川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质Bc1-2表达的影响

目的:研究川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2表达的影响.方法:以线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹、2, 3, 5-氯化三苯四氮唑(TTC)、 H-E染色和神经行为相结合的方法,观测缺血再灌注侧大脑皮质内Bcl-2的表达、脑梗塞体积、脑组织结构及神经功能的变化.结果:与缺血再灌注组(I 2h/R24h)比较,川芎嗪组的Bcl-2表达明显增高,脑梗塞体明显缩小,脑组织的病理损伤和神经异常行为明显减轻.结论:川芎嗪可通过上调Bcl-2的表达,缩小脑梗塞的体积和减轻脑缺血区组织结构的损伤以及明显改善神经症状,对脑缺血再灌注损伤有保护作用.     

桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质神经元Caspase-3与p53表达的影响

目的:探讨桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质神经元Caspase-3与p53表达的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、桃红四物汤低、中、高剂量组(0.7 g/kg、1.4 g/kg、2.1g/kg)共6组。采用改良后的Longa线栓法制备大脑中动脉阻塞再灌注模型,缺血90分钟再灌注24小时后,桃红四物汤各剂量组分别以桃红四物汤低、中、高剂量灌胃绐药量为1 ml/100 g,正常组和假手术组以等容量生理盐水灌胃。至第8天时将各组大鼠处死并取脑。通过2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法观察各组大鼠脑梗死体积及梗死体积率;TUNEL染色法显示大脑皮质凋亡神经元的形态和数量,免疫组织化学染色法观察半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)与p53的表达情况。结果:与模型组比较,桃红四物汤各剂量组均能降低大鼠脑梗死体积与梗死体积率(P0.01);减少大脑皮质顶叶区凋亡神经元(P0.01),降低大脑皮质顶叶区神经元Caspase-3与p53的表达(P0.01);并且其治疗效果随桃红四物汤给药剂量的增加而增强(P0.01)。结论:桃红四物汤能够抑制脑缺血再灌注损伤后大鼠大脑皮质神经元Caspase-3与p53的表达。     

高脂血症大鼠脑缺血/再灌注后p38 MAPK活化及对Bax和Bcl-2表达的影响

目的 检测高脂血症大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后大脑皮质内磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)、Bax和Bcl-2表达变化,及SB203580对p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2表达的影响,研究在高脂血症脑I/R损伤中p38 MAPK活化对Bax和Bcl-2表达的影响。方法 大鼠高脂血症模型建立后,将其随机分为3组,假手术组(sham)、手术组(I/R)、SB203580处理组(SB+I/R),每组10只。线栓法建立左侧大脑中动脉栓塞I/R模型,神经行为学评分观察大鼠神经行为损伤症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色显示脑梗死灶,TUNEL染色观察凋亡细胞,免疫组织化学法分析p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2相对表达水平。结果 与sham组比较,I/R组大鼠脑梗死体积百分比、细胞凋亡指数和神经行为学评分均显著升高,且p-p38 MAPK、Bax表达明显增高,Bcl-2表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与I/R组比较,SB+I/R组大鼠脑组织损伤减轻,梗死灶明显缩小,细胞凋亡指数明显降低,p-p38 MAPK表达明显降低,Ba...     

胡黄连苷Ⅱ干预脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的作用机制

目的 探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的影响及其神经保护作用机制.方法 成年健康雄性Wistar大鼠150只,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,按照随机对照原则,动物分为假手术组、模型组、胡黄连苷组、茴香霉素(p38 MAPK激活剂)组、茴...     

