急性髓细胞白血病免疫分型特点及临床意义

目的: 探讨急性髓细胞白血病(AML)免疫分型特点及其临床意义。方法: 采用流式细胞术(FCM)对145例AML患者进行白血病免疫分型检测。结果: 145例AML患者中MPO、CD13、HLA-DR、CD33、CD34表达率分别为93.1%、90.3%、77.2%、71.7%、70.3%。CD14仅表达于急性粒单细胞白血病(M4)和急性单核细胞白血病(M5)。AML伴淋系抗原表达者以CD7(34.5%)最为多见,其中以预后较差的M5型表达率为最高,其次为CD19(10.3%),且在急性粒细胞白血病部分分化型(M₂)中表达率最高。CD2仅表达于部分急性早幼粒细胞白血病(M3),共发现2例急性混合细胞白血病,同时有淋系和髓系抗原表达。结论: MPO、CD13、CD33为髓系最敏感的抗原,CD7、CD19、CD2淋系抗原在AML诊断及预后判断上有重要指导意义,FCM免疫分型对白血病的准确分型诊断,预后判断有重要的指导意义。     

急性髓细胞白血病免疫分型与交叉表达的临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(AML)免疫表型及交叉表达的特征及临床意义,分析免疫表型对AML诊断及预后的指导意义。方法利用三色流式细胞术分析169例AML免疫表型。结果169例AML患者各亚型中,M2发病率最高,其次为M5,M3,M0,M4,M1,M7,而M6发病率最低。各种抗原表达阳性率依次为CD117占89.3%(151例),CD13占74.0%(125例),CD33占70.4%(119例),HLA-DR占65.1%(110例),CD64占55.6%(94例),CD34占49.7%(84例),CD14占10.1%(17例);169例AML中伴淋系抗原表达(LY+AML)占36.7%(62例),62例LY+AML中淋系抗原表达率最高为CD7占74.2%(46例),其次分别为CD19占17.7%(11例),CD10占8.1%(5例)。伴淋巴细胞抗原交叉表达的AML(LY+AML)完全缓解(CR)率明显低于无髓系抗原表达的AML(LY-AML),差异有统计学意义(52.8%vs76.5%,P<0.05)。结论免疫分型对AML及LY+AML的诊断、治疗方案选择及预后判断有重要临床意义。     

急性白血病34例免疫分型与疗效关系

目的：采用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和流式细胞仪（ＦＣＭ）检测３４例急性白血病（ＡＬ）的免疫表型。结果：所检测的各种抗原的阳性表达率依次为ＣＤ３３〉ＣＤ１３〉ＣＤ１１ｂ〉ＣＤ１４,干／祖细胞分化抗原ＣＤ３４的表达率为２６．９％,Ｍ３表达ＣＤ３４和ＨＬＡ－ＤＲ。ＣＤ＾＋３４的完全缓解（ＣＲ）率明显低于阴性组。表明免疫表型的研究将有助于指导临床治疗及判断预后。     

流式细胞术用于混合型白血病及急性未分化型白血病的诊断

选用美国ＢＤ公司的急性白血病免疫表型分析试剂盒,以流式细胞术方法对白血病患者进行细胞免疫者分析,观察系属抗原表达情况,计算各系属Ｃａｔｏｖｓｋｙ积分,对混合型白血病和急性未分化型白血病进行鉴别诊断。结果根据Ｃａｔｏｖｓｋｙ积分标准,洒系和粒系的各自积分≥２分者,诊断为混合型白血病,急性未分化型白血病各系属特性抗原表达均为阴性。５１例临床白血病患者经流式细胞术分析,７例（１３．７２％）诊断为混合型白     

