miR-205对体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌的影响北大核心CSCD

目的:探讨miR-205对体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌的影响。方法:qRT-PCR方法分析脓毒症大鼠心肌组织中miR-205表达变化,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α、IL-6水平。心肌细胞分成Control组、LPS组(LPS诱导)、miR-NC+LPS组(转染mimics control,LPS诱导)、miR-205+LPS组(转染miR-205 mimics,LPS诱导),CCK-8方法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测C-Caspase-3、NF-κBp65蛋白表达,二硝基苯肼法检测LDH水平,硫代巴比妥酸法检测MDA水平,黄嘌呤法检测SOD水平,比色法检测GSH-Px水平,ELISA法检测TNF-α、IL-6水平。用NF-κB信号激活剂处理上调miR-205的心肌细胞,同样检测细胞增殖、凋亡、氧化损伤以及细胞炎症因子分泌水平。结果:脓毒症大鼠心肌组织中miR-205表达水平降低,心肌组织中细胞凋亡指数增加,TNF-α、IL-6水平升高。LPS组心肌细胞中miR-205水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达增多,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-6水平升高,细胞中MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,与Control组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-205+LPS组心肌细胞中miR-205水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3蛋白表达减少,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-6水平降低,细胞中MDA水平降低,SOD、GSH-Px水平升高,与miR-NC+LPS组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB信号激活剂逆转miR-205对LPS诱导的心肌细胞损伤作用。结论:miR-205抑制体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌,机制可能与下调NF-κB信号有关。     

下调lncRNA NEAT1通过NF-κB信号传导途径抑制TNF-α诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症因子释放北大核心CSCD

目的:探究下调lncRNA NEAT1对TNF-α诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症因子释放的影响。方法:将肺泡上皮细胞A549分成Control组、TNF-α组(TNF-α处理)、sh-NC组(转染shRNA control,TNF-α处理)、sh-NEAT1组(转染NEAT1 shRNA,TNF-α处理)、sh-NEAT1+PMA组(转染NEAT1 shRNA,TNF-α和NF-κB信号激活剂PMA处理)。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比妥酸法检测细胞中MDA含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中SOD活性,CellROX Green法检测细胞中ROS水平,ELISA检测IL-6、IL-8、IL-1β水平,Western blot检测Cleaved caspase-3、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,TNF-α组肺泡上皮细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,MDA含量、ROS水平升高,SOD活性降低,细胞分泌IL-6、IL-8、IL-1β增多,细胞中p65蛋白表达水平升高。与sh-NC组相比,sh-NEAT1组肺泡上皮细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,MDA含量、ROS水平降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-6、IL-8、IL-1β减少,细胞中p65蛋白表达水平降低。与sh-NEAT1组相比,sh-NEAT1+PMA组肺泡上皮细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved caspase-3、p65蛋白表达增多,MDA含量和ROS水平升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-6、IL-8、IL-1β增多。结论:下调NEAT1通过降低NF-κB信号通路激活水平抑制TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症因子释放。     

醛糖还原酶抑制剂抑制屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞系BEAS-2氧化应激反应

目的 探究醛糖还原酶抑制剂ARIs抑制屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞系BEAS-2B氧化应激反应。方法 将BEAS-2B分为对照组、模型组、NF-κB抑制剂组(PDTC组)和ARIs干预组(ARIs组)。检测氧化应激指标(MDA和ROS含量、SOD活性);ELISA检测IL-5、IL-13、IFN-γ含量;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹检测细胞内NF-κB、NF-κB p65和p38 MAPK蛋白表达。结果 模型组细胞中SOD活性、IFN-γ含量及细胞存活率均低于对照组(P<0.05),MDA、IL-5、IL-13含量及细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);与模型组相比,PDTC组和ARIs组细胞中SOD活性、IFN-γ含量及细胞存活率升高(P<0.05),MDA、IL-5、IL-13含量及细胞凋亡率降低(P<0.05);和对照组相比,模型组细胞中NF-κB、NF-κB p65和p38 MAPK蛋白表达均显著增加(P<0.05);和模型组相比,PDTC组和ARIs组细胞中NF-κB、NF-κB p65和p38 MAPK蛋白表达均明...     

