关节炎患者滑膜液中的IL-6

本文应用IL 6依赖鼠杂交瘤细胞系检测了9名风湿性关节炎、5名其他炎性关节炎和6名外伤性关节炎患者。结果发现所有关节液都检出IL-6,变动范围为50～22000U/ml。炎症性关节液中IL-6平均高于外伤性,     

类风湿性关节炎患者滑膜液中IL-10、IL-12和sFasL含量的检测

为了研究细胞因子和凋亡分子在类风湿性关节炎(RA)发病中的作用,用ELISA法分析了26例RA患者滑膜液和血清中IL-12、IL-10和可溶性FasL(sFasL)的含量。结果表明RA患者滑膜液中IL-12、IL-10含量分别为(419.9±89.2)pg/ml和(187.7±34.5)pg/ml,外周血中这两种细胞因子的含量均较低,分别为(65.3±34.2)pg/ml(IL-12)和(85.0±12.7)pg/ml(IL-10)。滑膜液中sFasL的含量为266pg/ml,明显高于血清含量(36pg/ml)。这一结果提示,RA患者滑膜液中IL-12含量和sFasL增高,这些炎性细胞因子增高可能参与了关节滑膜中的自身反应性T细胞的活化,继而造成免疫损伤。     

类风湿关节炎患者血清和关节液细胞因子水平的变化及临床意义

目的探讨幼年类风湿关节炎(JRA)及类风湿关节炎(RA)患者IL-6、IL-8、sIL-2R和TNF-α等细胞因子(CK)水平的变化,及其与风湿活动的传统指标血沉(ESR)和C-反应蛋白(CRP)的相关性。方法采用夹心ELISA法,对30例JRA和34例RA患者的血清中,4例JRA、7例RA、6例骨性关节炎(OA)和9例半月板损伤(MT)患者的关节液中IL-6、IL-8、sIL-2R和TNF-α的水平进行检测。结果①30例JRA、34例RA患者血清IL-6和sIL-2R的水平与对照组相差非常显著(P〈0.01);30例JRA患者血清IL-8水平与对照组比较相差显著(P〈0.05)。②JRA全身型、少关节型患者血清IL-8、sIL-2R的水平和JRA多关节型患者血清IL-6的水平与对照组相差非常显著(P〈0.01)。③4例JRA及7例RA患者关节液sIL-2R的水平和RA患者关节液的IL-6水平与对照组相差显著(P〈0.05)。④JRA患者血清IL-6和sIL-2R的水平与ESR和CRP的变化呈明显的相关关系(r值分别为0.532和0.621)。结论①IL-6、sIL-2R的水平与JRA、RA病的活动性有关,是类风湿活动性的主要指标。②sIL-2R不仅参与JRA和RA的全身病理损伤,而且是引起关节局部损伤的主要CK,IL-6也参与JRA关节局部的病理损伤,在RA关节局部损伤似乎更为重要。③IL-8主要参与JRA的全身病理损伤,对关节局部病理损伤似乎并不重要。     

类风湿关节炎患者外周血及滑膜液X型胶原反应性

目的：探讨类风湿关节炎（ＲＡ）患者体内是否存在抗Ｘ型胶原Ｂ细胞反应。方法：以ＥＬ－４ ＯＵ^rＢＵ^r／ｒＩＬ－２／ＰＭＡ作为刺激系统,通过酶联斑点技术检测抗Ｘ型胶原免疫球蛋白分泌Ｂ细胞（ａｎｔｉ－ＨＣＸ ＩＳＣ）频率。结果：２８例ＲＡ患者滑漠中１１例出现ａｎｔｉ－ＨＣＸ ＩＳＣ,而对照组骨性关节炎（ＯＡ）患者滑膜液中则未检测到ａｎｔｉ－ＨＣＸ ＩＳＣ。ＲＡ患者外周血主滑漠液ＣＤ１９^ 及ＣＤ２０^ 细胞     

IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用

目的:探究白细胞介素(IL)-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)功能的影响及机制。方法:组织块法培养RA-FLSs。将不同浓度(0、1、10、100μg/L)的重组人源性IL-22(rhIL-22)与RA-FLSs共培养24 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;利用10μg/L的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h,流式细胞术检测细胞周期改变。rhIL-22和/或信号转导和转录因子3(STAT3)特异性抑制剂STA-21以不同浓度作用RA-FLSs 24h,Western blot法检测Bcl-2和p-STAT3蛋白水平的变化。结果:不同浓度的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h、48 h、72h后,RA-FLSs细胞活力明显增高,均显著高于对照组(P0.05)。rhIL-22刺激RA-FLSs后,S期和G_2/M期细胞明显增多,G_0/G_1期细胞减少。Western blot法检测结果提示rhIL-22可上调RA-FLSs中Bcl-2、p-STAT3的蛋白水平,而STA-21单用或联用rhIL-22均可抑制RA-FLSs中Bcl-2及p-STAT3的表达(P0.05)。结论:IL-22在RA-FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用,且STAT3在IL-22促RA-FLSs细胞Bcl-2表达的过程中起关键作用,提示IL-22可能对RA-FLSs凋亡有一定的影响。     

IL-17、MMP-3在类风湿关节炎患者滑膜液及血浆中的表达及意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血浆中白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的水平及其临床意义.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者滑膜液及血浆中IL-17及MMP-3的水平,分析IL-17及MMP-3与临床指标的关系.结果:RA患者滑膜液IL-17及MMP-3水平明显...     

类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞活化标志的表达及意义

目的:研究类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者关节滑膜液淋巴细胞活化标志CD69、CD25、CD71、HLA-DR的表达,探讨其在RA致病中的作用。方法:采用流式细胞仪检测RA患者关节滑膜液淋巴细胞活化标志CD69、CD25、CD71、HLA-DR的表达,并设立正常对照组。结果:RA患者关节滑膜液表达CD25和CD71的淋巴细胞与正常对照组相比明显增多(P<0.01);而表达CD69和HLA-DR的淋巴细胞,与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:关节滑膜液淋巴细胞活化标志的表达增高,在RA发病机制中起着重要的作用。     

IL-12对慢性乙型肝炎患者PBMC产生IFN-γ、IL-10细胞因子的影响

为观察IL 12对不同临床分型慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC )产生Th1/Th2类细胞因子的影响。本实验分离 72例慢性乙型肝炎患者 (轻、中、重度 )PBMC ,分别与植物血凝素 (PHA ) (10 0 μg/ml)、HBcAg (1μg/ml)、HBeAg (1μg/ml)单独或联合IL 12 (10ng/ml)体外培养 4 8h ,ELISA法检测培养上清液中IFN γ、IL 10水平。 2 0例健康人群做对照。结果发现IL 12对PHA、HBcAg/HBeAg诱导健康人群PBMC产生Th1/Th2类细胞因子无协同效应 ,对慢性乙型肝炎患者PBMC产生IFN γ有显著协同增殖效应 ,慢性中度患者最为突出。同HBeAg联合诱导 ,不但显著增强慢性乙型肝炎患者PBMC产生IFN γ ,还抑制IL 10的产生。提示IL 12可增强慢性乙型肝炎患者IFN γ水平增高 ,但不同临床分型患者其增殖效应的强度不同 ;IL 12可促进HBeAg诱导的Th2型优势表达向Th1型优势表达转换     

MicroRNA-16对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响

 目的:研究microRNA-16（miR-16）对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者滑膜成纤维细胞（rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs）增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响。方法: 体外分离培养RASFs,脂质体转染化学合成的miR-16 mimic或miR-16抑制剂,分别采用MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测其对RASFs增殖、侵袭及凋亡的影响;RT-PCR和Western blotting检测miR-16对RASFs基质金属蛋白酶3/13（matrix metalloproteinase 3/13,MMP3/13）及白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）表达的影响。结果:增殖实验结果表明miR-16可显著抑制RASFs的增殖;细胞侵袭结果表明miR-16可显著抑制RASFs的侵袭;流式细胞术检测发现miR-16对RASFs凋亡无显著影响;miR-16可下调MMP3/13及IL-1β的表达水平。结论:  miR-16在RA的发生中起着重要作用,它可能通过下调MMP3/13及IL-1β的表达抑制RASFs增殖和侵袭。这为进一步研究miR-16在RA中的作用机制奠定了基础。     

