β-半乳糖苷酶在ROSAβgeo26小鼠衍生的神经干细胞中的表达变化

目的观察β-半乳糖苷酶(β-gal)在ROSAβgeo26小鼠衍生的神经干细胞(NSCs)中的表达变化。方法体外培养NSCs,并应用X-Gal组织化学和免疫细胞化学染色技术研究NSCs中β-gal的表达变化。结果原代克隆球和亚克隆球的NSCs均稳定表达β-gal;在NSCs分化过程中,NeuN阳性的神经元、GalC阳性的少突胶质细胞和GFAP阳性的星形胶质细胞均表达β-gal,但表达水平有所下降。结论ROSAβgeo26小鼠衍生的NSCs能稳定的表达β-gal,可用作NSCs研究的细胞来源。但在干细胞分化的相关研究中,值得注意存在β-gal不同程度的表达下调现象,并应进一步关注出现该现象的潜在机制。     

大鼠海马内移植神经干细胞的存活和迁移

为观察成鼠神经干细胞移植入切割海马伞侧海马和正常侧海马后的存活和迁移状况 ,用无血清培养和单细胞克隆技术获取成年 SD大鼠前脑室下带组织的神经干细胞 ,并用 Brd U标记、扩增。在切割 SD大鼠右侧海马伞术后 14 d,将标记有 Brd U的神经干细胞植入双侧海马齿状回中。分别于术后 1周、2周、1个月和 2个月时取脑、冰冻切片 ,进行 Nissl染色和 Brd U免疫荧光检测。结果发现 ,1周和 2周时移植细胞主要围绕在移植点周围 ;1个月和 2个月时 ,移植细胞沿着海马齿状回颗粒下层迁移排列成条带。在所有的脑组织切片中 ,切割海马伞侧海马内移植细胞的密度均明显地大于正常侧海马内的移植细胞密度 ,且切割海马伞侧海马内 Nissl深染的大胞体神经元样细胞明显地多于正常侧。提示 ,移植至海马齿状回中的神经干细胞可存活并可沿海马齿状回颗粒下层迁移 ;切割海马伞侧海马中存活和迁移的神经干细胞密度大于正常侧者 ,可能与某种物质的表达增加有关     

大鼠胚胎神经干细胞黑质内移植后的存活及分化

目的：观察胚胎神经于细胞脑内移植后的存活及生长分化状况。方法：从孕11d(E11d)大鼠胚胎神经管获取神经上皮细胞，经神经巢蛋白(nestin)染色鉴定干细胞；同时植入同种大鼠黑质内。于移植后7d、14d取脑，用神经元特异烯醇化酶(NSE)、酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化方法检测移植细胞的存活及分化状况。结果：E11d神经管上皮细胞多数呈nestin染色阳性，黑质内移植后增殖形成细胞团并随时间延长而增大。免疫组化染色显示移植细胞团内有NSE及TH免疫阳性细胞。结论：胚胎神经上皮细胞多数为神经干细胞，黑质内移植后可以存活并分化为多巴胺能神经元。     

红景天苷对新生大鼠海马区神经干细胞分化的研究

目的研究红景天苷药物血清诱导新生大鼠海马神经干细胞向神经元方向分化,并促进所分化神经元细胞发育的作用。方法从新生24h内的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后,加入低、中、高剂量的红景天苷药物血清及对照血清,观察其对神经干细胞分化为神经元的影响,并通过免疫细胞化学染色检测神经干细胞分化为神经元的状况。结果各药物实验组诱导神经干细胞分化为NSE阳性细胞的个数面积与周长明显高于对照组(P<0.05),分化为GFAP阳性细胞的个数明显低于对照组,且呈量效依赖关系。结论红景天苷药物学清在体外可促进神经干细胞向神经元方向分化,在一定范围内存在量效依赖关系,对所分化的神经元细胞有促生长发育作用。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及分化研究

研究新生大鼠海马区脑组织中神经干细胞体外培养方法,为治疗神经系统疾病寻找合适的细胞来源。取新生SD大鼠的海马区脑组织,采用accutase结合机械分离法获取神经干细胞,在含有B－27、碱性成纤维生长因子和表皮生长因子的DMEM／F12无血清培养液中培养;Accutase酶消化后传代培养,取第3代细胞行抗巢蛋白免疫荧光染色鉴定并以含10％胎牛血清培养液诱导分化,神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色检测NSCs向神经元及胶质细胞分化的能力。分离的新生大鼠海马区脑组织中细胞,在无血清培养液中形成大量的神经球,部分神经球出现融合及贴壁分化现象,细胞呈典型NSCs 形态。经巢蛋白染色鉴定,大部分为阳性细胞。神经细胞球经含有胎牛血清培养液培养后,可分化为神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白表达阳性的细胞。从新生大鼠海马组织分离培养的NSCs具有自我更新和增殖能力,在含胎牛血清培养液中具有向神经元和神经胶质细胞分化的潜能。     

