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相似文献
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1.
目的: 研究nestin(巢蛋白)在人尿萃取物细胞分化剂CDA-2(又名尿多酸肽)诱导SWO-38人胶质瘤细胞分化中表达的变化及其意义。方法: 采用光镜观察和鉴定CDA-2对SWO-38细胞的分化作用;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blotting分析CDA-2诱导前后SWO-38细胞nestin表达的变化。 结果: 光镜观察发现经CDA-2诱导后SWO-38细胞胞体变大、核浆比减小、突起增多,表现出向成熟的星形细胞分化的现象;Nestin表达在细胞浆,呈丝状着色;Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调。结论: Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调,进一步验证nestin与细胞分化的关系,nestin有可能成为胶质瘤诱导分化治疗领域新的标志物。  相似文献   

2.
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)下调COX-2及MMP-2的表达、抑制人脑胶质瘤细胞迁移及侵袭的作用机制。方法:MTT法检测EGCG处理24h后SWO-38细胞的活性,确定药物作用浓度;细胞侵袭与迁移实验检测EGCG处理24h后SWO-38细胞的迁移与侵袭能力;Western blotting对比分析EGCG处理24h后SWO-38细胞COX-2和MMP-2的表达。通过肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进COX-2的表达,观察EGCG是否通过COX-2/MMP-2通路抑制肿瘤的迁移侵袭。结果:细胞侵袭与迁移实验发现,EGCG对SWO-38细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用,与对照组SWO-38细胞相比较,有显著差异(P0.01)。Western blotting发现经过EGCG处理24h后,SWO-38细胞COX-2和MMP-2蛋白的表达水平降低,提示EGCG抑制SWO-38迁移的机制可能与该药物抑制COX-2的表达而降低SWO-38细胞酶解细胞外基质的能力相关。结论:EGCG抑制了人脑胶质瘤SWO-38细胞的迁移与侵袭,其机制与EGCG抑制COX-2表达后,调节了MMP-2诱导的酶解细胞外基质的能力相关。  相似文献   

3.
目的:探讨西红花酸对过氧化氢(H2O2)诱导的培养心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的作用。 方法: 通过光镜观察细胞形态、碘化丙啶(PI)染色法和流式细胞术相结合检测培养细胞凋亡率、免疫荧光染色法和流式细胞术相结合检测细胞中caspase-3、Bcl-2蛋白。 结果: 在本实验使用浓度范围内,各浓度H2O2组细胞形态明显改变、凋亡率明显高于正常对照组,1×10-4 mol·L-1 H2O2可使培养心肌细胞Bcl-2蛋白表达明显减少,而caspase-3表达明显增多;各剂量西红花酸组细胞形态学改变减少、凋亡率明显低于1×10-4 mol·L-1 H2O2组,细胞中Bcl-2蛋白减少幅度与caspase-3增加幅度均减小,且较高浓度(5×10-5 mol·L-1)西红花酸组比较低浓度(5×10-7 mol·L-1)西红花酸组作用也更明显(P<0.05)。 结论: 西红花酸能够减轻H2O2对培养心肌细胞的损伤性凋亡作用,可能与稳定细胞内凋亡相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2的功能有关。  相似文献   

4.
目的: 观察白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)引起胰岛细胞凋亡、胰岛素分泌、Bcl-xL和Bax蛋白表达变化及其牛磺酸的影响。方法: 应用体外单层培养Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL-1β、TNF-α和 IFN-γ对胰岛细胞凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中NO-2/ NO-3含量及NOS活性、胰岛素分泌、Bcl-xL和Bax表达的影响,并进一步观察牛磺酸的作用。结果: IL-1β、TNF-α和 IFN-γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加,DNA明显片段化,同时NO-2/ NO-3含量和NOS活性亦明显升高,胰岛素分泌明显降低, Bcl-xL表达下降和Bax表达增强(P<0.01);牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用(P<0.01),并有一定的剂量依赖性。结论:牛磺酸能够改善IL-1β、TNF-α和 IFN-γ诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与抑制NOS活性从而减少NO的生成以及下调Bax/Bcl-xL比例有关。  相似文献   

5.
管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的:观察肉苁蓉提取物管花苷B对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响。方法:用MTT法检测细胞存活率,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果:100 μmol·L-1 H2O2处理细胞24 h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达48.0%;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高;而线粒体膜电位却明显降低,红/绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右。而预先给予1、10或100 mg·L-1浓度的管花苷B处理细胞12 h,可显著提高细胞存活率;并可有效抑制DNA ladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9%、18.3%和6.2%;激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase-3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性。结论:管花苷B能显著地抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平,维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。  相似文献   