根除幽门螺杆菌治疗对类风湿关节炎患者血清IL-8、IL-18水平的影响

目的:探讨根除幽门螺杆菌治疗对类风湿关节炎血清IL-8、IL-18水平的影响。方法:采用14-C尿素呼气试验对140例活动期类风湿关节炎患者进行Hp检测,依据14-C尿素呼气试验结果分为Hp(+)组和Hp(-)组。Hp(+)组的患者依据是否进行抗Hp治疗分为对照组和抗Hp组。于治疗前及治疗后12周记录患者关节肿胀数、关节痛/压痛数、晨僵时间、双手握力,并监测血沉、C反应蛋白、类风湿因子、IL-8、IL-18水平。结果:治疗12周后,Hp(-)组、抗Hp组的有效率均高于对照组(84.09%vs 62.50%,χ2=5.41,81.25%vs 62.50%,χ2=4.17,P0.05),三组患者的关节肿胀数、关节痛/压痛数、晨僵时间、双手握力及血沉、C反应蛋白、类风湿因子、IL-8、IL-18水平均较治疗前显著改善(P0.05)。Hp(-)组、抗Hp组患者的晨僵、关节压痛数、关节肿胀数、双手握力等临床症状较对照组改善更为明显,Hp(-)组、抗Hp组患者ESR、CRP、IL-8、IL-18水平较对照组低,但三组患者RF水平相比较差异无统计学意义。结论:根除HP治疗可从一定程度上提高类风湿性关节炎的临床疗效。     

IL-32γ对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖与细胞周期的影响

目的:研究IL-32γ对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与细胞周期的影响及机制。方法:体外培养活动性类风湿关节炎和骨关节炎(OA)患者成纤维样滑膜细胞并以IL-32γ处理,应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western印迹方法检测cyclinD1及NF-κBp65蛋白含量;免疫细胞化学染色法检测PCNA表达的变化。结果:IL-32γ对OA-FLS增殖没有影响;不同浓度的IL-32γ(10～100 ng/ml)在72～120小时范围内,浓度和时间依赖性促进RA-FLS增殖;100 ng/ml的IL-32γ作用RA-FLS 48小时后促进了细胞周期由G1期向S期,进而G2/M期转化,同时上调了cyclin D1、NF-κBp65和PCNA的蛋白表达水平。结论:IL-32γ可促进RA-FLS增殖和加速细胞周期转化。上调NF-κBp65和cyclin D1的表达可能是其作用机制之一。     

siRNA沉默ADAM10基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默解整合素金属蛋白酶(ADAM10)基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响。方法将ADAM10特异性siRNA转染人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A细胞,实验分为3组,ADAM10-siRNA组转染ADAM10特异性siRNA,NC-siRNA组转染ADAM10非特异性siRNA,对照组为未经转染处理的MH7A细胞。转染48 h后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中ADAM10表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,ELISA测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果 ADAM10-siRNA组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平较NC-siRNA组和对照组低(P 0.05)。沉默ADAM10基因后,ADAM10-siRNA组细胞凋亡率显著高于NC-siRNA组和对照组(P 0.05)。ADAM10-siRNA组细胞中Bax基因表达水平明显高于NC-siRNA组和对照组(P 0.05),Bcl-2基因表达水平明显低于NC-siRNA组和对照组(P 0.05)。ADAM10-siRNA组细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-8显著低于NC-siRNA组和对照组(P0.05)。而NC-siRNA组和对照组以上各指标相比较,差异不明显(P 0.05)。结论沉默ADAM10基因可明显促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,并进一步减少TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子的分泌,提示通过沉默ADAM10基因使减轻/控制类风湿关节炎炎症成为可能。     

超活化血小板裂解液对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞影响的实验研究

目的 探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法 选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象,其中男3例、女3例,年龄26～49岁、中位年龄33岁,受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本,先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP);再加入0.08 mmol/L CaCl₂, 37 ℃孵育激活血小板;然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原,获得sPL。培养RA-FLS,分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组,分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度;细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性;流式细胞术测定各组细胞的凋亡率;体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。结果 (1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL,TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL,IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL,组间比较差异均有统计学意义(F=12.186、11.934、10.709,P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%,细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%,小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个,迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个,侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个,组间比较差异均有统计学意义(F=8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组,细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组,而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用,对RA-FLS凋亡具有促进作用,且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。     

