肥大细胞干细胞因子在人慢性根尖周病中的表达

 目的:观察干细胞因子（stem cell factor,SCF）在慢性根尖周病患者肥大细胞（mast cells,MCs）中的表达情况,探讨SCF阳性MCs在根尖周病发病机制及根尖周纤维组织的形成,尤其在根尖周囊肿纤维组织形成中的作用。方法:选择2011年7月~2013年6月期间在暨南大学荔湾口腔教学医院临床诊断为根尖囊肿或根尖肉芽肿并接受根尖刮治手术的病例30例,其中根尖肉芽肿15例,根尖囊肿15例。正常对照组20例,取自因正畸需要拔除的牙周健康的前磨牙。标本经10%甲醛固定48 h以上。组织标本经石蜡包埋、组织连续切片,HE染色,光学显微镜下观察其组织学改变;采用免疫组织化学法,观察各组标本组织中MCs数目及MCs脱颗粒情况;采用免疫荧光双染色法,在荧光显微镜下观察各组标本组织中tryptase-SCF双阳性MCs数目。结果: 免疫组织化学染色结果显示,2组慢性根尖周病组织中MCs和脱颗粒MCs数量与正常对照组相比显著增多（P<0.01）;根尖囊肿组的MCs和脱颗粒MCs的数量均明显高于根尖肉芽肿组（P<0.05）。免疫荧光双染色结果显示,2组慢性根尖周病组织中的tryptase-SCF双阳性MCs密度与正常对照组相比显著增多（P<0.01）;根尖囊肿组tryptase-SCF双阳性MCs密度明显高于根尖肉芽肿组（P<0.05）。各组标本组织中免疫组织化学染色MCs密度与免疫荧光双染色MCs密度无显著差异（P>0.05）。结论: Tryptase-SCF双阳性肥大细胞在慢性根尖周病的炎症损害,尤其在根尖囊肿的纤维组织形成中发挥重要作用。Tryptase-SCF双阳性肥大细胞与慢性根尖周病炎症损害的发生、进展及其持续存在有关。     

TLR2和TLR4在人慢性根尖周病组织肥大细胞上的表达

 目的: 观察人不同类型慢性根尖周病组织中肥大细胞(mast cells,MCs)上Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)和TLR4的表达情况,探讨TLR2-类胰蛋白酶(tryptase)和TLR4-tryptase双阳性MCs在慢性根尖周疾病发病机制中的作用。方法: 将60例自愿参与本研究的受试者按根尖周病分类标准分为3组:(1)正常对照组;(2)根尖周肉芽肿组;(3)根尖周囊肿组。将根尖周组织标本置于4%甲醛固定液中浸泡48 h以上,制作连续组织切片。HE染色,光学显微镜下观察各组根尖周标本的组织学变化;免疫荧光双染色后于荧光显微镜下观察TLR2-tryptase和TLR4-tryptase双阳性MCs在根尖周组织中的分布情况。结果: 根尖周病变组TLR2-tryptase和TLR4-tryptase双阳性MCs比正常牙周膜组明显增多(P<0.01);与根尖肉芽肿组相比,根尖囊肿组TLR2-tryptase及TLR4-tryptase双阳性MCs数目明显增高(P<0.01)。结论: TLR2及TLR4在慢性根尖周疾病组织中MCs上表达增加,提示TLR2-tryptase及TLR4-tryptase双阳性MCs可能参与慢性根尖周病发病过程的免疫调节。     

