蛇毒磷脂酶A2的研究

1　磷脂酶Ａ2 的一般性质磷脂酶Ａ2 (ＰＬＡ2 ,Ｅ Ｃ 3 1 1 4 )专一催化 3-Ｓｎ-甘油磷脂 2位酰脂键的水解反应 ,生成 1-酰基溶血磷脂和脂肪酸[1] .它广泛存在于生物体内 ,尤其富含于哺乳动物胰脏的分泌液和蛇与昆虫的毒液中 .对磷脂酶Ａ2 结构及功能的生物学研究可追溯到十九世纪末 .Ｓｌｏｔｔａ等在 1938年第 1次结晶了来自蛇毒的磷脂酶Ａ2 突触前神经毒素—响尾蛇毒素 (ｃｒｏｔｏｘ ｉｎ) .Ｄｉｊｋｓｔｒａ等在 1978年获得了第一个磷脂酶Ａ2 的晶体结构 .按照它的来源将其分为胞内ＰＬＡ2 (ｃＰＬＡ2 )和胞外ＰＬＡ2 (ｓＰＬＡ2 ) [2 …     

磷脂酶A2与神经系统疾病

磷脂酶A2是一大类能催化水解磷脂特定酯键的酶，与哺乳动物神经系统存在密切的关系。磷脂酶A2在神经系统广泛表达，以海马最为丰富，在维持神经元的正常功能中起重要作用。在神经系统病理状态下，磷脂酶A2同工酶活性可增强或降低，引起不同程度的神经系统病变。一些磷脂酶A2抑制剂可能延缓病程的进展，达到治疗的目的。     

磷脂酶A2的研究进展

磷脂酶A2 是一类催化磷脂二位酰基水解的庞大酶族 ,是花生四烯酸、溶血卵磷脂等炎性介质生成的限速酶 ,参与多种急、慢性炎症过程。依据存在部位、氨基酸同源性、生化特点的不同 ,磷脂酶A2主要分为三种类型 :分泌型 (sPLA2 )、胞浆型 (cPLA2 )、非钙离子依赖型 (iPLA2 ) ,其结构的微小差别就能导致功能的明显差异。     

PGE2在结核感染中对巨噬细胞凋亡的调控

<正>1 PGE2前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)是花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)在环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)作用下代谢形成的五大重要代谢产物之一,与其他四种产物PGF2α、PGD2、PGI及血栓烷A2(Thromboxane,TXA2)被统称为前列腺素。1.1 PGE2合成代谢PGE2的合成源自细胞膜上的磷脂(Phospholipd)在磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)作用下转化生成游离AA的过程[1]。游     

阿的平(QNC)对热应激大鼠膜磷脂代谢及β-受体的调节作用

以前的研究表明,热应激导致大鼠一些组织中的β-受体明显下调,同时磷脂酶A_2(PLA_2)活性明显升高。本研究在热应激前予大鼠腹腔注射磷脂酶A_2的非特异性抑制剂QNC,以了解PLA_2激活对磷脂代谢如花生四烯酸和膜磷脂成分(磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸)的影响及其与β受体变化的关系。为进一步认识热损伤发生发展的受体学机理和寻找防治措施提供依据。研究使用雄性健康Wistar大鼠。分为三组:对照组,热应激组(大鼠在     

磷脂酶Cγ的分子生物学研究进展

磷脂酶Cγ(PLCγ)是磷脂酶C(PLC)的一种,而磷脂酶C又是磷脂酰肌醇信号通路的关键酶,在机体内分布极为广泛.许多细胞外因子,如细胞表面抗原、免疫球蛋白、细胞因子、生长因子等都可以借助PLC的生化途径激活磷脂酰肌醇特异性途径作用于细胞,调控细胞代谢.PLCγ在B淋巴细胞的整个发育过程以及在其他生命活动中都起着重要的作用.     

Ⅱ型磷脂酶A2在炎症疾病中的表达与功能

磷脂酶Ａ2 (ＰＬＡ2 )是可水解甘油磷酸酯的ｓｎ 2位脂肪酸酰脂键 ,产生游离的花生四烯酸和溶血磷脂的一组酶。溶血磷脂经乙酰转移酶作用生成血小板活化因子 (ＰＡＦ)。花生四烯酸分别经环氧化酶和脂氧酶途径生成前列腺素 (ＰＧｓ)和白三烯 (ＬＴｓ)。ＰＧｓ、ＬＴｓ和ＰＡＦ均是体内的重要炎性介质 ,ＰＬＡ2 则是生成这些介质的限速酶[1] ,因此 ,磷脂酶Ａ2 的表达及酶活性的高低在炎症疾病中具有重要的意义。ＰＬＡ2 是一个超家族 ,其中Ⅱ型分泌型ＰＬＡ2 (Ⅱ型ＰＬＡ2 )在机体炎症的病理过程中 ,其活性增高处于关键的环节[2 ] 。1　Ⅱ型Ｐ…     