神经干细胞移植对大鼠脑损伤β-catenin的表达的影响

目的 通过观察神经干细胞(NSCS)移植治疗大鼠脑损伤前后大脑皮质神经元β-连环蛋白(β-catenin)的表达变化,探讨NSCS移植治疗对脑外伤功能恢复的作用.方法 自由落体撞击大鼠左脑大脑皮质运动感觉区以制作脑外伤模型,移植培养的NSCS,采用免疫组织化学、免疫印迹方法检测脑外伤后2w和4w及脑外伤神经干细胞移植后...     

新生大鼠海马神经干细胞的培养与传代

目的:探讨新生大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分离培养的条件和传代新方法。方法:从新生大鼠海马中分离细胞,采用无血清培养技术,在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)和B27联合作用下使其不断增殖克隆。采用机械吹打和神经小球分离试剂盒两种不同方法进行传代,利用免疫荧光染色的方法对培养的细胞进行鉴定。结果:从新生大鼠海马分离的细胞群可不断增殖形成细胞克隆球,并能稳定传代,呈nestin阳性表达,且具有多向分化能力。采用神经小球分离试剂盒传代的细胞球比机械吹打传代的细胞球生长快,数量多,体积大,折光性好。结论:利用无血清技术和特定生长因子,可以使来源于新生大鼠海马的NSCs在体外扩增,利用大鼠神经小球分离试剂盒可以有效地进行传代,稳定高效地培养出神经干细胞。     

新生大鼠神经干细胞移植对脑缺血再灌注损伤的治疗作用

目的:探讨新生大鼠神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性及疗效.方法:体外培养新生大鼠神经干细胞.采用改良的线栓法制作脑缺血再灌注模型,3d后用脑立体定位仪经脑室移植神经干细胞,移植时间点及再灌注1～7周对移植大鼠进行神经功能损伤程度评分(NSS).再灌注1、 2、 3、 5、 7周末麻醉处死大鼠,脑组织石蜡包埋.免疫组织化学方法观察移植后神经干细胞的存活、分布.结果:神经干细胞表达巢蛋白,在血清条件下分化为表达微管相关蛋白(MAP2)的神经元和表达胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)的星形胶质细胞.神经干细胞移植组NSS评分在各个时间点均显著低于对照组.移植的神经干细胞分布于缺血侧皮质、纹状体,再灌注后3、 5、 7周,皮质、纹状体阳性细胞数分别较1、 2周显著增多,第3、 5、 7周之间差异无统计学意义.前3周组织结构疏松,缺损严重,而第5、 7周组织结构较前3周完整致密.结论:移植的神经干细胞能在脑缺血大鼠脑内存活、迁移,并能改善缺血后大鼠的神经功能状况.     

神经节苷脂联合神经干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用***

背景：应用神经干细胞移植治疗脑损伤后神经功能障碍的实验研究是目前的热点。 目的：观察神经节苷脂联合神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠海马神经元的影响。 方法：健康Wistar大鼠66只,采用改进Feeney法制作创伤性脑损伤致海马神经元损伤模型,存活的60只大鼠伤后24 h给予相应治疗随机分为3组：创伤性脑损伤组注射1 mL DMEM/F12培养液;神经干细胞组注射1×1010 L-1神经干细胞悬液;神经干细胞+神经节苷脂组注射1×1010 L-1神经干细胞悬液后经腹腔注射30 mg/kg神经节苷脂水溶液,1次/d,连续3 d。 结果与结论：荧光显微镜观察PKH26标记的神经干细胞呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;PKH26标记神经干细胞的阳性率为95%。各组平均潜伏时间均逐渐缩短,神经干细胞+神经节苷脂组3~5 d时平均潜伏时间较神经干细胞组缩短(P < 0.05),较创伤性脑损伤组明显缩短(P < 0.01);神经干细胞+神经节苷脂组穿越平台次数及在目标象限游泳距离与总距离百分比均高于其他两组(P < 0.05)。PKH26阳性细胞和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量及脑源性神经营养因子mRNA的表达神经干细胞+神经节苷脂组多于神经干细胞组,神经干细胞组多于创伤性脑损伤组(P < 0.05)。提示神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠海马神经元有保护作用,联合应用神经节苷脂有协同效果。     

