香烟烟雾提取物下调小鼠C2C12成肌细胞组蛋白去乙酰化酶2表达并增强炎性细胞因子释放

目的观察香烟烟雾暴露后,小鼠C2C12成肌细胞内炎症介质、组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)和核因子κB(NF-κB)的变化。方法培养小鼠C2C12成肌细胞,用香烟烟雾提取物(CSE)进行处理。采用MTT法观察CSE对细胞生长的影响,以确定作用于细胞的合适浓度。将培养6~7 d的C2C12细胞接种到6孔板,分为对照组和(6.25、12.50、25.0)mL/L CSE组,培养24h。ELISA测定各组细胞上清液白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞HDAC2 mRNA的表达;Western blot法检测各组细胞中HDAC2的蛋白相对表达量;免疫共沉淀技术检测细胞内HDAC2/NF-κB复合物。结果 MTT结果提示终浓度为50 mL/L的CSE抑制C2C12细胞的生长;CSE刺激24h后,C2C12细胞IL-8和TNF-α释放增加,HDAC2的mRNA及蛋白相对表达量减少,并在一定程度上具有浓度依赖性;免疫共沉淀技术证实存在HDAC2/NF-κB复合物。结论 CSE下调C2C12细胞HDAC2表达,引起炎症因子释放增加。     

香烟烟雾对C2C12小鼠成肌细胞HDAC2及炎症介质的影响

目的:探讨香烟烟雾提取物(CSE)对C2C12小鼠成肌细胞组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)和炎症介质的影响。方法:CSE刺激C2C12细胞,用质粒脂质体法将构建好的HDAC2 siRNA转染细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting法检测HDAC2的表达情况,ELISA检测细胞培养上清白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:CSE组细胞HDAC2的mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P0.05),细胞上清IL-8和TNF-α的水平明显高于对照组(P0.05);应用HDAC2 siRNA转染细胞后再用CSE刺激细胞,细胞HDAC2的mRNA及蛋白表达均明显低于CSE组及对照组(P0.05),细胞释放IL-8和TNF-α的量均明显高于CSE组及对照组(P0.05)。结论:氧化应激条件下C2C12小鼠成肌细胞通过下调HDAC2表达使IL-8和TNF-α表达增多。     

人参皂苷Rg1对体外培养C2C12成肌细胞凋亡的影响

目的:研究人参皂苷Rg1对体外无血清诱导培养的C2C12成肌细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:采用MTT法、人参皂苷Rg1处理48 h后hoechst 33258-PI染色,以及RT-PCR方法观察不同浓度人参皂苷Rg1对C2C12成肌细胞凋亡的影响.结果:MTT法结果显示人参皂苷Rg1处理48 h后可抑制C2C12成肌细胞凋亡；Hoechst 33258-PI染色可见C2C12成肌细胞凋亡率人参皂苷处理前后差异有统计学意义,人参皂苷处理后C2C12成肌细胞凋亡率显著下降；RT-PCR法结果显示人参皂苷Rg1可抑制Caspase-3、Bax和AIF mRNA表达,并能诱导Bcl-2 mRNA表达.结论:人参皂苷Rg1对C2C12成肌细胞凋亡具有保护作用.     

