD5-AS1表达升高(P<0.05),miR-195-5p表达降低(P<0.05);转染si-FGD5-AS1或miR-195-5p mimics,与阴性对照相比,细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实FGD5-AS1可靶向结合miR-195-5p;OCI-Ly1细胞转染anti-miR-195-5p,与转染anti-miR-NC相比,细胞活力升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05);OCI-Ly1细胞转染si-FGD5-AS1与antimiR-195-5p,与转染si-FGD5-AS1、anti-miR-NC比较,细胞活力升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),CyclinD1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。结论:干扰FGD5-AS1表达可通过靶向miR-195-5p减弱弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

miR-125a-5p靶向LIMK1逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织及其细胞株A549和A549/DDP中miR-125a-5p和LIM激酶1(LIMK1)的表达;在A549/DDP细胞中上调或下调miR-125a-5p或LIMK1表达,分别采用MTT法、流式细胞术和Western blot检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达;TargetScan在线预测、萤光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和LIMK1的靶向关系;共表达miR-125a-5p和LIMK1,检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达。结果:在非小细胞肺癌组织及其细胞株中,miR-125a-5p表达下调,LIMK1表达上调(P0.05);萤光素酶报告基因实验表明miR-125a-5p可负向调控LIMK1表达。过表达miR-125a-5p或敲减LIMK1表达使A549/DDP细胞的活力下降,细胞凋亡率增加,顺铂的IC_(50)减小,耐药相关蛋白表达下调(P0.05)。过表达LIMK1则使miR-125a-5p对A549/DDP细胞活力和耐药相关蛋白表达的抑制作用减弱。结论:miR-125a-5p能通过抑制LIMK1基因表达,下调耐药相关蛋白表达,从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

miR-135a靶向调节SP1对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-135a通过靶向调节SP1对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和凋亡的影响。方法收集人正常成骨组织和OS组织,培养正常成骨细胞(h FOB1.19)和OS细胞(MG-63),Real-time PCR法检测miR-135a和SP1的表达,Western blot法检测SP1表达。转染miR-135a mimics和inhibitor,MTT法和Brd U-ELISA法检测OS细胞增殖变化,Western blot法检测凋亡蛋白Bax、BCL-2和Caspase 3的表达。双荧光素酶报告基因检测miR-135a与SP1的靶定关系。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中SP1表达的影响。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中JAK2/STAT3表达的影响。结果 OS组织和细胞中miR-135a表达均显著降低,SP1表达均显著升高。转染miR-135a mimics可降低OS细胞活性,减少Brd U阳性标记率。同时,miR-135a mimics增加OS细胞Bax和Caspase 3的表达,减少BCL-2的表达。miR-135a mimics降低荧光素酶报告基因的荧光强度,结合位点突变后荧光素酶活性升高。上调miR-135a显著降低SP1的表达并降低JAK2和STAT3的磷酸化水平。miR-135a inhibitor作用均与mimics相反。结论 miR-135a可通过靶向调节SP1抑制人OS细胞增殖,诱导OS细胞凋亡,并下调JAK2/STAT3活化。