联合应用EGF和NGF对成年大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的探讨联合应用表皮生长因子(EGF)和神经生长因子(NGF)对成年大鼠海马神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法用含碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子、B27的无血清细胞培养技术体外培养成年大鼠海马神经干细胞,单克隆培养细胞行Nestin免疫细胞化学染色,诱导分化1w后细胞行GFAP和NSE免疫细胞化学染色;根据培养基中所加营养因子的不同将第4代细胞分为4组培养:EGF组、EGF+NGF组、NGF组、对照组,此4组细胞培养1w后行NSE免疫细胞化学染色,计数阳性细胞比例后进行统计学分析。结果单克隆培养后克隆球表达Nestin,诱导分化1w后细胞表达NSE、GFAP。与空白对照组相比,EGF组、NGF组和EGF+NGF组细胞分化为神经元的比例较高(P<0.05),其中EGF+NGF组细胞的比例最高。结论单独或联合应用EGF、NGF可以促进成年大鼠海马神经干细胞向神经元分化。     

神经干细胞移植对痴呆大鼠记忆功能及海马组织氧化应激的影响

目的 研究神经干细胞移植对β淀粉样蛋白(Aβ1-40)所致痴呆大鼠记忆功能及海马组织丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)的影响.方法 取新生大鼠脑皮质进行神经干细胞的分离、培养、鉴定,传代培养2-3代;选取30只健康SD大鼠随机分为3组,10只,组.对照组:侧脑室注入蒸馏水5μl;模型组:侧脑室注入Aβ1-40 ...     

督脉电针对移植在大鼠脊髓全横断损伤处的神经干细胞存活分化和迁移的影响

目的探讨督脉电针对脊髓全横断损伤处移植的神经干细胞存活、分化和迁移的影响。方法将20只成年SD大鼠分为神经干细胞移植14d组（NSCs14d组）、督脉电针＋神经干细胞移植14d组（电针NSCs14d组）、神经干细胞移植30d组（NSCs30d组）和督脉电针＋神经干细胞移植30d组（电针NSCs30d组）4组。所有动物均实施T10段脊髓全横断手术,其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗。分别于术后14d和30d取材检测移植在脊髓损伤处的神经干细胞存活、分化和迁移情况。结果1．电针NSCs14d组或电针NSCs30d组移植的神经干细胞存活数量均多于NSCs14d组或NSCs30d组,但是电针NSCs30d组或NSCs30d组移植的神经干细胞存活数量均少于电针NSCs14d组或NSCs14d组。2．电针NSCs30d组和NSCs30d组的脊髓全横断损伤处及其相邻的组织均有少量移植的神经干细胞呈现微管相关蛋白2（MAP2）阳性染色。3．电针NSCs30d组和NSCs30d组的脊髓全横断损伤处及其相邻的组织均可观察到较多移植的神经干细胞呈现胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性染色。4．在电针NSCs14d组或电针NSCs30d组,移植的神经干细胞向脊髓损伤处尾端组织迁移的距离明显长于NSCs14d组或NSCs30d组。结论督脉电针能够促进大鼠脊髓全横断损伤处移植的神经干细胞存活,这些细胞能分化为MAP2或GFAP阳性细胞;督脉电针对移植在脊髓损伤处的神经干细胞向宿主脊髓组织迁移方向有一定的影响。     

NGF／GDNF基因修饰神经干细胞植入AD模型鼠脑内的存活、分化及表达

目的 观察NGF／GDNF基因修饰神经干细胞（NGF－NSC和GDNF－NSC）在AD模型鼠脑内的存活、分化及基因产物的表达。方法 将BrdU标记的NGF－NSC和GDNF－NSC单独和联合移植入穹窿海巴伞切断的大鼠侧脑室内。移植后3周,用免疫组织化学方法对脑切片进行BrdU、Nestin、GFAP、NF、NGF及GDNF单标或双标染色。结果 脑室内见到大量BrdU阳性细胞。部分移植细胞向脑实质迁移,在切口周围、穹窿海马伞、海马、胼胝体、隔区、室管膜下区及血管壁旁均可见到BrdU阳性细胞。在皮质和切口周围可见较多的BrdU＋GFAP双标细胞;在海马内可见较多的BrdU NF双标细胞;在脑室内,两者均可见到。在脑室、皮质和海马等处均检测出BrdU＋NGF和BrdU＋GDNF免疫双标阳性细胞。结论 NGF／GDFN基因修饰NSC能在宿主脑内较好地存活,并能分化成神经元和星形胶质细胞,而且能分别表达外源基因产物NGF和GDNF。     

