黄芩苷通过调控TGF-β1/TAK-NF-κB通路对胰腺纤维化的防治作用

目的:观察黄芩苷对慢性胰腺炎(CP)小鼠胰腺组织转化生长因子β1(TGF-β1)/TGF-β活化激酶(TAK)-核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨黄芩苷防治胰腺纤维化的作用机制。方法:健康雄性昆明小鼠58只,随机分为空白对照组、CP模型组和黄芩苷治疗组。除空白对照组外,其余小鼠均给予腹腔注射20%L-精氨酸诱发CP,治疗组于造模后2周开始腹腔注射黄芩苷(100 mg/kg,每天1次)。造模后2周、4周和6周分别处死动物,下腔静脉采血,摘取小鼠胰腺组织,HE及Masson染色检测各组小鼠胰腺组织形态学改变及纤维化程度;ELISA检测血清TGF-β1的表达;免疫组织化学法观察胰腺组织纤维连接蛋白(FN)和NF-κB的表达;Western blot检测胰腺组织FN、转化生长因子βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)、磷酸化TAK1(p-TAK1)及NF-κB蛋白的表达;real-time PCR检测胰腺组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)及金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的mRNA表达。结果:腹腔注射20%L-精氨酸2周、4周和6周后,HE及Masson染色显示胰腺组织有纤维沉积,FN表达升高;而黄芩苷治疗后小鼠的胰腺损伤及胶原纤维沉积程度明显减轻,FN表达减少(P<0.01)。CP模型组小鼠胰腺组织TGF-β1、TGF-βRⅠ、p-TAK1、NF-κB及TIMP-1的水平均升高,MMP-1表达降低;而黄芩苷治疗组TGF-β1、TGF-βRⅠ、p-TAK1、NF-κB及TIMP-1的水平降低,MMP-1表达升高(P<0.01)。结论:黄芩苷通过抑制TGF-β1/TAK-NF-κB信号通路的活化,调节MMP-1/TIMP-1的相对平衡,发挥抗CP小鼠胰腺纤维化的作用。     

环孢素A慢性肾毒性时肾转化生长因子-β1表达和细胞凋亡间的相关性及茶多酚的影响

目的:探讨环孢素A(CsA)慢性肾毒性作用时肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和细胞凋亡间的相关性及茶多酚(TP)对其的影响。方法:采用CsA慢性肾毒性大鼠模型,分别用CsA溶剂vehicle(oliveoil)、TP、CsA与CsA TP处理4周,观察肾功能与组织的改变,免疫组织化学和Westernblot检测肾组织TGF-β1表达,TUNEL法检测肾细胞凋亡,检测凋亡相关酶caspase-3活性。结果:与CsA组相比,CsA与茶多酚联用组明显增加肾肌酐清除率(0.12±0.03vs0.22±0.02,P<0.05)和减轻肾小管细胞损伤(2.29±0.43vs1.42±0.26,P<0.05)与间质纤维化程度(2.82±0.20vs1.43±0.19,P<0.05),并明显减少肾小管及间质凋亡细胞数(19.3±4.6vs7.5±2.1,P<0.05)与肾组织TGF-β1表达(P<0.05),肾细胞凋亡数和肾小管间质纤维化程度(r=0.89,P<0.05)与TGF-β1表达(r=0.85,P<0.05)间存在相关性。结论:肾小管间质纤维化与TGF-β1表达和肾细胞凋亡间存在显著的相关性,茶多酚抑制CsA慢性肾毒性时肾组织TGF-β1表达和细胞凋亡,改善CsA诱导的肾功能与组织结构损伤。     

