微小病毒B19的巢式聚合酶链反应检测

人微小病毒Ｂ19(ＨｕｍａｎｐａｒｖｏｖｉｒｕｓＢ19,简称Ｂ19)属微小病毒属 ,是目前动物病毒中体积最小和结构最简单的一类单链线状ＤＮＡ病毒〔1〕 ,自 1974年被Ｃｏｓｓａｒｔ发现以来 ,至今已证实该病毒与传染性红斑、一过性再障、胎儿水肿、死胎和关节炎等多种人类疾病有关〔2〕。新近有Ｂ19感染与心肌炎 ,心肌病 ,川畸病等心肌受累的报道。我们就巢式聚合酶链反应 (ＰＣＲ)对微小病毒Ｂ19ＤＮＡ的检测技术的建立及对 2 9例先天性心脏病心脏组织、30例非先天畸形尸解的心脏组织进行Ｂ19ＤＮＡ的检测结果报告如下。1　材料和方法1.1　…     

新冠病毒DNA疫苗的研究现状及展望

全球新冠病毒的流行对社会生产和人民生活都带来了严重的不利影响。疫苗是控制新冠病毒传播的有力武器,其中DNA疫苗具有安全、高成本效益以及易于生产的特点,更重要的是其可以诱导机体产生免疫应答并阻断病毒感染。本文综述了已进入临床试验以及在临床前研究的新冠病毒DNA疫苗,并对其作用特点以及保护效果进行了分析。     

荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

目的：建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法：利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒（Bacmid）和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重组Bacmid作为PCR检测的标准模板,由昆虫细胞中收获的病毒母液用于空斑测定和病毒DNA提取.以10倍梯度稀释的重组Bacmid作为标准模板,进行荧光定量PCR扩增IL18基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的重组杆状病毒DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测.同时,以琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果：成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101～108拷贝,病毒母液的DNA拷贝浓度（vg/ml）值约为空斑检测的滴度pfu/ml值的10倍.结论：荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒,并在较大的线性范围内检测重组杆状病毒滴度,较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量.     

建立PCR产物的新检测体系

建立ＰＣＲ产物的新检测体系钟镐镐衡万杰吴秉铨ＰＣＲ技术，在遗传病的异常基因分析、肿瘤分子标志物的判定以及疾病病原体的检测上已广泛应用。在实践中我们发现有三个问题急待解决：（１）ＰＣＲ产物的污染；（２）ＰＣＲ产物自动化的检测手段；（３）ＰＣＲ模板的定量...     

脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用

目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针,建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法,且对体系进行优化;对该法进行灵敏性、特异性验证;采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测,并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995;灵敏性比普通PCR高100倍,且仅能特异性检出 EMCV;对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法,该法灵敏性高、特异性好,可用于EMCV的检测及定量分析。     

PDCA循环在提升实验室新冠病毒检测能力中的应用

目的 应用PDCA循环提升我院新型冠状病毒核酸检测能力,提高临床、患者的满意度.方法 比较2020年2月至4月(改善前)和2020年5月至8月(改善后)的新冠病毒核酸检测报告例数及申请到报告TAT时间的数据,采用SPSS 24.0软件进行数据的统计与分析.结果 经过PDCA循环后,新冠病毒核酸报告的检测量由28例/月提...     

实时定量PCR检测马传染性贫血病毒载量方法的建立和应用

目的建立实时定量PCR检测血浆病毒载量的方法，对马传染性贫血病毒（equine infectious anemia virus，EIAV）强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测，探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性。方法以EIAV强毒株LN40序列为标准，在gag保守区设计1对引物和Taqman探针，用于实时定量PCR扩增，用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品，获得标准曲线，对扩增样品进行准确定量。强毒株LN40直接攻毒，或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒，跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况。结果反应在10^1～10^9copies／ml之间具有良好的线性关系，反应的检出下限为10copies／ml。强毒攻毒马出现发热并最终死亡，发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关，载量最高达10^7copies／ml。免疫攻毒马未出现发热，其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马，攻毒后3个月低至10copies／ml以下。结论成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法，并证实了用实时荧光定量PER检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性，为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台。     

荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

目的：建立一种高效﹑简便的荧光实时定量PCR方法，用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测。方法：利用Bac-to-Bac载体系统在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒，收获的病毒母液以10倍梯度系列稀释后，提取病毒基因组DNA。以10倍梯度稀释的重组杆状病毒穿梭质粒（bacmid）作为标准模板，进行荧光定量PCR反应扩增IL-18基因片段并绘制标准曲线，然后以上述的重组杆状病毒基因组DNA作为模板，采用同样体系进行实时PCR反应检测，同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度。结果：成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法。运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101-108拷贝，病毒母液的DNA拷贝浓度（vg/mL）值约为空斑检测的滴度 pfu/mL值的10倍。结论：荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒，并在较大的线形范围内检测重组杆状病毒滴度，较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量。     

利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系。方法依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较。结果荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高。     

用巢式PCR检测育龄妇女人群人细小病毒B19感染的研究

目的 调查人类细小病毒B19在武汉地区普通人群,尤其是育龄妇女中的感染状况.方法 采集武汉地区2家医院的血液样本1 700份,分为两组.以血清中提取的DNA为模板,进行巢式PCR扩增.结果 第Ⅰ组(普通组,包括男性和女性)阳性检测率为4.50%,第Ⅱ组(妇女组)阳性检测率为8.33%.结论 武汉地区育龄妇女的B19感染率高于普通人群,很有必要对孕妇进行诊断从而预防新生儿感染B19病毒.另外,由于巢式PCR具有灵敏、特异、简便等优点,适合于用来检测血液样本中的人细小病毒B19.     