白细胞介素1β和白细胞介素17在根尖周病组织肥大细胞上的表达

 目的：观察不同类型慢性根尖周病组织中肥大细胞（mast cells, MCs）的分布情况，并分析白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）在MCs上的表达情况，探讨MCs IL-1β和IL-17在根尖周病发病机制中的作用。方法：本实验共收集102例样本，分为3组：（1）根尖肉芽肿组32例；（2）根尖囊肿组35例；（3）正常对照组35例。组织标本经4%中性甲醛缓冲液固定48 h以上；石蜡包埋，组织连续切片，HE染色，在光学显微镜下观察其组织学改变；采用免疫荧光双染色法，在荧光显微镜下观察各组标本组织表达IL-1β和IL-17的MCs数目。结果：两组慢性根尖周病的炎症反应程度明显高于正常对照组（P<0.01）；根尖囊肿组与根尖肉芽肿组之间炎症反应程度无显著差异（P>0.05）。与正常对照组相比，两组慢性根尖周病组织中IL-1β和IL-17阳性MCs数目均显著增多（P<0.01）；根尖囊肿组与根尖肉芽肿组IL-1β和IL-17阳性MCs密度无显著性差异（P>0.05）。经Pearson相关分析，3组标本组织中IL-1β和IL-17阳性MCs密度与组织炎症反应程度存在直线的正相关关系（P<0.01）。结论：慢性根尖周病组织中MCs数目明显增多，同时IL-1β和IL-17阳性的MCs密度显著增高。IL-1β和IL-17阳性MCs密度与根尖周病的炎症程度趋势相一致。这提示IL-1β和IL-17阳性MCs可能在慢性根尖周病的致病机制中发挥重要作用。     

CD14、IL-4和TNF-α在健康人和慢性根尖周病患者组织中的免疫荧光定位

目的:观察白细胞分化抗原14(CD14)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在不同类型慢性根尖周病根尖周组织中的表达情况。方法:将88例样本分为3组:(1)正常对照组45例;(2)慢性根尖周脓肿组23例;(3)根尖周囊肿组20例。组织标本置于10%中性福尔马林固定液中浸泡48 h以上,制作连续组织切片。HE染色,于光学显微镜下观察各组的组织学变化;免疫荧光双染色,于荧光显微镜及共聚焦显微镜下分别观察TNF-α-CD14和IL-4-CD14双阳性细胞在根尖周组织中的表达。结果:(1)与正常对照组相比,两组慢性根尖周病组织中TNF-α-CD14及IL-4-CD14双阳性细胞密度均显著升高(P<0.05);(2)与根尖周囊肿组对比,慢性根尖周脓肿组织中TNF-α-CD14双阳性细胞密度显著升高(P<0.05);(3)与慢性根尖周脓肿组相比较,根尖周囊肿组IL-4-CD14双阳性细胞密度显著升高(P<0.05)。结论:TNF-α-CD14和IL-4-CD14双阳性细胞分别在慢性根尖周脓肿及根尖周囊肿中高表达。     

iNOS/CD163在人慢性根尖周炎组织中CD68+细胞上的表达

目的：观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和CD163在人不同类型的慢性根尖周炎组织中CD68⁺细胞的表达,分析在人不同类型的慢性根尖周炎组织中CD68⁺细胞的表达情况。方法：45名受试者按根尖周炎类型分为3组(健康对照组、慢性根尖脓肿组和根尖周囊肿组),每组15名。免疫荧光双染色法观察根尖周标本中CD68⁺-iNOS+和CD68⁺-CD163⁺细胞在各组标本中的表达情况,计算双阳性细胞的平均密度。结果：(1)3组标本中CD68⁺-iNOS+和CD68⁺-CD163⁺细胞密度差异显著(P<0.01);(2)慢性根尖脓肿组标本中CD68⁺-iNOS+细胞密度高于根尖周囊肿组(P<0.01),而两组间CD68⁺-CD163⁺细胞密度无显著差异(P>0.05);(3)慢性根尖周脓肿组中CD68⁺-iNOS+/CD68...     

Bcl-6和ICOS在根尖周囊肿与根尖周肉芽肿中的表达

目的:研究滤泡辅助性T细胞(Tfh)的相关分子标记物B细胞淋巴瘤家族基因6(Bcl-6)和可诱导共刺激分子(ICOS)在根尖周囊肿和根尖周肉芽肿中的表达。方法:收集24例慢性根尖周炎病损组织作为病例组,10例健康牙的牙周组织作为对照组。H-E染色观察根尖周组织的形态结构,免疫组织化学法及PCR法检测Bcl-6和ICOS蛋白及mRNA的表达。结果:免疫组织化学显色显示Bcl-6和ICOS在根尖周囊肿和根尖周肉芽肿病损组织中的蛋白表达水平显著高于对照组;PCR检测显示Tfh细胞的Bcl-6和ICOS在根尖周囊肿和根尖周肉芽肿病损组织中的mRNA表达水平均高于对照组。结论:Bcl-6和ICOS可能与根尖周囊肿和根尖周肉芽肿密切相关。     