麻黄附子细辛汤配合电针介导TGF-β1/Smad通路调控钙通道改善窦房结纤维化

目的 探讨麻黄附子细辛汤配合电针对窦房结纤维化小鼠钙离子通道的影响及可能机制。方法 C57B6小鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、麻黄附子细辛汤配合电针治疗组(MFXE组);其中Model组、MFXE组饲养至18月龄进行实验，MFXE组灌胃麻黄附子细辛汤配合电针处理，持续21天。电生理仪监测各组小鼠心率；取心脏窦房结，分别进行HE、Masson染色，观察窦房结病理损伤及纤维化程度；Western blot检测Klotho、Trpv3、Trpv6蛋白的表达；Western blot与qRT-PCR方法检测TGF-β1/Smad通路相关TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7蛋白和mRNA的表达。结果 麻黄附子细辛汤配合电针治疗能够提高窦房结纤维化小鼠的心率，从而改善窦房结纤维化损伤，同时上调Klotho蛋白的表达，增加钙通道调节蛋白Trpv3、Trpv6蛋白的表达，抑制TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达。结论 麻黄附子细辛汤配合电针通过调控TGF-β1/Smad通路降低窦房结纤维化损伤，促进窦房结纤维化小鼠的钙离子转运。     

miR-23基因干扰通过下调TGF-β改善风湿性心脏病大鼠心肌纤维化和免疫紊乱

目的研究miR-23基因干扰对风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)大鼠心肌纤维化和免疫紊乱的调节与TGF-β的相关性。方法建立灭活A组β型溶血性链球菌(group Aβ-hemolytic streptococcus,GSA)诱导的大鼠风湿性心脏病模型。大鼠分为对照组,RHD组(模型组),RHD+inhibitor-NC组(阴性对照组)和RHD+miR-23 inhibitor组(治疗组)。采用RTqPCR检测心肌组织中miR-23表达;HE和Masson染色观察心肌损伤和纤维化情况;Western blot法检测纤维标记物TGF-β、α-SMA和Fibronectin的蛋白表达;ELISA检测心损标记物CK-MB,cTnl和炎症免疫标记物iNOS和IL-10的水平。结果与对照组相比,RHD组大鼠心率水平降低(P0.05),CK-MB、cTnl、TGF-β、α-SMA、Fibronectin、iNOS和IL-10水平提升(P0.05),组织细胞出现损伤和纤维化。与RHD组相比,RHD+miR-23 inhibitor组大鼠心率水平提升(P0.05),CK-MB、c Tnl、TGF-β、α-SMA、Fibronectin、iNOS水平下降而IL-10水平增加(P0.05),且组织细胞损伤和纤维化有所改善。结论抑制miR-23表达可以通过负向调节TGF-β改善风湿性心脏病大鼠心肌纤维化和免疫紊乱。     

二肽基肽酶4抑制剂抑制Wnt/β-catenin信号通路改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化

目的探讨二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法将50只SPF级SD大鼠,体重(200±20)g,随机分为对照组(Control group)、模型组(Model group)、二肽基肽酶4抑制剂组(DPP-4 inhibitor group)、氯化锂组(LiCl group)及氯化锂+DPP-4组(LiCl+DPP-4 inhibitor group),每组10只。利用腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)的方法构建慢性心力衰竭大鼠模型。利用超声检测各组大鼠心功能;HE及Masson染色检测各组大鼠心脏病理学改变;Western blot检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,α-SMA, GSK-3β,p-GSK-3β及β-catenin蛋白的表达。结果与模型组相比,DPP-4inhibitor组大鼠心功能显著改善,心脏组织病理损伤及心肌纤维化减轻,心脏组织中TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显减少,p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达也显著降低(P0.05);LiCl加重慢性心力衰竭大鼠模型的心脏功能、病理损伤及心肌纤维化程度,增加TGF-β1和α-SMA蛋白表达,并显著增加p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达;但是DPP-4抑制剂能够减轻甚至部分逆转LiCl对慢性心力衰竭大鼠的影响。结论二肽基肽酶4抑制剂改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化,与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达相关。     

