MIB2对HepG2肝癌细胞恶性生长的影响

目的：探讨Mindbomb E3泛素蛋白连接酶2（MIB2）对HepG2肝癌细胞恶性生长的影响,并分析其可能机制。方法：以HepG2肝癌细胞为研究对象,首先筛选过表达MIB2稳定株,利用细胞软琼脂克隆实验观察集落形成情况;使用炎性细胞因子TNF-α和RNA病毒SEV处理MIB2过表达稳定株和阴性对照4 h,免疫印迹法检测Notch1的表达水平;同时收取细胞培养上清,ELISA检测IL-6及TNF-α的分泌情况。其次通过小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞,48 h后通过免疫印迹法验证MIB2敲低情况;同样使用TNF-α和SEV处理4 h,收取细胞培养上清,ELISA检测IL-6及TNF-α的分泌情况。结果：过表达MIB2对HepG2细胞的克隆形成有明显的抑制作用;过表达MIB2导致HepG2细胞IL-6本底水平的分泌和TNF-α及SEV诱导的分泌均下降,在上述各条件下均未检测到TNF-α的分泌,Notch1表达水平无显著变化。MIB2敲低后,HepG2细胞IL-6本底水平的分泌和TNF-α及SEV诱导的分泌均增强,反向验证上述效应。结论：MIB2能够明显抑制肝癌细胞的恶性生长,该效应可能和IL-6的表达下降有关。     

IFNα上调人肝癌细胞系胞苷单磷酸激酶2表达激活小鼠巨噬细胞系

目的探讨CMPK2在IFNα治疗肝癌中的抗肿瘤免疫反应作用。方法用RT-q PCR和Western blot检测IFNα处理后胞苷单磷酸激酶2(CMPK2)在肝癌细胞系Huh7中的表达。通过构建的稳定表达CMPK2的慢病毒感染Huh7细胞,用Cell Titer-Glo ATP荧光检测过表达CMPK2的Huh7细胞及其上清中ATP的水平。用RT-q PCR检测过表达CMPK2的Huh7细胞上清对巨噬细胞中炎性因子的表达的影响。结果 IFNα处理6 h后,Huh7细胞中CMPK2的转录水平和蛋白水平显著上调(P0.01);CMPK2显著上调Huh7细胞及其上清中ATP的水平(P0.01);用稳定过表达CMPK2的Huh7细胞上清处理巨噬细胞6 h后,巨噬细胞中IL1β、IL6和CCL5的转录水平明显高于对照组(P0.01)。结论 IFNα上调Huh7细胞中CMPK2水平,激活巨噬细胞中炎性因子的表达。     

补体C1s对食管鳞状细胞癌生物学行为的影响

目的：探究补体分子C1s对食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞增殖、迁移、黏附以及裸鼠移植瘤生长的影响。方法：利用NCBI-GEO数据库分析ESCC组织和癌旁正常组织（ANTs）中C1S mRNA的表达;采用RT-qPCR和Western blot检测ESCC细胞系中C1s的表达;利用C1s小干扰RNA(siRNA)、C1s短发夹RNA(shRNA)或C1s过表达慢病毒对ESCC细胞进行C1s的敲低或过表达,CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Western blot检测基质金属蛋白酶MMP1和MMP13表达;裸鼠皮下成瘤实验检测C1s对裸鼠移植瘤生长的影响,免疫组织化学法检测移植瘤中CD34表达,分析肿瘤微血管的形成。结果：ESCC组织中C1S mRNA表达明显高于ANTs,敲低C1s可明显抑制ESCC细胞的增殖、迁移、细胞-基质黏附以及裸鼠移植瘤的生长,而过表达C1S则具有相反的效果;C1s敲低的ESCC细胞TE-1中MMP1和MMP13的表达降低;与对照组相比,C1s过表达组移植瘤中的微血管更加丰富。结论：C1s在ESCC组织中显著上...     