绝经前后子宫内膜息肉中肥大细胞类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的表达及意义

目的探讨肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)及类糜蛋白酶(MCC)在绝经前、后子宫内膜息肉组织(EP)中的表达及临床意义。方法收集120例患者标本,其中绝经前EP组和绝经后EP组各35例,绝经前正常增生期子宫内膜组和绝经后正常萎缩性子宫内膜组各25例。采用Max VisionTM/HRP免疫组织化学染色法,检测各组中MCT及MCC阳性的肥大细胞(MCs)数量并分析临床意义。结果绝经前、后EP组和正常子宫内膜组中MCT和MCC阳性的MCs计数均值分别为高倍镜下(11.82±5.24)个和(2.94±2.20)个、(4.18±2.32)个和(2.18±1.52)个、(2.19±1.80)个和(0.49±0.60)个以及(0.35±0.32)个和(0.19±0.26)个。两两比较结果显示,绝经前、后EP组MCT和MCC阳性的MCs数量明显高于同期正常子宫内膜组(P0.05);在EP组中,MCT阳性的MCs数量在绝经前高于绝经后(P0.05),而MCC阳性的MCs数量没有明显差异(P0.05);在正常子宫内膜组中,MCT和MCC阳性的MCs数量在绝经前均高于绝经后(P0.05)。结论肥大细胞(MCs)的过度活化以及伴随的炎症性损害可能是绝经前、后子宫内膜息肉形成及发展的原因。     

Tryptase阳性细胞在移植后不同时间段排斥肾中的分布

目的　了解Tryptase阳性肥大细胞在肾移植后不同时间段的排斥肾组织中的分布规律。方法　采用抗Tryptase单抗免疫组化染色法与甲苯胺蓝特殊染色方法 ,对移植后 8d～ 7a手术切除的排斥肾进行了染色。结果　在移植后的各个时间段的排斥肾中均见到较正常肾明显偏多的肥大细胞 ,且随着移植时间的延长呈增长的趋势。其中移植后 7a以上组的肥大细胞明显高于 1～ 2a组和 5～ 6a组 (P <0 .0 1)。甲苯胺蓝染色结果与Tryptase免疫组化结果相一致 ,但Tryptase免疫组化方法更为敏感。结论　肥大细胞可能参与了肾移植的排斥反应 ,此反应可能导致肾组织的纤维化变性     

Tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞在不同程度人牙周炎组织中的量化研究*

 目的：T细胞免疫球蛋白黏蛋白1（T-cell immunoglobulin mucin 1,TIM-1）作为一种免疫调节分子,能影响肥大细胞的功能。TIM-1在牙周炎过程中是否在肥大细胞上表达未见报道。本研究旨在观察TIM-1在慢性牙周炎牙龈组织中肥大细胞上的表达,探讨类胰蛋白酶（tryptase）和TIM-1双阳性肥大细胞在牙周炎发病机制中的作用。方法：将92例接受研究的患者按慢性牙周炎的病变程度分成3组：（1）正常对照组27例;（2）轻度牙周炎组34例;（3）重度牙周炎组31例。牙龈组织标本经4%甲醛液固定48 h以上。牙龈标本经石蜡包埋、组织连续切片,HE染色,光学显微镜下观察牙龈的组织学改变;采用免疫荧光双染色,荧光显微镜下观察牙龈组织中tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞的表达情况。结果：牙龈组织中的炎症反应程度与慢性牙周炎的病变程度趋势一致。与正常对照组相比较,轻度慢性牙周炎组（P<0.05）和重度慢性牙周炎组（P<0.01）牙龈组织中tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞数量显著升高;重度牙周炎组牙龈组织中的tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞数量高于轻度牙周炎组（P<0.05）。结论：慢性牙周炎牙龈组织中的tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞数量与牙周炎程度的趋势相一致,提示tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞可能参与对慢性牙周炎发病过程的免疫调节。     