川芎嗪对肾间质纤维化中TGF-β1/miR-29表达的影响

目的:观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)、间质损伤及TGF-β1/miR-29表达的影响.方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(Ctrl组)、假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)、缬沙坦组(VAN组)和TMP组各10只.经相应处理后,通过HE,Masson染色观察肾组织的病理学表现;同时采用SP免疫组织化学法检测各组病变组织中TGF-β1的表达情况;最后采用RT-PCR技术比较各组TGF-β1,miR-29基因的表达.结果:HE染色结果显示Ctrl组、Sham组、UUO组、VAN组及TMP组的肾间质损伤评分分别为0.27±0.10,0.30±0.12,8.79±1.03,6.23±0.81及4.57±0.74.Masson染色胶原半定量分析结果显示Ctrl组、Sham组、UUO组、VAN组及TMP组的评分分别为0.21±0.03,0.23±0.06,2.49±0.33,1.63±0.07及1.32±0.04.SP免疫组织化学染色显示模型组TGF-β1的蛋白表达高于对照组;而缬沙坦和TMP可部分逆转TGF-β1蛋白的表达,且TMP的效果优于缬沙坦.RT-PCR结果显示模型组的TGF-β1 mRNA表达增高、miR-29 mRNA表达降低.TMP组和缬沙坦组TGF-β1 mRNA表达明显低于模型组,而miR-29 mRNA表达则明显高于模型组;且TMP 组TGF-β1 mRNA表达高于缬沙坦组.结论:缬沙坦和TMP可明显减轻UUO致RIF中肾组织学损伤,且TMP的疗效优于缬沙坦.此外TMP还可抑制TGF-β1而促进miR-29的表达.     

糖尿病和高糖饮食大鼠肾脏形态学变化及转化生长因子β1的表达

目的 探讨高血糖对糖尿病肾病.肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达与形态学变化的作用.方法 用胰岛素拮抗剂链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病模型,作为糖尿病组(D组),另设高糖饮食组(H组)以及正常对照组(C组),每组各10只.C组用普通饲料喂养,H组和D组用高糖饲料喂养.16周后测定空腹血精(FBG)、尿蛋白及.肾脏质量系数;苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺和肾脏的组织学变化;透射电镜观察肾组织的超微结构变化;用免疫组织化学法及Western免疫印迹技术检测肾组织TGF-β1蛋白的表达.结果 (1)C组、D组、H组24 h尿蛋向定量分别为(15.93±8.43)mg,(97.76±7.83)mg,(56.28±10.36)mg,FBG为(8.2401 ± 1.3307)mmol/L,(19.8726±1.8973)mmol/L,(16.2418±2.3464)mmol/L,D组和H组均高于C组,且D组高于H组(均P<0.05). D组大鼠肾脏质量系数较C组高(P<0.05),与H组差异无统计学意义,H组与C组差异无统计学意义.(2)与C组相比,H组胰岛体积缩小,D组胰腺小叶缩小,胰岛明显萎缩,甚至消失.H组、D组大鼠肾脏纤维化面积比和肾小球基底膜厚度均明显增大,且H组肾脏纤维化面积比和肾小球基底膜厚度增大程度均较D组轻.(3)免疫组织化学显示C组大鼠肾脏组织中TGF-β1仅有微弱表达,与C组相比,D组和H组大鼠TGF-β1的表达明显升高(P<0.05),且D组大鼠TGF-β1的表达高于H组(P<0.05).Western免疫印迹显示,肾组织中TGF-β1蛋白表达的条带灰度强度D组和H组高于对照组(P<0.05),且D组显著高于H组(P<0.05).结论 D组和H组大鼠肾组织中TGF-β1的表达增强,肾脏出现糖尿病相应的形态学变化,提示高血糖是启动糖尿病性肾病的始动因子.     

