异丙酚麻醉对小鼠脑内ERK1/2磷酸化的影响

为探索全身麻醉的中枢作用靶位,本研究观察了异丙酚麻醉-清醒过程中小鼠脑内磷酸化的细胞外信号调节激酶(pERK1/2)的表达变化。24只雄性BALB/c小鼠,随机分为4组:未麻醉对照组,异丙酚麻醉5min组,异丙酚麻醉后清醒5min组和异丙酚麻醉后清醒1h组;每组6只。麻醉动物腹腔内注射异丙酚100mg/kg。分别于清醒状态和麻醉各时点脱臼处死,灌注固定,取脑,冠状位冰冻切片,行全脑pERK1/2免疫组织化学染色,观察分析。结果显示:与未麻醉对照组相比,异丙酚麻醉5min组小鼠脑内感觉运动皮质、扣带皮质、梨状皮质、嗅周皮质及海马的pERK1/2阳性细胞数明显减少(P<0.05),而杏仁中央核、终纹床核卵圆亚核、下丘脑室旁核、视上核、下丘脑腹内侧核腹外侧部、缰外侧核和中脑E-W核等均较未麻醉组显著升高(P<0.01)。清醒5min后与麻醉组相比,各脑区/核团的pERK1/2表达除海马外均明显恢复(P<0.05);清醒1h后除海马外各脑区/核团的pERK1/2表达均恢复至对照组水平(P>0.05)。本研究表明异丙酚能引起小鼠脑内一些脑区和核团的ERK1/2磷酸化水平随麻醉过程发生变化,提示ERK1/2磷酸化可能参与全身麻醉的作用过程。相关脑区和部位可能与全麻药的中枢作用靶位或麻醉的应激效应调控有关。     

强迫游泳大鼠脑内信号分子ERK1/2磷酸化水平的变化

通过观察强迫游泳时大鼠脑内不同核团内ERK1/2磷酸化水平变化,探讨与负性心理应激有关的脑内环路。将大鼠置于高60cm、水深约30cm的玻璃缸内,先预游15min,24h后进行5min的强迫游泳,观察大鼠游泳过程中的不动时间。游泳完毕后将大鼠灌流处死,对全脑组织进行磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的免疫组织化学染色及其与酪氨酸羟化酶(TH)在部分核团内的免疫荧光双标细胞。强迫游泳后前额叶皮质、外侧隔区、下丘脑室旁核、海马CA13区、杏仁内侧亚核和皮质亚核、孤束核等脑区/核团中pERK1/2阳性细胞数显著增多;而杏仁中央亚核、下丘脑视上核内的磷酸化ERK1/2蛋白水平下降,阳性细胞数明显减少。免疫荧光双标结果表明,孤束核内部分pERK1/2阳性细胞呈TH免疫反应阳性。上述结果表明,以上脑区/核团内的神经元可能和负性心理应激的中枢调控有关,ERK1/2信号通路参与了其调控过程。此外,孤束核中的儿茶酚胺能神经元可能参与了心理应激的脑内活动。     

磷酸化的蛋白激酶p44／42MAPK在成年大鼠脑内的分布

目的：研究活化形式的p44／42MAPK在成年正常大鼠脑内的分布。方法：免疫组织化学方法（ABC法）。结果：磷酸化的p44／42MAPK在正常大鼠脑内有广泛的表达,出现在许多核团,特别在岛皮质、感觉运动及视、听皮质、扣带前皮质、海马尾侧的内嗅区、内侧杏仁核、皮质杏仁核和中介核、视上核、蓝斑、臂旁外侧核、小脑Purkinje细胞、A5区、旁巨细胞外侧核、吻侧（C1区）和尾侧（A1区）延髓腹外侧网状结构等,阳性结构主要见于神经元的胞浆、胞核和突起内,在部分脑膜细胞和少突胶质细胞内也有表达,结论：活化的p44／42MAPK在脑内的广泛存在提示其作为重要的信号转导分子在正常状的脑功能活性中可能起重要作用。     

