抗变形链球菌卵黄抗体的初步研制

目的通过用变形链球菌作为疫苗免疫蛋鸡,从鸡蛋中获得抗变形链球菌特异性抗体(抗S.mutans抗体).方法以变形链球菌Ingbritt珠(血清型c型)作为抗原免疫蛋鸡,取鸡蛋卵黄以水溶-硫酸铵沉淀-超滤提取纯化的卵黄抗体(IgY),以直接凝集法测定鸡血清及蛋黄中的抗体.结果血清中首先产生抗变形链球菌的抗体,在初免后2周逐步增高,在4～5周达到高峰,而后抗体转移到卵黄中,制备的卵黄抗体经电泳检测,相对分子质量约为210 000,纯度达到75%以上,每只鸡蛋中能提取约150 mg的IgY.结论变形链球菌菌苗免疫蛋鸡可使鸡蛋产生高效价IgY.     

抗变形链球菌卵黄抗体的初步研制

目的 通过用变形链球菌作为疫苗免疫蛋鸡，从鸡蛋中获得抗变形链球菌特异性抗体（抗S.mutans抗体）。方法 以变形链球菌Ingbritt珠（血清型c型）作为抗原免疫蛋鸡，取鸡蛋卵黄以水溶－硫酸铵沉淀－超滤提取纯化的卵黄抗体（IgY)，以直接凝集法测定鸡血清及蛋黄中的抗体。结果 血清中首先产生抗变形链球菌的抗体，在初免后2周逐步增高，在4－5周达到高峰，而后抗体转移到卵黄中，制备的卵黄抗体经电泳检测，相对分子质量约为210000，纯度达到75％以上，每只鸡蛋中能提取约150mg的IgY。结论 变形链球菌菌苗免疫蛋鸡可使鸡蛋产生高效价IgY。     

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157∶H7抗体的制备与特性研究

目的研究制备特异性抗E.coliO157∶H7鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)及酶标记抗体(IgY-HRP)的工艺条件。方法分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡,水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY,再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记,各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果可获得纯度为79.6%~85.3%的IgY,提取率74%~77%;过碘酸钠氧化法标记效果较好,IgY-HRP(1mg/ml)最高效价640。结论免疫制备IgY方法可行,过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。     

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157:H7抗体的制备与特性研究

目的：研究制备特异性抗E.coli O157：H7鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）及酶标记抗体（IgY-HRP）的工艺条件。方法：分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡,水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY,再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记,各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果：可获得纯度为79．6％～85．3％的IgY,提取率74％～77％;过碘酸钠氧化法标记效果较好,IgY-HRP（1mg／ml）最高效价640。结论：免疫制备IgY方法可行,过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。     

Galectin-7多克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备鼠抗重组半乳糖凝集素7(Galectin-7)多克隆抗体及其在膀胱癌组织中特异性鉴定。方法 PCR法从人包皮组织中扩增Galectin-7基因,并构建到pET28a表达载体中,使用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过镍柱亲和层析纯化获得Galectin-7蛋白。以纯化的Galectin-7蛋白混合福氏完全佐剂免疫Balb/C小鼠制备抗体,并用ELISA,Western blot及免疫组织化学法检测抗体。结果 成功表达、纯化了Galectin-7重组蛋白,ELISA检测Galectin-7蛋白免疫的小鼠血清效价为1:32 000,Western blot显示该抗体能与天然的Galectin-7特异结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人膀胱肿瘤组织的天然Galectin-7。结论 通过制备重组Galectin-7蛋白为免疫原,免疫家兔,成功地制备了效价高、特异性好的抗Galectin-7多克隆抗体。     

人缺失型Midkine重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备

目的获得兔抗人缺失型Midkine(t MK)的多克隆抗体,并将其初步应用于临床检测。方法将人t MK蛋白经亲和层析法纯化,并将其作为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗人血清,经饱和硫酸铵纯化,获得初步纯化的兔抗人t MK多克隆抗体,用免疫组织化学和蛋白印迹(Western blot)试验检测抗体的灵敏度和特异性。结果获得初步纯化的兔抗人t MK特异性多克隆抗体,该抗体能识别天然人t MK蛋白。结论制备的t MK多克隆抗体可初步用于临床检测。     

