胶原诱导的关节炎大鼠关节中浸润的T细胞TCR Vβ克隆型分析

目的：研究胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠关节中局部浸润的T细胞TCR Vβ克隆型。方法：用Ⅱ型胶原（CⅡ）诱导Lewis大鼠发生关节炎后，经流式细胞术分析大鼠外周血CD4^＋和CD8^＋细胞的变化。提取CIA大鼠关节组织的总RNA，通过RT-PCR／SSCP方法分析大鼠两后肢足关节中TCR Vβ克隆型的一致率。将CIA大鼠脾淋巴细胞转移至同系正常大鼠，观察发病情况。结果：从注射CⅡ的第30天起，大鼠后爪出现红、肿等症状。流式细胞术分析显示，与正常大鼠相比较，CIA大鼠外周血CD8^＋T细胞的降低有显著性意义（P〈0．01），CD4^＋T／CD8^＋T的比值大于2（P〈0．01），提示CIA大鼠体内存在T淋巴细胞亚群的比例失调。CIA大鼠两后肢足关节中聚集的TCR Vβ克隆型的一致率，以TCR Vβ5．2和8．2最高，分别为78．89％和72．23％。脾淋巴细胞转移试验显示，受者发病的大鼠关节中，出现与供者CIA大鼠一致的TCR Vβ克隆型条带，表明关节局部聚集的TCR Vβ克隆型与关节炎（RA）的发病有关。结论：CIA大鼠关节局部存在以TCR Vβ5．2和8．2为主的致病性的T细胞TCR Vβ克隆型，可将其作为治疗CIA的靶物质，进行实验动物RA治疗的研究。     

重肌灵片对ⅡA型重症肌无力外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子IFN-γ、IL-4、TGF-β水平的影响

目的：探讨重肌灵片对重症肌无力（MG）患者的细胞免疫调节机制。方法：将60例MG患者随机分为治疗组30例、对照组30例，治疗组服用重肌灵片及泼尼松模拟片；对照组服用泼尼松片及重肌灵模拟片，疗程12周。应用流式细胞仪检测重症肌无力患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况；ELISA法测定患者外周血单个核细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-4和TGF-B的水平。结果：两组患者治疗后CD4^＋T细胞百分率、CD4^＋／CD8^＋比值均有明显下降，治疗组CD4^＋／CD8^＋比值与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。治疗组治疗后CD8^＋T细胞百分率明显增加，与治疗前比较有显著性差异（P〈0．05），而对照组治疗后CD8^＋T细胞百分率无明显变化（P〉0．05）。与治疗前比较，治疗组治疗后IFN—γ、IL-4水平降低（P〈0．01），TGF-β水平升高（P〈0．01），而对照组三者水平皆降低。结论：通过调节T淋巴细胞亚群比例分布以及IFN-γ、IL-4、TGF-β等细胞因子的分泌，可能是重肌灵片发挥免疫调节作用机制之一。     

休克期大面积切痂对严重烧伤大鼠细胞免疫功能影响的研究

目的 观察休克期大面积切痂对严重烧伤大鼠细胞免疫功能的影响，探索改善烧伤后机体免疫功能紊乱的有效方法。方法 将大鼠分成休克期切痂组（A组）、常规切痂组（B组）和正常对照组（C组）。A、B组造成30％TBSAⅢ度烫伤，C组不烫伤。A组伤后第6h、B组伤后第4d切痂，并于伤后第1、5、9d各活杀10只，取材送检，观察其免疫指标的变化。结果 （1）A、B组与C组比较：A、B组烫伤大鼠各时相点CD3^＋T细胞变化不大（P〉0．05），但CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显下降、CD8^＋T细胞增高（P〈0．05或P〈0．01）。NK细胞活性明显下降（P〈0．05或P〈0.01），外周血CD25^＋T淋巴细胞表达及经活化后脾脏CD25^＋T淋巴细胞表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。（2）A组与B组比较：A组CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显升高、CD8^＋T细胞降低（P〈0．05或P〈0．01），NK细胞活性明显升高（P〈0．05或P〈0．01），外周血CD25^＋T淋巴细胞表达及经活化后脾脏CD25^＋T淋巴细胞表达均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论 （1）大鼠烫伤后细胞免疫状况发生了明显变化。（2）休克期切痂可以改善烫伤大鼠T淋巴细胞亚群分布，提高NK细胞活性，增加外周血CD25^＋T淋巴细胞的表达。提高经活化后脾脏CD25^＋T淋巴细胞数。从而改善烫伤大鼠伤后机体的细胞免疫功能。     

