miRNA-145在卵巢癌组织中的表达及其对增殖、迁移与侵袭的影响

摘 要：［目的］ 检测不同卵巢组织中miRNA-145的表达,并探讨miRNA-145在卵巢细胞SKOV-3增殖、迁移与侵袭的作用。［方法］ 采用定量聚合酶链反应（qPCR）测定正常卵巢组织、卵巢癌旁组织与卵巢癌卵巢组织的miRNA-145表达水平,随机将SKOV-3细胞分为正常对照组、空白病毒组和病毒转染组,分别采用MTT法测定各组细胞的增殖情况,采用qPCR测定miRNA-145的表达水平,采用划痕实验测定迁移能力,采用Transwell小室法测定侵袭能力。［结果］ 卵巢癌组织miRNA-145表达水平为0.56±0.23,较卵巢癌旁组织和正常卵巢组织显著性降低（P<0.05）。卵巢癌组织miRNA-145表达水平与患者国际妇产科联合会分期和组织分化程度相关（P<0.05）,但与年龄无关（P >0.05）。病毒转染组细胞的miRNA-145表达水平为4.63±0.47,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增加（P<0.05）。病毒转染组细胞在培养24h、48h和72h时OD值分别为0.68±0.15、1.17±0.23和1.62±0.26,均较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。病毒转染组细胞的划痕宽度为675±46μm,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增大（P<0.05）。病毒转染组穿膜细胞数量为36±6个,较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。［结论］ miRNA-145低表达可能与卵巢癌的发生发展有关,过表达miRNA-145能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭。miRNA-145可以作为治疗卵巢癌的新作用靶点。     

GOLM1在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨高尔基磷蛋白2(Golgi phosphoprotein 2,GOLPH2,又称为GP73或GOLM1)在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法:从GEPIA数据库分析肺腺癌组织中GOLM1 mRNA表达情况及与肺腺癌患者预后的相关性;利用慢病毒siRNA技术下调人肺腺癌A549细...     

丙泊酚对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响和作用机制

目的 分析丙泊酚对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 将SKOV3细胞分为空白对照组(C组)、脂肪乳对照组(F组),以及按不同丙泊酚浓度(25、50、100μmol/L)干预分为P25组、P50组、P100组.CCK8实验检测不同组SKOV3细胞吸光度(OD)值评估细胞增殖活性;划痕实验、流式细胞术、...     

卵巢癌组织MEOX1表达对细胞增殖和侵袭及迁移影响

目的卵巢癌极易发生转移和耐药,严重影响患者预后。前期研究发现,同源盒基因MEOX1可能在肿瘤的转移中发挥着重要作用。但有关MEOX1在卵巢癌中的表达和功能尚罕见报道。本研究探讨MEOX1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,及其在卵巢癌组织中的表达水平和临床意义。方法采用脂质体转染法将靶向MEOX1的特异性siRNA序列、无效序列分别转染至人卵巢癌细胞OAW28中,命名为实验(siMEOX1)组和阴性对照(siNC)组,同时设置空白对照(Control)组。采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)和蛋白质印迹法检测转染siRNA对人卵巢癌细胞OAW28中MEOX1的敲降效果。采用Transwell小室法检测细胞的体外迁移和侵袭能力。采用CCK8法检测细胞的体外增殖能力。采用免疫组织化学染色法检测购于西安艾丽娜生物科技有限公司的73例卵巢癌组织中MEOX1的表达水平。结果qPCR和蛋白质印迹结果显示,siMEOX1转染后,卵巢癌OAW28细胞中MEOX1表达水平明显降低,RNA水平敲降效率约72%。敲降MEOX1后卵巢癌OAW28细胞的增殖能力受到抑制,差异有统计学意义,F=59.217,P<0.001。此外迁移实验显示,siMEOX1组迁移细胞数(108.80±4.27)少于siNC组(230.20±5.63),差异有统计学意义,F=491.571,P<0.001。侵袭实验显示,siMEOX1组侵袭细胞数(217.80±3.49)低于siNC组(379.80±3.96),差异有统计学意义,F=712.267,P<0.001。免疫组化结果显示,MEOX1在卵巢癌组织中表达阳性率为60.3%(44/73)。临床关联性研究发现,MEOX1阳性表达与卵巢癌患者的转移具有关联性,χ^2=7.637,P=0.004;但与患者的年龄、TNM分期、病理分级无关联。结论MEOX1可促进人卵巢癌细胞的体外增殖和迁移侵袭能力,且MEOX1高表达与卵巢癌患者转移具有关联性,可能成为抑制卵巢癌转移的潜在靶点。     