微粒体谷胱甘肽S转移酶1过度表达促进肝癌发生发展

目的探讨微粒体谷胱甘肽S转移酶1(MGST1)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖、迁移和裸鼠成瘤中的作用。方法 Western blot检测人肝癌样品及肝癌细胞系中MGST1的表达;用慢病毒PLL3.7载体系统构建敲低MGST1的MHCC97H和HCCLM3细胞株及慢病毒p CDH载体系统构建过表达MGST1的SK-Hep-1细胞株后,用克隆形成实验检测细胞增殖能力;用Transwell实验检测细胞迁移能力;用皮下移植瘤实验检测MHCC97H细胞裸鼠成瘤能力。结果 71%(17/24)的肝癌组织中MGST1蛋白表达上调。敲低MGST1抑制MHCC97H和HCCLM3细胞的增殖、迁移能力(P0.05);过表达MGST1促进SK-Hep-1细胞增殖、迁移(P0.05);敲低MGST1的MHCC97H细胞裸鼠成瘤时间滞后(P0.01),肿瘤体积减小(P0.001),裸鼠生存期延长(P0.001)。结论 MGST1过度表达促进肝癌发生发展,是治疗肝癌的一个新靶点。     

羟基红花黄色素A抑制人肝癌细胞系Huh7发生上皮-间质转化

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人肝癌细胞系Huh7迁移及侵袭的影响,并通过体内外实验探究其是否影响肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)。方法体外培养Huh7细胞,分为对照组、HSYA 80和160μmol/L实验组,分别处理24 h,用transwell小室法和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞vimentin和E-cadherin蛋白表达;建立Huh7细胞裸鼠皮下移植瘤模型,HE染色观察移植瘤和肝脏组织形态;免疫组化检测移植瘤组织TGF-β1、vimentin和E-cadherin表达情况。结果与对照组相比,HSYA实验组Huh7细胞迁移与侵袭能力明显下降,E-cadherin蛋白表达升高,vimentin蛋白表达下降(P0.05);与移植组相比,HSYA实验组(2.25 mg/kg)肝内无肿瘤细胞转移,移植瘤组织出现肿瘤细胞坏死,E-cadherin表达升高,vimentin和TGF-β1表达下降(P0.05)。结论 HSYA通过抑制肝癌细胞发生EMT,抑制肝癌细胞的迁移及侵袭能力。     

逆转录病毒介导IL-27基因对胰腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制

目的:探讨IL-27基因在人胰腺癌Aspc1细胞中的抗肿瘤作用及免疫机制。方法:以逆转录病毒为载体,采用基因转染的方法用G418梯度筛选法建立转染IL-27基因的Aspc1细胞,用RT-PCR检测其基因导入,ELISA法检测IL-27的分泌。将Aspc1/IL-27、Aspc1/LXSN和Aspc1细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤性、移植瘤的生长情况。10天时取3组裸鼠脾脏,用ELISA法检测3组小鼠脾细胞在Aspc1诱导下IFN-γ、TNF-α和IL-12的产生情况,乳酸脱氢酶法检测脾细胞杀伤活性。结果:成功建立稳定转染的Aspc1/IL-27细胞株,ELISA检测Aspc1/IL-27细胞培养上清中IL-27的分泌量为(121.56±6.29)pg/ml,而在Aspc1/LXSN细胞和Aspc1细胞的培养上清中未检出IL-27。IL-27基因转染组裸鼠皮下结节生长速度明显慢于接种空载体转染组及未转染组;接种Aspc1/IL-27细胞的裸鼠脾细胞可产生较水平的IFN-γ、TNF-α和IL-12等细胞因子,与接种Aspc1/LXSN细胞和Aspc1细胞组裸鼠的脾细胞相比明显增高(P0.01),接种Aspc1/IL-27细胞的裸鼠脾细胞杀伤活性显著性升高(P0.01)。结论:转染IL-27基因的裸鼠胰腺癌细胞所分泌的IL-27具有生物学活性,通过增强细胞免疫功能在裸鼠体内发挥抗肿瘤作用。     