大鼠脑缺血后IFN-γ mRNA的表达

目的：检测SD大鼠脑缺血后缺血脑组织和外周免疫淋巴细胞干扰素-γ（IFN-γ）mRNA的表达，探讨IFN-γ在脑缺血中的作用。方法：用线拴封闭大脑中动脉的方法制作脑缺血动物模型，采用原位杂交的方法检测缺血脑组织及外周淋巴组织中IFN-γ mRNA动态的变化情况。采用免疫组织化学方法检测缺血脑组织中浸润的T淋巴细胞数量。结合免疫组化和寡核苷酸探针杂交方法，检测T细胞表达IFN-γ。结果：①缺血脑半球IFN-γ mRNA含量较假手术组明显增高（P〈0．001），且随着脑缺血时间延长其表达量增加；②IFN-γ mRNA表达数量随损伤面积扩大而增加（R=0．9780，P〈0．001）；③缺血组外周血单核细胞IFN-γ mRNA水平较假手术组明显增高，12小时达高峰（P〈0．001），而脾淋巴细胞、淋巴结细胞IFN-γ mRNA水平也均比假手术组明显增高，且随着脑缺血时间延长表达量增加（P〈0．05、P〈0．01、P〈0．001）；④随着脑缺血时间的延长，脑内浸润的T细胞数量显著增加（P〈0．05、P〈0．01、P〈0．001）。结论：IFN-γ mRNA表达主要参与大脑损伤后期反应过程，可能加重脑缺血后期的炎症反应。     

动态观察131I治疗对Graves病患者血清细胞因子水平的影响

目的：探讨^131I治疗对Graves病（GD）患者血清细胞因子水平的影响。方法：用放射免疫分析法检测52例GD患者^131I治疗前及治疗后30、90和180天血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α水平，并与血清甲状腺激素进行相关性分析，30例年龄与性别相匹配的健康者作为正常对照。结果：GD患者血清IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于对照组（P〈0．01），IL-2显著低于对照组（P〈0．01）；经^131I治疗，甲状腺功能恢复正常后，IL-1、IL-8水平明显降低，IL-2明显升高，与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；IL-6、TNF-α明显低于治疗前（P〈0．01），但仍高于对照组（P〈0．05）。血清IL-1、IL-6与FIB呈正相关（P〈0．05），IL-2与FIB呈负相关（P〈0．05）。结论：^131I治疗能有效抑制GD患者自身免疫，其治疗前后血清细胞因子的变化可反映GD的免疫动态，可能与发病机制、治疗效果和预后有关。     

