非小细胞肺癌中窖蛋白1基因的蛋白表达和甲基化及其意义

目的 检测窖蛋白1(Car-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的蛋白表达以及启动子的甲基化状况,探讨Cav-1基因在NSCLC中的作用及其临床意义.方法 应用免疫组织化学(sP法)和量子点Qd600染色检测123例NSCLC组织、17例良性病变肺组织中Cav一1蛋白表达和亚细胞定位.亚硫酸氢钠处理DNA,甲基化特异性PCR(MSP)检测Cav-1基因启动子区域的甲基化水平.结果 Cav-1蛋白在肺支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞的胞质和胞膜高表达.癌旁组织(对照)组和肺癌组中Cav-1蛋白的阳性率分别为17/17、43.1%(53/123),两组间差异有统计学意义(P=0.001);Cav-1蛋白在NSCLC不同的组织学类型(P=0.552)和分化程度(P=0.160)中差异均无统计学意义.Cav-1蛋白阳性率与NSCLC的TNM分期(P=0.001)以及淋巴结转移(P=0.001)均相关.在40例Cav-1蛋白表达为阴性的肺癌组织和12例癌旁肺组织,MSP法均未检测到Cav-1因启动子区域的甲基化.结论 Cav-1蛋白失表达的机制可能与启动子区是否甲基化无关.Cav-1蛋白高表达预示NSCLC恶化进展和高侵袭性.     

Wip1在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达

目的： 检测肺癌组织和3种肺癌细胞中Wip1的表达水平,探讨肺癌中Wip1的表达水平与其各种临床病理特征之间的关系。方法: 利用实时荧光定量PCR检测44例肺癌及相应正常肺组织中Wip1 mRNA的表达,分析Wip1 mRNA表达与各临床病理参数之间的关系;利用实时荧光定量PCR的方法检测人肺腺癌细胞A549、人鳞癌细胞NCI-1299、人大细胞肺癌细胞NCI-H460和人正常支气管上皮细胞HBE中Wip1 mRNA的表达量,进行相对定量分析。结果: 44例非小细胞肺癌及相应正常肺组织均有Wip1 mRNA的表达,其中17例肺癌中Wip1 mRNA高表达,占38.6%,两者表达差异显著(ratio=2.1644±1.3940,P＜0.05);分化程度低的肿瘤细胞Wip1 mRNA表达量显著高于分化程度高者（P<0.05）。3种肺癌细胞中的Wip1 mRNA表达量显著高于正常支气管上皮细胞,差异显著(均P＜0.05)。结论: Wip1mRNA在非小细胞肺癌中过表达,可能与肿瘤发生有关,有望成为非小细胞肺癌基因治疗的新靶点。Wip1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达与肿瘤细胞分化程度有关,可能成为确定肿瘤恶性程度的分子生物学参考指标。     

不同标本制备法对小鼠小肠组织中ERK1/2和pERK1/2免疫组织化学定位的影响

目的:本研究针对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员细胞外信号调节激酶(ERK1/2),以及磷酸化的ERK1/2(pERK1/2),探讨不给任何刺激时,用不同标本制备法检测ERK1/2在小鼠小肠组织中的免疫组织化学定位。方法:分别应用灌流固定脱水法(PF-DH),浸泡固定脱水法(IM-DH),快速冻结-冻结置换法(QF-FS)制备的标本,通过免疫组织化学显色检测ERK1/2和pERK1/2在肠上皮中的定位。结果:应用PF-DH法,ERK1/2位于几乎所有上皮细胞的核中,而pERK1/2在上皮细胞中很难检测到。应用IM-DH法,ERK1/2位于所有上皮细胞的胞质和核内,pERK1/2仅位于小肠绒毛顶部的上皮细胞内,而不存在于肠隐窝区域的上皮细胞中。应用QF-FS法制备的标本中,ERK1/2定位于所有上皮细胞的胞质中,而pERK1/2主要存在于肠隐窝部位和肠绒毛顶部的上皮细胞中。结论:本研究结果提示,用不同的标本制备方法会影响ERK1/2的免疫组织化学定位。通过比较不同标本制备方法取材的小鼠小肠组织中的ERK1/2和pERK1/2的免疫组织化学定位,得出QF-FS法可能为最接近活体状态的小鼠小肠组织中的ERK1/2和pERK1/2定位的方法。     