急性淋巴细胞白血病免疫表型的研究及其临床意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)免疫表型的特点及其临床意义.方法 应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测33例初诊ALL患者的免疫表型.结果 ①33例ALL分为B-ALL(75.76％),T-ALL(12.12％)和T/B-ALL(12.12％).②B-ALL中CD19表达率最高,占100％;T-ALL中CD7与cCD3表达率均为100％;CD20在成人及儿童组B-ALL表达率分别为23.53％、62.5％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD22在成人及儿童组B-ALL表达率分别为29.41％、62.5％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).③33例ALL中髓系抗原表达阳性率为60.61％,髓系抗原阳性与阴性患者完全缓解率之间的比较无统计学差异(P＞0.05).④33例ALL中CD34阳性表达率为66.67％,CD34阳性与阴性患者CR率之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD19、cCD79a分别是B-ALL中高敏感性抗原和高特异性抗原,CD7、cCD3分别是T-ALL中高敏感性抗原和高特异性抗原;儿童组CD20和CD22表达率明显高于成人组;髓系抗原和CD34的表达与CR率无相关性.     

75例白血病的免疫分型分析

目的探讨白血病免疫分型及其临床意义。方法选用CD13、CD14、CD33、CD2、CD5、CD7、CD10、CD19、CD20、CD22、CD9、CD64、CD34、HLA—DR等14种胞膜抗体，采用流式细胞仪、CD45-ssc双参数设门检测75例白血病患者免疫分型情况。结果75例各种类型白血病中，ALL23例，5例T—ALL均表达T系抗原，其中3例交叉表达CD13，3例表达CD22；18例B—ALL均表达B系抗原，其中交叉表达CD13有14例，CD33有2例，CD2有2例。髓系白血病52例，按FAB分型，M02例，M15例，M25例，M38例，M4／M526例，CML6例，交叉表达CD7有11例，CD2有4例，CD194例，CD22有10例，75例各种类型白血病中CD34阳性50例，阳性率为67％。HLA—DR53例，阳性率为67％，M3中为阴性表达。结论流式细胞仪三色免疫荧光直接标记法进行自血病免疫分型能确诊一些特殊类型的白血病，对于急性白血病的诊断治疗和预后判断均有很大的帮助。     

47例急性淋巴细胞白血病免疫表型分析

目的探讨免疫分型在急性淋巴细胞白血病（ALL）诊断及预后判断中的价值。方法采用流式细胞术对47例急性淋巴细胞白血病患者进行免疫表型检测和分析。结果 （1）47例ALL中,B-ALL36例（76.6%）,T-ALL9例（19.1%）,T/B-ALL2例（4.3%）。B-ALL中cCD79a和CD19表达率均为100.0%,明显高于CD20（83.3%）和CD10（77.8%）（P〈0.01）;9例T-ALL cCD3和CD7的表达率均为100%,明显高于CD5（77.8%）（P〈0.01）;47例ALLcMPO表达均阴性。（2）伴髓系抗原表达阳性者（My＋ALL）完全缓解（CR）率为66.7%,低于髓系抗原表达阴性者（My-ALL）（87.0%）,但无统计学意义（P〉0.05）;14例CD34＋的患者CR率为64.3%,18例CD34-的患者CR率94.4%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论免疫表型分析有助于ALL的诊断和预后判断。     

免疫分型在-些特殊类型急性白血病诊断中的应用

目的 报告免疫分型在一些特殊类型急性白血病(AL)诊断中应用的重要意义.方法 应用流式细胞术(FCM)分析369例AL的免疫表型.结果 369例AL中有2例诊断为急性髓细胞白血病(AML)·M0,1例诊断为AML-M7,0例诊断为急性杂合性白血病(HAL),5例诊断为急性未分化型白血病(AUL),2例诊断为侵袭性NK细胞白血病.结论 AML-MO、AML-M7、HAL、AUL和侵袭性NK细胞白血病等特殊类型AL的诊断依赖于细胞免疫表型分析.     