鼻咽癌患者树突状细胞对EBV特异性细胞毒T细胞的免疫反应

目的：用负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的鼻咽癌患者树突状细胞（DC）诱导自身CD8^＋T细胞，观察其细胞毒性T细胞的免疫应答能力。方法：在体外分离并诱导成熟HLA—A2基因型鼻咽癌患者自身的DC，分别负载EB病毒抗原LMP-2的HIA—A2限制型两个表位肽段CLGGLLTMV（CLG）和LTAGFIFL（LTA）后，诱导自身CD8^＋T细胞，培养2周后，运用酶联免疫斑点法（Elispot）和HLA-肽四聚体法（Tetramer）检测诱导后T细胞的免疫应答情况。结果：经DC抗原呈递后分泌IFN-γ的CLG和LTA特异性CD8^＋T细胞数，分别为（42．67±33．79）个／孔和（25．67±18．25）个／孔，而呈递前分别为（2．67±1．97）个／孔和（5．33±1．86）个／孔。两者IFN-γ^＋CD8^＋T细胞数均有明显增加（P〈0．05）。CLG和LTA肽段特异性细胞毒性T细胞（CTL）的中位数在呈递前分别为0．135％和1．14％；呈递后则为1．045％和1．945％。两者较呈递前均明显增加（P〈0．05）。结论：负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的DC诱导鼻咽癌患者自身CD8^＋T细胞，可产生特异性CTL，对鼻咽癌患者的免疫治疗具有潜在的应用价值。     

青少年吸毒者免疫细胞、细胞因子和生长激素的改变

目的：通过测定青少年吸食海洛因者外周血中T细胞亚群、Th1／1112细胞因子和血清中的生长激素，从分子水平探讨吸食海洛因对青少年免疫功能和生长发育的影响。方法：用微量全血直接免疫荧光染色，用流式细胞术检测外周血中T细胞亚群；流式细胞（Cytometric bead array，CBA）技术测定Th1／Th2细胞因子；化学发光法测定生长激素。结果：青少年吸食海洛因组（n=20）CD3^＋、CD3^＋＋CIM^＋、CD3^＋＋CIM^＋／CD3^＋＋CD8^＋、Th1细胞因子（IL-2，TNF-α和IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-4，IL-10）低于健康组（n=23）（P〈0．01或0．05）；且Th1细胞因子下降程度大于Th2细胞因子（P〈0．05）；血清生长激素显著高于健康组（P〈0．01）。结论：海洛因降低青少年机体免疫功能，对细胞免疫的损伤大于体液免疫；海洛因能升高青少年血清生长激素，机制需进一步探讨。     

黄芪复方对重症肌无力患者T淋巴细胞亚群及IFN－γ、TNF—α、IL-4和AChRAb的影响

目的探讨黄芪复方对重症肌无力（MG）患者的细胞免疫调节机制及疗效。方法30例患者服用黄芪复方,疗程12周,观察症状改善情况及不良反应。应用流式细胞仪检测MG患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况;应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定患者治疗前后外周血血清细胞因子IFN-γ、TNF—α、IL4及乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）的变化情况：结果经治疗12周后,临床显效率60％（18／30）,总有效率为80％（24／30）。CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值均有明显下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗后CD8^＋T细胞明显增加,与治疗前比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;治疗前血清IFN-γ、IL-4、TNF-α和AChRAb水平显著高于健康组,治疗后IFN-γ、IL-4、TNF-α和AChRAb水平显著降低,与治疗前比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论通过调节淋巴细胞亚群比例分布以及细胞因子水平的变化,可能是黄芪复方发挥免疫调节作用机制之一。     

胶原诱导性关节炎大鼠淋巴细胞的过继转移

目的：探讨类风湿性关节炎（RA）发病的免疫学机制以及II型胶原在疾病发生过程中的作用。方法：用鸡II型胶原（CCII）加完全佛氏佐剂（CFA）免疫Wistar大鼠建立胶原诱导性关节炎（CIA）模型，分别用发病大鼠的T淋巴细胞和血清进行过继转移，以ELISA检测外周血中抗CCII抗 体的水平；用病理组织学方法对炎性关节进行分析。结果：成功建立了CIA大鼠模型，发病率为90％，用T淋巴细胞转移的大鼠，可见明显CIA症状，发病率为40％，实验组大鼠外周血中的抗CCII抗体的水平虽较对照组高，但并无显著性意义（P＞0．05），以血清过继转移的大鼠无一发病，但该组外周血中抗CCII抗体的水平明显高于对照组（P＜0．05），组织学鉴定结果可见炎性部位呈典型的CA病变，结论：CIA可以通过淋巴细胞过继转移，机体对I原产生的特异性细胞免疫应答在CIA发生过程中起着重要的作用。为采用T细胞介导的免疫治疗RA提供了实验基础。     