新生鼠和胎鼠海马神经干细胞分离和培养方法的比较

目的:探索大鼠海马神经干细胞离体培养的实验条件和方法,并建立一种简便且获得率较高的实验方法。方法:分别随机选取新生1~3 d SD大鼠和孕18~19 d SD胎鼠,并提取海马组织,采用机械吹打结合胰蛋白酶消化的方法获得单细胞悬液,然后对培养出的细胞进行鉴定和诱导分化,最后测定并分别比较两组原代细胞获得率和增殖率以及凋亡率之间的差异。结果:来源于两种不同发育阶段大鼠的海马组织培养出的细胞均呈Nestin阳性和Brd U阳性的神经球样结构,诱导分化后的细胞高表达βⅢ-tublin和GFAP。其中,胎鼠组原代细胞获得率较高、增殖能力较强,并有统计学差异(P0.05);但两组神经干细胞的凋亡率无明显差异(P0.05)。结论:胎鼠和新生鼠海马组织均能培养出神经干细胞,而且胎鼠组细胞产出率更高。     

嗅鞘细胞联合神经干细胞脑内移植改善Parkinson病大鼠行为的观察

为了观察嗅鞘细胞(OECs)联合神经干细胞(NSCs)脑内移植对Parkinson病(PD)的治疗作用,首先将6-OHDA注射至左侧黑质致密部和腹侧被盖区制备PD大鼠。将成功制备的PD大鼠随机分为5组,即0.9%生理盐水对照组、单纯移植NSCs或OECs组、OECs+NSCs共移植组和PD模型对照组。将培养并传至第3代的NSCs、OECs和OECs+NSCs分别移植到PD大鼠的纹状体内,于移植后7、14、30、60d检测PD大鼠旋转行为变化后处死,取脑做冰冻切片,行BrdU、酪氨酸羟化酶(TH)、p75免疫荧光和TH免疫组织化学检测。移植后21d以内,各组大鼠的旋转行为无明显变化;30d和60d时,单纯移植NSCs或OECs组和OECs+NSCs共移植组与生理盐水和模型对照组相比,旋转行为有较明显的改善(P<0.05),其中OECs+NSCs共移植组的旋转行为改善更为显著。在移植后30d和60d,单纯移植NSCs或OECs组在移植区可见少数TH阳性神经元,而OECs+NSCs共移植组的TH阳性神经元明显多于单纯移植NSCs或OECs组(P<0.05)。上述结果表明:OECs能促进胚鼠中脑来源的NSCs向TH阳性神经元分化;单纯移植NSCs或OECs和OECs+NSCs共移植,均能不同程度地改善PD大鼠的旋转行为,但联合移植优于单纯移植。     

立体定向脑内移植神经干细胞改善颅脑损伤大鼠的神经运动功能

BACKGROUND: Cell replacement therapy as an effective strategy for reconstruction of the central nervous system has very broad application prospects. OBJECTIVE: To investigate the effect of stereotactic transplantation of neural stem cells into the brain on the neuromotor function of craniocerebral trauma rats. METHODS: Twenty male Sprague-Dawley rats were equivalently randomized into study and control groups. Animal models of craniocerebral trauma were made using the improved free-fall method in the rats. Then, model rats in the study and control groups were given parenchymal transplantation of embryonic neural stem cells and the same volume of culture medium with no stem cells at 1 day after injury, respectively. Neuromotor function of rats was assessed based on the neurological severity scores. At 2 weeks after transplantation, brain tissues were taken for hematoxylin-eosin staining, anti-BrdU, glial fibrillary acidic protein, β-tubulin III and tyrosine hydroxylase immunohistochemistry staining. RESULTS AND CONCLUSION: The neurological severity scores in the study group were significantly lower than those in the control group at 1 and 2 weeks after injury (P < 0.05). In the study group, there were many BrdU-positive neural stem cells in the brain tissues, some of which were positive for glial fibrillary acidic protein, β-tubulin III and tyrosine hydroxylase; while in the control group, there was no BrdU-positive cell in the brain tissues. Experimental findings show that neural stem cells stereotactically transplanted into the brain can proliferate and differentiate in the brain lesion, and thereby notably improve the neuromotor function of rats with craniocerebral trauma.  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