免疫分型在急性淋巴细胞白血病中的临床应用

急性淋巴细胞性白血病是一组严重影响甚至危害人们生命健康的血液系统的恶性肿瘤。近年来，由于化疗方法的改进，缓解率有不同程度的提高。尤其是在使用单克隆抗体研究白细胞表面标志后，为白血病分型工作增添了新的手段。为了在临床上了解掌握急性白血病的发生发展规律及判断预后以利于指导治疗，我们利用单克隆抗体对36例急性淋巴细胞性白血病进行了免疫分型，现将结果报告如下。     

流式细胞术在急性白血病细胞免疫表型分析中的价值

目的研究应用流式细胞技术对急性白血病进行免疫表型分析,为临床治疗和预后提供有价值的信息。方法运用双色免疫荧光抗体标记患者骨髓或外周血单个核细胞,用流式细胞仪分析白血病细胞膜免疫表型。结果分析75例急性白血病患者中,急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者12例,占16.0%;急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者24例,占32.0%;急性髓细胞白血病(AML)患者37例,占49.3%。混合型急性HALL/B有2例,占2.6%。ALL患者除均表达淋系抗原外,同时伴有髓系统抗原的表达;AML患者除均表达髓系抗原外,少部分同时伴有淋系抗原的表达。AML细胞表面抗原表达百分率成人明显高于儿童(73%/27%)。结论流式细胞技术能准确地分析并鉴别出急性白血病各型别,是白血病诊断分型的重要手段之一。     

CD117在白血病细胞中的表达及意义

目的 :探讨细胞分化抗原CD117在各型白血病中的表达情况及意义。方法 :采用三色流式细胞术 ,CD45 /SSC双参数散点图设门方法 ,对 15 9例白血病患者骨髓或外周血白血病细胞免疫分型及CD117表达进行分析。结果 :急性髓系白血病患者表达率为 5 4% ,各型急性白血病M0 /M1 ( 75 % )、M4 /M5( 62 % )、M6 ( 10 0 % )、在M3中CD117表达较低为 14 %。慢性髓细胞白血病慢性期CD117为表现性 ,加速期、急变期患者CD117阳性细胞 >10 % ,急淋、慢淋CD117均为阴性 ,在双表型白血病中CD117亦达 5 0 %。结论 :CD117有助于淋巴系和髓系白血病的鉴别 ,同时在AML中CD117的表达与CD3 4呈正相关性     

三色流式细胞术在检测儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型中的应用

目的:探讨三色荧光标记流式细胞术CD45辅助设门检测儿童急性淋巴细胞白血病(CALL)免疫表型的临床应用及意义。方法:采用流式细胞仪和几组三色荧光标记抗体检测25例FAB分型为ALL的儿童骨髓或外周血免疫表型。结果:25例ALL儿童中,B型淋巴细胞白血病14例,T型淋巴细胞白血病6例,双标记5例,在T-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD7>CD3>CD5,在B-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD19>CD10>CD22>CD20,在T-ALL、B-ALL及双标记中还可同时表达髓系抗原(CD13、CD14、CD15、CD33),且髓系标记抗原在T-ALL与B-ALL中出现的频率相同。结论:三色荧光标记流式细胞术CD45/SSC设门技术检测儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型,可准确将幼稚细胞从正常细胞群中分离出来并专门对异常细胞群进行免疫表型分析,将淋巴细胞白血病分为B型和T型白血病及双标记,并能反映髓系抗原阳性的ALL(M y+ALL),对指导临床治疗有重要价值。     

鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达

目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础。方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力。结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6%;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73%、11.96%和31.57%,阻滞2次后分别下降了26.44%、21.75%和42.11%。结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础。     