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞 TLR2、TLR4表达及其与 Th1和 Th2型免疫应答相关性观察北大核心CSCD

目的：研究Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）2、TLR4在过敏性紫癜（HSP）患儿外周血单核细胞的表达及其与Th1和Th2型免疫应答的相关性,探讨TLR2、TLR4在HSP发病机制中的作用。方法选取2011年10月-2012年11月于我院儿内科收治的HSP患儿64例为研究对象,分为HSP无肾损害组（NHSPN,36例）及HSP有肾损害组（HSPN,28例）,另选取我院儿保科健康查体儿童30例作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群及单核细胞TLR2及TLR4蛋白表达,实时荧光定量PCR技术检测外周血单核细胞TLR2 mRNA及TLR4 mRNA的基因相对表达量,ELISA法检测血浆IFN-γ、IL-4、IL-6水平。结果（1） HSP 患儿外周血单核细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA相对表达量及TLR2、TLR4蛋白表达均显著高于正常对照组（P均＜0．01）,HSPN组外周血单核细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA相对表达量及TLR2、TLR4蛋白表达均明显高于NHSPN组（P＜0．05;P＜0．01;P＜0．01;P＜0．01）。（2）HSP组CD3＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞显著降低,CD3＋CD8＋T细胞及CD3＋HLADR＋活化T细胞明显升高（P均＜0．01）。（3）HSP组血浆IL-4、IL-6水平显著高于正常对照组（P＜0．01,P＜0．01）,IFN-γ水平显著低于正常对照组（P＜0．05）,IFN-γ/IL-4比值显著低于对照组（P＜0．01）。（4）HSP组TLR2、TLR4蛋白表达与血浆IL-4、IL-6水平均呈显著正相关（P＜0．01,P＜0．05;P＜0．01,P＜0．01）;与IFN-γ/IL-4比值均呈显著负相关（P＜0．01;P＜0．01）。结论TLR2及TLR4活化可能参与了HSP的免疫发病机制,TLR2及TLR4的过度活化可能与HSP的肾损伤有关。 HSP患儿存在T淋巴细胞亚群失调,功能紊乱,Th1/Th2失衡。活化的TLR2及TLR4可能通过上调Th2型免疫应答介导HSP的免疫发病机制。     

热休克蛋白对子宫内膜癌术后转归的预测价值

目的检测子宫内膜癌患者术后标本中HSP70、HSP90表达,预测子宫内膜癌患者手术后生存期、复发、死亡情况的价值.方法采用Envision免疫组化染色法检测不同标本中HSP70和HSP90的表达.检测100例子宫内膜癌患者手术前及手术后1、2、3、4、5年后标本中HSP70、HSP90的水平,计算100例子宫内膜癌患者生存率及标准误. 结果患者手术前后HSP70,HSP90检测结果显示,生存1、2、3、4、5年的患者的HSP70,HSP90值与术前比有非常显著的统计学差异(:P<0.001).100例子宫内膜癌患者一年生存率为97%,二年95%、三年89%、四年78%、五年72%.结论通过100例子宫内膜癌患者术后HSP70,HSP90水平的检测及生存率的计算,随着生存年限的延长,HSP70,HSP90越来越接近正常,说明HSP70,HSP90的值可以预测子宫内膜癌患者的转归.     