小鼠ACADL对巨噬细胞表达炎症因子的影响

目的探讨长链酰基辅酶A脱氢酶(Acyl-CoA dehydrogenase,long chain,ACADL)对巨噬细胞分泌炎症因子的影响。方法在体外诱导的小鼠骨髓来源巨噬细胞中加入脂多糖(LPS)以及白细胞介素4(IL-4)分别诱导M1和M2极化,在极化0、12、24、36、48 h时用Western blot检测ACADL在M1和M2极化中的蛋白表达量。构建ACADL-pEGFP-N1质粒,使用G418筛选和鉴定过表达ACADL的RAW264.7细胞稳定株。LPS刺激过表达ACADL稳定株和对照组细胞4 h后,通过ELISA和qRTPCR检测TNF-α、IL-6、IL-10的表达情况。在RAW264.7细胞中加入beta氧化抑制因子etomoxir预处理,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-10的表达情况。结果在巨噬细胞极化过程中ACADL蛋白量先减少再增加;过表达ACADL的细胞中,IL-6和IL-10分泌量及mRNA水平均显著高于对照组(P0.001):beta氧化抑制因子etomoxir能够减少RAW264.7细胞分泌炎症因子。结论 ACADL能增强巨噬细胞IL-6和IL-10的分泌,其作用机制可能是通过beta氧化影响炎性细胞因子的表达。     

转染IL-27基因的食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用

目的将小鼠IL-27基因转染人食管癌细胞株,研究其在裸鼠体内的抗肿瘤活性.方法以逆转录病毒为载体,将IL-27基因转染人食管癌细胞株Eca109,获得表达IL-27的阳性细胞克隆(Eca109/IL-27),用ELISA法检测细胞IL-27的分泌.将Eca109/IL-27移植裸鼠腹腔,观察瘤细胞的成瘤性和裸鼠的生存期.用RT-PCR检测IL-27基因在裸鼠体内瘤组织中的表达,用流式细胞仪检测CD204表达、细胞周期和细胞凋亡变化.结果成功建立了表达IL-27基因的人食管癌细胞株Eca109/IL-27,该细胞培养上清中IL-27含量为(137.73±7.00)pg/ml,而Eca109/LXSN和Eca109细胞培养上清中未检出IL-27(P＜0.01),但Eca109/IL-27与Eca109/LXSN和Eca109细胞周期和细胞凋亡率无明显差异(P＞0.05).将Eca109/IL-27、Eca109/LXSN 和Eca109细胞分别接种裸鼠腹腔15天后,各组裸鼠均于腹腔形成多数瘤结节,Eca109/IL-27组明显少于Eca109/LXSN 和Eca109细胞组(P＜0.05);Eca109/IL-27组裸鼠的生存期(35天时均无死亡)明显长于Eca109/LXSN 和Eca109细胞组[分别为(23.33±1.52)、(24.00±1.37)天](P＜0.01);Eca109/IL-27组肿瘤组织中有p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN 和Eca109细胞组瘤组织中未见表达(P＜0.01);其CD204表达水平、细胞凋亡率也明显高于接种Eca109/LXSN与Eca109细胞组(P＜0.05);G0/G1和G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少,与接种Eca109/LXSN和Eca109细胞组比较均有显著差异(P＜0.05).结论IL-27可于体内促进肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期发展,提高CD204的表达,延长生存期,发挥抗肿瘤免疫活性.     