转染的miR-1908通过靶向转化生长因子β1抑制肾脏纤维化

目的探讨miR-1908在肾纤维化中的调控作用。方法运用实时定量PCR检测纤维化进程中人肾组织中miR-1908和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的水平;运用生物学信息分析和萤光素酶报告基因技术探索miR-1908对TGF-β1的靶向调控关系;体外转染miR-1908腺病毒表达载体后,运用Western blot法检测人原代肾间质细胞中TGF-β1、smad2/3和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白水平;对早期肾纤维化模型小鼠腹腔注射miR-1908腺病毒表达载体6周后,Masson染色观察肾纤维化情况。结果 miR-1908在人肾纤维化过程中水平逐渐降低,与TGF-β1 mRNA水平变化趋势相反;过表达miR-1908后,原代肾间质成纤维细胞中TGF-β1、smad2/3和MMP-2的蛋白水平均显著下调;注射miR-1908腺病毒表达载体6周后,与未注射组相比,小鼠肾纤维化症状明显缓解。结论 miR-1908通过靶向TGF-β1,对抑制肾脏纤维化有一定作用。     

多沙唑嗪干预对α_1肾上腺素能受体抗体阳性糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的:探讨多沙唑嗪干预对α1肾上腺素能受体自身抗体(α1R-Ab)阳性糖尿病(DM)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的影响及其心肌保护作用。方法:Wistar大鼠分为5组:A组(正常对照组,n=10)、B组(DM模型组,n=10)、C组(DM+多沙唑嗪干预组,n=10)、D组(α1R-AbDM组,n=8)和E组(α1R-AbDM+多沙唑嗪干预组,n=8)。腹腔注射链脲佐霉素(STZ)复制T2DM模型。造模成功后,D组和E组于当周、第4、8、12、16周尾静脉注射α1R-Ab注射液(100μg/100g),建立α1R-AbDM模型。C组和E组均从注射α1R-Ab起每日给予多沙唑嗪0.36mg/Kg灌胃,持续16周。A组不予任何处理。16周后处死各组大鼠,取左室心肌组织常规病理切片和超薄切片,采用免疫组化检测左室心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达量,电镜观察心肌超微结构。结果:A组大鼠心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达明显低于B、C、D、E组(均P<0.01),C组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达低于B组(P<0.05),E组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达亦明显低于D组(P<0.05);电镜下,A组心肌未见明显异常;D组心肌线粒体减少,排列紊乱,呈空泡变性,间质胶原增生,微血管基底膜增厚;而E组心肌病变较D组明显减轻;C组心肌病变亦较B组明显减轻。结论:多沙唑嗪可通过抑制α1R-Ab阳性DM大鼠心肌组织中TGF-和Ⅰ型胶原表达,减轻DM大鼠心肌间质纤维化,保护心肌。     

Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞在体外对肝星状细胞TGF-β1信号传导的影响

目的:探讨Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞(Smad7-EGFP-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的机制。方法:分离、纯化大鼠BMSCs并经Smad7基因腺病毒质粒(Ad-Smad7-EGFP)转染建立Smad7-EGFP-BMSCs。实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组、C组和D组,分别与Smad7-EGFP-BMSCs、BMSCs、Smad7质粒及PBS进行共同培养72 h,采用ELISA测定培养液中Smad7和TGF-β1的表达,采用Western印迹法和RT-PCR法测定细胞Smad7、TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA的表达,采用流式细胞术测定细胞凋亡情况。结果:(1)ELISA结果显示,B组、C组和D组培养液TGF-β1蛋白水平较A组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白水平较A组显著升高(P0.01);D组TGF-β1蛋白水平较B组和C组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白水平较B组和C组显著升高(P0.01);(2)Western印迹法和PCR结果显示,B组、C组和D组TGF-β1、ColⅠ和α-SMA蛋白和mRNA表达水平较A组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较A组显著升高(P0.01);D组TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著升高(P0.01);(3)流式细胞仪检测结果显示,B组、C组和D组HSC-T6细胞凋亡率较A组显著升高(P0.01),而D组细胞凋亡率较B组和C组显著升高(P0.01)。结论:Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞可通过作用肝星状细胞TGF-β1信号转导通路以及促进星状细胞凋亡而具有抗肝纤维化的作用。     