SARS-CoV-2核酸检测试剂盒的制备及样本混检性能分析

目的 开发一种适用于中国大规模人群新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染筛查的核酸检测试剂盒,分析对多样本混合检测的效果,为临床多样本混合检测提供理论指导.方法 选用SARS-CoV-2的ORF1ab、N 2个靶基因,并加入RNase P作为内标基因进行试剂盒研发.采用单一变量及正交实验优化试剂盒中3个靶基因引物及探...     

Application of a portable instrument for rapid and reliable detection of SARS-CoV-2 infection in any environment

The ongoing outbreak of the novel coronavirus (SARS-CoV-2) infection is creating serious challenges for health laboratories that seek to identify viral infections as early as possible, optimally at the earliest appearance of symptom. Indeed, there is urgent need to develop and deploy robust diagnostic methodologies not only to use in health laboratory environments but also directly in places where humans circulate and spread the virus such as airports, trains, boats, and any public aggregation places. The success of a reliable and sensitive asymptomatic diagnosis relies on the identification and measurement of informative biomarkers from human host and virus in a rapid, sensitive, and inexpensive manner. The objective of this article is to describe an innovative multidisciplinary approach to develop an efficient, inexpensive, and easy-to-use portable instrument (bCUBE^® by Hyris Ltd) that can be employed as a surveillance system for the emergency caused by SARS-CoV-2. A solution for Coronavirus testing, compliant with CDC guidelines, is scheduled to be released in the next weeks. In addition, we will describe a workflow and path of an integrated multi-omic approach that will lead to host and pathogen biomarker discovery in order to train the instrument to provide reliable results based on a specific biomarker's fingerprint of SARS-CoV-2 infection.     

不同人群中SARS-CoV-2抗体检测的作用价值

目的:探讨新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）特异性IgM和IgG抗体检测应用于不同人群新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019,COVID-19）诊断和筛查的作用价值。方法:回顾性分析2020年...     

地表水中肠道病毒检测结果分析

目的了解某地地表水中EV71、CoxA16等人肠道病毒的污染情况。方法选择某地1个污水处理厂和1条河流（上、下游）作为采样对象,每月采集未经处理的污水和上、下游河水各1份,经过滤、浓缩后进行人肠道病毒核酸检测。结果 36份水样中,肠道病毒检出率为52.77%;其中EV71阳性检出率为44.44%,CoxA16阳性检出率为16.66%,其它肠道病毒的检出率亦高达36.11%。夏季地表水体中的肠道病毒阳性率（100.00%）显著高于其它季节（37.03%）（P〈0.00）。污水中各类肠道病毒的检出率与河水中肠道病毒的检出率差异无统计学意义（P〉0.05）。地表水中肠道病毒的检出率与当地手足口病、手足口病重症及肠道传染病（甲乙丙类）的发生无相关（P〉0.05）。结论地表水中肠道病毒的污染严重,有必要开展进一步的研究了解肠道病毒经水传播的风险。     

影响SARS-CoV-2疑似感染者检出率的多因素分析

目的 由于轻症和无症状携带者的病毒载量较低以及试剂敏感性的影响,新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的检测常会出现假阴性.因此分析试剂性能和该群体的病毒分布特征,选择性能较优试剂并优化采样部位十分必要.方法 我们收集了新诊断...     

Detection of human coronavirus 229E in nasal washings using RNA:RNA hybridisation

A method is described for the detection of human coronavirus 229E (HCV 229E) in nasal washings using RNA:RNA filter hybridisation. Volunteers were inoculated with HCV 229E, and daily nasal washings were collected. These washings were then examined for the presence of viral RNA using a single-stranded RNA probe. Nucleic acid hybridisation is shown to be a sensitive technique for the diagnosis of HCV 229E infections.     

Bounds in the Sensitivity of BioMEMS Devices for Cell Detection

This paper presents an ongoing effort to characterize performance and reliability of micro electromechanical systems used for biomedical diagnostics (BioMEMS). In order to study the interactions of human osteosarcoma (HOS) cells with BioMEMS devices, cultures were performed on silicon (Si) surfaces as well as silicon surfaces coated with 50 nm of titanium (Ti). Cell spreading on the surfaces was observed over time for up to 2 hours. It was seen that titanium coated silicon surfaces have the potential to provide a better interface for BioMEMS devices, due to enhanced adherence and spreading of the cells on these surfaces. Atomic force microscope (AFM) cantilevers were used as cell detection sensors. These cantilevers were coated with 50nm of titanium metal to provide a cell friendly surface. Theoretical models were then developed for the prediction of the vibrational responses of the AFM cantilevers before and after cell attachment. The models were used to relate the experimentally observed changes in frequency to the number of cells that are attached on the cantilever. The bounds in the possible frequency changes were determined within a theoretical framework. From experimentally calculated values for the mass of cells, random number simulations were carried out to determine the probability of cell attachment as a function of the change in resonance frequency of the cantilever sensor. The implications of the results are then discussed for the future reliability modeling of the sensor.