6.
目的:研究灯盏花素对大鼠心室肌细胞膜瞬间外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(IK1)的影响,在离子通道水平探讨灯盏花素的抗心律失常作用机制。方法: 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录Ito和IK1。结果:(1) 灯盏花素呈浓度依赖性抑制Ito,在+50 mV时,0.02、0.05、0.08、0.10 (g· L-1)灯盏花素分别阻断Ito峰电流(10.07±0.30)%、(27.47±1.25)%、(42.72%±1.30)% 和(56.09±2.10)%,冲洗后可以完全恢复。在+50 mV时,0.10 g·L-1灯盏花素使峰电流从(29.61±3.40)pA/pF 减少至(13.00±1.80)pA/pF (n=5,P<0.05)。(2)灯盏花素呈电压依赖性抑制Ito,在0~+50 mV,各浓度随电压增加抑制作用明显减弱。(3)0.10 g·L-1灯盏花素对Ito失活、激活和复活曲线无明显影响。(4)0.10 g·L-1灯盏花素对IK1无明显影响。结论: 灯盏花素能够抑制心肌细胞Ito,呈浓度依赖性和电压依赖性,对IK1无明显影响,这可能是其抗心律失常作用的重要机制之一。  相似文献   

7.
目的: 研究白藜芦醇经蛋白激酶G对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。 方法: 采用全细胞膜片钳技术,记录给予白藜芦醇前后ICa-L的变化,并分别记录给予蛋白激酶G(PKG)特异性激动剂8Br-cGMP(100 μmol·L-1)、PKG特异性拮抗剂H8(5 μmol·L-1)后白藜芦醇对ICa-L的影响。 结果: (1)白藜芦醇呈浓度依赖性抑制ICa-L,1、50、100 μmol·L-1可使ICa-L峰值分别低18.31%±0.68%,56.20%±2.19%,84.51%±2.52%(n=5,P<0.05),但对ICa-L激活电位、峰电位、反转电位均没有影响;(2) 100 μmol·L-1 8Br-cGMP轻度抑制ICa-L,电流密度低10.50%±1.11%,100 μmol·L-1 8Br-cGMP+50 μmol·L-1白藜芦醇使ICa-L电流密度降低87.58%±3.49%(n=6,P<0.05);(3)5 μmol·L-1 H8对ICa-L无影响,5 μmol·L-1 H8+50 μmol·L-1白藜芦醇对ICa-L无抑制作用。 结论: 白藜芦醇浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞ICa-L,此作用机制可能与PKG激活有关。  相似文献   

8.
威麦宁对小鼠Lewis肺癌细胞周期的影响(英)   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
目的:探讨威麦宁对小鼠Lewis肺癌的抑制作用,并检测其对细胞周期的影响。 方法:采用流式细胞术分析、免疫组化法检测药物对模型鼠肿瘤细胞周期及对cyclin D1表达的影响。 结果:威麦宁浓度在100 mg·kg-1·d-1、150 mg·kg-1·d-1、200 mg·kg-1·d-1、250 mg·kg-1·d-1时,对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为19.14%、33.59%、40.63%、51.56%, 药物对肿瘤的抑制作用具有剂量依赖性;该药物可将肿瘤细胞阻滞在G0-G1期,并降低肿瘤细胞cyclin D1的表达(P<0.01)。 结论:威麦宁对小鼠Lewis肺癌抑制作用的机制之一可能是通过降低肿瘤细胞cyclin D1的表达,将肿瘤细胞阻止于G0-G1期,使细胞不能进入S期进行DNA复制,从而抑制肿瘤的生长。  相似文献   

9.
VEGF诱导血管内皮细胞产生H2O2及其促增殖作用   总被引:4,自引:2,他引:2       下载免费PDF全文
目的: 研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法: ① 以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测 500 μg/L VEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;② 以MTT法检测3×106 U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-20 mmol/L H2O2对VEGF促增殖功能的影响。结果: ① 在VEGF刺激血管内皮细胞 15 min 后,细胞内开始出现逐渐增强的荧光,且随时间逐渐增强,至 45 min 左右最强,随后逐渐减弱;而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生,且荧光强度不随时间变化;② 3×106 U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用(P<0.01);③ 外源性加入5-10 mmol/L H2O2 时对血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.01),但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用(P<0.01)。结论: VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H2O2,在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H2O2对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。  相似文献   