黄芩素通过上调miR-7-5p影响脂多糖诱导的肾小球上皮细胞氧化应激及凋亡

目的:探讨黄芩素(SCU)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小球上皮细胞氧化应激和凋亡的影响及其机制。方法:体外培养人肾小球上皮细胞,LPS(1.0 mg/L)处理建立细胞损伤模型,分为正常对照(NC)组、LPS组、NC+SCU组、LPS+SCU组、LPS+miR-NC组、LPS+微小RNA-7-5p(miR-7-5p)组、LPS+SCU+anti-miR-NC组和LPS+SCU+anti-miR-7-5p组。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;RT-qPCR检测miR-7-5p的表达水平。结果:与NC组比较,LPS组细胞活力、miR-7-5p表达和SOD活性显著降低,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著升高(P0.05);与LPS组比较,LPS+SCU组细胞活力、miR-7-5p表达和SOD活性显著升高,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著降低(P0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-7-5p组细胞活力和SOD活性显著升高,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著降低(P0.05);与LPS+SCU+anti-miR-NC组比较,LPS+SCU+anti-miR-7-5p组细胞活力和SOD活性显著降低,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著升高(P0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-7-5p表达抑制LPS诱导的肾小球上皮细胞氧化应激损伤和凋亡。     

miR-30a-3p靶向NOD1对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的　探究miR-30a-3p与NOD1的靶向关系,及其对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响和机制。 方法　将细胞分为Ctrl组、H/R组、miR-30a-3p mimic组和miR-30a-3p inhibitor组,经过缺氧复氧处理后,转染相应的miRNA处理细胞,RT-PCR检测miR-30a-3p和NOD1基因表达水平,荧光素酶报告检测miR-30a-3p和NOD1靶向关系,Western blot检测NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平,CCK8法检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测LDH、CK、MDA、T-SOD水平。 结果　miR-30a-3p表达水平随缺氧复氧处理时间增长而下降,NOD1基因表达水平随缺氧复氧处理时间增长而升高。在荧光素酶报告实验中,NOD1 WT+miR-30a-3p mimic荧光素酶活性显著低于NOD1 WT+NC组。与Ctrl组比较,H/R组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平降低,NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率升高;与H/R组比较,miR-30a-3p mimic组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平升高,NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率降低,miR-30a-3p inhibitor组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平降低,NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率升高。 结论　miR-30a-3p可靶向作用于NOD1,缓解心肌细胞缺氧复氧造成的损伤,其作用机制可能与调控NF-κB信号通路有关。     

miR-30a-3p靶向NOD1对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的　探究miR-30a-3p与NOD1的靶向关系，及其对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响和机制。 方法　将细胞分为Ctrl组、H/R组、miR-30a-3p mimic组和miR-30a-3p inhibitor组，经过缺氧复氧处理后，转染相应的miRNA处理细胞，RT-PCR检测miR-30a-3p和NOD1基因表达水平，荧光素酶报告检测miR-30a-3p和NOD1靶向关系，Western blot检测NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平，CCK8法检测细胞活性，Hoechst检测细胞凋亡，试剂盒检测LDH、CK、MDA、T-SOD水平。 结果　miR-30a-3p表达水平随缺氧复氧处理时间增长而下降，NOD1基因表达水平随缺氧复氧处理时间增长而升高。在荧光素酶报告实验中，NOD1 WT+miR-30a-3p mimic荧光素酶活性显著低于NOD1 WT+NC组。与Ctrl组比较，H/R组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平降低，NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率升高；与H/R组比较，miR-30a-3p mimic组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平升高，NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率降低，miR-30a-3p inhibitor组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平降低，NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB（p65）、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率升高。 结论　miR-30a-3p可靶向作用于NOD1，缓解心肌细胞缺氧复氧造成的损伤，其作用机制可能与调控NF-κB信号通路有关。     