正常生活状态下的大鼠脑中 FOS的基础表达

用免疫组织化学 ABC方法普查了正常生活状态下大鼠全脑内 FOS的基础表达。结果显示在正常生活状态下大鼠脑中有广泛而恒定的 FOS表达 ,出现于许多核团 ,如 :孤束核的连合核、内侧亚核 ,脑桥核 ,臂旁外侧核及 KF核 ,下丘 ,丘脑室旁核 ,下丘脑乳头体上核、视交叉上核以及中央杏仁核 ,新皮质等处。另外 ,在外侧网状核 ,三叉神经脊束核尾侧亚核 ,A1区 ,舌下神经前置核 ,小脑皮质颗粒层 ,中央灰质腹外侧部 ,腹侧被盖区 ,顶盖前区 ,下丘脑后区 ,外侧膝状体腹侧核 ,外侧缰核 ,尾壳核 ,屏状核 ,视上核 ,隔外侧核 ,扣带回皮质和嗅结节等处也有恒定的 FOS表达。面部皮下注射甲醛后 ,在部分脑区如三叉神经脊束核尾侧亚核 、 层及下丘脑室旁核等处 FOS表达增多 ,而脑内大部分核团 FOS表达模式未变。本文作者推测 ,这些正常生活状态下的 FOS表达可能与机体的基础代谢以及内脏、躯体功能活动 ,外界刺激如光线、声音等感觉传入活动有关。在分析实验刺激引起的 F OS表达变化时应注意区分     

限制饮水对大鼠脑核团内蛋白激酶ERK1/2磷酸化水平的影响

目的研究限制饮水应激对大鼠脑内磷酸化蛋白激酶ERK1／2（pERK1／2）水平的影响。方法58只雄性Wistar大鼠分为对照组（C，n=4）、定时给水组（TW，n=18）、空瓶刺激组（EB，n=18）、限制饮水组（WR，n=18），后3组动物同置一室。TW组、EB组和WR组再按限制饮水时间分为3d、7d和14d3个亚组。各实验组在最后一次实验刺激后1h用免疫组织化学方法观察脑内pERK1／2表达的变化。并对相关核团中pERK1／2阳性细胞的面积进行图像分析。结果与对照组相比。实验刺激后引起大鼠脑内下丘脑室旁核（PVN）、视上核（SON）、腹外侧隔区（LSV）、内侧杏仁核（MeA）、中央杏仁核（CeA）和孤束核（NTS）等核团的pERK1／2表达显著增强；其中，EB组和WR组在SON、LSV、MeA和CeApERK1／2的表达均显著强于TW组，且EB组在LSV、MeA、CeA和NTSpERK1／2的表达增强和回落的时间要显著早于WR组。除PVN仅与刺激时间有关外，其余核团均与刺激时间和方式双重因素有关。结论限制饮水应激激活脑内PVN、SON、LSV、MeA、CeA和NTS等核团。物理性应激和心理性应激激活的中枢核团活动有一定差别。     

磷酸化PKCγ在正常小鼠脑内的免疫组织化学定位

为了研究磷酸化的蛋白激酶Cγ(pPKCγ)在小鼠脑内的区域分布,为进一步了解其在脑内的功能提供线索。我们将BALB/c小鼠脱臼处死,灌流取脑,行免疫组织化学染色,观察pPKCγ阳性反应产物在脑内的分布。观察到pPKCγ阳性产物主要见于神经元的胞浆和突起中,在正常小鼠脑内表达广泛。仅很少量胶质细胞被染色,着色浅淡。海马CA1区锥体细胞,小脑的浦肯野氏细胞,大脑新皮质V层细胞,边缘前皮质、岛皮质的深层细胞以及前梨皮质的颗粒层细胞,外侧嗅束核、杏仁基底外侧核和杏仁外侧核的神经元,以及穹窿、锥体束纤维等均有强或较强的pPKCγ表达;吻侧丘脑大多数核团,尾侧丘脑的内侧膝状体核及外侧膝状体的背侧核,脑干耳蜗背侧核的表浅部位,三叉神经感觉核簇及巨细胞网状结构神经元中均有弱阳性表达。本实验研究揭示正常状态下小鼠脑内pPKCγ表达广泛,但有区域特异性,提示PKCγ可能参与正常状态下脑内部分脑区/核团神经元的功能活动。     

芳香化酶mRNA在小鼠脑内的表达及其分布

目的 研究芳香化酶ｍ（ＲＮＡ（ａｒｏｍａｔａｓｅ ｍＲＮＡ）在小鼠脑内的基因表达。方法 原位杂交组织化学和ＰＮＡ斑点杂交。结果 （１）斑点杂交结果显示,脑内芳香化酶ｍＲＮＡ在小鼠Ｅ１６－Ｐ３００整个发育过程中均有表达,表达高峰在生后６ｄ左右,成年后降至最低;（２）脑内芳香化酶ｍＲＮＡ主要定位于神经元;（３）芳香化酶ｍＲＮＡ在脑内的表达,阳性区域主要分布于大脑皮层,丘脑、下丘脑及边缘系统。其中,皮质锥体细胞层、内侧视前区、隔内侧核、海马各区锥体层、杏仁核群、扣带皮质、梨状前皮质及杏仁周皮质等部位阳性信号较强;中等强度的阳性信号见于丘脑腹内、外侧核,丘脑外侧背核、下丘脑室旁核、室周核等处。结论 以上结果进一步证明脑内芳香化酶的表达与脑发育存在一定的相关性,芳香化酶ｍＲＮＡ的表达部位与文献报道酶的活性分布基本一致;海     