10.
目的:研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员对外周血单个核细胞(PBMNC)中树突状细胞(DC)亚群及其功能的影响。方法:以CD34-Lin- HLA-DR+细胞群设门4色荧光分析方法检测25例无关供者G-CSF动员前、后外周血细胞DC亚群;ELISA检测其血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4活性,并分析DC1/DC2(CD11c+CD123- /CD11c-CD123+)比值与CD34+细胞含量的相关性。结果:G-CSF动员后, 供者PBMNC 的DC1/DC2比值显著低于动员前(P<0.05);DC1/DC2与CD34+细胞含量呈负相关(r=-0.438, P<0.05),CD34+细胞/MNC≥0.4%时, DC1/DC2倒置;而血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4水平无显著改变(P>0.05); DC2 HLA-DR表达上调而CD83不表达。结论: G-CSF动员后,供者外周血CD34+细胞数量增加的同时,DC2数量也增加,这些DC2尽管HLA-DR表达上调,但仍处前体细胞状态,不直接分泌或调节Th2细胞分泌免疫抑制因子。  相似文献   

11.
目的: 探讨胶质瘤细胞中的维甲酸合成调控机制,以及维甲酸对人脑胶质瘤细胞SWO-Z2的增殖抑制作用及可能的机制。方法: 运用小分子RNA干扰Krüppel 样转录因子9(KLF9);Real-time PCR和Western blotting检测 KLF9 基因RNAi沉默效率。 KLF9 基因干扰后,运用Western blotting检测醛脱氢酶1家族成员A1(ALDH1A1)蛋白表达的变化。应用CCK-8法从3种类型维甲酸药物(13-顺维甲酸、9-顺维甲酸和全反式维甲酸分别简称13- cis RA、9- cis RA和ATRA)中筛选出对SWO-Z2细胞活性抑制作用最强的药物。Western blotting检测不同浓度ATRA作用SWO-Z2细胞后增殖相关蛋白cyclin D1、Bcl-2、cleaved PARP以及胶质瘤分化标记物GFAP的表达情况。Real-time PCR检测SWO-Z2细胞的维甲酸受体表达情况。结果: 小分子RNA干扰 KLF9 基因后, 成功下调KLF9表达,引起ALDH1A1 mRNA和蛋白表达都下降。3种类型维甲酸中ATRA对SWO-Z2细胞的增殖活性抑制作用最强。ATRA作用SWO-Z2细胞72 h后cleaved PARP蛋白激活,cyclin D1和Bcl-2表达水平下降,而GFAP表达没有改变。SWO-Z2细胞维甲酸受体(RARs)表达降低。结论: KLF9作为 ALDH1A1 基因的上游调控基因,通过正调控 ALDH1A1 基因的表达促进胶质瘤细胞中的维甲酸合成;ATRA处理SWO-Z2细胞后未能促进胶质瘤分化而是明显抑制肿瘤细胞增殖能力,可能是由于胶质瘤细胞内缺乏维甲酸受体所致。  相似文献   

12.
目的: 探讨黑色素瘤相关抗原H1(Mage-H1)在细胞增殖和分化调控中的作用。方法: 神经生长因子(nerve growth factor, NGF)诱导PC12细胞分化后用相差显微镜对其形态学进行观察。通过RT-PCR、Western blotting 检测分化前后Mage-H1表达变化情况。流式细胞技术分析PC12细胞瞬时表达Mage-H1对细胞周期的影响。结果: 经NGF诱导8 d后,92%以上PC12细胞属于已分化细胞。分化后的PC12细胞与对照组相比,Mage-H1表达上调。PC12细胞瞬时表达Mage-H1后被明显阻滞在G0-G1期。结论: Mage-H1可抑制PC12细胞增殖并促进细胞的分化。  相似文献   

13.
目的: 探讨过氧化氢(H2O2)对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在其中的作用。方法: 采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H2O2处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性,采用RT-PCR检测 COX-2 mRNA的表达水平,采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果: H2O2增强COX-2表达,呈浓度和时间依赖性。100 μmol/L H2O2处理肺动脉内皮细胞4 h,COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组,COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%(P<0.05),蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%(P<0.05)。 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H2O2的这一效应。结论: H2O2可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达,CaMKⅡ是H2O2增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。  相似文献   