姜黄素通过上调miR-124抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响。方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur)。各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况。转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平。结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P0.05)。LPS+Cur(40和80μmol/L)组细胞活力、miR-124水平及胞浆NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组(P0.05),上清液TNF-α水平和胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组(P0.05)。LPS+80μmol/L Cur组细胞上清液IL-1β水平低于LPS组(P0.05)。miR-124 mimic组细胞miR-124和胞浆中NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组和mimic-NC组(P0.05),胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组和mimic-NC组(P0.05)。结论:Cur可抑制Pg LPS诱导的HGFs炎症反应,可能是通过上调miR-124进而抑制NF-κB p-p65入核实现的。     

LRRFIP1基因干扰对脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响

目的探讨富亮氨酸重复序列相互作用蛋白1(LRRFIP1)基因对脂多糖(LPS)诱导的支气管上皮细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法使用LPS处理人支气管上皮细胞株16HBE,并利用Lipofectamine 2000试剂将siLRRFIP1转染到16HBE细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LRRFIP1 mRNA表达;免疫印迹试验(Western blot)检测LRRFIP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、p65、磷酸化p65(p-p65)、IκBα和IκBα和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达;噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)水平和炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌;流式细胞术检测细胞凋亡。结果LPS诱导的16HBE细胞中LRRFIP1 m RNA、LRRFIP1蛋白表达量、Cleaved caspase-3、Bax、p-p65、p-IκBα蛋白表达量、MDA、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α水平和细胞凋亡率显著提高(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平、细胞活力、SOD活性和IL-10水平明显降低(P0.05),而p65和IκBα蛋白表达量无显著变化。抑制LRRFIP1明显减少LPS诱导的16HBE细胞中LRRFIP1、Cleaved caspase-3、Bax、p-p65、p-IκBα蛋白表达量、MDA、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α水平和细胞凋亡率(P0.05),并显著增加CyclinD1、Bcl-2蛋白水平、细胞活力、SOD活性和IL-10水平(P0.05),对p65和IκBα蛋白水平无明显影响。结论抑制LRRFIP1可能通过下调NF-κB信号通路活性及促进脂多糖损伤的支气管上皮细胞的增殖,减轻细胞炎症和氧化应激,并抑制细胞凋亡。     

白桦脂酸对 H2O2 诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡影响 #br#

目的探讨白桦脂酸对 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和凋亡的影响。 方法PC12 神经细胞分成 Control、 Model (H2O2刺激)、 BA-L (1 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-M (2 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-H (4 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2 刺激)、 BA-H + PMA 组 (1 μmol / L 的白桦脂酸、H2O2 、 NF-κB 信号通路激活剂 PMA 刺激), CCK-8 方法分析细胞增殖活性变化, 流式细胞术分析细胞凋亡水平变化, Western 印迹分析细胞中 Bax、 Bcl-2、 P65 蛋白表达变化, 黄嘌呤氧化法检测 SOD 水平, 比色法检测 GSH-Px 水平、 硫代巴比妥酸法检测 MDA 水平、 CellROX Green 荧光法检测 ROS 水平。 结果与 Control 组比较, Model 组 PC12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax 蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高, P65 蛋白水平升高。 与 Model 组比较,BA-L、 BA-M、 BA-H 组 PC12 神经细胞增殖活性逐渐升高, 细胞凋亡率逐渐降低, 细胞中 Bax 蛋白表达逐渐减少, Bcl-2 蛋白表达逐渐增加, SOD、 GSH-Px 活性逐渐升高, MDA、 ROS 水平逐渐降低, P65 蛋白水平逐渐降低。 与 BA-H 组比较, BA-H + PMA 组 C12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax、P65 蛋白表达增多, Bcl-2 蛋白表达减少, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高。 结论白桦脂酸通过下调 NF-κB 信号抑制 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡。     

黄芩素调控miR-378a-5p对脂多糖诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤和凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-378a-5p表达有关。方法:将H9C2细胞分为对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素组、LPS+40μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-con组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-378a-5p组。细胞计数法、流式细胞术分析细胞活力和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。实时定量PCR分析miR-378a-5p表达量。结果:LPS处理显著降低H9C2细胞存活率、促进细胞凋亡,增加MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,降低SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。黄芩素显著提高LPS处理的H9C2细胞存活率,抑制细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,并增加SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。过表达miR-378a-5p显著减弱黄芩素对LPS处理的H9C2细胞存活率、凋亡、MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:黄芩素可减轻LPS诱导的心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与下调受损心肌细胞miR-378a-5p表达有关。     

脑钠肽联合miR-328基因对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨脑钠肽(BNP)联合miR-328基因对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌损伤的影响。方法:按照随机数字表将50只大鼠分为5组,假手术组(Sham组,开胸后只穿线,不结扎)、MIRI模型组(I/R组,建立MIRI模型)、BNP组(建立MIRI模型前静脉给予BNP 0.01μg/kg)、miR-328组(建立MIRI模型前静脉给予miR-328 antagomir 200μl)和BNP+miR-328组(建立MIRI模型前静脉给予BNP和miR-328 antagomir,量同前),每组各10只。于再灌注结束后,获取心脏穿刺血液及心脏组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Sham组、I/R组和miR-328组心肌组织miR-328 mRNA表达水平;TTC+伊文思蓝双染色法测定各组心肌梗死面积;ELISA法测定血清肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;硫代巴比妥酸(TBA)法及邻苯三酚法分别测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法测定心肌细胞凋亡率;Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和核因子活化B细胞κ轻链增强子p65(NF-κB p65)蛋白表达水平。结果:I/R组miR-328 mRNA表达显著高于Sham组和miR-328组(P0.05)。I/R组心肌梗死面积、CK-MB水平、TNF-α和MDA含量、细胞凋亡率、Bax和NF-κB p65蛋白表达水平均显著高于Sham组,IL-10含量、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均显著低于Sham组(P0.05),而BNP组和miR-328组肌梗死面积、CK-MB水平、TNF-α和MDA含量、细胞凋亡率、Bax和NF-κB p65蛋白表达均显著低于I/R组,高于BNP+miR-328组,IL-10含量、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均显著高于I/R组,低于BNP+miR-328组(P0.05)。结论:BNP及miR-328 antagomir均可降低炎症反应、氧化损伤及心肌细胞凋亡率,从而对MIRI起保护作用,而联合使用效果更明显,机制可能与其下调NF-κB p65信号通路有关。     

干扰LncRNA PVT1对LPS所致人支气管上皮细胞16HBE损伤的影响

目的探讨干扰LncRNA PVT1对脂多糖(LPS)所致人支气管上皮细胞16HBE炎症、氧化应激、凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导16HBE细胞建立细胞损伤模型,将16HBE细胞分为对照组Control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-PVT1组、LPS+si-PVT1+anti-miR-NC组、LPS+si-PVT1+anti-miR-1301-3p组;采用qRT-PCR检测PVT1、miR-1301-3p的表达量;采用ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-1301-3p的靶向关系。结果与Control组比较,LPS组PVT1的表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p的表达水平降低(P<0.05),IL-6、IL-13、TNF-α的水平与MDA、LDH的含量及凋亡率升高(P<0.05),SOD的含量降...     

