青藤碱下调兔膝骨关节炎滑膜脂肪因子受体的表达

正骨关节炎(osteoarthritis,OA)是以进行性关节软骨退变、骨赘形成及继发关节间隙变窄为主要特征的退行性关节疾病,其发病机制仍不明确。脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)、内脂素(visfatin)和抵抗素(resistin)等多种脂肪因子在滑膜炎性反应、软骨退变以及软骨下骨重塑等OA病理过程中发挥了重要作用[1]。青藤碱是从传统治疗风湿性疾     

瘦素对骨关节炎大鼠关节软骨IGF-Ⅰ表达的影响

目的探讨瘦素(Leptin)对骨关节炎模型大鼠膝关节软骨的外周作用。方法在膝关节骨关节炎模型大鼠的关节腔内注射100 gLeptin后,取胫骨平台,分别用RT-PCR法及免疫组织化学法检测胫骨平台软骨中Leptin及胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的变化。结果骨关节炎关节软骨Leptin、IGF-Ⅰ的表达明显高于正常关节软骨;Leptin并不能增加或减少骨关节炎晚期关节软骨IGF-Ⅰ的表达。结论 Leptin是软骨细胞代谢过程中重要的外周调控因子,但对骨关节炎晚期关节软骨保护作用不明显。     

维骨力预防骨关节炎软骨退变的实验研究

目的:观察维骨力(viartrils)对兔实验性早中期骨关节炎(OA)病变发生发展是否有预防作用及其对OA软骨细胞增殖的影响。方法:24只新西兰兔用切断膝关节前、后交叉韧带的方法复制兔OA模型,随机分为对照组和实验组各12只,实验组术后即加服维骨力(主要成份为硫酸氨基葡萄糖)每天2粒,对照组常规饲养。术后第10周处死动物,取股骨髁负重面软骨标本进行HE、safranin’O/fast green组织化学染色及骨关节炎评分、分级,采用免疫组化方法观察软骨细胞增殖状况。结果:切断兔前后交叉韧带成功复制出OA早、中期模型,第10周时实验组(维骨力组)骨关节炎病理评分显著低于对照组(P<0.05),软骨细胞增殖指数显著高于对照组(P<0.05)。结论:维骨力对兔膝骨关节炎软骨细胞有刺激增殖的作用,可以较好地预防OA的发生发展。     

青藤碱抗肝癌作用机制研究北大核心CSCD

目的:探讨青藤碱对Hep G2人肝癌细胞株的增生和转移能力的多靶向作用机制。方法:运用噻唑蓝还原法(MTT)来检测青藤碱对Hep G2人肝癌细胞株的抗增殖作用,而同时运用Transwell法来检测药物对于细胞转移能力的作用变化;间接荧光标记法测定经过不同浓度的青藤碱作用后,细胞内活性氧水平的变化;利用酶抑制动力学方法,研究青藤碱对逆转录酶的抑制作用;再通过逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹的实验来检测Hep G2细胞中凋亡蛋白水平的变化。结果:青藤碱对Hep G2人肝癌细胞株具有抗侵袭及转移的治疗作用。MTT检测结果显示青藤碱对于Hep G2人肝癌细胞抗增殖作用明显,半抑制浓度IC50为(15.35±2.43)μmol/L;而Transwell法的结果显示青藤碱对癌细胞有较好的抗转移能力;青藤碱是一种有效的逆转录酶抑制剂,IC50为(21.32±2.43)μmol/L;荧光标记法检测细胞内活性氧水平随青藤碱呈浓度依赖性升高;蛋白水平测定显示青藤碱上调Hep G2人肝癌细胞CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达。结论:青藤碱可能是通过上调CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达,进而抑制人肝癌细胞的增殖和转移,调节相关信号通路,最终在分子水平证明青藤碱对Hep G2人肝癌细胞的抑制作用。     

青藤碱抗肝癌作用机制研究

目的:探讨青藤碱对Hep G2人肝癌细胞株的增生和转移能力的多靶向作用机制。方法:运用噻唑蓝还原法(MTT)来检测青藤碱对Hep G2人肝癌细胞株的抗增殖作用,而同时运用Transwell法来检测药物对于细胞转移能力的作用变化;间接荧光标记法测定经过不同浓度的青藤碱作用后,细胞内活性氧水平的变化;利用酶抑制动力学方法,研究青藤碱对逆转录酶的抑制作用;再通过逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹的实验来检测Hep G2细胞中凋亡蛋白水平的变化。结果:青藤碱对Hep G2人肝癌细胞株具有抗侵袭及转移的治疗作用。MTT检测结果显示青藤碱对于Hep G2人肝癌细胞抗增殖作用明显,半抑制浓度IC50为(15.35±2.43)μmol/L;而Transwell法的结果显示青藤碱对癌细胞有较好的抗转移能力;青藤碱是一种有效的逆转录酶抑制剂,IC50为(21.32±2.43)μmol/L;荧光标记法检测细胞内活性氧水平随青藤碱呈浓度依赖性升高;蛋白水平测定显示青藤碱上调Hep G2人肝癌细胞CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达。结论:青藤碱可能是通过上调CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达,进而抑制人肝癌细胞的增殖和转移,调节相关信号通路,最终在分子水平证明青藤碱对Hep G2人肝癌细胞的抑制作用。     