非小细胞肺癌中Frat1与Axin表达的相关性及意义

目的近年来肺癌的发病率及死亡率逐年升高,寻找新的靶向治疗方向的要求日益迫切。作为Wnt通路中的一个新成员,Frat1在肺癌组织中的表达情况以及Frat1与Axin在肺癌组织中表达相关性的研究甚少。方法用免疫组化SP法对120例原发性非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术标本中Frat1和Axin的表达进行检测,使用SPSS 16.0统计数据。结果在NSCLC中Frat1的阳性表达与肺癌组织的低分化(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.033)、TNM分期相关(P=0.039);Axin的异常表达与肺癌组织的低分化(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.036)、TNM分期相关(P=0.043);Frat1的阳性表达与Axin的异常表达有相关性(P=0.025)。结论 Frat1和Axin在NSCLC中与肺癌的低分化、转移、高级别TNM分期等恶性表型有关,Frat1和Axin在癌组织中的表达有相关性,Frat1可能成为非小细胞肺癌患者靶向治疗的新靶点。     

非小细胞肺癌中NDRG1与HIF-1α表达模式及相关性的研究

目的探讨非小细胞肺癌组织中NDRG1(N-myc下游调节因子1)与HIF-1α(缺氧诱导因子1α)的表达模式及关联。方法应用免疫组织化学方法检测105例非小细胞肺癌及癌旁肺组织中NDRG1和HIF-1α的蛋白表达。应用Western Blotting检测12对新鲜肺癌组织及癌旁肺组织中NDRG1及HIF-1α的蛋白表达。结果 NDRG1与HIF-1α在非小细胞肺癌组织中具有相似的表达模式,均主要表达于细胞浆,阳性率分别为55.2%(58/105)及50.5%(53/105),部分病例伴有细胞核(分别为20.0%(21/105)及35.2%(37/105))和细胞膜(分别为11.4%(12/105)及7.6%(8/105))的表达,总的阳性率分别为60.0%(63/105)及53.3%(56/105)。NDRG1在癌旁肺组织中的表达(17.1%(18/105))低于癌组织(<0.05),HIF-1α在癌旁肺组织中的表达(46.7%(49/105))与癌组织中的表达无显著差异(>0.05),NDRG1与HIF-1α在非小细胞肺癌组织中的表达水平呈正相关(r=0.210,<0.05)。Western Blotting结果显示NDRG1在肺癌组织中的表达高于癌旁肺组织(<0.05),其在癌组织中的表达与HIF-1α的蛋白表达呈正相关(<0.05)。HIF-1α在癌及癌旁组织中的表达无明显差异(<0.05)。结论 NDRG1在非小细胞肺癌高表达与HIF-1α表达呈正相关,二者可能在肿瘤内部缺氧诱导的应激反应过程中存在相互作用。     

非小细胞肺癌中LASS2/TMSG1的表达及其临床意义

目的探讨LASS2/TMSG1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测NSCLC和癌旁正常组织中LASS2/TMSG1蛋白的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系,并进行术后随访。结果LASS2/TMSG1蛋白在NSCLC组织中的表达(21/87,24.13%)明显低于正常肺组织(15/25,60.00%)。LASS2/TMSG1在NSCLC组织中的表达与肿瘤分化、淋巴结转移呈负相关(P<0.05),且LASS2/TMSG1阳性患者的总生存期及无瘤生存期均明显高于LASS2/TMSG1阴性患者(P<0.05)。多因素Cox分析显示,LASS2/TMSG1是NSCLC患者的独立预后因素。结论LASS2/TMSG1可能抑制肺癌的发生、分化及转移,有望成为肺癌患者的预后指标之一。     

