洛贝林逆转胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药的作用

目的:探讨哌啶类生物碱洛贝林(Lobeline)能否逆转人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,并进一步探讨洛贝林逆转其多药耐药的机制,评估其有效性.方法:以人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,用四氮唑蓝(MTT)法分别测定在无和有洛贝林(细胞无毒浓度10 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR对VCR及5-Fu的半数生长抑制率,并由此求其耐药逆转的倍数;RT-PCR分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药基因MDR1 mRNA表达情况;Western blot分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的P-gp蛋白表达.结果:在洛贝林无毒作用浓度(10 mol/L)作用下,多药耐药细胞株SGC7901/VCR对化疗药的敏感性增加,VCR对耐药细胞株的IC50由原来的16.55 g/L±0.13 g/L变成7.27g/L±0.65 g/L,逆转指数约为2.28;5-Fu对耐药细胞株的IC50由原来的11.01 g/L±0.43 g/L变成9.53 g/L±0.79 g/L,逆转指数约为1.16;RT-PCR检测示多药耐药细胞株SGC7901/VCR呈现MDR1 mRNA高度表达,随洛贝林终作用浓度的增大,MDR1 mRNA表达逐渐下降,各组间差距有统计学意义(P<0.05);Western blot检测表明多药耐药细胞株SGC7901/VCR高度表达P-gp蛋白,随洛贝林作用终浓度依次增加P-gp蛋白表达依次减弱,组间呈浓度依赖性,差别有统计学意义(P<0.05).结论:无细胞毒作用浓度的洛贝林可以逆转胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,增强VCR和5-Fu的化疗敏感性.洛贝林对SGC7901/VCR细胞多药耐药的逆转可能机制为抑制P-gp蛋白的表达.     

肿瘤易感基因101在胃癌耐药细胞中的表达及作用

目的 探讨肿瘤易感基因(TSG)101在多药耐药胃癌细胞中的表达和作用。方法 应用半定量RT-PCR和Western blot方法观察TSG101在胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药亚系SGC7901／VCR中的表达。将TSG101真核表达载体转染SGC7901细胞，通过Western blot方法鉴定转染细胞TSG101蛋白的表达。用流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞内阿霉素(ADR)的平均荧光强度。用MTT法检测细胞生长曲线和对VCR、ADR的药敏性。结果 胃癌耐药细胞SGC7901／VCR与亲本细胞SGC7901相比，TSG101的表达明显增高。SGC7901细胞转染TSG101真核表达载体后其表达较对照细胞明显增高，G1期细胞比例减少而S期比例增加，细胞增殖加快，且对VCR、ADR的敏感性减低，细胞内阿霉素蓄积和潴留减少。结论 TSG101真核表达载体转染SGC7901后其耐药性明显增强，提示TSG101在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用。     

Antisense expression of PKCα improved sensitivity of SGC7901/VCR cells to doxorubicin

AIM: To explore whether antisense blocking of protein kinase C alpha (PKCα) would reverse multi-drug resistance (MDR) in the vincristine (VCR)-resistant human gastric cancer cell line SGC7901/VCR.METHODS: SGC7901/VCR cells expressing antisense PKCα, SGC7901/VCR/aPKC, were established by transfection with a recombinant plasmid reversely inserted with PKCα cDNA. Empty vector (PCI-neo)-transfected cell clones, SGC7901/VCR/neo, served as the control. Western blot method was used to detect PKCα content in SGC7901, SGC7901/VCR, SGC7901/VCR/neo and SGC7901/VCR/aPKC cells, using PKCα-specific antibody. The sensitivity of SGC7901, SGC7901/VCR, SGC7901/VCR/neo and SGC7901/VCR/aPKC cells to doxorubicin (DOX) in vitro was determined by MTT assay. The uptake of DOX in these cells was detected with fluorescence spectrophotometer.RESULTS: Western blot analysis showed that the PKCα protein level was about 8.7-fold higher in SGC7901/VCR cells than that in SGC7901 cells, whereas the protein expression of PKCα was reduced by 78% in SGC7901/VCR/aPKC cells when compared with the SGC7901/VCR cells. SGC7901/VCR/aPKC cells had a 4.2-fold increase in DOX cytotoxicity, accompanied by a 1.7-fold increase of DOX accumulation in comparison with SGC7901/VCR cells.CONCLUSION: PKCα positively regulates MDR in SGC7901 cells, and inhibition of PKCα can partially attenuate MDR in human gastric cancer cells.     