连翘苷对IL-1β诱导的人关节软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响

目的探究连翘苷(phillyrin,PHN)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的人关节软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的作用及机制。方法将细胞分为Control组、IL-1β组、PHN(2 mg/ml)组、PHN(5 mg/ml)组和PHN(10 mg/ml)组,用IL-1β处理软骨细胞30 min后加入相应浓度的PHN处理细胞,MTT检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,RT-PCR检测炎症介导因子以及collagenⅡ、基质金属蛋白酶(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)和AMAMTS-5的基因表达水平,Western blot检测细胞增殖、凋亡、细胞外基质和NF-κB相关蛋白的表达,免疫荧光检测NF-κB的入核情况。结果与Control组比较,IL-1β组细胞活性及PCNA蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率及促进细胞凋亡蛋白的表达水平显著升高;与IL-1β组比较,PHN(2、5、10 mg/ml)组细胞活性和PCNA、Bcl-2、PARP蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率及p53、Bad、Bax、cl-caspase-3的表达水平明显降低。IL-1β促进炎症介导因子的表达,而PHN抑制炎症接到因子的表达。同时,与Control组比较,IL-1β组细胞collagenⅡ和aggrecan的蛋白和基因表达水平明显降低,SOX-9、TIMP-1、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因及蛋白表达水平明显升高;PHN(2、5、10 mg/ml)组collagenⅡ和aggrecan基因和蛋白表达水平显著高于IL-1β组,PHN(5、10 mg/ml)组SOX-9、TIMP-1、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因和蛋白表达水平明显降低。此外,IL-1β能显著抑制IκBα表达,促进p-IκBα和NF-κB p65表达,并促进NF-κB转移入核;PHN(5、10mg/ml)能显著减弱IL-1β对IκBα、p-IκBα、NF-κBp65表达及NF-κB转移入核的调控作用。结论连翘苷能抑制IL-1β诱导的人软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

miR-21通过NF-κB信号通路影响血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达

目的探讨miR-21对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖和炎症因子的影响。方法以AngⅡ诱导体外培养人肾小球系膜细胞HMC,在AngⅡ诱导的HMC细胞中转染miR-21模拟物。采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Western blot检测NF-κB信号通路核心分子IκBα和p65蛋白及磷酸化水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用NF-κB信号通路激活剂PMA处理,检测对炎症因子表达的影响。结果 AngⅡ组HMC细胞中miR-21表达水平较Control组降低(P0.05),细胞增殖能力明显升高(P0.05),炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达升高(P0.05)。进一步在AngⅡ组过表达miR-21后,IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著降低(P0.05),细胞增殖能力明显降低(P0.05),IL-6、IL-1β和TNF-α的表达亦降低(P0.05)。NF-κB信号通路激活剂处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α的含量较AngⅡ+miR-21组升高(P0.05)。结论过表达miR-21能够通过NF-κB信号通路调控AngⅡ诱导的HMC细胞增殖和炎症因子的表达。     

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠NF-κB磷酸化水平及炎症相关通路的影响北大核心CSCD

目的：探究人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠核因子-κB(NF-κB)磷酸化水平及炎症相关通路的影响。方法：盲肠结扎穿孔法（CLP）构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,60只大鼠随机分为假手术（sham）组、CLP组、人参皂苷Rg1低剂量（CLP+Rg1L）组、人参皂苷Rg1中剂量（CLP+Rg1M）组、人参皂苷Rg1高剂量（CLP+Rg1H）组、瑞沙托维（CLP+TAK-242）组,每组10只。LPS构建体外脓毒症心肌细胞模型,H9C2细胞分为对照（control）组、LPS组、LPS+Rg1L组、LPS+Rg1M组、LPS+Rg1H组、LPS+TAK-242组。右颈总动脉插管法检测各组大鼠平均动脉压（MABP）、心率×左心室发展压（LVDP×HR）、左心室压力最大上升/下降速率（±dp/dtmax）水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌组织和H9C2细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清和H9C2细胞肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β含量;CCK-8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力;RT-qPCR检测心肌组织Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK） mRNA表达;Western blot检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38MAPK、p-p38MAPK、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果：人参皂苷Rg1能够提高MABP、LVDP×HR、±dp/dtmax水平,降低CK、LDH、AST活力,降低cTnⅠ、TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB p65、p38MAPK mRNA与TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38MAPK、NLRP3蛋白水平（P<0.05）,促进心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡与炎症水平,改善心肌损伤。结论：人参皂苷Rg1能够抑制心肌组织细胞凋亡及炎症水平,提高心功能,从而减轻脓毒症所致心肌损伤,其机制可能与TLR4/NF-κB、p38MAPK信号通路有关。     