非小细胞肺癌survivin、p53和COX-2蛋白的表达

目的探讨非小细胞肺癌组织中survivin、p53和环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达及其在肺癌发生、分化程度、淋巴结转移以及预后评估中的意义。方法采用SP法免疫组化技术检测70例非小细胞肺癌组织中的survivin、p53和COX-2表达情况。结果survivin和COX-2阳性表达与肺非小细胞癌组织的分化程度、有无淋巴结转移及临床TNM分期有关（P〈0．01）;p53阳性表达与非小细胞肺癌组织的分化程度有关（P〈0．01）。同时发现,survivin、p53和COX-2（＋＋＋～＋＋＋＋）阳性表达率明显高于（＋～＋＋）,差异有显著性（P〈0．01）。这3种抗体中在非小细胞肺癌中的阳性表达占76％。结论survivin、p53和COX-2的表达在非小细胞肺癌组织的浸润、转移和发展中具有重要意义,有助于对非小细胞肺癌的诊断及预后的评价。     

非小细胞肺癌中PD-L1表达及其与肺癌相关驱动基因的关系

目的探讨程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与临床病理特征、肺癌相关驱动基因的关系。方法采用免疫组化En Vision法检测323例NSCLC肿瘤细胞、肿瘤浸润性免疫细胞PD-L1的表达;应用二代测序技术检测肺癌相关驱动基因(EGFR、KRAS、ALK)突变情况;分析PD-L1在肿瘤细胞、肿瘤浸润性免疫细胞中的表达,及与NSCLC临床病理特征及肺癌驱动基因的关系。结果 NSCLC肿瘤浸润性免疫细胞PD-L1的表达明显高于肿瘤细胞(P 0.001);肿瘤细胞PD-L1在鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)中的表达高于腺癌(P 0.05)。当NSCLC肿瘤细胞中PD-L1阳性率≥50%时,PD-L1表达与患者性别、吸烟、肿瘤大小及淋巴结转移有关(P 0.05);腺癌中PD-L1表达仅与肿瘤大小及淋巴结转移相关(P 0.05)。肿瘤细胞PD-L1的表达与EGFR、KRAS基因突变相关(P 0.01)。NSCLC肿瘤浸润性免疫细胞PD-L1阳性率≥10%,PD-L1的表达与EGFR、KRAS基因突变有关(P 0.05),而腺癌PD-L1的表达仅与KRAS基因突变相关(P=0.036)。结论当肿瘤细胞PD-L1阳性率≥50%或肿瘤浸润性免疫细胞PD-L1阳性率≥10%,NSCLC、腺癌中PD-L1的表达与KRAS基因突变相关,提示伴KRAS基因突变的肺癌患者有可能从抗PD-1/PD-L1免疫治疗中获益,从而提高生存率。     

窖蛋白-1在肺癌中的表达及意义

目的 探讨窖蛋白-1（caveolin-1）在不同类型肺癌组织中的表达及其与微血管密度（MVD）和临床病理因素之间的关系。方法 对154例原发性肺癌、相应癌旁正常肺组织及36例淋巴结转移癌行caveolin-1免疫组织化学染色;对154例原发性肺癌行CD34免疫组织化学（SP法）染色并进行微血管密度计数;Western印迹法检测其中50例新鲜肺癌组织及其癌旁正常肺组织中caveolin-1的表达情况。结果 caveolin-1为膜／质表达蛋白,在正常支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞中的阳性率为100％。在肺癌组织中的阳性率为59．1％（91／154）,低于癌旁正常肺组织,P＜0．01;Western印迹结果进一步证实caveolin-1在肺鳞癌、肺腺癌组织中的表达均显著低于癌旁正常肺组织,P＜0．01。caveolin-1在小细胞肺癌（SCLC）和非小细胞肺癌（NSCLC）中的阳性率分别为7．1％和64．3％,二者间差异有统计学意义,P＜0．01。NSCLC中,有淋巴结转移组caveolin-1表达高于无淋巴结转移组（P=0．005）;Ⅲ、Ⅳ期组caveolin-1表达显著高于Ⅰ、Ⅱ期组（P=0．042）,caveolin-1表达与NSCLC的其他临床病理因素及MVD值无关（P＞0．05）。结论caveolin-1其作为一种肿瘤抑制因子的同时,可能还具有促进NSCLC进展和转移的活性。     