香烟烟雾提取物通过活化NF-κB上调小鼠巨噬细胞ICAM-1表达

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)对香烟诱导的小鼠巨噬细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的调控机制,以及地塞米松的抑制作用。方法:分别用香烟烟雾提取物(CSE)、CSE 二硫基氨基甲酸吡咯烷(PDTC)、CSE 地塞米松(DEX)与小鼠巨噬细胞共同孵育1、4和12h,采用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测巨噬细胞NF-κB和ICAM-1的表达。结果:(1)CSE组巨噬细胞NF-κB核染色阳性细胞百分比(41.50%±1.30%)明显高于对照组(10.40%±1.57%),P<0.01;CSE PDTC组和CSE DEX组阳性细胞百分比(17.89%±2.62%,12.72%±1.10%)明显低于CSE组,均P<0.01;(2)CSE组巨噬细胞ICAM-1mRNA水平(1.34±0.05)及其蛋白表达阳性细胞百分比(43.02%±2.37%)明显高于对照组(0.49±0.03,10.58%±0.88%),均P<0.01;CSE PDTC组和CSE DEX组巨噬细胞ICAM-1mRNA水平(0.98±0.05,1.07±0.04)及其蛋白表达阳性细胞百分比(18.42%±1.06%,27.76%±2.06%)明显低于CSE组,均P<0.01;(3)巨噬细胞NF-κB核染色阳性细胞百分比与ICAM-1mRNA水平及其蛋白表达阳性细胞百分比均呈显著正相关(分别为r=0.789和r=0.833,均P<0.01)。结论:香烟可通过诱导巨噬细胞NF-κB的活化在转录水平上上调ICAM-1的表达,地塞米松可抑制香烟诱导的NF-κB活化和ICAM-1的表达。     

三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的SIRT6/NF-κB信号轴

背景:SIRT6/NF-κB信号轴是细胞衰老的调控通路,但其在造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cell,HSC/HPC)衰老中的作用尚不清楚。目的:探讨SIRT6/NF-κB信号通路在三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的作用。方法:免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC。用100μmol/L三丁基过氧化氢体外诱导Sca-1+HSC/HPC构建体外衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期、造血祖细胞混合集落培养确定三丁基过氧化氢诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用。荧光定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果与结论:与对照组比较,衰老组Sca-1+HSC/HPCβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞数、G0/G1期细胞比例增高,形成造血祖细胞混合集落数量减少;SIRT6 mRNA及蛋白表达下调,NF-κB mRNA及蛋白表达上调。结果表明三丁基过氧化氢可能通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥诱导Sca-1+HSC/HPC衰老作用。     

二甲双胍抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞的光老化效应

目的研究二甲双胍(MF)对长波紫外线(UVA)诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)光老化效应的抑制作用及相关机制。方法体外培养人皮肤成纤维细胞,分为对照组(control)、UVA组、UVA+MF组。以CCK-8法检测细胞增殖;对各组细胞进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色;以荧光探针DCF-DA染色流式细胞仪检测细胞内ROS水平;real-time PCR检测衰老相关基因MMP1、MMP3的mRNA相对表达量;Western blot检测蛋白MMP1、MMP3、SOD1和SOD2的表达。结果 0.01 mmol/L二甲双胍对HSF增殖无显著影响,0.1和1 mmol/L二甲双胍则显著抑制HSF的细胞增殖(P0.05)。与对照组相比,UVA组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增高(P0.01);ROS水平显著升高(P0.05);MMP1和MMP3 mRNA相对表达量显著增加(P0.01);MMP1和MMP3蛋白表达量显著增多(P0.01);SOD1、SOD2蛋白表达显著减少(P0.01)。与UVA组相比,UVA+MF组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著降低(P0.05);ROS水平显著下降(P0.05);MMP1和MMP3的mRNA相对表达量显著降低(P0.05);蛋白MMP1和MMP3表达量显著降低(P0.05);蛋白SOD1表达显著增加(P0.01);SOD2表达量增加。结论二甲双胍可通过抑制细胞内ROS水平和相关基质金属蛋白酶的表达,提高细胞抗氧化能力,从而抑制UVA诱导的皮肤成纤维细胞的光老化效应。     

何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞p53、Bcl2和BAX mRNA表达的影响

目的:探讨何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞p53、 Bcl2、BAX mRNA表达的影响。方法:用自由基氧化损伤方法建立睾丸间质细胞衰老模型,通过β-半乳糖苷酶染色观察何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞衰老情况的影响;应用实时荧光定量PCR检测p53、Bcl2和BAX mRNA在间质细胞中表达水平。结果:间质细胞模型组β-半乳糖甘酶含量明显高于正常组,何首乌饮能明显降低间质细胞衰老标志物β-半乳糖甘酶的含量。模型组间质细胞p53、BAX的mRNA水平明显高于正常组,Bcl2的mRNA表达水平低于正常组;何首乌饮干预组的p53、BAX的mRNA表达低于模型组,Bcl2的mRNA表达水平高于模型组。结论:何首乌饮可以上调间质细胞Bcl2mRNA表达水平,下调p53和BAX的mRNA表达。     