DNMT1在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:采用免疫组化方法检测15例正常卵巢组织及31例卵巢癌组织中DNMT1的表达水平;利用DNMT1的过表达质粒及DNMT1 siRNA瞬时转染SKOV3细胞系,Western blot检测DNMT1的蛋白表达水平,CCK8法检测各组细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测DNMT1对卵巢癌细胞迁移能力的影响。结果:31例卵巢癌组织中DNMT1阳性率（83.9%,26/31）显著高于15例正常卵巢组织（20.0%,3/15）。临床分期Ⅲ-Ⅳ期、病理分级G3、远处转移者DNMT1阳性率明显升高（P＜0.05）。过表达DNMT1后,SKOV3细胞增殖能力及迁移能力均增强;敲低DNMT1后,SKOV3细胞生长及迁移能力受抑。结论:DNMTl在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织,其具有促进卵巢癌细胞增殖和远处转移的作用。     

人上皮性卵巢癌组织中PFTK1的表达及其对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究PFTAIRE蛋白激酶1（PFTAIRE protein kinase 1,PFTK1）在人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达,以及PFTK1基因的沉默对人卵巢癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。方法: 随机选取我院2015年6月至2016年11月收治的25例EOC患者为研究对象,采用Western blot检测癌组织以及癌旁组织中PFTK1蛋白的表达情况。选取PFTK1高表达的人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,转染PFTK1-siRNA后,采用流式细胞仪检测PFTK1基因的沉默对SKOV3细胞周期的影响,采用细胞迁移和侵袭实验（Transwell）检测SKOV3细胞迁移、侵袭能力的变化,采用平板克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖能力的变化。结果:Western blot检测结果显示,EOC患者癌组织中的PFTK1蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示,PFTK1-siRNA组细胞出现明显的生长抑制,细胞多停滞在G0/G1期,与对照组相比差异显著（P＜0.01）;细胞迁移和侵袭实验（Transwell）结果显示,PFTK1-siRNA组细胞的迁移和侵袭能力与对照组比较显著下降,且差异均显著（P＜0.01）;平板克隆形成实验结果显示,PFTK1-siRNA组细胞增殖能力显著降低,与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结论:PFTK1在人EOC癌组织中呈现高表达状态;PFTK1基因沉默后,EOC细胞株SKOV3的细胞迁移、侵袭及增殖能力均受到不同程度的抑制,这将为基因治疗人卵巢癌提供一定的理论依据。     

MAP3K9在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:检测MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中的表达,研究MAP3K9对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,并结合受试者工作特征曲线（ROC曲线）评估其诊断价值。方法:从云南省肿瘤医院收集2018年09月至2019年12月经病理诊断确诊为肺癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织。MAP3K9在肺癌组织及癌旁组织、肺癌细胞系A549和H1299、人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中的mRNA表达量采用实时荧光定量PCR技术检测。MAP3K9在细胞系中的蛋白表达量采用蛋白质印迹技术检测。分别用CCK8、划痕和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。利用在线生存数据库分析表达MAP3K9患者的生存率。使用SPSS软件绘制ROC曲线。结果:MAP3K9在肺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织（P＜0.05）。MAP3K9在A549和H1299中的表达量均高于BEAS-2B（P均<0.05）。体外细胞实验表明敲低MAP3K9能够明显抑制A549、H1299细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。生存曲线显示高表达MAP3K9的肺癌患者生存率低（P＜0.05）。ROC曲线下面积为0.894（P＜0.05）,诊断临界值为1.36×10-3,诊断敏感度为71.2%,特异度为98.1%。结论:MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中高表达,该基因高表达能够促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与患者预后不良有关,MAP3K9作为一个致癌基因有潜力成为临床诊断和治疗肺癌的有效靶点。     

UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究泛素结合酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C）在宫颈癌细胞中的表达情况,并明确UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:首先查阅GEPIA数据库,了解UBE2C在宫颈癌中的表达;其次通过qRT-PCR和Western blotting 法明确UBE2C在宫颈癌HeLa细胞及正常宫颈上皮细胞End1/E6E7中表达差异,然后分别构建si-UBE2C及si-NC转染宫颈癌HeLa细胞,检测转染后细胞中 UBE2C mRNA和蛋白表达;最后采用CCK-8 实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化,并鉴定UBE2C下游靶基因PTEN、P-p53的表达情况。结果:UBE2C在宫颈癌中高表达,能够促进宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并下调抑癌基因PTEN、P-p53的表达。结论:UBE2C能够加重宫颈癌细胞恶性表型;UBE2C可能作为宫颈癌诊断及治疗的判定指标之一。     

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移及侵袭的影响

目的:探讨下调microRNA-214 (miR-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移和侵袭的作用及其可能机制.方法:采用脂质体介导法将miR-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,Real-time PCR法检测miR-214、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uridylyl phosphate adenosine,uPA)基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞NF-κB和uPA蛋白表达.划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力.结果:经转染miR-214抑制剂后,人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达降低,细胞迁移和侵袭能力降低.同时NF-κB和uPA mRNA和蛋白表达也降低.结论:下调人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达可抑制细胞迁移和侵袭能力,下凋NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制.     