利用多指标流式细胞术和外周血标本进行白血病免疫分型的研究

目的:利用CD45/SCC组合及设门技术的多参数流式细胞术,探讨采用外周血标本在白血病免疫分型中的技术要点和资料分析中的注意事项。方法:检测标本以CD45标记,构建CD45/SSC散点图,采用一组针对不同白细胞系列的单克隆抗体进行三色或双色荧光染色,用设门技术对白血病细胞群体加以限定,进行免疫表型分析。结果:113例急性白血病患者中106例在CD45/SSC散点图上出现可供分析白血病细胞独立群体,占分析标本的94%。描述了不同白血病免疫分型的特点。讨论了运用多参数FCM白血病免疫分型的技术要点和应注意的事项。结论:多数白血病标本在CD45/SCC散点图上可出现白血病细胞群体,对白血病细胞群体设门进行分析,可迅速而可靠地获取免疫分型结果。     

CD173在急性白血病中的表达及临床意义

目的 探讨CD173在急性白血病中表达及其临床意义.方法 应用直接荧光标记法,经流式细胞术对我院血液内科2016年6~11月收治的42例急性白血病和15例对照组(非白血病患者)骨髓细胞进行CD173和CD34的检测.结果 对照组患者的骨髓单个核细胞均未见CD173阳性表达,42例急性白血病患者中阳性率为4.8%,但差异无统计学意义(P>0.05);CD173在对照组有核红细胞中的阳性率为53.3%,阳性细胞表达水平为(23.0±16.4)%,而急性白血病组有核红细胞的阳性率为50.0%,阳性细胞表达水平(21.3±13.0)%,差异均无统计学意义(P>0.05);对照组患者的骨髓单个核细胞未见CD34阳性表达,急性白血病组患者阳性率为61.9%,差异有显著统计学意义(P<0.01);26例CD34+急性白血病患者中2例表达CD173阳性,16例CD34-急性白血病患者中未见CD173阳性表达,差异无统计学意义(P>0.05).结论 CD173在急性白血病和非白血病中的表达无差异.     

抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析

目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM○R-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析。结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。     

直标鼠抗人CD14单克隆抗体2F9-FITC的研制及鉴定

目的:研制异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断.方法:2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的2F9-FITC单抗;通过流式细胞术鉴定单抗亚型,比较2F9-FITC和标准CD14-FITC在不同类型白血病细胞上的表达情况.结果:制备了大量高纯度的IgG1κ亚型2F9单抗,成功研制了直标单抗2F9-FITC,A495/A280比值为0.44;2F9-FITC与CD14-FITC在单核细胞上反应的阳性细胞百分数分别为84.50%及90.08%,而在淋巴细胞仅为0.52%和1.01%;2F9-FITC与标准CD14-FITC在各类白血病细胞上的阳性细胞百分数的差异不显著(n=23,t=0.922,P=0.367).结论:研制的2F9-FITC能够替代进口的同类高质量单抗试剂,用于单核细胞相关性白血病的免疫诊断.     

多发性骨髓瘤CD38及CD56表达的研究

目的研究CD38及CD56在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）细胞上的表达。方法采用三色免疫荧光直接标记法及多参数流式细胞术分析13例多发性骨髓瘤的免疫表型。结果13例MM标本的CD38均为强阳性；70％（9／13）骨髓瘤标本CD56和CD38双阳性。结论CD38及CD56有助于对MM的诊断，并且为MM亚型的分类提供重要的依据。     

三类Ig抗甲状腺球蛋白独特型抗体的检测与意义

用兔抗人甲状腺球蛋白(ATG)包被,建立了检测 IgG 类、IgA 类、IgM 类抗 TG 独特型抗体(ATG—Ab_2)的方法。此法可不受类风湿因子和 TG 与抗 TG 免疫复合物(TG—IC)的干扰.以正常对照组 A 值的(?)+3 s 为正常上限,甲亢、桥本甲状腺炎、甲减患者的 ATG—Ab_2总阳性率分别为58.2%、100.0%与40.0%.三类 Ig 的 ATG—Ab_2均存在.对甲亢患者检测的结果表明,ATG—Ab_2与 ATG 相互间具有排他性,提示前者对 ATG 的产生可能有负调节作用.