PC-1基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化

目的 通过建立稳定表达外源PC-1基因的小鼠成纤维细胞株,初步探讨PC-1基因表达对肿瘤发生、发展的影响。方法 通过脂质体介导的方法,将真核表达载体pcDNA3、1(-)／myc-his-pc-1稳定转染NIH3T3细胞,之后利用PCR、逆转录PCR(RT-PCR)技术,确定外源PC-1基因在靶细胞染色体上的整合及在转录水平的表达。通过细胞形态学分析、MTT实验、细胞周期分析、软琼脂集落形成和裸鼠成瘤实验,观察PC-1基因表达对NIH3T3生物学特性的影响。结果建立了稳定转染PC-1基因的NIH3T3细胞株。PC-1基因表达的小鼠成纤维细胞NIH3T3生长速度加快,在软琼脂上生长并形成集落,接种裸鼠后可成瘤(6／6)。结论 PC-1基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能。     

p75NGFR对胰腺癌细胞株SW1990生物学行为的影响

目的通过体内和体外实验，探讨p75NGFR在胰腺癌SW1990细胞生长、分化以及侵袭中的作用。方法采用脂质体转染法将含p75NGFR的真核表达质粒转染人胰腺癌细胞株SW1990，建立稳定表达p75NGFR的细胞模型；应用MTT法、平板克隆形成实验以及流式细胞技术分别检测细胞的生长曲线、克隆形成能力以及细胞周期变化；建立胰腺癌的裸鼠皮下移植瘤和胰腺原位移植瘤模型，观察p75NGFR对SW1990细胞裸鼠成瘤能力、肿瘤组织学分化、细胞侵袭和转移的影响。结果与对照组相比较，转染p75NGFR的SW1990细胞其生长速度缓慢（P〈0.01），克隆形成能力降低（P〈0.05）；转染细胞的细胞周期改变表现为G1期细胞明显增多和S期细胞明显减少（均为P〈0.01）。与对照组相比较，转染组裸鼠皮下以及胰腺原位的成瘤率以及肿瘤体积减小（P〈0.01），肿瘤的生长缓慢，组织学分化差，浸润性生长趋势不明显，未见肿瘤卫星现象。结论体外实验均发现p75NGFR通过阻滞细胞周期进程而显著抑制胰腺癌细胞株的生长，体内研究发现p75NGFR可抑制裸鼠皮下及胰腺原位移植瘤的形成、分化和侵袭，提示p75NGFR与胰腺癌的生物学行为密切相关。     

敲低长链非编码RNA MIAT对视网膜母细胞瘤肿瘤成球、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探究敲低长链非编码RNA MIAT(lncRNA MIAT)对视网膜母细胞瘤(RB) SO-RB50细胞系成球、侵袭能力及裸鼠移植瘤生长的影响。方法选择襄阳市中心医院2015年3月至2017年3月38例RB患者,并收集RB组织38例。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析lncRNA MIAT高表达和低表达患者生存率。将SO-RB50细胞随机分为对照组、shRNA-NC组、sh-MIAT组,构建sh-MIAT及shRNA-NC载体并转染对应细胞组。RT-PCR检测MIAT、E-cadherin和N-cadherin的表达。通过细胞成球、克隆形成试验、Transwell分别检测细胞成球、增殖、侵袭能力。Western blot检测VEGF、MMP-16、E-cadherin、N-cadherin的表达情况。构建裸鼠移植瘤模型,比较肿瘤生长情况,并通过免疫组化检测VEGF的表达情况。结果 lncRNA MIAT低表达患者生存率高于高表达患者。与对照组相比,shRNA-NC组细胞成球直径、细胞成球数、克隆形成数、侵袭数量、VEGF、MMP-16、N-cadherin和E-cadherin表达量均无明显差异。与对照组相比,sh-MIAT组细胞成球直径、细胞成球数、克隆形成数、侵袭数量和VEGF、MMP-16、N-cadherin表达量均较小/少/低,而E-cadherin表达量较高,裸鼠模型的肿瘤质量较低,且VEGF阳性细胞数较少,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。结论 lncRNA MIAT低表达患者生存率高于高表达患者,且敲低lncRNA MIAT可抑制SO-RB50细胞成球、增殖、侵袭和裸鼠移植瘤的生长。     