抗幽门螺杆菌HP1188蛋黄抗体的研究

目的 制备抗幽门螺杆菌(H.pylori) HP1188 蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY),即 HP1188-IgY,了解其理化特性和生物学活性,为研制H.pylori HP1188-IgY型抗体口服制剂提供实验依据.方法 用纯化的重组HP1188蛋白免疫产蛋鸡,以水稀释法结合氯仿有机沉淀法提取蛋黄抗体(HP1188-IgY),采用SDS-PAGE电泳检测其纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot分析抗原特异性.间接ELISA评价 HP1188-IgY 对热、酸及胃蛋白酶消化作用的耐受情况.分别检测不同浓度 HP1188-IgY及不同 pH 相同浓度HP1188-IgY对H.pylori的生长抑制试验.用MTT法检测不同浓度HP1188-IgY对H.pylori细胞毒活性的中和作用.结果 HP1188-IgY 纯度约为68%,蛋白浓度为7.79 mg/mL,Western blot结果 显示在相对分子质量30 000附近出现反应条带.HP1188-IgY具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶消化的能力.HP1188-IgY在体外可抑制H.pylori生长,并具有浓度依赖性和pH依赖性.HP1188-IgY 能阻断H.pylori菌体蛋白对Hela细胞的毒性作用,且该作用具有浓度依赖性.结论 成功制备了HP1188-IgY,其具有良好的理化性质和生物学特性,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的口服制剂奠定了基础.     

1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法

目的建立1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法。方法用RT-PCR方法获得bax保守N端1～123位氨基酸基因片段,并将其插入pET42a原核表达载体,诱导表达的Bax融合蛋白组合应用GST、His亲和层析技术获得免疫原(pET42a/Bax融合蛋白),HPLC鉴定纯度达95%。利用改良快速免疫法获得人Bax兔多克隆抗体,并经蛋白A柱亲和层析技术,抗原亲和纯化技术获得高效价高特异性的抗体。间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化试验检测抗体特异性,并与商业化抗体进行对比。结果通过快速免疫法得到人Bax兔多克隆抗体,经过Protein A柱纯化,再经抗原亲和纯化后,间接ELISA证明,抗体效价均达1:51 200;Western blot显示,只有经过抗原亲和纯化后的抗体特异性高,无其他杂带;免疫组化证明,在原发性肝癌组织中,人Bax兔多克隆抗体能特异地和内源性Bax结合,其高效高特异性已达国外Santa Cruse公司Bax商业化抗体水平。结论快速免疫法与抗原亲和纯化相结合,获得人Bax高效单特异性兔多克隆抗体,建立了1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法。     

免疫印迹法在抗dsDNA抗体检测中的应用

目的 评价免疫印迹法检测抗dsDNA抗体的敏感性和特异性.方法 用免疫印迹法分别与酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测样本进行比对,来验证免疫印迹检测抗dsDNA抗体的敏感性和特异性.选用抗dsDNA抗体阳性样本30 份,抗核抗体(ANA-IIF)阳性样本30份,阴性样本76份,对检测结果进行统计学分析.结果 用免疫印迹法检测抗dsDNA抗体,结果与ELISA 法和IIF法符合率高,敏感度达96.7%特异度达98.7 %.结论 用免疫印迹法检测抗dsDNA抗体 可获得很好的敏感度和特异度,且试剂盒操作简单方便,结果判读容易,适合基层检验人员操作,值得在临床推广,作为常规初筛实验.     

抗人载脂蛋白B单链抗体基因的克隆和表达

载脂蛋白（APO）B主要分布在人体血液中的的低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）中，约占LDL蛋白质的95％～99％，其主要功能是参与脂质转运和被细胞膜上的LDL受体识别。研究证明，apoB与动脉粥样硬化（AS）的发生有着密切的关系。近年来，多数医院已开展了测定人体血液中apoB含量来判定AS的危险程度。而国内所用的试剂盒均为多克隆抗体，这给临床测定结果的准确性和特异性带来了一定的差异。为此国内许多研究单位拟想通过基因重组技术，将apoB单抗细胞株通过逆转录、构建使其表达apoB单链抗体。