大鼠脑内星形胶质细胞对渗透压改变的反应及其和神经元的相互关系

为观察大鼠在饮用 3 % Na Cl溶液 2 d和 5 d时的脑内星形胶质细胞的反应变化及相互关系。本文应用免疫组织化学三重标记法 ,在脑原位切片同时显示 FOS、胶质原纤维酸性蛋白、酪氨酸羟化酶 (或加压素 )的表达、相互关系及分布规律。结果显示 :(1)实验组大鼠脑内孤束核、味觉核、臂旁核、蓝斑、导水管周围灰质的腹外侧区、上丘中灰层、下丘脑室旁核外侧大细胞部、视上核、和穹隆下器同时出现 FOS阳性神经元胞核和胶质原纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞。 (2 )在孤束核、蓝斑、下丘脑室旁核外侧大细胞部和视上核出现酪氨酸羟化酶阳性神经元 ,在下丘脑室旁核外侧大细胞部、下丘脑室旁核腹侧部和视上核等出现加压素阳性神经元。(3 )在孤束核、蓝斑、或下丘脑室旁核外侧大细胞部、视上核的三重免疫组化染色切片上见到胶质原纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞包绕 FOS阳性和酪氨酸羟化酶阳性 (或加压素阳性 )神经元 ,形成复合体。提示 :脑内相关核团内的星形胶质细胞与神经元共同参与对渗透压的调节 ,并以神经元—星形胶质细胞复合体作为功能单位     

Fos蛋白在LPS免疫激发大鼠脑内的分布

目的 研究与神经免疫调节有关的功能神经元在大鼠脑内的分布。方法 以腹腔注射脂多糖（ＬＰＳ）为免疫激发模型,采用免疫组织化学ＡＢＣ方法,观察Ｆｏｓ蛋白在脑内的分布情况。结果 Ｆｏｓ阳性产物多集中分布在大脑额顶皮质、边缘前脑（扣带皮质、梨状皮质、外侧隔核和中央杏仁核等）、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、弓状核、视上核、视交叉上核、下丘脑外侧区、中脑导水管周围灰质腹外侧部、外侧臂旁核和延髓内脏带,小脑内无明显     

大鼠胃肠道伤害性刺激引起的中枢神经系统c-fos表达

本文应用Fos免疫组织化学(ABC法)对大鼠胃肠道伤害性刺激后中枢神经系统内的c-fos表达进行了观察,结果表明:(1)多数核团或部位的c-fos表达于伤害性刺激后的30min开始,2h达高峰,4h后逐渐降低,12h基本恢复正常。(2)Fos免疫反应阳性神经元呈双侧性分布,定位于胸髓(Rexed Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ和Ⅹ层)、孤束核、延髓腹外侧区、臂旁外侧核、脑桥室周灰质、中脑导水管周围灰质、楔形核、中缝背核、下丘、丘脑(中线核团、背内侧核、腹后内侧核小细胞部)、外侧缰核、内侧膝状体大细胞部、下丘脑(背内侧核、腹内侧核、室周核等)、中央杏仁核、终纹床核、伏核、外侧隔核、梨状区皮质等。本文对以上部位的c-fos表达规律及其意义进行了初步探讨。     