IL-27活化NK细胞抗肿瘤效应及其机制研究

目的:本文通过研究转染IL-27基因的人食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤效应及其对NK细胞表达和功能的影响,旨在探讨其抗肿瘤作用机制。方法:IL-27基因转染的人食管癌细胞(Eca109/IL-27)接种于裸鼠,观察其抗肿瘤效应。用免疫组化法检测移植瘤组织间质中NK细胞浸润数量;ELISA检测脾细胞产生IFN-γ的含量;RT-PCR检测移植瘤组织中IL-12Rβ2、TNF-α和IL-1β基因的表达;LDH法检测NK细胞对其靶细胞K562细胞的杀伤活性。结果:接种Eca109/IL-27细胞荷瘤裸鼠的移植瘤体积较接种野生型Eca109细胞(未转染)和Eca109/LXSN(空载体质粒转染)减小、裸鼠生存期明显延长(P0.05)。接种Eca109/IL-27细胞移植瘤组织中NK细胞浸润数量增多(P0.05),IL-12Rβ2、TNF-α和IL-1β基因的表达水平增高(P0.05)、脾细胞产生IFN-水平增高(P0.05)、NK细胞对其靶细胞K562细胞杀伤活性增强(P0.05)。结论:IL-27在裸鼠体内能够通过活化NK细胞、诱导炎症性细胞因子的产生而发挥抗肿瘤作用。     

裸鼠皮下种植性肝癌模型的建立

背景：目前采用Huh7肝癌细胞在BALB/c裸小鼠皮下种植性成瘤的报道较多,但对其成瘤后稳定性的研究较少。 目的：建立稳定的皮下种植性裸鼠肝癌模型。 方法：取1.5×10⁶个对数期细胞Huh7肝癌细胞,种植于裸鼠皮下。成瘤后从体质量、大体形态,肿瘤生长情况,反转录-聚合酶链式反应,苏木精-伊红染色及免疫组织化学多方面进行稳定性及病理学特征鉴定。 结果与结论：肿瘤形成的潜伏期约12 d,肿瘤成功率为92.8%。种植肿瘤组小鼠体质量较正常对照小鼠明显减轻,肿瘤生长迅速,甲胎蛋白基因及蛋白强阳性表达,细胞分裂明显。表明成功建立了稳定的裸鼠皮下种植性肝癌模型。     

c-Met基因调控肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的探讨上调和下调肺腺癌细胞株A549细胞中c-Met基因表达水平后,该细胞鼠移植瘤放射敏感性的变化情况。方法利用电穿孔法将c-Met siRNA和重组表达载体pc DNA3.1-c-Met分别转染入肺癌A549细胞后采用G418筛选得到稳定转染的肺癌细胞系。转染48 h后用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中c-Met基因和蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验研究分别上调和下调c-Met基因表达水平对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响;TUNEL法检测细胞凋亡影响,移植瘤实验检测基因沉默和激进c-Met基因表达水平并联合放射射线照射对肺腺癌细胞生长的抑制作用。结果 c-Met下调组中肺癌A549细胞内c-Met基因和蛋白表达水平明显降低,而上调组中的表达水平则得到了明显升高。c-Met下调组肺癌A549细胞放射敏感性升高,c-Met上调组肺癌A549细胞放射敏感性降低(P0.05)。下调组中肺癌A549细胞的增殖活性受到抑制而细胞凋亡率显著增加(P0.05),上调组肺癌细胞的增殖能力明显增强而细胞凋亡率明显降低(P0.05);下调组裸鼠移植瘤的平均体积明显小于对照组,而上调组裸鼠移植瘤的瘤体平均体积则显著大于对照组(P0.05)。结论基因沉默c-Met的基因表达水平能显著降低肺癌细胞的增殖活性,抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长并明显提高移植瘤瘤体的放射敏感性。     