花生四烯酸的不稳定代谢物在止血和血栓形成中的作用

花生四烯酸(AA)是所有哺乳类动物细胞膜磷脂的组分,磷脂酶A_2(phospholipase A_2)使之释放。还不了解磷脂酶A_2是如何被激活的.但对细胞膜的任何搔扰都会释出AA接着迅速代谢为加氧(oxygenated)产物,其中有稳定的前列腺素(PG)。AA经两种酶代谢:一种是脂加氧酶(lipoxygenase),形成不稳定的12-hydro-     

蛇血清分泌型磷脂酶A2抑制剂防治人炎症的生物信息学分析

目的 比较人和蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)结构相似性,分析蛇血清磷脂酶A2抑制剂(PLI)对sPLA2特异性抑制的结构与功能关系,评价蛇血清PLI对人炎症的抑制作用.方法 用Clustal W2对人和五步蛇sPLA2氨基酸序列进行多重序列比对.用Swiss-model对各种sPLA2的空间结构进行同源建模预测,并...     

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1的表达

将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)基因克隆至表达载体pET28a(+),转化入大肠杆菌BL21,经过诱导,SDS-PAGE检测,重组质粒pET28a-APLA2-1在18KD有一明显的表达条带,表达产物APLA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在,将产物变复性后用Sephadex G-75 纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带,通过Western-blot检测,证实纯化产物是酸性磷脂酶A2.对表达的APLA2进行酶活性和药理活性的测定.至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLA2,这将为以后对PLA2的结构与功能的研究打下了良好的基础.     

应用荧光高效液相法检测心肌磷脂酶D的活性

 目的：为心肌磷脂酶D活性的检测提供新的可靠、灵敏的实验方法。方法：提取心肌膜脂质，以荧光标记的磷脂酰胆碱及乙醇为底物。高效液相色谱条件：LiChrosphere 100色谱柱（250 mm×4 mm, 5 μm）为固定相，流动相A液为正已烷-丙醇-冰醋酸（82∶17∶1, V∶V∶V），流动相B液为丙醇-水-冰醋酸（85∶14∶1, V∶V∶V），柱温 45 ℃，流速1 mL/min，梯度洗脱。荧光检测：激发波长475 nm，发射波长515 nm。结果：PLD标准品在0.625-40 pmol范围含量与峰面积呈线性关系，相关系数0.999；孵育时间在0-45 min，磷脂酰乙醇生成量与孵育时间呈直线相关；日内及日间变异系数分别为5.6%、6.9%。小鼠心肌样品色谱图见二酯酰甘油、磷脂酰乙醇、磷脂酸3个峰，心肌磷脂酶D活性检测水平为nmol·h^-1·g^-1。结论：荧光高效液相法是检测心肌磷脂酶D活性的简便、快速、准确、灵敏的实验方法。     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因表达与临床相关疾病

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的膜蛋白称为GPI锚定蛋白 ,具有广泛功能。糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)是人体内唯一能特异性水解GPI并能释放出锚定蛋白的磷脂酶 ,可调节锚定蛋白的表达和生理功能。GPI PLD可能成为评估预后的标记物。在某些肝脏疾病、恶性肿瘤、糖尿病等疾病中有GPI PLD基因异常表达     

广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2的基因克隆与序列分析

目的研究广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2(APLA2)的基因克隆与序列分析.方法从广西眼镜王蛇毒腺中提取总RNA,根据种属关系接近的台湾眼镜蛇毒APLA2两端非翻译区的保守序列设计引物,利用RT-PCR进行体外扩增,获得磷脂酶A2基因,克隆至pMD18-T载体,经测序筛选出APLA2-1,APLA2-2及一个新的酸性磷脂酶A2(命名为APLA2-3).根据测序结果确定了APLA2-3基因的全序列,并由此推导编码的氨基酸序列. 结果利用Antheprot 4.3c蛋白质序列分析软件包计算它的等电点为4.885,相对分子质量为16.543kD,并预测了它的二级结构和部分理化性质.同源性比较表明,APLA2-3的1～39位氨基酸残基序列与APLA2-2相同,其同源性为64%,而40～108位氨基酸残基序列与APLA2-1相同,其同源性为69%,109位氨基酸残基序列皆不同于这两种APLA2.结论 揭示了APLA2具有基因多样性,可能与物种进化和生物活性有关,并为进一步研究PLA2的结构与功能的关系提供更多的信息.     

喹乙醇对鸡生物膜磷脂酶A2活性和膜磷脂代谢的影响

目的： 研究喹乙醇（olaquindox）对生物膜磷脂酶A₂活性（PLA₂）和膜磷脂代谢的影响。方法: 将150只健康艾维茵肉鸡随机分成正常对照组（第1组）和喹乙醇处理组（第2组）。2组均饲喂相同不含喹乙醇的空白饲料，其中第2组每天按15 mg/kg体重将喹乙醇原粉装于胶囊中，给鸡1次内服,实验时间共6周。每周采样本1次，随机抽取2组鸡各6只，颈静脉采血后用于制备红细胞膜（ECM）和肝线粒体膜（MiM）。结果: 第2组ECM和MiM中PLA2活性在整个实验过程中除1、2周外其余3-6周活性均显著高于第1组（P＜0.05，P＜0.01）；第2组中2种膜样品的磷脂含量在整个实验过程中均低于第1组（P＜0.05,P＜0.01）。结论: 喹乙醇能影响ECM和MiM上的PLA₂活性和磷脂含量，从而引起生物膜损伤。     