Heat shock proteins HSP25, HSP60, HSP72, HSP73 in isoosmotic cortex and hyperosmotic medulla of rat kidney

The distribution of heat shock proteins (HSP) HSP60, HSP73, HSP72 and HSP25 in the isoosmotic cortex and the hyperosmotic medulla of the rat kidney was investigated using Western blot analysis and immunohistochemistry. HSP73 was homogeneously distributed throughout the whole kidney. The level of HSP60 was high in the renal cortex and low in the medulla. HSP25 and HSP72 were present in large amounts in the medulla. Only low levels of HSP25 and almost undetectable amounts of HSP72 were found in the cortex. HSP25 exists in one nonphosphorylated and several phosphorylated isoforms. Western blot analysis preceded by isoelectric focussing showed that HSP25 predominates in its nonphosphorylated form in the outer medulla but in its phosphorylated form in cortex and inner medulla. Although this intrarenal distribution pattern was not changed during prolonged anaesthesia (thiobutabarbital sodium), a shift from the nonphosphorylated to the phosphorylated isoforms of HSP25 occurred in the medulla. The characteristic intrarenal distribution of the constitutively expressed HSPs (HSP73, HSP60, HSP25) may reflect different states of metabolic activity in the isoosmotic (cortex) and hyperosmotic (medulla) zones of the kidney. The high content of inducible HSP72 in the medulla most likely is a consequence of the osmotic stress imposed upon the cells by the high urea and salt concentrations in the hyperosmotic medullary environment.     

热休克蛋白60与肿瘤关系的研究进展

HSP6 0是一类进化上高度保守的蛋白质家族。生理状态时协助多肽或蛋白质的正确转位、折叠和装配 ,起“分子伴侣”的作用 ;在应激状态下 ,HSP6 0过表达或异位表达 ,作为一种自身抗原被免疫系统识别 ,诱发机体的保护性免疫应答 ,也可作为一种信号分子 ,在信号转导中发挥作用。近年来研究证实 HSP6 0在自身免疫性疾病、传染病、动脉粥样硬化及慢性感染的发病中均发挥重要的作用     

缺血预处理对猪移植肝脏保护作用的研究

目的 通过分析小型版纳猪供肝经过缺血预处理后产生的保护效应，为缺血预处理的临床应用提供理论依据。方法 将实验用小型版纳猪25只随机分成正常对照组（A组）、缺血再灌注组（I／R）、缺血预处理组（IP）。采用HSP70免疫印迹法检测HSP70的表达量，观察先镜下细胞形态学损害。结果 IP组HSP70表达量明显增加（p〈0．01），IP组的急性排斥反应和缺血再灌注损伤明显减轻；结论 缺血预处理对移植肝产生了明显的保护效应，缺血预处理对HSP70的表达起正性调控作用。     

HSP47在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏组织的表达及作用

目的:观察HSP47在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型肾脏组织的表达情况,探讨HSP47在肾小管间质纤维化中的作用.方法:将SD大鼠随机分为模型组(UUO组)和假手术组(Sham组),每组8只.采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型.术后第14天处死动物.观察两组间蛋白尿和血肌酐水平, 运用HE和Masson染色观察肾脏组织形态学改变,采用免疫组织化学方法检测HSP47、胶原Ⅳ(Collagen Ⅳ)的表达.结果:与Sham组比较,UUO组大鼠血肌酐水平升高,蛋白尿差异无统计学意义.光镜下UUO组大鼠肾组织出现不同程度的肾小管扩张、间质炎症细胞浸润,间质面积增宽、部分肾小管萎缩、肾小管上皮细胞空泡样变性.Masson染色结果显示UUO组大鼠肾组织胶原在肾小管周围、间质区显著增多.免疫组织化学结果显示UUO组大鼠肾组织HSP47表达显著增加,在肾小管周围、间质区表达增加最明显;Collagen Ⅳ表达显著增加,在肾小管基底膜、间质区表达增加最明显.结论:HSP47在UUO大鼠模型肾脏组织中表达上调,且与胶原表达部位一致,提示HSP47促进肾间质纤维化,且该作用与其促进胶原蛋白的合成有关.     

HSP27研究现状

热休克蛋白(HSP)是生物体内进化保守的蛋白家族,多种因素可诱导其产生,该家族蛋白具有多种生物学作用,是重要的分子伴侣.HSP 27是HSP家族中小分子量热休克蛋白(sHSP)亚家族中的一员,对生物体起重要作用.HSP 27与临床多种疾病有关,特别是与肿瘤关系密切.     