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞IL-18及其受体表达的影响

目的:研究雷公藤内酯醇(TP)对佛波酯(PMA)刺激的关节滑膜成纤维细胞(RASF) 白细胞介素18(IL-18)及其受体(IL-18R)表达的影响, 并对其机制进行探讨.方法:RASF先用TP(0～100 μg/L) 预处理2 h, 再用PMA (50 μg/L)刺激.收集上清用 ELISA 法检测上清IL-18水平.利用人IL-18能特异诱导人髓系单核细胞KG-1产生IFN-γ的特性检测上清中IL-18生物学活性.收集处理的RASF, 用Western blot 和荧光定量RT-PCR检测IL-18和IL-18R的蛋白和mRNA表达.NF-κB的活性用类ELISA法检测. 结果:TP能有效抑制PMA刺激的RASF的IL-18生物学活性.TP能够抑制PMA刺激的RASF的IL-18和IL-18R的蛋白和mRNA表达.TP还抑制PMA刺激的RASF 的NF-κB 活性.TP对PMA刺激的RASF 的抑制效应呈剂量相关性.结论:TP能有效抑制PMA刺激的RASF 的IL-18和IL-18R的表达.这些结果说明了TP对RA治疗作用的机制.     

大黄素对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及转移的抑制作用

目的探讨大黄素对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及转移的影响。方法采用组织块提取法和酶消化法体外培养类风湿关节炎滑膜细胞,分别加入不同浓度大黄素培养6、12、24 h,CCK-8法检测增殖能力的变化及时效关系,Transwell法检测处理前后转移能力的变化。结果酶消化法和组织块法分别于14 d和21 d得到原代RA成纤维样滑膜细胞,扩大培养3代后用大黄素处理,CCK-8检测6 h处理后20、40、60、80、100μmol/L大黄素的抑制率依次为0.39±0.11、0.51±0.04、0.55±0.07、0.72±0.18、0.98±0.11。且随着处理时间延长,抑制率增加(P0.05)。Transwell法检测浓度为20、40、80μmol/L大黄素处理后,处理组穿过小室膜的细胞数明显少于对照组,迁移试验表明,抑制率分别为39.48%、54.76%、82.99%。侵袭试验表明,抑制率分别为25.38%、60.41%、81.73%。与对照组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论不同浓度的大黄素对体外培养RA-FLSs的转移及增殖能力具有抑制作用,且具有一定的量效和时效关系,为进一步研究大黄素在类风湿关节炎的治疗提供一定的实验室依据。     

类风湿关节炎滑膜组织及关节液中DcR3表达的研究

目的:观察研究人诱骗受体3(DcR3)在类风湿关节炎(RA)关节液及滑膜组织中的表达及其与滑膜炎性病变程度的相关性.方法:用免疫组织化学的方法对12例RA患者、6例骨关节炎(OA)患者及4例无关节病变的骨折患者滑膜组织中DcR3的表达进行描述分析,并对DcR3表达情况与RA患者滑膜炎性病变程度相关性进行分析.同时用ELISA的方法检测了26例RA及19例OA患者关节液中DcR3的表达.结果:DcR3在RA滑膜组织主要分布于血管翳周围炎性细胞及部分滑膜细胞中,DcR3阳性细胞数约为72％.OA滑膜组织细胞中DcR3也呈现少量的阳性表达,但与RA比较阳性程度较弱,阳性细胞数量较少:对DcR3表达与RA滑膜炎性程度的相关性分析发现,DcR3与RA滑膜炎性程度呈正相关(r=0.832,P＜0.01),同时发现RA患者关节液中表达也明显高于OA患者.结论:DcR3在RA滑膜组织炎性细胞及滑膜细胞上的异常表达可能是其参与RA滑膜炎及滑膜组织侵袭等病理过程,从而导致滑膜损伤的一个重要机制.     

成纤维样滑膜细胞通过IL-6下调类风湿关节炎患者外周血Treg北大核心CSCD

类风湿关节炎（ rheumatoid arthritis, RA）是以关节组织慢性炎症性病变为主的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞（ fibroblast-like synoviocytes, FLS）异常活化是RA发病的重要机制之一,通过释放大量炎症因子、募集其他炎性细胞等方式加重关节侵蚀破坏. 调节性T细胞（ regulatory T cell, Treg）是具有免疫负调节功能的T细胞亚群. 我们推测FLS在RA炎症环境中分泌的炎症因子可能会影响RA患者外周血Treg的比例,本研究旨在阐明RA-FLS对Treg细胞是否具有免疫调控作用及可能的作用途径.