转化生长因子β1促进大鼠子宫内膜纤维化

目的 探讨大鼠子宫内膜纤维化中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及相关机制。方法 将SD雌性大鼠随机分成假手术组(n=12)和模型组(n=12)。术后7、14及28 d收集双侧子宫组织，HE染色观察子宫内膜形态，动态观察子宫内膜病理改变和子宫内膜腺体数目；Masson染色检测子宫内膜纤维化程度；免疫组织化学法检测TGF-β1及α-SMA蛋白表达。结果 相比假手术组，模型组大鼠子宫结构破坏；术后7、14和28 d,子宫内膜TGF-β1蛋白表达显著升高(P<0.05);术后14和28 d,子宫内膜腺体数目明显减少、子宫内膜纤维化面积比例明显增加，α-SMA蛋白表达上调(P<0.05)。结论 TGF-β1可能通过激活肌成纤维细胞及相关信号通路进一步促进子宫内膜纤维化。     

Apelin-13减轻糖尿病小鼠主动脉损伤

目的探讨apelin-13对糖尿病小鼠主动脉结构的影响及其机制。方法对照组:8周龄C57/BL6j小鼠6只;糖尿病组:8周龄kk Ay小鼠6只;apelin-13处理组:kk Ay小鼠6只,皮下埋微量植渗透泵释放apelin-13[30μg/(kg·d)]。4周后取材,进行HE、Masson染色,光学显微镜下观察血管的形态学改变及胶原纤维的沉积情况,弹性蛋白染色观察血管弹力纤维板的形态学改变,免疫组织化学染色分析血管内信号蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平。结果与正常对照组相比,糖尿病组小鼠血管壁中膜明显增厚,主动脉内胶原纤维含量明显升高(P<0.05),弹力纤维排列紊乱、断裂,同时血管壁TGF-β1表达增强(P<0.05),而apelin-13处理组小鼠血管壁中膜较糖尿病组明显变薄,血管间质内胶原纤维的含量较糖尿病组小鼠显著下降(P<0.05),弹力纤维排列较整齐,血管壁TGF-β1表达也显著下调(P<0.05)。结论外源性Apelin-13可能通过抑制TGF-β1以及平滑肌细胞增殖减轻糖尿病引起的主动脉纤维化以及血管中膜弹力纤维损伤。     

CXXC5 对心房颤动大鼠心肌纤维化的影响及机制

目的:探讨锌指蛋白5(CXXC5)在心房颤动大鼠心肌纤维化中的表达及其对心肌纤维化的影响及可能机制。方法:将40只大鼠分为对照组(正常大鼠组)、空白对照组(心房颤动模型大鼠组)、阴性对照组(心房颤动大鼠尾静脉注射阴性对照病毒组)和过表达CXXC5组(心房颤动大鼠尾静脉注射过表达CXXC5病毒),每组10只。空白对照组、阴性对照组和过表达CXXC5组大鼠建立心房颤动心肌纤维化模型(腹部皮下注射异丙肾上腺素建立心房颤动心肌纤维化模型)。伊红-苏木素(HE)染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化,并测定胶原容积分数(CVF);采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定心肌组织中Ⅰ型胶原、CXXC5、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7 mRNA水平;采用Western blot法测定大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、CXXC5、TGF-β1、Smad7蛋白水平。结果:HE染色和Masson染色显示:对照组大鼠心肌组织形态学正常;空白对照组和阴性对照组大鼠心肌细胞排列紊乱,间质胶原纤维增多,心肌纤维化严重;过表达CXXC5组大鼠心肌细胞排列稍紊乱,心肌纤维化较轻;模型组大鼠CVF明显高于对照组(P0.05)。与对照组相比,其他3组大鼠CVF升高(P0.05),CXXC5、Smad7 mRNA和蛋白水平升高(P0.05),Ⅰ型胶原、TGF-β1 mRNA和蛋白水平降低(P0.05);与空白对照组和阴性对照组相比,过表达CXXC5组大鼠CVF降低(P0.05),心肌组织中CXXC5、Smad7 mRNA和蛋白水平升高(P0.05),Ⅰ型胶原、TGF-β1 mRNA和蛋白水平降低(P0.05);空白对照组和阴性对照组大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、CXXC5、TGF-β1、Smad7 mRNA和蛋白水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:心房颤动心肌纤维化大鼠心肌组织CXXC5水平降低,TGF-β1/Smad7信号通路激活;过表达CXXC5可通过抑制TGF-β1/Smad7信号通路抑制心房颤动大鼠心肌纤维化。     