14.
目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)分化中神经元特异性蛋白表达与细胞凋亡的关系。 方法: 分别用BDNF和β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs分化为神经元样细胞,在诱导1 h、6 h、12 h及24 h后用蛋白质印迹法检测神经元特异性蛋白(nestin、NSE、MAP-2及GFAP)的表达,同时用流式细胞仪检测各时点的细胞生长周期及细胞凋亡。 结果: 蛋白质印迹法结果显示β-ME和BDNF诱导的细胞均能表达神经元特异性蛋白:nestin和NSE,不表达MAP-2;神经胶质细胞特异性蛋白GFAP也有较弱表达。β-ME组诱导12 h后nestin的表达转为阴性,NSE表达也减弱,而BDNF组直至24 h nestin和NSE表达才渐转阴性;BDNF诱导的细胞S期百分率均较同时点的β-ME组高,β-ME在诱导后12 h出现了凋亡峰,BDNF诱导组在观察的时点内均未出现凋亡峰。 结论: β-ME诱导细胞的神经元特异性蛋白表达的减少与细胞凋亡在时间上一致,说明分化后细胞死亡的原因可能与凋亡有关;而BDNF诱导细胞的蛋白表达减少与细胞凋亡无关,提示BDNF诱导分化后的细胞死亡可能还与其它因素有关或者BDNF可能有抗凋亡作用。  相似文献   

15.
为研究单胺氧化酶抑制剂(TCP)对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的诱导分化作用,以不同浓度TCP单独或与100nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)联合处理U251细胞。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;Hoechst 33258染色显示细胞凋亡;Real-time PCR和Western印迹法检测分化相关基因mRNA和蛋白表达水平的改变。结果表明:TCP可诱导细胞突起增多且变细长,抑制细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期,抑制全能性转录因子Oct4和Sox2的表达,上调分化标志基因胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,TCP联合TSA也诱导了GFAP的高表达。这些结果提示:TCP可诱导胶质瘤U251细胞分化,TSA对TCP诱导细胞分化有协同作用。  相似文献   

16.
目的: 探讨defensin α1 对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株1097增殖的影响以及可能的机制。方法: 利用MTT掺入观察不同浓度的基因重组人类defensin α1在不同作用时间对系膜细胞增殖的影响,选择能够刺激系膜细胞生长的浓度及作用时间给予U0126预孵育,观察能否阻断defensin α1促系膜细胞增殖作用,使用Western blotting了解defensin α1对系膜细胞ERK1/2磷酸化及Ⅳ型胶原合成的影响。结果: Defensin α1在3-20 mg/L 范围内对系膜细胞具有促生长作用,12 h达到峰值(P<0.01)。当浓度大于20 mg/L时可抑制系膜细胞的生长,浓度在15-25 μmol/L U0126可以阻断defensin α1对系膜细胞的促生长作用。浓度为3 mg/L defensin α1刺激5 min后可使ERK1/2磷酸化明显增加,作用12 h后系膜细胞的IV胶原蛋白表达高于对照组并持续到48 h(P<0.01)。结论: 一定浓度的defensin α1可以促进系膜细胞的增殖和细胞外基质的合成,这种促增殖作用可能是通过MAPK途径实现的。  相似文献   

17.
p53 mutation is associated with “gain-of-function” capabilities of human cancers. We aim to identify p53 mutations in human glioma cells and to explore the potential mechanism for mutant p53-promoted cellular growth. Whole genomic DNA was isolated from SWO-38, a human glioma cell line and amplified for the region of exons 5, 6, and 8 in p53 gene using polymerase chain reaction (PCR). By means of direct sequencing of PCR products and alignment analysis using BLAST database, a mutation of G to C transition at codon 280 of p53 exon 8 (AGA → ACA), i.e. R280T was detected in SWO-38 cells. Knockdown of R280T mutant p53 by RNA interference inhibited the GSK-3β/PTEN associated cell proliferation, and PI3K/Akt but not Wnt/β-catenin signaling pathway was involved in this process. Furthermore, depletion or overexpression of PTEN alone did not affect cell proliferation and cell cycle, implicating the impairment of PTEN function in SWO-38 cells. However, knockdown of both PTEN and p53 mutation could significantly rescue the p53 depletion-mediated growth inhibition, suggesting that the R280T mutation in glioma may promote the proliferation through an underlying mechanism related to PTEN. Our observations indicate that the R280T mutation of p53 regulates the proliferation of human glioma cells related to the GSK-3β/PTEN pathway. These findings provide valuable insights for better understanding the molecular mechanism of uncontrolled growth of glioma cells.  相似文献   

18.
目的:研究中药复方茯苓制剂对培养大鼠前脂肪细胞增殖和分化的影响,并探讨其可能的作用机制。 方法: 原代培养大鼠前脂肪细胞,采用细胞计数、MTT方法测定细胞的增殖,油红O染色方法测定细胞分化,RT-PCR方法检测PPARγ基因表达的变化。 结果: 复方茯苓制剂能抑制原代培养大鼠前脂肪细胞的增殖和分化,并能抑制PPARγ基因表达。 结论: 复方茯苓制剂可能抑制原代培养大鼠前脂肪细胞的增殖,并能通过抑制PPARγ基因表达进而抑制其分化。  相似文献   

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