大鼠心壁内CGRP阳性肥大细胞定位及分布研究

本文用免疫细胞化学方法及甲苯胺蓝染色法,研究大鼠心壁内肥大细胞降钙素基因相关肽(CGRP)样免疫反应物质以及含这类物质的肥大细胞在心壁内的分布.发现部分肥大细胞含有降钙素基因相关肽样免疫反应物质.含这类物质的肥大细胞约占甲苯胺蓝染色肥大细胞数的13.5%,细胞直径多在8～15μm,心房后壁多于心室壁,t检验结果表明二者差异显著(P<0.001),这种分布特点与甲苯胺蓝染色的肥大细胞分布相一致.由于对照组均为阴性,排除了假阳性的可能.文中对心壁内这种细胞的有关问题进行了讨论.     

巢蛋白及性别决定基因高迁移率组蛋白在SAMP8小鼠穹窿下器的表达及其意义

目的 观察巢蛋白（Nestin）与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器（SFO）中的表达。 方法 成年8月龄SAMP8小鼠设为实验组,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光染色的方法观察Nestin及SOX2在穹隆下器中的表达,同时设正常老化小鼠SAMR1对照。结果 Nestin免疫组织化学染色发现,对照组免疫阳性细胞呈突起分布,放射丝状表达;实验组免疫阳性细胞染色深,丝状结构粗大,在血管周围密集分布,阳性细胞百分比（49.17±7.60）%较对照组阳性细胞百分比（16.33±4.41）%明显增多,差异有统计学意义（P＜0.01）。SOX2免疫组织化学染色,对照组免疫阳性细胞散在分布,染色深浅不一;实验组大部分阳性细胞染色较深,在血管周围密集分布;阳性表达细胞百分比（62.17±20.27）%较对照组阳性表达细胞百分比（36.00±16.20）%明显增多,差异有统计学意义（P＜0.05）。荧光双标染色,对照组SOX2散在分布,其间可见Nestin阳性表达,室管膜下区可见少量SOX2/Nestin双表达细胞。实验组阳性表达强烈,SOX2/Nestin双表达细胞增多。结论 Nestin及SOX2在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器的表达明显增强,表明阿尔茨海默病（AD）在一定时期可能引起穹隆下器神经干细胞/祖细胞的增殖或分化增强,进而可能影响穹隆下器的神经生发功能。     

家兔主要淋巴器官肥大细胞的分布特征

目的：探讨家兔主要淋巴器官肥大细胞（MC）的分布特征与组织化学特点。方法：将家兔脾脏及圆小囊用Camoy液和（或）4％中性甲醛溶液（NBF）固定,进行常规甲苯胺蓝染色或长时间甲苯胺蓝染色（LTB）,光镜观察。结果：家兔的圆小囊MC主要分布于黏膜上皮或黏膜下层结缔组织中,脾脏MC则主要分布于红髓淋巴细胞间,两者非胸腺依赖区的淋巴滤泡中均无MC,Carnoy液固定的家兔组织染色效果更佳,采用LTB染色可不同程度的增加MC的着染性。结论：MC都具有胸腺依赖性或T细胞依赖性,淋巴器官MC与T淋巴细胞位置关系密切。不同固定液和不同时间染色方法所获得的MC数量不同。     