高血脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马内bFGF表达的影响

目的:研究高血脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马内碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法:高脂饮食建立高血脂模型。以线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血再灌注模型,采用蛋白印迹和神经行为学相结合的方法,观察缺血再灌注侧海马内bFGF的表达及其意义。结果:与假手术组比较,脑缺血再灌注组bFGF的表达均增高,其变化趋势均为1 d有所升高,3 d达高峰,7 d后下降。在相同再灌注时间点内与脑缺血再灌注组比较,高血脂合并脑缺血再灌注组bFGF的表达减少。结论:脑缺血再灌注损伤后bFGF的表达是呈动态变化的。高血脂可能影响bFGF的分泌。     

高血脂对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:通过检测大脑皮质内Bcl-2和Bax蛋白的表达,探讨高血脂加重脑缺血再灌注损伤的可能机制.方法:高脂饲料喂养建立高脂血症动物模型,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.神经行为学评分观察大鼠神经行为改变、TTC染色检测梗死灶体积、免疫印迹检测Bcl-2和Bax的表达.结果:与假手术组比较,单纯脑缺血再灌注组和高血脂合并脑缺血再灌注组Bcl-2和Bax表达增加,并随再灌注时间的延长表达逐渐增加,再灌注24 h时达高峰,而后又降低.相同再灌注时间点,与单纯脑缺血再灌注组比较,高血脂合并脑缺血再灌注组Bcl-2减少但Bax增加.结论:高血脂可通过影响Bcl-2和Bax蛋白的表达,使Bcl-2/Bax值降低,加重脑缺血再灌注损伤.     

P38丝裂原活化蛋白激酶在炎症因子诱导糖尿病肾病中的作用

近年来的研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)是细胞将信号从细胞膜传递到细胞核的主要通路.其中p38MAPK可通过调节转化生长因子β1、核因子-κB及血管内皮生长因子等炎症因子的表达影响糖尿病肾病的进程.研究p38MAPK及其信号转导通路机制可能为糖...     

天麻素通过蛋白激酶B/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制H9c2心肌细胞凋亡

目的采用血清剥夺/复灌的大鼠H9c2心肌细胞模拟心肌缺血/再灌注损伤(I/R),从细胞层面探讨天麻素(gastrodin)抗H9c2心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞随机分为对照组、血清剥夺(0.5~6 h)处理组、血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组、天麻素(10、20和40μmol/L)处理组、天麻素(20μmol/L)+渥曼青霉素(wortmannin)(1μmol/L)处理组、wortmannin (1μmol/L)处理组。采用免疫印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt以及凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡;通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达变化;采用免疫荧光双标记法检测细胞内p-Akt蛋白水平表达的变化。结果血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理诱导细胞凋亡水平增加;加入不同浓度天麻素处理,与血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组比较,凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值上调(P0.05),基因转录水平检测的Caspase-3和Bax表达量降低,Bcl-2表达量上调((P0.05),流式细胞术凋亡检测结果也同样显示,天麻素能抑制血清剥夺/复灌(2/4 h)诱导的细胞凋亡(P0.05);同时,血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理能抑制Akt/p38MAPK信号通路;加入不同浓度的天麻素(10、20和40μmol/L)处理后,p-Akt的表达水平增多,p-p38MAPK蛋白表达减少(P 0.05)。加入Akt的特异性抑制剂wortmannin(1μmol/L)处理后,天麻素对上述因子的调控作用被反转(P0.05)。结论在H9c2心肌细胞中,天麻素通过激活Akt/p38MAPK信号通路,抑制血清剥夺/复灌诱导的细胞凋亡,从而发挥抗心肌I/R损伤的保护作用。     

磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶在大鼠睾丸的表达

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的3个亚家族成员细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N-端激酶(JNK)和p38 MAPK的活化形式在睾丸中的定位,了解MAPKs在生精过程中所起的作用。方法免疫组织化学方法检测正常大鼠睾丸中磷酸化的p-ERKJ、NK、p38 MAPK的表达情况。结果正常大鼠睾丸中p-ERK主要分布于精原细胞、细线前期到粗线期的初级精母细胞以及9~12期长形精子细胞的细胞核,p-JNK则主要位于支持细胞与支持细胞、支持细胞与生精细胞(尤其是19期精子细胞)之间,而p-p38 MAPK除了在生精小管的部分细胞胞质中有分布外,其表达最明显的部位是在间质细胞的细胞质。结论ERKJ、NK和p-38 MAPK分别定位于正常大鼠睾丸内的不同部位,提示MAPKs不同的亚家族成员分别在精子发生的不同环节中发挥主要作用。ERK可能参与生精细胞增殖、分化的信号转导,JNK则可能通过调节细胞的黏附而最终影响生精细胞的迁移与精子释放过程,而p38 MAPK除了可能与JNK一起参与精子释放的调节外,最主要的作用可能是睾酮合成分泌的调节。     