RhoA/Rho激酶在2型糖尿病大鼠肝脏纤维化中的作用

目的阐明RhoA/Rho激酶在糖尿病大鼠肝纤维化中的作用。方法通过高脂饮食和小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组和法舒地尔干预组(法舒地尔10 mg/(kg·d),分两次腹腔注射)24周末。测定血糖、血脂、谷草转氨酶和谷丙转氨酶;Masson染色和羟脯氨酸测定评估肝胶原沉积;RT-PCR测定转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达;免疫组化测定TGF-β1蛋白表达;Western blot测定肝组织肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1磷酸化(p-MYPT1)水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、血脂和转氨酶显著增高,肝组织大量胶原沉积,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著上调(P0.01)。与糖尿病组比较,法舒地尔干预组大鼠转氨酶降低,肝胶原沉积明显减轻,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著下降(P0.01)。结论高血糖激活了肝组织RhoA/Rho激酶,通过调控TGF-β1/CTGF表达,在糖尿病肝纤维化中起着重要作用。     

利用CRISPR/Cas-9技术抑制热休克蛋白Gp96的表达对小鼠酒精性肝纤维化的影响

目的 探讨热休克蛋白Gp96对小鼠酒精性肝纤维化的影响。 方法 健康雄性C57BL/6 J小鼠220只,随机分为4组：正常对照组(n=10),生理盐水+酒精诱导纤维化组(n=70)。尾静脉注射CRISPR表达质粒Gp96-sgRNA3+酒精诱导肝纤维化组（n=70）,腹腔注射核因子κB（NF-κB）抑制剂PDTC+酒精诱导肝纤维化组（n=70）。于酒精诱导第8周眼球取血后处死各组小鼠,测定各组小鼠血清谷草转氨酶（AST）活性,HE染色检测各组小鼠肝脏病理变化,天狼猩红染色检测各组小鼠肝纤维化情况,过碘酸-雪夫(PAS)染色检测各组小鼠肝糖原变化情况;免疫印迹法检测小鼠肝脏Gp96和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化。 结果 与正常对照组相比,其余3组AST酶活性显著上升,肝纤维化加重,糖原显著减少（P<0.01）;与生理盐水+酒精组相比,注射质粒Gp96-sgRNA3+酒精组和注射NF-κB抑制剂+酒精组AST上升更为明显,肝纤维化更严重,糖原减少更多,Gp96表达显著下降,TGF-β1表达显著增加（P<0.01或 P<0.05）。 结论 尾静脉注射CRISPR表达质粒Gp96-sgRNA3显著抑制了小鼠肝脏Gp96的表达,促进了小鼠酒精性肝纤维化程度,NF-κB信号通路对Gp96的表达起到一定的调控作用。     