大鼠胚脑皮质和中脑神经干细胞移植治疗PD模型鼠的比较研究

为比较大鼠胚胎大脑皮质和中脑神经干细胞(NSCs)移植入Parkinson病(PD)模型鼠后动物行为的改善和植入细胞分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的情况,本研究将大鼠胚胎大脑皮质和中脑NSCs在体外分离、扩增、BrdU标记后,添加或不加白细胞介素-1α(IL-1α)、白细胞介素-11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)等因子,分别移植入PD模型鼠病侧纹状体中。术后每隔2周进行动物旋转行为的检测,第12周时用免疫荧光双重标记方法检测BrdU和TH双标神经元。结果显示:中脑NSCs+因子移植组,动物的旋转行为得到明显改善;单纯中脑NSCs移植组次之;而单纯皮质NSCs移植组、皮质NSCs+因子移植组及生理盐水对照组动物的行为无明显改善。免疫荧光双重染色结果显示,中脑NSCs+因子组和单纯中脑NSCs组BrdU和TH双标神经元的数量明显多于其它组,而中脑NSCs+因子组又多于单纯中脑NSCs组。以上结果提示,大鼠胚胎中脑NSCs移植治疗PD模型的疗效明显优于胚胎皮质NSCs,IL-1α、IL-11、LIF和GDNF等因子能促进移植的中脑NSCs分化为TH阳性神经元。     

衰老相关-β-半乳糖苷酶和P16在老年大鼠脾内的表达及意义

目的:研究衰老相关-β-半乳糖苷酶和P16在老年大鼠脾内的表达及意义.方法:采用组织化学及SABC免疫组织化学检测成年及老年Wistar大鼠脾组织内衰老相关-β-半乳糖甘酶及P16蛋白的表达.结果:衰老相关-β-半乳糖苷酶阳性细胞主要分布于脾内的边缘区及脾索,老年大鼠较成年大鼠阳性细胞数量显著增多.P16阳性细胞也主要分布于脾内的边缘区及脾索;与成年鼠相比,老年大鼠P16阳性细胞显著增多.结论:P16和衰老相关-β-半乳糖苷酶在大鼠脾内高表达,可能与脾的衰老相关.     

神经干细胞移植对大鼠脑损伤锚蛋白表达的影响

目的观察神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑损伤前后大脑皮质神经元锚蛋白(ankyrin)的表达变化,探讨NSCs移植治疗对脑外伤功能恢复的作用。方法体外培养NSCs,自由落体撞击大鼠左脑大脑皮质运动感觉区以制作脑外伤模型,观察脑外伤后1w,2w和4w及脑外伤神经干细胞移植后1w,2w和4w时细胞骨架蛋白ankyrin的表达变化。采用免疫组织化学、免疫印迹来检测Ankyrin的表达变化。结果创伤组SD大鼠大脑皮层ankyrin的表达水平随脑外伤后时间增加(1w-4w)逐渐减少(P0.05),移植组ankyrin的表达水平随时间增加(1w-4w)逐渐增加(P0.05)。结论 NSCs移植对脑外伤的修复作用可能与ankyrin的表达有关。     

神经干细胞移植联用神经节苷脂对脑损伤大鼠神经学功能恢复的影响

背景：研究表明, 神经节苷脂(GM1)通过激活神经营养因子,抑制毒性产物对神经元的损害,并且能够减少兴奋性氨基酸所引起的神经细胞的死亡起到促进神经细胞修复的作用。 目的：神经干细胞移植同时应用GM1,观察两者对脑损伤大鼠恢复的影响。 方法：取健康Wistar大鼠制成重型液压颅脑损伤模型,随机分成3组：损伤组(培养液移植组),神经干细胞移植组,神经干细胞+GM1组。脑损伤后4 d用RT-PCR、Western Blot检测脑组织中AQP4基因表达和蛋白合成的变化,并于脑损伤后24 h,3 d及伤后1,2,3,4 周行动物神经学缺损评分,在脑损伤后21~28 d进行Morris水迷宫试验。4周后处死大鼠行免疫组化、苏木精-伊红染色组织学观察。 结果及结论：脑损伤后4 d脑损伤周围组织AQP4及其mRNA的表达损伤组高于神经干细胞移植组,神经干细胞移植组高于神经干细胞+ GM1组(P < 0.05);移植后1,2,3,4 周,大鼠神经学缺损评分及水迷宫测试结果显示,神经干细胞移植可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经功能,联合应用GM1有协同效果。移植4周后苏木精-伊红染色神经干细胞+ GM1组出现典型的神经细胞样形态学改变且软化灶消失。免疫组化染色结果显示大鼠损伤灶脑组织中的BrdU阳性细胞数神经干细胞+GM1组高于NSCs移植组和损伤组。提示神经干细胞移植可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能,联合应用GM1有协同效果。