非小细胞肺癌中YAP1、SRPX2的表达与微血管密度及预后的相关性分析

目的探讨YAP1和SRPX2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达与微血管密度(microvessel density,MVD)及预后的关系。方法采用Western blot法检测NSCLC及其癌旁正常组织中YAP1和SRPX2的表达;采用免疫组化SP法检测NSCLC及其癌旁正常组织中YAP1、SRPX2和CD34的表达,并结合临床病理特征进行相关性分析。结果Western blot实验显示YAP1和SRPX2在NSCLC组织中的表达均高于癌旁正常组织(P<0.05)。免疫组化结果显示YAP1和SRPX2在NSCLC组织中均阳性,阳性率分别为62.5%(50/80)和55%(44/80);YAP1、SRPX2的表达与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。YAP1和SRPX2阳性组的MVD值高于阴性组(P<0.05);NSCLC组织中YAP1和SRPX2表达水平均呈正相关(r=0.545,P<0.05),且YAP1和SRPX2表达与MVD值呈正相关。生存分析显示,YAP1和SRPX2阳性组生存期明显低于阴性组。结论YAP1和SRPX2在NSCLC中的表达具有相关性,两者可能在NSCLC的血管生成中发挥重要作用,联合检测YAP1和SRPX2的表达,可能为NSCLC的治疗提供新的预测指标和靶点。     

表皮生长因子受体基因突变与非小细胞肺癌临床病理特征及预后的关系

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因第19和21号外显子突变情况并探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术对282例NSCLC患者手术标本的石蜡包埋癌组织EGFR基因第19和21号外显子片段进行扩增并测序,分析EGFR突变与临床病理特征及预后的关系。结果282例NSCLC组织中120例(42.6％)存在EGFR基因突变,包括第19号外显子突变61例,第21号外显子突变66例,其中7例第19和21号外显子同时存在突变。女性EGFR突变率(55.2％,53/96)高于男性的(36.0％,67/186),年龄51～60岁患者EGFR突变率(51.3％,39/76)高于≤50岁者(30.4％,21/69)和＞60岁者(43.8％,60/137),非吸烟者的EGFR突变率(54.3％,69/127)高于吸烟者的(32.9％,51/155),EGFR突变与吸烟呈负相关（P =0.000,rs=-0.216）;腺癌（47.8％,64/134）、细支气管肺泡癌(73.0％,27/37)、腺鳞癌(7/9)中EGFR突变率均明显高于鳞癌(23.6％,17/72)、其他类型(16.7％,5/30)中的突变率,分化程度中高、中、低、未分化的EGFR突变率分别为55.7％ (68/122)、50.8％( 30/59)、22.7％( 17/75)、19.2％ (5/26),随着分化程度的降低而降低,EGFR突变与肺癌组织分化程度呈正相关(P =0.000,rs=0.296);EGFR基因突变型的患者生存期明显较野生型的长(P =0.027),EGFR突变与临床TNM分期不相关。结论EGFR基因突变在女性患者、年龄51 ～60岁患者、非吸烟者及腺癌、细支气管肺泡癌、腺鳞癌中多见,EGFR突变与肺癌组织分化程度呈正相关,存在基因突变的患者预后较好,有利于患者靶向治疗的临床筛选。     