电针水沟、百会穴对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质神经元凋亡的影响

背景:脑缺血再灌注损伤常见于缺血性脑卒中,严重影响患者预后,因此探索有效缓解脑缺血再灌注损伤的治疗方法十分重要。电针可有效改善缺血性脑卒中神经功能的缺损症状。目的:探讨电针治疗对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及其对大脑皮质神经元凋亡的影响。方法:将48只雄性3月龄的SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组16只。模型组及电针组所有大鼠进行左侧大脑中动脉脑缺血再灌注造模,缺血2 h,再灌注6 h;假手术组大鼠仅暴露并游离颈动脉。然后对电针组大鼠进行“水沟”“百会”穴的电针干预,选择疏密波,频率3 Hz/15 Hz,强度1 mA,干预20 min,1次/d,连续5 d。模型制作后第5天,使用Longa神经功能评分对所有纳入实验的大鼠进行神经功能受损程度评定;TTC染色观察脑梗死体积;ELISA法检测炎症因子水平;TUNEL法检测细胞凋亡情况;荧光定量PCR及Western blot分别检测大脑皮质区半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)mRNA及蛋白的表达水平。结果与结论:(1)与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分明显升高(P<0.01);脑梗死体积明显增大(P<0.01);左侧大脑皮质区TUNEL阳性细胞数量明显增多(P<0.01);血清炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α表达水平升高(P<0.05,P<0.01,P<0.01);大脑皮质区Caspase-3、Caspase-8 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01,P<0.01);(2)与模型组相比,电针组大鼠神经功能评分降低(P<0.05);脑梗死体积减小(P<0.05);左侧大脑皮质区TUNEL阳性细胞数量明显减少(P<0.01);血清炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α表达水平均降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05);大脑皮质区Caspase-3、Caspase-8 mRNA及蛋白表水平明显降低(P<0.01,P<0.01);(3)提示电针治疗可能通过抑制大鼠大脑皮质神经元凋亡,缓解脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。     

糖尿病大鼠肾小管骨调素和p38MAPK表达的动态研究

目的:动态观察骨调素（OPN）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾小管的表达，探讨它与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB（NF-κB）及肾损害之间的关系。方法：雄性SD大鼠，注射STZ诱导糖尿病（DM），随机分成5组，每组分别设鼠龄匹配的正常对照组。免疫组化方法检测肾小管OPN、p38MAPK、NF-κB及纤连蛋白（FN）的表达；Western印迹法检测肾皮质OPN和p38MAPK蛋白质水平；生化方法测定血糖、血肌酐及24 h尿蛋白量；光镜检查肾组织的形态改变。结果： Western印迹和免疫组化检测发现糖尿病3 d大鼠肾组织p38MAPK和DM 7 d OPN的表达增多，并随病程发展而增加，与正常对照组比较有显著差异（P<0.01）。DM 4周，肾小管OPN的表达与p38MAPK、NF-κB、FN表达及蛋白尿呈显著正相关。结论： 糖尿病大鼠肾小管OPN表达增加参与了糖尿病肾小管间质损害的发病机制；肾小管p38MAPK可能介导了DM状态时NF-κB的表达，进而调节OPN的表达增多。     

眼针对脑缺血再灌注损伤72小时大鼠海马组织ICAM表达的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注模型大鼠海马组织细胞间黏附因子(intercellular adhesionmolecule,ICAM)表达的影响,探讨眼针对脑缺血再灌注损伤治疗的机制。方法应用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用眼针治疗,于缺血再灌注后72h进行神经功能缺损评分,采用Western blot方法、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定海马组织ICAM蛋白及mRNA表达的变化。结果缺血再灌注损伤模型组分别与正常组和假手术组比较,大鼠神经功能缺损评分明显升高,且Western结果显示模型组ICAM蛋白量升高,mRNA的表达上调。与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损评分明显下降,眼针组大鼠海马组织ICAM蛋白及mRNA表达明显下调(0.05)。结论眼针具有明显的改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制之一可能与下调海马组织ICAM表达有关。     