索拉非尼对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:本实验研究索拉非尼对Hela细胞相关活性的影响,为该药物的临床应用提供理论依据.方法:我们通过MTT实验和Edu增殖实验研究索拉非尼对Hela细胞增殖能力的影响,分别通过划痕实验以及Transwell小室侵袭实验研究索拉非尼作用后Hela细胞迁移能力和侵袭能力的变化.结果:在MTT实验中5、10和20 μmol/L索拉非尼刺激48小时后Hela细胞的OD值均显著小于对照组(P<0.05).10 μmol/L药物刺激后Hela细胞的Edu阳性数量和比例均显著小于对照组(P<0.05).在细胞划痕实验中,药物组细胞的迁移能力显著减弱,空白划痕两侧的距离显著大于对照组(P<0.05).在Transwell小室侵袭实验中,药物组单个视野内的细胞数量显著少于对照组(P<0.01).结论:索拉非尼可以抑制Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一种对抗宫颈癌细胞活性的潜在药物.     

顺铂耐药促进卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:观察人卵巢癌顺铂(cisplatin,CDDP)敏感细胞株OVCAR-3和耐药细胞株OVCAR-3/CDDP生物学行为的差异,并探讨其可能的机制。方法:取对数生长期的OVCAR-3和OVCAR-3/CDDP细胞,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力;Transwell小室、失巢凋亡实验和裸鼠皮下移植瘤实验分别检测细胞体外和体内的侵袭、迁移能力;免疫组织化学实验检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9的表达。结果:与OVCAR-3细胞比较,OVCAR-3/CDDP细胞克隆形成能力显著增加[(0.66±0.09)%vs(0.31±0.07)%,P<0.05]。Transwell小室实验发现,OVCAR-3/CDDP细胞较OVCAR-3细胞侵袭和迁移能力均明显增强[(233.1±8.5)vs(167.4±5.9),P<0.01;(143.6±9.1)vs(95.8±6.2),P<0.01];OVCAR-3/CDDP细胞较OVCAR-3细胞更易聚集,细胞凋亡指数下降[(7.78±1.32)%vs(15.41±1.26)%,P<0.01]。OVCAR-3/CDDP细胞移植瘤组织中MMP-2、MMP-9的表达高于OVCAR-3细胞。结论:顺铂耐药OVCAR-3/CDDP细胞的增殖、抗失巢凋亡、侵袭和迁移能力显著增强,其机制可能与MMP-2和MMP-9表达升高有关。     

Musashi1在结肠癌中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨Musashi1(Msi1)基因在结肠癌中的表达,分析其对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测Msi1在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达情况。通过慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的HCT116细胞株(shMsi1组),同时设置空白对照组和NC组。MTS实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。Western blotting检测沉默Msi1表达对Wnt和Notch信号通路关键分子的影响。结果结肠癌组织中Msi1表达量为3.36±0.75,明显高于癌旁正常组织的0.69±0.33,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默Msi1表达后,shMsi1组24、48、72 h的细胞增殖率分别为(128.00±3.13)%、(162.70±4.28)%、(191.86±7.72)%,明显低于空白对照组和NC组(P<0.05);shMsi1组48h细胞凋亡率为(8.47±1.04)%,明显高于空白对照组的(4.66±0.75)%和NC组的(4.83±1.07)%,差异具有统计学意义(P<0.05);shMsi1组细胞划痕愈合率为(27.38±9.63)%和侵袭细胞数为51.67±13.50,明显低于空白对照组的(58.12±8.54)%、219.00±24.56和NC组的(60.87±10.08)%、212.33±13.58,差异具有统计学意义(P<0.05)。下调Msi1表达后,shMsi1组Frat1蛋白表达量为0.53±0.10,低于空白对照组的1.00±0.16和NC组的0.94±0.13,而shMsi1组Numb蛋白表达量为1.74±0.09,明显高于空白对照组的1.00±0.17和NC组的0.73±0.09,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Msi1可能通过调控Frat1及Numb表达增强结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制其凋亡。     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