非小细胞肺癌中Axin与β-连环素异常表达的关系

目的 探讨Axin（axis inhibition protein）和β-连环素（β-catenin）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达、β-catenin突变及它们与各临床病理因素的关系。方法 采用免疫组织化学（SP法）和直接测序方法对100例NSCLC标本中Axin和β-catenin的表达和β-catenin基因突变进行了检测。结果 β-catenin的细胞膜表达降低率为80．0％,细胞核表达率为26．0％。高、中分化和低分化NSCLC中,β-catenin的表达降低率分别为70．0％（35／50）和90．0％（45／50）,差异有统计学意义（P=0．012）。有淋巴结转移和无淋巴结转移NSCLC中β-catenin表达降低率分别为87．3％（48／55）和71．1％（32／45）,差异有统计学意义（P=0．044）。Axin的阳性表达率为48．0％,高、中分化和低分化NSCLC中,Axin的阳性率分别为60．0％（30／50）和36．0％（18／50）,差异有统计学意义（P=0．016）。在β-catenin核表达阳性的病例中,Axin阳性表达率为15．4％（4／26）,低于β-catenin核表达阴性的病例（59．5％,44／74）（P〈0．001）。100例肺癌新鲜标本中未发现β-catenin基因第三外显子突变。结论 β-catenin的膜表达降低与NSCLC的低分化和淋巴结转移相关,Axin的表达与NSCLC的低分化和β-catenin的细胞核蓄积负相关。β-catenin基因第三外显子的突变可能不是NSCLC中β-catenin蛋白异常表达的主要原因。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的临床病理学意义。方法应用即时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测1444例NSCLC患者肺癌组织中EGFR基因第19号和21号外显子突变状况,分析EGFR基因突变与年龄、性别、吸烟状况、组织学分级及临床分期之间的关系。结果1410例成功分型的NSCLC肿瘤组织中401例存在EGFR突变,突变检出率为27.8％,其中193例第19号外显子发生缺失突变,208例第21号外显子发生替代突变。EGFR突变更常见于腺癌、不吸烟或女性患者[突变率分别为33.5％ (367/1094)]、37.6％( 321/853)及43.2％ (225/521)。细支气管肺泡癌及伴细支气管肺泡癌分化特征的腺癌突变率显著高于普通腺癌[突变率分别为61.3％( 19/31)、48.0％( 12/25)及32.4％ (336/1038)]。随着吸烟暴露水平的增加,EGFR突变率呈下降趋势;女性、不吸烟、腺癌为EGFR基因突变状况的独立影响因素。结论NSCLC患者女性、不吸烟、腺癌患者突变率较高。即时荧光定量PCR技术可快速、敏感、准确地检测EGFR基因突变。     

粒细胞集落刺激因子在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床病理意义

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达并探讨其临床病理意义.方法 收集解放军总医院2001 - 2010年伴有大量粒细胞浸润的NSCLC 53例,同时选用无粒细胞浸润的NSCLC 61例作对照,共114例.观察癌组织中粒细胞浸润情况,同时用免疫组织化学(EnVision法)检测癌组织中G-CSF的表达情况.对G-CSF表达情况及其与NSCLC临床病理特征的关系进行统计学分析,并随访全部患者,分析G-CSF表达对预后的影响.结果 114例NSCLC中55例癌细胞表达G-CSF.其中大细胞癌41例(41/54,75.9％),腺癌9例(9/30,30.0％),鳞状细胞癌5例(5/30,16.7％).G-CSF表达与癌组织中粒细胞浸润、组织学类型、坏死、肿瘤分级、局部淋巴结转移和远处转移、复发密切相关(P＜0.01),而与原发肿瘤大小无密切关联(P＞0.05);表达阳性者发生坏死、淋巴结转移、远处转移复发的相对危险度分别是阴性者的5.57、6.28和5.24倍(P＜0.05).阳性者与阴性者中位生存期分别为42和62个月,5年生存率分别为0和12.1％,生存期间的差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 部分NSCLC能产生G-CSF,且以大细胞癌最常见.产生G-CSF的NSCLC组织分化差,异型性明显,恶性度高;易发生广泛坏死,常伴有粒细胞浸润;易发生淋巴结转移、远处转移和复发;生存率低,预后差.     