胃肠道5-HT内分泌细胞和肥大细胞与肝再生的关系

目的 探讨胃肠道及肝中5-HT免疫活性(5-HT-IR)内分泌细胞和肥大细胞(MC)与肝再生的关系.方法 150只SD大鼠随机分为对照组、手术对照(OC)组和实验组.实验组大鼠切除2/3肝(部分肝切除,PH),分别于术后不同时段取胃、小肠、肝组织.用免疫组织化学技术检测组织中5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IR MC,用甲苯胺蓝(TB)染色技术检测组织中MC.OC组除不切除肝叶外,其他同实验组.结果 1.实验组和OC组胃肠中5-HT-IR内分泌细胞数均于PH后2h较对照组下降(胃P<0.05,肠P<0.01),但实验组PH后6～72h极显著多于对照组(P<0.01),肝中未见5-HT-IR内分泌细胞.2.除PH后48～96h肝中MC数显著少于对照组(P<0.05)外,实验组和OC组胃肠及肝中MC数较对照组均无显著差异.3.在胃中5-HT-IR MC数于PH后3～6h和96h显著多于对照组(P<0.05),12～72h极显著多于对照组(P<0.01);在小肠中PH后2h和120h显著多于对照组(P<0.05).3～96h极显著多于对照组(P<0.01);肝中PH后48～72 h显著少于对照组(P<0.05).OC组胃肠和肝中5-HT-IR MC数较对照组均无显著差异;4.MC的5-HT阳性率在胃中于PH后2～96 h,在小肠中于PH后0.5～120 h逐渐增大,在肝中于1.5～24 h有所增加,48～72 h明显下降.OC组胃肠和肝中的阳性率较对照组均无明显变化.结论肝切除后的肝细胞增殖期内胃肠道5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IR MC数显著增多,两种细胞可能提供了在肝再生中起重要作用的5-HT.     

Pneumocystis carinii in sputum. Comparable efficacy of screening stains and determination of cyst density

To determine whether accurate quantification of Pneumocystis carinii cysts in sputum is possible using currently available means and to determine the optimal stain for screening sputum for P carinii, we undertook a comparative evaluation of readily available stains: (1) Diff-Quik, a stain that provides tinctorial detail comparable with Giemsa, (2) toluidine blue, and (3) silver methenamine on simultaneously thawed sputum samples containing P carinii. We also studied the Diff-Quik stain in combination with (4) toluidine blue and (5) silver methenamine. The three stains were comparable for screening purposes. Each disclosed similar numbers of P carinii aggregates on similarly prepared slides. Cysts were difficult to recognize on Diff-Quik due to the negatively staining character of the cyst wall with this stain. The cyst-wall stains, toluidine blue and silver methenamine, clearly stained the cyst wall. The combination of a cyst-wall stain with Diff-Quik allowed visualization of cysts, highlighted by the cyst-wall stain, and aggregate area, delineated by the Diff-Quik, allowing expression of number of cysts per aggregate area, a measure termed cyst density.     

Mast cell density and subtypes in the skin of dogs with atopic dermatitis

Skin biopsies from seven dogs with atopic dermatitis and 13 dogs with no clinical or histological evidence of skin diseases were examined. The study of the atopic dogs included 11 biopsy samples of nonlesional skin and 15 samples of lesional skin. One section of each tissue sample was stained with haematoxylin and eosin and another with toluidine blue to demonstrate the sulphated acid glycosaminoglycans in mast cell (MC) granules. To investigate MC subtypes, the MC-specific proteases tryptase and chymase were examined by a double enzyme-immunohistochemical staining technique. With the double labelling technique a significantly lower mast cell density was demonstrated in lesional (P = 0.0023) and nonlesional (P = 0.0004) skin samples of the atopic dogs than in the skin of control dogs. In the dermis of control dogs, a median mast cell density of 31.2 MC/mm2 was detected with the toluidine blue staining method and of 27.5 MC/mm2 with the double labelling technique. In lesional dermis of atopic dogs 29.8 MC/mm2 were seen with toluidine blue while only 12.4 MC/mm2 were stained with the double labelling method (P = 0.0027). A similar difference was observed in nonlesional dermis samples, in which a mast cell density of 23.3 MC/mm2 was detected with toluidine blue but only 6.4 MC/mm2 with the double labelling method (P = 0.0127). The data provide evidence that mast cell granule heterogeneity exists in the dog and suggests that degranulation occurs selectively, depending on the pathological condition of the canine skin. Further investigations on the pathophysiological role of mast cell subtypes may help to elucidate the pathogenesis of atopic dermatitis.