Reversine对小鼠C2C12成肌细胞增殖与分化作用的初步研究

目的　初步探讨Reversine对小鼠C2C12成肌细胞增殖分化的影响。 方法　体外培养　C2C12成肌细胞系.实验第一步分三组:A组：正常对照组,B组：1μM Reversine处理12h组,C组：1μM 　Reversine处理24 h组。上述三组用Annexin-V/PI双染法处理C2C12成肌细胞并用流式细胞仪技术检测三组C2C12细胞凋亡的影响;实验第二步分五组：D组：正常对照组,E组：单独1 μM Reversine处理7d,F组：单独成骨诱导7 d,G组：1 μM Reversine诱导12h＋单独成骨诱导7d,H组：1μM Reversine诱导12h+1 μM Reversine联合成骨诱导7 d。上述五组光镜下观察细胞形态的变化,并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测五组C2C12成肌细胞分化抑制因子（ID2）,肌肉发生调节因子（Myogenin）,生肌因子后结蛋白(Desmin)mRNA的表达。 结果　与A组相比,C组1μM Reversine处理24h能引起C2C12细胞明显的凋亡,B组1 μM Reversine处理12 h的C2C12细胞未见明显的凋亡。与D组相比,E组和H组的细胞增殖明显受到抑制,F组和G组细胞逐渐增殖并融合。 结论　Reversine能够显著的抑制成肌细胞的增殖分化过程。     

衰老相关-β-半乳糖苷酶和P16在老年大鼠脾内的表达及意义

目的:研究衰老相关-β-半乳糖苷酶和P16在老年大鼠脾内的表达及意义.方法:采用组织化学及SABC免疫组织化学检测成年及老年Wistar大鼠脾组织内衰老相关-β-半乳糖甘酶及P16蛋白的表达.结果:衰老相关-β-半乳糖苷酶阳性细胞主要分布于脾内的边缘区及脾索,老年大鼠较成年大鼠阳性细胞数量显著增多.P16阳性细胞也主要分布于脾内的边缘区及脾索;与成年鼠相比,老年大鼠P16阳性细胞显著增多.结论:P16和衰老相关-β-半乳糖苷酶在大鼠脾内高表达,可能与脾的衰老相关.     

周期性张应力对C2C12成肌细胞增殖的影响

背景：在力学刺激下,肌肉组织发生改建,其中的成肌过程是一个多阶段的发育过程,细胞外基质的许多信号参与了成肌过程,其中力学信号是肌肉形成和再生的重要外界因子。目前国内外有许多关于周期性张应力刺激成肌细胞凋亡和增殖的报道,但是力学刺激在成肌作用中的具体机制目前还明确。 目的：探讨周期性张应力对C2C12成肌细胞增殖的作用及影响机制。 方法：采用FX4000T应力加载系统对体外培养的C2C12成肌细胞施加10%的周期性张应力,分别作用6,12,24 h。 结果与结论：MTT结果显示,随着加力时间的延长C2C12成肌细胞的增殖情况及S期的细胞周期率逐渐增加,在应力作用12 h时增殖效果最明显(P < 0.05),随后开始降低。Western blot检测显示,C2C12成肌细胞中核转录因子κB蛋白的表达随加力时间增加而不断减少,加力24 h时表达量又开始上升。结果提示,周期性张应力可以诱导C2C12成肌细胞增殖,能够改变其细胞周期,核转录因子κB可能也参与了此调节过程。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