内毒素休克中红细胞膜的损伤及与磷脂酶A2的关系

本文研究了内毒素休克中兔红细胞膜磷脂酶Ａ２活性、膜磷脂主要组分ＰＣ、ＰＥ、ＰＳ含量及膜流动的变化，以探讨内毒素休克时磷脂酶Ａ２与膜损伤的关系及磷脂酶Ａ２抑制剂对细胞的保护效应。     

磷酸氯喹对失血性休克大鼠治疗效果和治疗条件的探讨

目的磷脂酶A2(PLA2)是细胞膜特异性水解酶,它以膜磷脂为底物,释放花生四烯酸系列,激活和启动脂介质前列腺素、血栓素、血小板激活因子、白三烯脂质过氧化物和溶血磷脂,从而引起休克加重和循环衰竭.PLA2是休克的关键酶.我们已经证明磷酸氯喹(CQ)是PLA2的抑制剂,磷酸氯喹预处理可提高内毒素血症动物和失血性休克动物的存活率.显著降低血浆、组织、细胞的PLA2活性;可明显改善血流动力学状态;可减少细胞膜和细胞器的膜通透性;可减少膜脂质过氧化损伤;可降低和抑制脂介质的产生;可减少膜脂成份的改变,可逆转膜流动性和微粘度;可改善泵功能.本文旨在探讨磷酸氯喹对失血性休克大鼠治疗效果和治疗条件,以便为临床应用提供实验依据.方法采用Wistar大鼠,分为四组正常对照组(n=8);失血性休克对照组(n=8);磷酸氯喹治疗组(n=8);补液加磷酸氯喹治疗组(n=8).测定血压、呼吸、血乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷脂酶A2(PLA2)、血液和组织MDA.结果失血性休克动物血浆LA、LDH、PLA2、血浆和组织MDA均显著高于对照组,而磷酸氯喹治疗组血浆LA、LDH、PLA2、血浆和组织MDA均显著低于失血性休克组,与对照组无显著差异.静脉直接推注磷酸氯喹(3mg/kg)血压轻度下降,先输二倍失血量的平衡盐液再静脉滴注磷酸氯喹(3mg/kg)治疗,动物血压稳定,呼吸平稳,血液生化指标显著改善,疗效更好.结论磷酸氯喹对失血性休克动物有显著疗效,给药方式以先扩容、后给药效果更好.     

足细胞抗原在人类膜性肾病治疗中的研究进展

膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是一种器官特异性自身免疫病,发病机制是自身抗体结合足细胞靶抗原后激活补体导致肾小球滤过屏障损伤和蛋白尿.近年研究已发现中性肽链内切酶、M型磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)、醛糖还原酶、超氧化物歧化酶2、α烯醇化酶、1型血小板反应蛋白7A域等足细胞靶抗原.抗PLA2R抗体和肾组织PLA2R抗原是诊断和治疗MN的新兴生物标志物.     

环氧合酶及其在病理性痛中的作用

<正> 环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)是以花生四烯酸为底物生成前列腺素(prostaglandins,PGs)途径中的关键酶。花生四烯酸是细胞膜上的卵磷脂,在磷脂酶A2(phospholipaseA2,PLA2)或磷脂酶C(phospholipase C,PLC)作用下生成,其代谢途径如图1所示。PGS在病理性痛的产生过程中发挥     

肾性高血压大鼠主动脉Gαq介导的信号转导通路的变化

目的 :探讨肾性高血压主动脉Ｇαｑ介导的细胞信号转导系统的动态变化及其在高血压中的发病学意义。方法 :制作两肾一夹肾性高血压大鼠模型 ,分别于术后周 1、2、4和 8测定颈动脉血压 ;血浆血管紧张素转换酶 (ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ -ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ,ＡＣＥ)活性 ;免疫印迹法测定主动脉Ｇαｑ蛋白含量 ;以 [3Ｈ]二磷酸磷脂酰肌醇为底物测定主动脉细胞膜蛋白ＰＬＣ活性磷脂酶Ｃ活性。结果 :高血压组大鼠于术后 2周血压开始升高 ;血浆ＡＣＥ活性于术后 1周至 4周显著升高 (Ｐ <0 0 1 ) ,8周时降至假手术组水平 ;主动脉Ｇ…     

Annexin家族在抗磷脂综合征血栓形成中的作用

抗磷脂抗体-磷脂结合蛋白复合物可破坏Annexin A5在细胞膜上有序排列,或者抗体直接结合膜上An-nexin A5,从而暴露膜的磷脂表面,这是抗磷脂综合征血栓形成并导致习惯性流产的病理机制之一。Annexin A2可介导抗β2GPΙ抗体/β2GPΙ复合物与内皮细胞膜结合,并将其激活而分泌黏附活性分子等,促使血栓形成。此外,Annexin家族其他成员抗体也与抗磷脂综合征的病理机制有关。