DUSP10对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨DUSP10在浆液性卵巢癌组织中的表达情况及其与卵巢癌细胞迁移及侵袭能力的关系。方法：实时荧光定量PCR方法检测浆液性卵巢腺癌和正常输卵管伞端组织中 DUSP10的表达情况;转染DUSP10过表达和干扰质粒至人卵巢癌A2780细胞,划痕实验和Transwell实验观察癌细胞迁移及侵袭能力的变化。结果：DUSP10在浆液性卵巢癌组织的表达低于正常输卵管伞端组织（ P﹤0.05）。与对照组相比,转染DUSP10过表达质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力受到抑制,转染DUSP10干扰质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力增强。结论：DUSP10在浆液性卵巢癌组织中低表达;DUSP10可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移及侵袭能力。     

锌转运体1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响

目的： 检测锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)基因在胶质瘤组织中的表达,初步探索ZnT1对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响。 方法： 收集2015年10月至2017年1月中国医科大学附属第一医院神经外科收治的术前未接受过放化疗的 Ⅱ～Ⅲ期胶质瘤患者20例,采用Real-time PCR和Western blotting检测胶质瘤组织与瘤旁组织中ZnT1 mRNA和蛋白的含量。向 胶质瘤细胞系U87中分别转染ZnT1和si-ZnT1质粒,构建ZnT1过表达和低表达细胞系,MTT和Transwell实验分别检测ZnT1对 U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 结果： ZnT1 mRNA和蛋白在胶质瘤组织中表达显著高于瘤旁组织（均P<0.05）。成功构建 ZnT1过表达和低表达U87细胞系。与空白和空质粒对照组相比,转染12 h后,ZnT1过表达U87细胞的增殖（0.54±0.01 vs 0.45± 0.04、0.43±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著升高;而转染12 h后ZnT1低表达U87细胞的增殖（0.37±0.03 vs 0.45±0.01、0.44±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著降低。 结论： ZnT1在胶质瘤组织中呈高表达,ZnT1可以促进 胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭。     

抑癌基因OVCA1体外对卵巢癌细胞A2780迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨卵巢癌基因1[ovarian cancer gene 1,OVCA1;也称为DPH2L( diphthamide synthesis protein 2-like)基因]体外对卵巢癌细胞系A2780迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:采用脂质体法将GFP标记的携带OVCA1的重组质粒pEGFP-OVCA1或GFP空白质粒分别转染A2780细胞后,G418筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选稳定转染细胞的单克隆细胞株,荧光显微镜检查绿色荧光蛋白的表达及RT-PCR方法检测A2780细胞OVCA1基因mRNA的表达.A2780-OVCA1细胞为实验组, A2780-GFP细胞和A2780细胞为对照组,采用划痕实验、Transwell体外迁移实验和Matrigel体外侵袭实验检测OVCA1对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:重组质粒pEGFP-OVCA1转染后获得了稳定表达GFP标记OVCA1蛋白的A2780细胞株.A2780-OVCA1组划痕后的细胞迁移速度明显小于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Transwell滤膜的迁移细胞数明显少于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Matrigel滤膜的侵袭细胞数明显少于两对照组(P<0.05).结论:OVCA1在体外具有显著抑制卵巢癌A2780细胞迁移和侵袭的作用.     

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429(miR-429)在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组组织中miR-429的表达.体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻...     

lncRNA LINC00460在结直肠癌组织中的表达及其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00460在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:GEPIA在线数据库和实时荧光定量PCR(qPCR)分析检测lncRNA LINC00460在结直肠癌组织、结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、SW620)及结直肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达,进一步分析LINC00460表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。将LINC00460过表达质粒及阴性对照(pcDNA3.1-LINC00460和pcDNA3.1-NC)转染HCT-8细胞,将LINC00460小干扰RNA及阴性对照(si-LINC00460和si-NC)转染SW620细胞,分别采用CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖能力和侵袭迁移能力,采用Western blot实验检测cyclin D1、p21、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与癌旁组织和NCM460细胞相比较,LINC00460在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、S...     

LncRNA OIP5-AS1对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨lncRNA OIP5-AS1对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法：实验选取人正常膀胱细胞系（SV-HUC-1）和膀胱癌细胞系（EJ、T24、BIU87）为研究对象,采用Real-time PCR检测细胞lncRNA OIP5-AS1的表达。选取lncRNA OIP5-AS1表达较高的T24细胞进行后续实验,设置组别为control组、siRNA-NC组、siRNAOIP5-AS1组、Vector组、OIP5-AS1组,通过CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Real-time PCR检测细胞lncRNA OIP5-AS1的表达,Western blot检测细胞Vimentin、E-Cadherin蛋白表达。结果：与SV-HUC-1细胞相比,lncRNA OIP5-AS1在膀胱癌细胞中的表达明显升高,T24细胞表达量较高（P <0.05）。与control组相比,siRNA-OIP5-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,Vimentin蛋白表达明显降低,E-Cadherin蛋白表达明显升高（P &l...     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。