维拉帕米逆转胃癌细胞系SGC7901/VCR多药耐药性的研究

目的研究维拉帕米对人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR多药耐药性的逆转效应.方法利用RT-PCR、免疫组化以及MTT等方法,观察维拉帕米对体外培养SGC7901/VCR细胞系耐药性的逆转作用.结果RT-PCR、免疫组化和MTT结果表明维拉帕米可以使SGC7901/VCR的MDRl基因表达水平和P-gP糖蛋白表达降低,细胞对丝裂霉素、替加氟等药物的敏感性明显增加.结论维拉帕米在体外有逆转SGC7901/VCR胞多药耐药的效应.     

脐血CIK细胞对耐药白血病细胞体外杀伤效应及其机制的研究

目的:探索干预或克服白血病细胞耐药的新策略.方法:采用抗CD3McAb联合多种细胞因子诱导的脐血杀伤细胞(CB-CIK)体外作用于K562耐药细胞株(K562/A02),用MTT比色法检测其杀伤效应;用免疫组化染色法检测杀伤前后K562/A02细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平;采用DNA凝胶电泳进行CB-CIK细胞诱导白血病细胞凋亡的检测.结果:①CB-CIK细胞杀伤K562/A02细胞活性(73.647±5.72)与杀伤K562细胞活性(75.124±4.36)相比差异无统计学意义,P＞0.05;其杀瘤活性显著高于CB-LAK细胞、CB-CD3AK细胞,P<0.05,与成人CB-CIK细胞相比差异无统计学意义,P＞0.05.②经CIK细胞杀伤后,K562/A02细胞表面mdr1表达产物P170含量明显减少.③K562/A02细胞在CIK细胞作用20 h后,其DNA结构断裂,在DNA凝胶电泳上呈现凋亡特有的梯形图谱(DNA Ladder).结论:CB-CIK细胞对K562细胞及其耐药株K562/A02细胞均有较强的杀伤作用,其杀伤机制可能与CIK细胞能下调白血病细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平,以及诱导白血病细胞凋亡有关.提示脐血CIK细胞在抗白血病多药耐药性方面具有独特的优势,若与化疗联合使用,有可能成为克服白血病细胞多药耐药性的一种可供选择的新策略,因脐血的来源较广,采制相对简便,该研究方法可能具有广泛的应用前景.     

Occludin在胃癌耐药细胞SGC7901中mRNA水平

肿瘤多药耐药现象是肿瘤化疗研究的热点。且前已经发现的多药耐药机制主要涉及Pgp、MRP、LRP、GSH/GST、TopoⅡ和多种凋亡相关基因的变化。但这些还不能圆满解释肿瘤多药耐药现象。本所制备的胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR细胞形态与亲本细胞SGC7901相比,细胞扁平,排列紧密,细胞间紧密连接非常突出。RNA点杂交结果初步表明参与紧密连接的重要分子Occludin在胃癌耐药细胞SGC7901/VCR中表达显著高于其亲本细胞SCG7901,而SGC7901又明显高于fas基因转导的耐药细胞SGC7901/VCR,提示Occludin可能通过调节细胞紧密连接处通透性参与肿瘤多药耐性(MDR)产生。这可望为探讨胃癌耐药新机制奠定一定的基础。     

EGCG联合维拉帕米逆转白血病细胞系K562/A02多药耐药的研究

克服多药耐药(MDR)是提高白血病疗效的重要途径。我们选择非细胞毒性剂量维拉帕米(VRP)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合对人白血病多药耐药细胞系K562/A02进行体外逆转研究。一、材料和方法1.细胞系和培养条件:K562/A02和K562/S细胞均在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中,以     