藤梨根提取物对食管癌细胞系EC109细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 研究藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌细胞系EC109细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制. 方法 建立食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤模型,观察藤梨根乙酸乙酯提取物的作用.将裸鼠分为对照组、治疗组(低剂量组、高剂量组),每组6只.通过测量移植瘤体积变化绘制生长曲线,根据终末瘤重比较计算抑制率;采用TUNEL法检测移植瘤凋亡指数,采用免疫组织化学法检测移植瘤生存素(Survivin)蛋白表达和增殖指数;用RT-PCR法检测移植瘤Survivin mRNA变化. 结果 各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤重及瘤体积明显低于对照组,高、低剂量组的瘤重抑制率分别为64.57%和46.78%.各治疗组移植瘤组织凋亡指数则明显高于对照组,而Ki-67抗原、Survivin mRNA及蛋白表达较对照组明显减少,高剂量组尤其明显,各组间上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.01). 结论 藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与抑制移植瘤细胞的增殖活性,降低其Survivin蛋白和mRNA表达及促进癌细胞凋亡有关.     

CARM1表达与食管癌细胞增殖和迁移相关性的研究

为探讨共激活相关精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响,采用免疫组织化学方法检测食管癌组织和癌旁组织中CARM1的表达情况,利用特异的短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)分别敲低食管癌细胞株KYSE510和TE-1中CARM1的表达,通过过表达质粒上调食管癌细胞株KYSE150和ECA9706中CARM1的表达,采用CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成试验检测CARM1敲低和上调后的食管癌细胞增殖能力的变化情况,并采用Transwell细胞迁移试验检测细胞迁移能力的变化情况。结果显示,与癌旁组织比较,CARM1蛋白在食管癌组织中高表达(P0.01);敲低CARM1后食管癌细胞的迁移和增殖能力减弱(P0.05);过表达CARM1后食管癌细胞的迁移和增殖能力增强(P0.05)。提示CARM1在促进食管癌细胞生长和恶性肿瘤进展过程中发挥重要作用。     

STK15过表达对人食管癌细胞株KYSE150生长的影响

 目的：探讨丝氨酸／苏氨酸激酶15 (serine/threonine kinase 15,STK15)过表达对人食管癌细胞株KYSE150生长的影响。方法：采用脂质体法将pEGFP-C1-STK15真核表达载体转染人食管鳞癌细胞株KYSE150,构建STK15过表达的稳定细胞系（GFP-STK15）,通过荧光显微镜和Western blotting检测STK15的表达。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察STK15过表达对体外肿瘤细胞生长的影响。通过流式细胞术分析STK15过表达对细胞周期和凋亡的影响。采用裸鼠致瘤实验观察STK15过表达对体内肿瘤细胞生长的影响。结果：pEGFP-C1-STK15质粒转染细胞后筛选得到稳定克隆,荧光显微镜显示GFP-STK15融合蛋白定位于细胞的中心体以及纺锤体,Western blotting可检测到GFP-STK15 融合蛋白的表达。与对照细胞相比,GFP-STK15细胞系的体外生长能力明显增加;G0/G1期细胞百分率降低,细胞凋亡率减少;GFP-STK15细胞系接种组裸鼠肿瘤明显增大,差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论：STK15过表达能促进人食管癌KYSE150细胞的生长,提示STK15将可能成为治疗食管癌的新靶点。     

siRNA特异性沉默hTERT基因对人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响

目的:探讨靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的siRNA抑制人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响和机制。方法:构建针对hTERT基因的siRNA(pU6-hTERT-siRNA),LipofectamineTM2000转染LoVo细胞,以同源性的pU6作阴性对照,以未转染的细胞作空白对照。MTT法检测细胞生长率。建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型,瘤内注射法将pU6-hTERT-siRNAs、pU6转导,观察各组移植瘤生长情况。RT-PCR和荧光定量PCR检测细胞株和移植瘤细胞hTERTmRNA水平的变化。Western blotting检测hTERT蛋白水平的变化。结果:LoVo细胞转染pU6-hTERT-siRNA72 h后,细胞增殖抑制率达42.1%,显著高于阴性对照组(3.2%),P0.01。裸鼠皮下移植瘤转染pU6-hTERT-siRNA14 d后,种植瘤体积为(85.9±18.7)mm3,显著小于阴性对照组[(157.4±55.6)mm3]和空白对照组[(155.2±54.2)mm3],P0.01。荧光定量PCR和Western blotting结果显示转染pU6-hTERT-siRNA后,细胞株和移植瘤内的hTERT mRNA以及细胞株蛋白水平表达显著减少(P0.01),阴性对照和空白对照间无显著差异。结论:pU6-hTERT-siRNA在体内外能有效抑制结肠癌LoVo细胞中hTERT基因表达,对裸鼠皮下结肠癌细胞移植瘤有明显的抑制生长作用。     

miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究

目的探究微小RNA-198(miR-198)过表达对视网膜母细胞瘤(RB) Y79细胞系生长、侵袭及裸鼠异体移植瘤的影响。方法培养RB Y79细胞系,随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组和过表达组,采用Lipofectamine~?2000分别转染miR-NC、miR-198模拟物至阴性对照组和过表达组Y79细胞。qRT-PCR检测转染后Y79细胞中miR-198的相对表达水平;利用干细胞成球试验和Transwell小室试验分别检测各组Y79细胞的增殖及侵袭能力; Western blot检测各组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平。将培养好的miR-NC和miR-198 mimic细胞分别进行裸鼠皮下注射,60只裸鼠分为阴性对照组和过表达组,各组每5 d随机处死3只裸鼠,检测RB质量及体积,qRT-PCR检测瘤体中miR-198的mRNA相对表达水平;免疫组化法检测Ki67、SOX2、VEGF阳性表达率。结果与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中miR-198的相对表达水平较高(P 0.05),并且干细胞成球直径、数量、细胞侵袭率均较低(P 0.05); Western blot结果显示,与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平均较低(P 0.05)。过表达组裸鼠的瘤体质量及体积均小于阴性对照组(P 0.05),并且过表达组裸鼠瘤体组织中miR-198的mRNA相对表达水平高于阴性对照组(P 0.05),过表达组Ki67、SOX2、VEGF的阳性表达率低于阴性对照组(P 0.05)。结论 miR-198可能在RB中作为抑癌基因发挥作用,过表达miR-198可明显抑制RB的增殖及侵袭能力,并抑制裸鼠瘤体生成。     

IL-6和AG490对移植裸鼠的弥漫大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤生长的影响

目的:观察STAT3通路对移植裸鼠弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)和伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)的作用。方法:建立OCI-LY8细胞(DLBCL)和Raji细胞(BL)裸鼠移植瘤模型,并分别将其分为对照组、IL-6组和AG490组,测量裸鼠体重和肿瘤体积;应用Western blot和免疫组织化学检测移植瘤组织中p-STAT3、survivin及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的水平;real-time PCR检测瘤组织中survivin和VEGF的mRNA表达。结果:2种细胞株总成瘤率为83.3%(25/30),其中OCI-LY8细胞成瘤率为66.7%(10/15),低于Raji细胞成瘤率100%(15/15)(P0.05)。DLBCL和BL荷瘤鼠IL-6组在第9和10天裸鼠体重和总瘤体积较对照组均增加,2种移植瘤的IL-6组中第1天与第10天瘤体积总差值均明显大于对照组(P0.05)。pSTAT3阳性信号定位于细胞核;survivin和VEGF以细胞浆表达为阳性。与对照组相比,DLBCL移植瘤IL-6组survivin和VEGF明显升高(P0.05),p-STAT3无显著变化;AG490组p-STAT3及VEGF明显降低(P0.05),survivin无显著变化;在BL移植瘤IL-6组,p-STAT3和VEGF蛋白与相应对照相比均显著升高(P0.05),在AG490处理组中3种蛋白均明显降低(P0.05)。IL-6组和AG490组中survivin和VEGF的mRNA表达与对照组相比差异无统计学显著性。结论:IL-6和AG490可能通过STAT3通路影响DLBCL和BL的生长,STAT3通路活化可能通过调控VEGF和survivin表达而影响肿瘤的发生发展。