香烟烟雾提取物通过蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1表达

 目的：探讨蛋白激酶C（PKC）-红系衍生的核因子相关因子2 (Nrf2)对香烟烟雾提取物（CSE）诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法：通过CSE刺激雄性SD大鼠气道上皮细胞,使用PKC抑制剂RO318220和Nrf2 siRNA,将细胞分为对照组、CSE 3 h组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和RO318220+Nrf2 siRNA组,用Western blotting法分别检测HO-1、Nrf2和p-PKC蛋白表达,免疫细胞化学法观察HO-1蛋白表达,逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HO-1 mRNA表达,免疫荧光法检测Nrf2蛋白定位,测定HO-1活性。结果：暴露CSE 3 h后,Nrf2蛋白主要表达在胞核, 胞核蛋白表达增强,p-PKC蛋白、HO-1的mRNA和蛋白高表达,HO-1活性增强。预先给予RO318220,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1的mRNA和蛋白表达均明显减弱,HO-1活性显著降低。预先用siRNA沉默Nrf2,胞浆和胞核的 Nrf2蛋白表达均减弱,HO-1活性、mRNA和蛋白水平明显降低。RO318220联合Nrf2 siRNA处理后,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达均明显降低,HO-1活性明显降低。结论：CSE通过PKC激活Nrf2,诱导Nrf2核转位,从而上调HO-1的表达水平。     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

应力加载对体外培养C2C12细胞自身抗原及TLR3的影响

目的　探讨机械应力加载是否干扰体外培养C2C12成肌细胞自身抗原及TLR3的转录表达。 方法　对生长于BioFlex柔性基底膜表面的C2C12细胞施加不同频率的拉伸加载,流式细胞术分析细胞增殖情况。Real-time RT-PCR检测并比较分析应力加载前、后骨骼肌自身抗原(HRS、Mi-2、U1-70、DNA-PKcs）、TLR3的mRNAs表达差异。 结果　0.25 Hz、10%幅度、2 h/d的拉伸条件能加速C2C12细胞进入细胞周期。 2 d和4 d拉伸组DPI较对照组提高（P＜0.05）,尤以2d拉伸组细胞增殖最为显著。拉伸2 d时,C2C12细胞内HRS、 Mi-2、U1-70、DNA-PKcs以及TLR3的mRNA水平均显著低于同一培养时间的对照组（P＜0.05）。 结论　机械应力刺激信号可能参与下调与骨骼肌组织炎症相关的免疫调节分子。     

周期性机械拉伸对C2C12成肌细胞增殖的影响

目的：探讨不同的周期性拉伸应变条件对C2C12成肌细胞增殖的影响。方法：周期性拉伸的各种力学条件通过BioFlex加载系统实现，采用应用流式细胞术和BrdU法对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行分析，反映成肌细胞增殖情况。结果：不同的周期性机械拉伸条件影响C2C12细胞的增殖，拉伸的频率对C2C12细胞增殖有较大的影响。在0．5Hz拉伸频率下，2．5％、5％和10％的细胞变形幅度都不能促进细胞的增殖，其中10％（0．5Hz）的拉伸幅度抑制C2C12成肌细胞的增殖；而在0．125Hz拉伸频率下，10％的细胞变形幅度明显地促进C2C12成肌细胞的增殖。结论：较低的拉伸频率有利于成肌细胞的增殖，高频率的拉伸抑制成肌细胞的增殖。     

SIRT1/eNOS/NO通路在人参皂苷Rb1抗内皮细胞复制性衰老中的作用

目的:观察人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨SIRT1/e NOS/NO通路在其中的作用机制。方法:建立原代HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老情况;采用real-time PCR方法和Western blot法检测沉默SIRT1前后衰老细胞中e NOS和PAI-1的mRNA和蛋白表达,并检测细胞上清NO的含量。结果:累积细胞群体倍增水平(CPDL)为16的HUVECs可作为复制性衰老模型; 80μmol/L人参皂苷Rb1处理后衰老细胞内SIRT1和eNOS的mRNA及蛋白表达水平增加,NO含量增加(P 0. 05),而PAI-1的mRNA和蛋白表达水平下降(P 0. 05);沉默SIRT1后,衰老细胞内e NOS的mRNA及蛋白表达减少,PAI-1的mRNA及蛋白表达增加,NO含量减少(P 0. 05);与SIRT1沉默组比较,在沉默SIRT1基础上加用人参皂苷Rb1后,e NOS和PAI-1表达水平及NO的含量未见明显变化。结论:人参皂苷Rb1可通过调控SIRT1/e NOS/NO通路延缓HUVECs复制性衰老。     

MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。     

导电弹性水凝胶促进C2C12细胞增殖的实验研究

目的　本文主要探讨一种多巴胺激活的导电冷冻水凝胶(Dopamine-based polypyrrole -methacrylated gelatin cryogel, Ppy-GelMA)对成肌细胞活性的影响。 方法　通过扫描电镜了解材料结构、细胞粘附生长情况,并通过活死染色、CCK-8试验、Ki-67免疫荧光染色明确此水凝胶对C2C12细胞的影响。 结果　扫描电镜结果显示此水凝胶具有均一连通的多孔结构, Ppy-GelMA导电水凝胶上的成肌细胞具有同向排列性;活死染色显示此水凝胶对C2C12成肌细胞有良好的细胞相容性;CCK-8检测显示Ppy-GelMA导电水凝胶上的细胞活力显著高于GelMA水凝胶上的细胞活力; Ki67免疫染色结果显示Ppy-GelMA导电水凝胶相比GelMA水凝胶拥有更高的Ki67阳性细胞率。 结论　Ppy-GelMA导电水凝胶可促进成肌细胞增殖。     

静脉表型分子COUP-TFⅡ表达降低对血管内皮细胞衰老的影响

目的:观察静脉表型分子鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)表达对血管内皮细胞衰老的影响和分子机制。方法:通过RT-qPCR检测比较人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中COUP-TFⅡ的表达情况。使用10~(-5)mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导HUVEC衰老,通过COUP-TFⅡ特异性小干扰RNA(siCOUP-TFⅡ)转染HUVEC使其COUP-TFⅡ的表达降低,利用β-半乳糖苷酶染色、Western blot、CCK-8、细胞计数等方法分别观察siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老及增殖的影响,通过Western blot检测Akt信号分子的表达变化。结果:与HCAEC相比,HUVEC中COUP-TFⅡ呈显著高表达;用siCOUP-TFⅡ抑制HUVEC的COUP-TFⅡ表达时,能显著促进AngⅡ诱导的内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖和p-Akt蛋白水平;加入Akt激动剂SC79(4 mg/L)能够部分逆转siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的HUVEC衰老和增殖的影响。结论:COUP-TFⅡ表达降低可促进血管内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖,其机制可能与调节Akt信号有关。     

Metformin limits ceramide-induced senescence in C2C12 myoblasts

High lipid and ceramide concentrations are hallmarks of obese and/or insulin resistant skeletal muscle, yet little is known about its role on cell cycle and senescence. The purpose of this study was to examine the role of ceramide on muscle senescence, and whether metformin limited this response.MethodsLow passage, proliferating C2C12 myoblasts were treated with a control, 50 μM C2-ceramide (8 h), and/or 2 mM metformin, then examined for insulin sensitivity, cell senescence, cell proliferation, cell cycle, protein expression of cell cycle regulators.ResultsCeramide treatment caused a dephosphorylation (p < 0.05) of Akt and 4E-BP1, regardless of the presence of insulin. The ceramide treated myoblasts displayed higher β-galactosidase staining (p < 0.05), reduced BrDu incorporation and total number of cells (p < 0.05), and an increased proportion of cells in G2-phase (p < 0.05) versus control cultures. Ceramide treatment also upregulated (p < 0.05) p53 and p21 protein expression, that was reversed by either pifithrin-α or shRNA for p53. Metformin limited (p < 0.05) ceramide's effects on insulin signaling, senescence, and cell cycle regulation.ConclusionsHigh ceramide concentrations reduced myoblast proliferation that was associated with aberrant cell cycle regulation and a senescent phenotype, which could provide an understanding of skeletal muscle cell adaptation during conditions of high intramuscular lipid deposition and/or obesity.