The Prognostic Impact of Heat Shock Proteins Expression in Patients with Esophageal Cancer: A Meta-Analysis

Purpose

Heat shock proteins (HSPs) are highly conserved molecular chaperones. There are various studies that assess the prognostic value of HSPs in patients with esophageal cancer, but the conclusion remains controversial. This is the first meta-analysis study aiming to summarize the evidence on the suitability of HSPs to predict patients'' survival.

Materials and Methods

Searching PubMed, Web of science and Medline until May 31, 2014, data were compared for overall survival in patients with down-regulated HSPs level with those with up-regulated level. We conducted a meta-analysis of 9 studies (801 patients) that correlated HSPs levels with overall survival. Data were synthesized with hazard ratios (HRs).

Results

The estimated risk of death was 2.93-fold greater in HSP27 negative patients than HSP27 positive patients [95% confidence interval (CI), 1.12-7.62]. When limited to esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), the risk of death in HSP27 negative patients seemed more significant (HR, 3.90; 95% CI, 2.35-6.49). Decreased expression of HSP70 was also associated with worse survival in esophageal cancer (HR, 2.83; 95% CI, 1.90-4.23) and, when limited to ESCC, HR was 3.21 (95% CI, 1.94-5.30). Data collected, however, were not sufficient to determine the prognostic value of HSP90 in patients with ESCC nor esophageal adenocarcinomas (EADC).

Conclusion

In this meta-analysis, reduced HSP27 and HSP70 expressions were associated with poor survival in patients with esophageal cancer, especially esophageal squamous cell carcinoma.     

HSP70及其在气道慢性炎症中的作用

热休克蛋白(heat shock protein, HSP)家族作为分子伴侣在细胞生长、发育、分化、蛋白质合成、基因转录等多方面发挥重要作用,近年来发现其与慢性气道炎症也密切相关,其中又以HSP70作用最为突出而成为研究的热点.HSP70不仅存在于细胞内,也可作为分泌型蛋白被分泌至细胞外与相应受体结合,上调白介素(interleukin, IL)-1β,IL-6,IL-8,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)等炎症介质表达,导致气道炎症反应、黏液高分泌等病理改变.同时HSP70也参与气道黏蛋白的分泌过程,因此了解HSP70 在气道慢性炎症中的作用,将为气道慢性炎症性疾病提供新的治疗方向.     

防暑汤对士兵高温训练前后外周血中HSP72表达及血液生化的影响

目的研究防暑汤对高温训练前后士兵外周血中淋巴细胞热休克蛋白72（HSP72）的表达和血液生化的影响,为防暑药物增强士兵热耐力、预防中暑提供实验依据。方法选取某部普通士兵120人,随机分为两组,每组60人。未饮用防暑汤者为对照组,饮用防暑汤者为实验组。进行高温训练任务的1周内,实验组士兵每日饮用防暑汤300 mL,饮用前及1周后抽取各组外周静脉血,分别进行淋巴细胞HSP72含量、血液常规及生化指标测定。结果饮用前后两组血液常规及生化检测值均在成年男子的正常值范围之内。饮用前,实验组HSP72的表达与对照组比较无显著差异（P〉0.05）;饮用后,实验组HSP72表达显著高于训练前及对照组（P〈0.05）;HSP72表达的增长值,实验组显著高于对照组（P〈0.05）;部分血液常规及生化指标存在显著差异。结论防暑汤能提高士兵受热刺激后表达HSP72的能力,从而起到增强士兵热耐力、预防中暑的作用。     

热应激蛋白70及其抗体在中暑病人血浆中水平改变的观察研究

探讨中暑发生的病理过程中热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）水平及其抗体滴度水平的变化和相互关系。应用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定血浆ＨＳＰ７０水平；应用免包被的酶联免疫吸附分析法经倍比稀释测定血浆ＨＳＰ７０抗体滴度。