miR-195缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应

目的探讨miR-195对脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分成空白对照组、脂多糖组(LPS)、LPS+miR-NC组、LPS+miR-195组;RT-PCR检测转染后miR-195表达量;ELISA检测心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI);流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核形的变化;Western blot检测氧化应激相关蛋白表达(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α);试剂盒检测氧化应激标记物SOD活性;ELISA检测炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)。结果与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组miR-195表达量、氧化应激标记物水平(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α)、抗氧化酶SOD活性均显著升高(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI)、细胞凋亡率、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)均显著降低(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-...     

miR-21通过抑制A20促进小鼠RAW264.7细胞NF-κB和NLRP3的表达

目的探讨调控微小RNA21(miR-21)表达对脂多糖(LPS)刺激下RAW264.7细胞中核因子κB(NF-κB)及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的影响及机制。方法 RAW264.7细胞给予100 ng/mL LPS刺激24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平;转染miR-21抑制物或模拟物调节RAW264.7细胞miR-21的表达水平,并给予LPS刺激,实时定量PCR检测其对白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-1β的mRNA表达的影响,Western blot法检测对NF-κB、 NLRP3蛋白及NF-κB抑制分子锌指蛋白A20表达的影响。结果 LPS刺激RAW264.7细胞后,miR-21表达明显升高。上调miR-21表达后,IL-6、 TNF-α、 IL-1β、 NF-κB、 NLRP3表达均上升,下调miR-21表达后,IL-6、 TNF-α、 IL-1β、 NF-κB、 NLRP3表达均下调。miR-21靶向抑制A20表达。结论 miR-21促进RAW264.7细胞NF-κB、 NLRP3表达,其机制可能与靶向抑制A20有关。     

miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用北大核心CSCD

目的:探究miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用和机制。方法:支气管上皮细胞分为Control组、Model组(尘螨抗原提取物处理)、miR-NC组(转染mimics control,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b+PMA组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物和NF-κB信号激活剂PMA处理)。qRT-PCR分析miR-125b表达,流式细胞术分析细胞凋亡,ELISA分析细胞培养液上清中IL-6、IL-29水平,Western blot分析Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组支气管上皮细胞中miR-125b水平降低,细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。与miR-NC组相比,miR-125b组支气管上皮细胞中miR-125b水平升高,细胞凋亡率降低,细胞分泌IL-6、IL-29减少,细胞中Bax、p65蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。与miR-125b组相比,miR-125b+PMA组支气管上皮细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-125b抑制过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

miR-148b 基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及免疫抑制因子的影响研究

目的:探讨miR-148b基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及免疫抑制因子TGF-β1表达的影响。方法:小鼠肾小球系膜细胞(MMCs)分三组处理,即低糖+miR-148b scramble组(LG组)、高糖+miR-148b scramble组(HG组)和高糖+miR-148b inhibitor组(HG+miR-148b inhibitor组),其中miR-148b scramble和miR-148b inhibitor的转染参照脂质体LipofectamineTM2000转染说明进行瞬时转染,收集转染48 h的细胞,通过qRT-PCR检测各组细胞中miR-148b的mRNA表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blot检测免疫抑制因子TGF-β1及NF-κB信号通路p-IκBα及下游相关基因cyclin D1和Bax的蛋白表达。结果:高糖可上调miR-148b的表达,转染miR-148b inhibitor后miR-148b的表达明显降低;与LG组比较,HG组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著升高,TGF-β1、p-IκBα、cyclin D1和Bax的蛋白表达均明显升高,与HG组比较,HG+miR-148b inhibitor组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,TGF-β1、p-IκBα、cyclin D1和Bax的蛋白表达均明显降低(P0. 05)。结论:抑制肾小球系膜细胞miR-148b基因表达可抑制高糖诱导的细胞活力、凋亡率及免疫抑制因子TGF-β1表达的增加,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。