p38蛋白激酶对支气管哮喘大鼠Th2类细胞因子表达的调控

目的：探讨p38蛋白激酶（p38 MAPK）对支气管哮喘大鼠Th2类细胞因子IL-4、IL-5表达的调控作用。 方法： 分离培养正常和哮喘大鼠外周血T淋巴细胞。采用蛋白质印迹方法检测细胞核蛋白p38蛋白激酶，采用原位分子杂交方法检测IL-4、IL-5的mRNA，采用ELISA方法检测上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度。 结果： 哮喘对照组T淋巴细胞核蛋白p38蛋白激酶、IL-4、IL-5的mRNA表达阳性细胞数百分比以及上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度均显著高于正常对照组（P<0.01）。加入递增浓度的SB203580处理后，上述指标均较哮喘对照组显著降低（P<0.05）。T淋巴细胞核蛋白p38蛋白激酶含量与IL-4、IL-5 mRNA原位分子杂交染色阳性细胞的百分比均呈显著正相关（r=0.71、0.63，P<0.01），与培养上清液中IL-4、IL-5蛋白质含量之间亦均呈显著正相关（r=0.68、0.57，P<0.01）。 结论： p38蛋白激酶在转录和翻译水平调控支气管哮喘IL-4和IL-5的表达。p38蛋白激酶抑制剂可望成为临床治疗哮喘的新途径。     

白细胞介素1β通过p38信号通路上调系膜细胞表达白细胞介素6

目的：探讨p38信号通路(p38MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β上调肾小球系膜细胞表达白细胞介素6(IL-6)中的作用。方法：应用Western Blotting检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度，应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELJSA法检测IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质IL-6的表达水平并观察p38MAPK特异性抑制剂SB203580对其mRNA的转录和蛋白质生成的影响。结果：IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞IL-6表达。SB203580以剂量依赖方式从基因转录和翻译水平显著抑制IL-1β诱导的IL-6表达。结论：p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL-6中起重要作用。     

瑞舒伐他汀预处理对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨瑞舒伐他汀预处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤脑组织Bcl-2和Bax表达的影响。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血/再灌注组(I/R组)、溶剂对照组(Vehicle组)和瑞舒伐他汀预处理组(Ros组)。Ros组在模型制备前用瑞舒伐他汀5 mg/kg/d连续灌胃10 d,1次/d;Vehicle组用相同体积的生理盐水连续灌胃10 d。线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型,于缺血2 h后再灌注24 h后行神经功能评分,断头取脑,免疫组织化学法和RT-PCR法观察脑组织Bcl-2和Bax表达水平的变化。结果:大鼠脑缺血/再灌注损伤后,Bcl-2和Bax显著增多;与I/R组和Vehicle组相比,Ros组神经功能改善,Bcl-2的表达显著上调,Bax的表达显著下调,Bcl-2/Bax比值显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:瑞舒伐他汀预处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能与上调脑组织中Bcl-2的表达,下调Bax的表达,Bcl-2/Bax比值增加,从而抑制胞凋亡有关。     

P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在免疫性疾病中的研究进展

P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号转导通路在机体的免疫应答反应中发挥着重要作用,包括与类风湿性关节炎、原发性干燥综合征、寻常型天疱疮、炎症性肠病、系统性红斑狼疮、骨关节病、银屑病、自身免疫性脑脊髓炎等疾病密切相关.其不仅参与免疫性疾病炎性介质的调节,还参与其发生发展相关基因的调控,因此探讨P38MAPK信号转导通路在免疫性疾病中的作用可为免疫性疾病在临床中的治疗研究提供新的思路.     

内毒素诱导p38MAPK信号转导作用的研究进展

The diseases caused by endotoxin have seriously affected human health. Previous studies have shown that p38 MAPK pathway is involved in the intracellular signal transduction induced by lipopolysaccharide (LPS), which plays an important role in the activation of inflammation-related cells to release inflammation mediator. Recently there have been some progresses in the isoforms distribution, substrate, molecular mechanism of regulating the release of inflammatory mediators, cellular specific activation and levels of p38 MAPK.