穿心莲内酯对肺纤维化大鼠BALF中细胞因子和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨穿心莲内酯灌胃对博来霉素(BLM)致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β1浓度和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:取健康雄性SD大鼠90只,随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、泼尼松(Pred)组、不同剂量穿心莲内酯组(即穿A组62.5mg/kg、穿B组125 mg/kg、穿C组250 mg/kg),各组大鼠15只,分别气管内灌注BLM(BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组)或NS(NS组)后,每天给予NS(NS组、BLM组)、Pred(Pred组)或穿心莲内酯(穿A组、穿B组、穿C组)灌胃,各组分别于气管内灌注药物后第7、14、28天处死大鼠5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;酶联免疫吸附试验测定BALF中TNF-α、TGF-β1浓度;同时监测肾功能指标血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及肝功能指标血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果:肝肾功能监测显示:不同剂量穿心莲内酯组、NS组、BLM组、Pred组所监测的AST、ALT、BUN、Cr比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NS组大鼠肺组织未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润和纤维化形成。BLM组第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,第14天时肺泡炎仍存在,但炎症细胞明显减少,肺泡间隔内成纤维细胞明显增多,肺泡结构破坏,肺泡隔增宽,第28天时炎症较前减轻,肺纤维化程度加重,部分肺泡腔消失,形成严重纤维化。穿A组病理形态改变与BLM组相似。Pred组、穿B组、穿C组大鼠第7天有较多的炎症细胞浸润及局部聚积,第14天和第28天的纤维化病理改变均较BLM组、穿A组明显减轻。NS组各个时间点BALF中TGF-β1、TNF-α含量均明显低于同时间点BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组BALF中的浓度(P<0.05)。BLM组3个时间点BALF中TGF-β1、TNF-α含量较Pred组、穿B、穿C组高(P<0.05)。与BLM组比较,穿A组BALF中TGF-β1、TNF-α含量无统计学意义。NS组各个时间点肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显低于同时间点BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组肺组织中的表达(P<0.05)。BLM组3个时间点Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达较Pred组、穿B组、穿C组高(P<0.05)。与BLM组比较,穿A组肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达无统计学差异。结论:穿心莲内酯灌胃可减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,降低肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,降低BALF中TNF-α、TGF-β1浓度,且对肝肾无明显毒副作用。     

依普利酮通过下调VEGF表达抑制UUO模型大鼠对侧肾脏血管新生并减轻肾脏纤维化

目的:观察依普利酮抑制单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠对侧肾脏血管新生及肾脏纤维化的作用。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组和依普利酮组,每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠行UUO手术复制梗阻性肾病模型。依普利酮组以100 mg·kg~(-1)·d~(-1)加入饲料中喂养,连续给药180 d后摘取对侧肾脏。天狼星红染色观察大鼠肾脏组织纤维化改变;免疫荧光检测血管新生标志物CD34、血管内皮生长因子A(VEGF-A)和VEGF受体2(VEGFR2)的表达;免疫组化检测血清/糖皮质激素调节激酶1(SGK1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)等促炎、促纤维化细胞因子的表达;RT-qPCR检测SGK1、TGF-β1和NF-κB的mRNA表达;Western blot检测VEGF-A、VEGFR2、SGK1、TNF-α、TGF-β1和CTGF的蛋白表达。结果:UUO大鼠对侧肾脏胶原纤维沉积明显增多,血管增生明显,VEGF-A、VEGFR2、SGK1、TNF-α、TGF-β1和CTGF的表达均显著增强(P0.05);RT-qPCR结果显示,UUO组SGK1、TGF-β1和NF-κB的mRNA表达较假手术组显著升高(P0.05)。依普利酮治疗后,CD34、VEGF-A、VEGFR2、SGK1、TGF-β1和NF-κB的表达均受到抑制(P0.05)。结论:依普利酮可通过下调VEGF的表达抑制UUO大鼠对侧肾脏病理性血管新生并减轻纤维化损伤。     

三种方法建立外伤性增生性玻璃体视网膜病变的兔模型研究

目的：比较三种方法建立外伤性增生性玻璃体视网膜病变(TPVR)兔模型的效果。方法：青紫蓝兔24只,共48只眼,在均造成眼外伤的基础上随机分成4组,每组各12只眼：实验组3组,分别为富血小板血浆(PRP)组[玻璃体腔内注射0.3 mL PRP]、转化生长因子β₂(TGF-β₂)组[玻璃体腔内注射0.3 mL TGF-β₂(50μg/L)]和视网膜色素上皮(RPE)组[玻璃体腔内注射0.3 mL RPE细胞(1.5×109/L)],以及对照组(玻璃体腔内注射0.3 mL生理盐水)。术后每周通过眼底照相和B超观察玻璃体及视网膜的增生情况;术后第4周采用Western blot法检测玻璃体内视网膜增生过程中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,采用冰冻切片法在显微镜下观察各组视网膜组织结构。结果：术后第4周,对照组及3组实验组TPVR的平均分级分别是0、3.67、2.33和2.50,3组实验组病变级别显著高于对照组(P<0.05),PRP组病变级别高于TGF-β₂组和RPE组(P<0.05),...     