雌性大鼠下丘脑5-羟色胺1A和2A受体亚型的定位分布

本研究应用免疫细胞化学技术观察了雌性成年SD大鼠下丘脑内5-HT1A受体亚型(5-HT1AR)和5-HT2AR免疫阳性结构的分布。结果显示:5-HT1AR免疫阳性神经元在视前区大细胞核、视前室周核、视上核和下丘脑外侧前核等核团内密集分布。在内侧视前核、外侧视前区、下丘脑室周核、下丘脑外侧区、背内侧核、腹内侧核、结节核、结节乳头体核、乳头体内侧核和乳头体外侧核等结构内也有较多的分布;而在正中视前核、视交叉上核、下丘脑室旁核、下丘脑背侧核、弓状核、乳头体上核和乳头体前核等部位有散在的分布。与5-HT1AR不同,5-HT2AR免疫阳性反应产物主要见于纤维和终末,阳性胞体少且染色淡。5-HT2AR阳性胞体见于下丘脑室旁核、视上核、腹内侧核、结节核、视前内侧区、外侧区、外侧前核、下丘脑背内侧核等处。另外,在视前区前内侧视前核、视交叉上核背侧和外侧可见围绕血管分布、密集成团簇状、带有大小不同膨体的阳性神经纤维缠结。本文结果提示5-HT1AR阳性结构广泛地分布于大鼠下丘脑,而5-HT2AR在下丘脑分布较为局限。二者不同的分布特点,提示它们可能介导5-HT在下丘脑的不同生理功能。     

Localization of glutamatergic/aspartatergic neurons projecting to the hypothalamic paraventricular nucleus studied by retrograde transport of [3H]D-aspartate autoradiography

Morphological and functional data indicate that glutamatergic innervation of the hypothalamic paraventricular nucleus plays an important role in the control of this prominent cell group. Sources of this neural input are unknown. The present investigations were aimed at studying this question. The retrograde tracer [3H]D-aspartate, which is selectively taken up by the terminals of neurons that use glutamate or aspartate as a neurotransmitter, and is retrogradely transported to their perikarya, was injected into the paraventricular nucleus. The brain was examined for labelled neurons visualized by autoradiography. Labelled neurons were detected in the paraventricular nucleus itself, in several hypothalamic areas including medial and lateral preoptic area, suprachiasmatic nucleus, anterior hypothalamic area, ventromedial nucleus, dorsomedial nucleus, lateral hypothalamic area, posterior part of arcuate nucleus, ventral premammillary nucleus and supramammillary nucleus. Outside the hypothalamus labelled neurons were found in the thalamic paraventricular nucleus and in certain telencephalic regions including lateral septum, bed nucleus of the stria terminalis and amygdala. All of them are known to project to the hypothalamic paraventricular nucleus. We failed to detect labelled neurons in the lower brainstem.From these findings we conclude that firstly, there are glutamatergic/aspartatergic interneurons in the paraventricular nucleus; secondly, all intrahypothalamic and telencephalic, but not lower brainstem afferents to this nucleus contain glutamatergic/aspartatergic fibres; and thirdly, the glutamatergic/aspartatergic innervation of this heterogeneous cell group is extremely complex.     

Suppression of stress immobilization-induced phosphorylation of ERK 1/2 by biting in the rat hypothalamic paraventricular nucleus

We have previously reported that acute immobilization stress induces Fos protein. Fos protein is generally used as a marker for neuronal activity and has been linked to phosphorylation of extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 (pERK1/2), in the hypothalamic paraventricular nucleus (PVN). Biting behavior during the period of stress reduced the expression of Fos protein. The present immunohistochemical study was designed to determine whether acute immobilization stress induces pERK1/2 in the PVN, and whether the stress-induced pERK1/2 was attenuated by simultaneous biting behavior. Acute immobilization stress, in increments of up to 15min, produced detectable amounts of pERK1/2 that were proportional to the interval of stress. Biting during the acute immobilization stress significantly reduced the amount of detectable pERK1/2. These results suggest that biting activity during acute stress inhibits pERK1/2 in this region of the brain. It is feasible that the neuronal cellular response to acute stress is regulated, in some part, by inhibition of pERK1/2 by biting.     

NF1基因表达产物在大鼠脑的分布-免疫荧光组化法

用免疫荧光组织化学方法观察了 NF1基因表达产物神经纤维素在正常成年大鼠脑中的分布 ,结果如下 :(1)大脑皮质中神经纤维素阳性细胞最为密集 ;其次 ,在海马结构、丘脑前核群、丘脑内侧核群、丘脑板内核群、丘脑中线核群及下丘脑室周核、室旁核中神经纤维素阳性细胞也较密集 ;在杏仁核、下丘脑前区、下丘脑外侧区、下丘脑后区以及隔外侧核、隔内侧核、尾壳核、屏状核、苍白球、三叉神经脊束核等部位 ,也可见到数量不等的神经纤维素阳性细胞稀疏分布。 (2 )神经纤维素免疫阳性反应产物除了分布于神经细胞胞质外 ,在细胞核也有分布。 (3 )结合抗星形胶质细胞特异性酶 (胶质纤维酸性蛋白 )免疫组化反应 ,在星形胶质细胞中未观察到神经纤维素免疫反应阳性信号