老龄关节软骨和软骨下骨的变化及相互作用机制研究进展

衰老是骨关节炎(osteoarthritis,OA)和骨质疏松等疾病的主要影响因素。然而,它们并不是衰老的必然结果,而且与衰老有关的骨和软骨的变化与疾病发展之间的关系尚不清楚。研究表明,骨关节炎的发生和发展并不是简单的软骨磨损过程,它的发生包括整个关节各组织复杂的生物、化学和力学变化,特别是软骨和软骨下骨之间生化和力学的相互作用。衰老促成OA的发生和发展,但并不是直接导致OA的原因。与衰老相关的变化为OA的发生提供了一个基础,使关节更容易受到其他因素(如异常的生物力学和生物化学)影响,从而促进OA发展。因此,了解衰老影响关节组织的基本机制可能会为减缓或预防OA发展提供新的靶点。从衰老过程中软骨和软骨下骨的年龄相关性变化、力学传导作用和血管新生机制3个方面对相关研究进展进行综述。     

白细胞介素家族在骨关节炎中的表达意义

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种慢性退行性骨关节病,白细胞介素家族在OA中表达失衡可加速骨关节软骨破坏,且与临床症状及预后密切相关。该家族主要包括IL-1家族、结合含γc受体的细胞因子(IL-2、IL-4等)、IL-6、IL-10、IL-17。这些家族因子的表达对关节软骨起着破坏、保护或调节等多种作用。本文就这些细胞因子在OA中的表达进行综述后发现:(1)IL-1β可通过对软骨破坏酶如MMP、ADAMTS-5蛋白聚糖酶等的调节,与IL-6、TNF-α等相互协同加速关节软骨损伤;(2)IL-18可通过诱导并上调IL-18Rα在软骨表面刺激过量合成MMP-1、MMP-3和MMP-13而增加软骨降解酶浓度,使软骨细胞进入凋亡状态而加速OA进展;(3)IL-12、IL-15和IL-21主要通过对细胞免疫和体液免疫的调节来诱导或加速对关节软骨的破坏;(4)IL-6可与IL-1β等相互协同促进关节软骨破坏;(5)IL-7可刺激关节软骨细胞分泌MMP-13而促进关节软骨破坏;(6)IL-4、IL-10和IL-1Ra可通过抑制或拮抗IL-1生物效应起到对关节软骨的保护作用;(7)IL-15、IL-17与关节疼痛程度明显相关。     

软骨干/祖细胞修复软骨损伤的研究进展

关节软骨损伤是临床常见的运动损伤,然而关节软骨缺乏血管、神经支配,损伤后难以自身完全再生修复,缺乏有效的治疗会导致骨关节炎(OA)的发生。随着组织工程学的发展,近期研究发现,软骨组织中存在具有多向分化潜能的软骨干/祖细胞(CSPC),可以分化成高度同质化的软骨细胞。这种细胞在软骨损伤后自发迁移并参与软骨损伤组织修复和再生,有望成为治疗软骨损伤的新方法。本文对CSPC的分布、特征及其在软骨损伤和OA中的作用和应用进行综述,旨在为CSPC的研究应用及软骨损伤的治疗提供理论基础,为临床上治疗软骨损伤开拓新方向。     

应用于双向电泳技术的不同软骨蛋白提取方案对比

目的探索可兼顾双向电泳凝胶图像质量和结果保真性的软骨蛋白提取方案。方法取股骨髁软骨(n=17)。分别用软骨组织直接提取总蛋白(软骨组织组)、软骨组织提取总蛋白后CPC处理(软骨+CPC组)、直接分离软骨细胞提取总蛋白(直接软骨细胞组)或培养软骨细胞提取总蛋白(培养软骨细胞组)同步进行2-DE,对比不同方案产生凝胶图像质量和结果保真性的差异。结果软骨组织组不能形成等电聚焦。软骨+CPC组可形成等电聚焦,但蛋白点数量偏少。直接软骨细胞组可获得与培养软骨细胞组媲美的高质量等电聚焦和凝胶图像,且在高分子量和偏碱区域分离出培养软骨细胞组缺如的部分蛋白点,质谱结果显示这些蛋白分别为VI型胶原、TGF-β2和annexin等骨关节炎病因学相关蛋白。结论从软骨组织直接提取软骨细胞用于2-DE的方案在解决等电聚焦难题的同时,还避免了细胞培养对实验结果保真性的影响,是软骨相关疾病样本的2-DE研究优化处理方案。     

青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成及其抗炎作用

目的合成并初步探索青藤碱衍生物青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎作用。方法以青藤碱(SN)为原料,化学合成青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。用脂多糖(LPS)诱导建立内毒素血症小鼠模型,并在诱模前于治疗组小鼠体内分别注射5 mg/kg、2.5 mg/kg剂量的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,未治疗组和空白对照组注射生理盐水,观察记录各组小鼠的状态及生存状况。MTT法检测不同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞增殖的影响。用终浓度为(0、1、2、5、10)μmol/L的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯共培养刺激RAW264.7细胞24 h,再加终浓度为1μg/kg的LPS刺激6 h后,实时定量PCR检测IL-6mRNA表达水平。结果成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。体内研究发现:相同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯治疗组小鼠,生存状态较青藤碱治疗组有所改善;青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外可以抑制巨噬细胞的增殖和IL-6的表达。结论青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯具有一定的抗炎作用,可能是通过抑制巨噬细胞增殖、减少炎症介质释放而实现的。