穿心莲内酯对肺纤维化大鼠BALF中细胞因子和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨穿心莲内酯灌胃对博来霉素(BLM)致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β1浓度和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:取健康雄性SD大鼠90只,随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、泼尼松(Pred)组、不同剂量穿心莲内酯组(即穿A组62.5mg/kg、穿B组125 mg/kg、穿C组250 mg/kg),各组大鼠15只,分别气管内灌注BLM(BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组)或NS(NS组)后,每天给予NS(NS组、BLM组)、Pred(Pred组)或穿心莲内酯(穿A组、穿B组、穿C组)灌胃,各组分别于气管内灌注药物后第7、14、28天处死大鼠5只.用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;酶联免疫吸附试验测定BALF中TNF-α、TGF-β1浓度;同时监测肾功能指标血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及肝功能指标血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST).结果:肝肾功能监测显示:不同剂量穿心莲内酯组、NS组、BLM组、Pred组所监测的AST、ALT、BUN、Cr比较,差异无统计学意义(P＞0.05).NS组大鼠肺组织未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润和纤维化形成.BLM组第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,第14天时肺泡炎仍存在,但炎症细胞明显减少,肺泡间隔内成纤维细胞明显增多,肺泡结构破坏,肺泡隔增宽,第28天时炎症较前减轻,肺纤维化程度加重,部分肺泡腔消失,形成严重纤维化.穿A组病理形态改变与BLM组相似.Pred组、穿B组、穿C组大鼠第7天有较多的炎症细胞浸润及局部聚积,第14天和第28天的纤维化病理改变均较BLM组、穿A组明显减轻.NS组各个时间点BALF中TGF-β1、TNF-α含量均明显低于同时间点BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组BALF中的浓度(P＜0.05).BLM组3个时间点BALF中TGF-β1、TNF-α含量较Pred组、穿B、穿C组高(P＜0.05).与BLM组比较,穿A组BALF中TGF-β1、TNF-α含量无统计学意义.NS组各个时间点肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显低于同时间点BLM组、Pred组、穿A组、穿B组、穿C组肺组织中的表达(P＜0.05).BLM组3个时间点Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达较Pred组、穿B组、穿C组高(P＜O.05).与BLM组比较,穿A组肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达无统计学差异.结论:穿心莲内酯灌胃可减轻BuM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,降低肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,降低BALF中TNF-α、TGF-β1浓度,且对肝肾无明显毒副作用.     

参仙升脉口服液对AngⅡ诱导小鼠窦房结纤维化及Col1α、Col3α、TGF-β1基因表达的影响

目的观察参仙升脉口服液对血管紧张素2(AngⅡ)诱导小鼠窦房结纤维化的改善作用,初步探讨其作用机制。方法小鼠随机分为三组:假手术组(Sham组)、AngⅡ诱导窦房结纤维化组(AngⅡ组)、参仙升脉治疗组(SXSM组)。AngⅡ组和SXSM组均采用皮下微量渗透泵入AngⅡ诱导窦房结纤维化小鼠模型,SXSM组给参仙升脉口服液(2ml/d)灌胃,连续给药28天。观察各组小鼠心率变化趋势,HE、Masson染色观察各组病理学变化,qPCR、Western blot检测纤维化相关因子Col1α、Col3α、TGF-β1表达情况。结果 AngⅡ组小鼠心率呈下降趋势,窦房结区域组织结构紊乱,细胞肿胀,P细胞及T细胞数量明显减少,纤维化程度较重;参仙升脉口服液可以明显改善小鼠窦房结区域的损伤,降低纤维化相基因Col1α、Col3α、TGF-β1的表达水平(P0.05),改善窦房结区域纤维化程度。结论参仙升脉口服液明显改善AngⅡ诱导窦房结纤维化小鼠窦房结区域纤维化,与下调TGF-β1的表达,减少胶原蛋白的产生相关。