p73：人类非小细胞肺癌细胞株中的肿瘤抑制基因(英文)

目的：p73基因是与p53相类似的基因,在人类神经母细胞瘤中被假定作为肿瘤抑制基因。为了证实p73在非小细胞肺癌中是否也是肿瘤抑制基因，我们应用StyⅠ内切酶多态分析法研究了6株非小细胞肺癌细胞的等位基因表达模式。方法：利用RT-PCR检测p73基因在这6株肺癌细胞中转录水平的表达，同时用免疫组织化学方法检测5株非小细胞肺癌细胞所诱发的裸鼠种植瘤中P73蛋白的表达。结果：p73基因在这6株非小细胞肺癌中均为纯合性等位基因表达，而GC/GC基因型为主要类型。p73基因在转录水平和蛋白水平完全丧失表达。结论：根据实验结果可推测，p73在这6株非小细胞肺癌细胞中仍扮演了肿瘤抑制基因的角色。     

p120ctn在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨p120ctn在非小细胞肺癌组织中的表达及与各临床病理因素和预后的关系.方法应用p120ctn单克隆抗体,采用免疫组织化学SP法检测143例非小细胞肺癌p120ctn表达情况,其中36例同时应用Western blot方法对其蛋白表达和亚型情况进行了观察.结果免疫组织化学正常支气管黏膜细胞p120ctn表达为细胞膜强阳性,而在非小细胞肺癌中绝大多数表现为膜表达减弱或出现胞质内异位表达,其异常表达率为79.7%(114/143).异常表达与组织学类型无关(P>0.05),但与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与非小细胞肺癌患者不良预后正相关.胞质的异位表达更容易出现在胞膜表达减弱的病例中,鳞癌中胞质异位表达高于腺癌.Western blot正常组织中p120ctn总蛋白量明显高于非小细胞肺癌,二者差异有统计学意义(P＝0.003).正常肺组织p120ctn以亚型1(相对分子质量120 000)和亚型3(相对分子质量100 000)表达为主,而肿瘤组织中则以亚型1表达缺失或减弱为主.结论 p120ctn在非小细胞肺癌组织有异常表达,可作为评估预后的辅助指标.     

Increased ZO-1 expression predicts valuable prognosis in non-small cell lung cancer

Objective: The aim of this study was to investigate the expression of Zonula Occludens-1 (ZO-1) and its potential value as prognostic indicator of survival in patients with primary non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and immunohistochemistry with tissue microarrays were used to characterize the expression of the ZO-1 mRNA and protein in NSCLC. The correlation of ZO-1 expression with clinical characteristics and prognosis was determined by statistical analysis. Results: The ZO-1 mRNA and protein levels were significantly lower in NSCLC tissue compared with corresponding peritumoral tissue (P<0.05). ZO-1 protein expression in NSCLC was related to age (P=0.042) and 5-year survival (P<0.001). Kaplan-Meier survival and Cox regression analyses revealed that low ZO-1 expression (P<0.001) and later stage grouping by TNM (P=0.031) were independent factors predicting poor prognosis for patients with NSCLC. Conclusions: Our findings provide the first evidence that high expression of ZO-1 is associated with good prognosis in NSCLC.     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的相关性

目的探讨中国非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变特点及与临床病理特征的相关性。方法采用优化寡核苷酸探针聚合酶链反应(PCR)法检测309例甲醛固定、石蜡包埋NSCLC组织中EGFR基因第18 ～21号外显子突变情况,分析EGFR突变与临床病理特征的关系。结果受检309例NSCLC样本中,E...