MGr1抗体筛选文库获得胃癌耐药相关的新基因片段

目的制备胃癌多药耐药相关性单克隆抗体(mAb),并以该抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库,以获得肿瘤耐药相关的新基因片段.方法采用杂交瘤技术,以胃癌耐药细胞株SGC7901/ VCR为免疫原制备胃癌多药耐药相关性,mAbMGr1,并以MGr1作为探针对肿瘤耐药细胞表位文库反复进行筛选;对稳定阳性重组子所携带的cDNA片段进行正反向测序,并将测序结果输入GeneBank进行同源性分析;原位杂交与Northern blot检测阳性克隆在不同组织细胞中的表达.结果经过21次融合获得了26株培养上清能与SGC7901/ VCR结合的杂交瘤克隆,经免疫组化和单克隆抗体逆转耐药实验发现其中一株mAb在SGC7901/ VCR膜表面及胞内的表达显著高于其相应的药物敏感细胞SGC7901,并能部分逆转SGC7901/ VCR对ADR和5-FU的耐药性. Western blot表明该mAb对应的抗原Mr 800 000～110 000,与Pgp和MRP不同,该株mAb被命名为MGr1. 以MGr1筛选文库,获得了5个能与MGr1抗体结合的携带阳性重组子的菌落,经反复筛选后,证实有一个稳定的阳性克隆;正反向测序结果表明该阳性cDNA片段长度为310 bp,GeneBank检索显示该片段无任何同源性;原位杂交表明该基因在肝、食管、胃、大肠的正常组织均未见表达,Northern blot证实该基因在胃癌细胞SGC7901,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR,食管癌细胞EC109,肝癌细胞HCC7402中均有表达,但在SGC7901/ VCR中的表达量显著高于其他细胞.结论成功地制备了胃癌耐药相关性mAbMGr1. 以MGr1抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库获得了一个与胃癌耐药相关的新基因片段.     

表没食子儿茶素没食子酸酯逆转人白血病细胞多药耐药性及机制研究

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)epigallocatechin-3-gallate(EGCG）对人自血病细胞K562／A02多药耐药性的逆转作用及相关机制。方法：采用MTT法确定EGCG的非细胞毒性剂量。以及对K562／A02细胞药物敏感性的影响。以流式细胞仪测定细胞内化疗药物浓度的改变，同时于逆转前后采用免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达水平的变化。结果：EGCG在低于103．2μmol/L时对K562/A02细胞的生长抑制率小于10％。40μmol/L、60μmol/L及80μmol/L EGCG均可增加K562／A02细胞对阿霉素的敏感性，使阿霉素对K562／A02细胞的IC50由原来的113．34mg／L降低至9．66mg／L、7．67mg/L和4．68mg／L，其逆转倍数分别为11．73、14．77和24．23倍。同时，不同浓度EGCG均可增加细胞内阿霉素浓度，并呈剂量依赖性。在40μmol/L、60μmol/L及80μmol/L EGCG作用后，细胞bcl-2和bax的表达水平均增加，并且bax/bcl-2比值升高。结论：EGCG可部分逆转人白血病细胞K562／A02对阿霉素的耐药性，其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度，升高细胞bax／bcl-2比值从而诱导细胞凋亡有关。     

PPIs抑制P13K/Akt／mTOR信号通路逆转胃癌细胞的化疗多药耐药

背景：前期实验显示质子泵抑制剂（PPIs）可抑制空泡型质子泵（V-H＋-ATPases）和多药耐药蛋白P—gP、MRP1表达,增强胃癌细胞的化疗敏感性。目的：探讨PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药与P13K／Akt／mTOR信号通路的关系。方法：应用不同浓度埃索美拉唑或泮托拉唑预处理人胃腺癌细胞敏感株SGC7901和多药耐药株SGC7901／MDR,或以V—H＋-ATPasessiRNA干扰SGC7901／MDR细胞内的V-H＋-ATPases表达,或以雷帕霉素阻断mTOR表达,以蛋白质印迹法检测经不同方式处理的细胞内V—H＋ATPases、P—SP、MRPl蛋白表达以及P13K／Akt/mT0R／HIF—1α信号通路及其信号旁路TSCl／2-Rheb中的相关蛋白表达;以免疫荧光法检测经埃索美拉唑预处理的SGC7901／MDR细胞内的V-H＋ATPases、P—gP蛋白表达和定位。结果：PPIs可呈浓度依赖性地抑制SGC7901／MDR细胞内的V—H＋ATPases、P13K、Akt、roTOR、HIF-1仅、TSCI、TSC2、Rheb、P—gP、MRP1表达以及Akt底物和TSC2磷酸化,改变V-H＋ATPases、P—gP的胞内定位,对SGC7901细胞则无上述影响。以V—H＋-ATPasessiRNA抑制SGC7901／MDR细胞内的V—H＋-ATPases表达,作用与PPIs预处理相似。以雷帕霉素阻断mTOR可呈浓度依赖性地抑制SGC7901／MDR细胞内的HIF-1α、P—gP表达。结论：PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药的机制与抑制P13K／Akt／mTOR信号通路有关。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP