冻存保护剂对低温保存的组织工程骨修复骨缺损的影响

目的 探讨不同方法低温保存的组织工程骨修复节段性骨缺损的差异.方法 以骨髓基质干细胞(marrow stromal cells,MSCs)复合部分脱蛋白骨培养制备组织工程骨,组织工程骨分别用添加或不添加冻存保护剂的保存液于-80℃深低温冻存3个月,3个月后复温冻存的组织工程骨.选择60只新西兰白兔,制作15mm长的桡骨节段性骨缺损模型,实验根据植入不同的材料分为A、B、C和D组.A组:骨缺损区植入添加冻存剂保存的组织工程骨;B组:骨缺损区植入未添加冻存剂保存的组织工程骨;C组:骨缺损区植入未行低温保存的组织工程骨;D组:骨缺损区植入部分脱蛋白骨.术后4、8、16周取材,行X线检查、组织学观察、计算机图像分析和生物力学测定.结果 术后4、8、16周各组骨缺损区均有新骨生成,成骨量随时间的推移而增加.经X线、组织学和生物力学评估,A组与C组比较未见差异(P＞0.05),A组或C组分别与B组和D组比较,成骨能力依次为:A或C＞ B ＞ D(P＜0.001,P＜0.05),其中A或C组术后16周骨缺损完全修复,骨髓腔再通,生物力学性能接近正常骨.结论 选择适宜的冻存保护剂对组织工程骨的生物活性有一定的保护作用.     

新型纳米生物材料修复胫骨大面积缺损的实验研究

目的 通过组织工程方法研究纤维增强纳米相羟基磷灰石胶原复合材料(nanohydroxyapatite collagen/chitin fibres,n-HAC/CF)的细胞相容性及其修复大面积骨缺损的情况,探讨其临床应用的可能性.方法 采用纳米技术制备n-HAC/CF,在体外与羊骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)复合培养,观察BMSCs在材料上的生长、增殖情况;取24只山羊,制备羊胫骨40 mm骨缺损模型,随机分为3组:A组为BMSCs复合n-HAC/CF;B组为单纯n-HAC/CF;C组为空白对照组.分期行X线、组织学、生物力学测定观察各组成骨情况.结果 BMSCs能在n-HAC/CF材料上良好地黏附、增殖和生长.12周时X线、组织学检查显示A组完全修复了骨缺损区,B组部分修复了骨缺损区,A组的新生骨小梁多于B组(P＜0.01),C组未见骨修复.生物力学测定显示最大应力值A组大于B组(P＜0.01). 结论 n-HAC/CF具有良好的细胞相容性,并能成功地修复山羊大面积骨缺损,有望成为骨组织工程理想的细胞外基质和骨移植的替代材料.     

热适应通过P53依赖性细胞凋亡机制提高肝癌细胞热耐受性

目的：探讨热适应影响热应激所致细胞凋亡的机制。方法：将培养有7721的细胞瓶随机分为对照组（A组）、热适应组（B组）、热适应热暴露组（C组）和热暴露组（D组），分别给予不同热暴露，用DAPI荧光显微法观察细胞凋亡，用Western blot检测P53和P21表达，用克隆形成试验测定细胞增殖。结果：细胞存活率：D组〈C组〈B组〈A组；凋亡细胞所占比例：D组〉C组〉A组和B组；C组和D组P53和P21表达均明显强于A组和B组，C组P53和P21表达明显低于A组。结论：热适应通过P53依赖性细胞凋亡机制提高细胞热耐受性。     

气管套囊对麻醉兔气管黏膜形态结构影响的研究

目的：探讨气管充气套囊对麻醉兔气管黏膜形态结构的影响。方法：家兔120只，按气囊压力不同随机分为A(30cmH2O维持1、2、4、5h)、B(20cmH2O维持1、2、4、5h)、C(20cmH2O维持2h气嶷放气10、20、30mm再充气2h)、D(对照组)4组，分别对气管黏膜作组织学和超微结构观察。结果：①气囊压力20cmH2O维持2h及气囊放气20min再充气2h光镜下黏膜结构未见异常，电镜显示纤毛细胞质及线粒体轻度肿胀；24h后光镜和电镜观察均未见异常；②气囊压力20cmH2O维持≥4h、30cmH2O≥2h气管黏膜充血、上皮细胞变性、坏死及脱落，拔管后24h黏膜表面有黏液及坏死物覆盖，病变程度随气囊压迫时间延长而加重。结论：①气囊压力以20cmH2O对气囊黏膜的损伤最轻；②气囊充气2h后放气≥20min再充气，可以减轻黏膜损伤。     

正加速度暴露下大鼠肠黏膜屏障损伤及sIgA水平的变化

目的 探讨模拟正加速度(+Gz)暴露对大鼠肠黏膜免疫屏障的影响.方法 32只雄性SD大鼠随机分成4组(n=8),通过动物离心机模拟+Gz暴露.A组大鼠不做处理,B组大鼠以+5Gz值旋转5min,C组大鼠以+10Gz值旋转5min,D组大鼠连续暴露于+5Gz值1.5min、+10Gz值2.0min、+5Gz值1.5min.每日暴露1次,持续5d.实验结束后观察大鼠肠黏膜大体损伤情况及镜下表现,ELISA法检测肠黏膜内分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量.结果 +Gz暴露后,与A组相比,其他各组大鼠肠黏膜均有损伤,损伤程度D组＞C组＞B组;ELISA检测显示其他各组大鼠肠黏膜sIgA含量均明显下降(P＜0.05),且sIgA含量D组＜C组＜B组(P＜0.05).结论 +Gz暴露可损伤大鼠肠黏膜,并削弱肠黏膜的免疫屏障功能.     

实验犬留置不同类型气管支架的基础研究

目的 探讨不同类型气管覆膜支架植入在实验动物中的应用价值.方法 健康成年杂种犬18只,随机平均分为3组,气管内留置不同类型支架,A组留置全覆膜支架(全长6 cm覆膜),B组留置中段覆膜支架(全长6 cm,上下两端各1 cm不覆膜,覆膜长度4 cm),C组留置裸支架(全长6 cm).术后观察动物进食、排痰、呼吸情况,饲养20周后分别处死.观察气管标本大体和HE镜下改变,并行增殖细胞核抗原(PCNA)染色,定量分析增生细胞的阳性表达.结果 各组实验犬均未发生支架留置后的急性呼吸困难,有轻至中度呛咳,经观察,排痰量并无明显差异.均可正常饮水、进食,发声无异常.部份犬活动减少.支架不覆膜处,气管内壁组织增生较明显,气管腔狭窄程度大于支架覆膜处.各组HE染色镜下均表现为炎性反应,低柱状上皮细胞鳞状化生、肉芽增生和纤维增生性改变.3组覆膜处与不覆膜处的黏膜增殖细胞阳性表达有显著的统计学差异(P＜0.05).不覆膜处的黏膜增殖细胞比率较高.结论 ①气管支架有无覆膜在留置的短期内对于进食、呼吸状况及痰液的排出无明显影响;②气管支架留置后,覆膜段气管内膜组织增生水平要小于不覆膜段;③气管支架留置后,覆膜段的黏膜增值细胞阳性表达小于不覆膜段.覆膜支架的生物相容性好.     

以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料对兔骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的 观察以纤维蛋白胶(FS)为载体的注射型骨修复材料对体外培养的兔骨髓基质细胞(MSCs)增殖和分化的影响.方法 取3天龄新西兰兔MSCs进行培养,实验分为5组,A组(实验组)培养液中加入含1μg/ml重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)和1μg/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的纤维蛋白胶,B组(对照1组)培养液中加入单纯的纤维蛋白胶,C组(对照2组)培养液中加入含lμg/ml bFGF的纤维蛋白胶,D组(对照3组)培养液中加入含1μg/ml rhBMP-2的纤维蛋白胶,E组为单纯对照组(培养液中不加入任何材料).采用细胞培养、组织化学及电镜观察等方法对各组细胞增殖情况、贴壁率、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原表达、超微结构变化等进行研究.结果 各组材料的促增殖作用和对细胞贴壁率的影响由强到弱均依次为C组、A组、B组、D组、E组,差异有显著性(P＜0.05).各组细胞ALP活性及Ⅰ型胶原表达水平由强到弱均依次为A组、D组、B组、C组、E组,差异有显著性(P＜0.05).扫描电镜观察发现,以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料表面粗糙,有微孔存在,各组细胞与其融合生长.透射电镜观察发现:A组的绝大部分细胞呈成骨细胞表型,细胞增殖旺盛,分化好,胞质内有丰富的粗面内质网和线粒体,并明显扩张,内有蛋白样物质,细胞外基质丰富,细胞周围可见大量的胶原纤维;而各对照组或是细胞增殖活性高,但向成骨细胞表型分化差,或是向成骨细胞表型分化好,但细胞增殖活性较差,细胞外基质及胶原纤维少.结论 以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料(FS bFGF rhBMP-2)可显著促进MSCs的增殖及其向成骨细胞的分化.     

高原对去势大鼠骨密度、生物力学和骨组织学的影响及复方红景天对其保护作用

目的：探讨高原低氧环境对去势大鼠骨密度、生物力学和骨组织病理变化影响及复方红景天对其保护作用。方法：选用Wistar雌性大白鼠120只，高、平原各60只。分别摘除卵巢或假性去卵巢。分为A组（假手术组），B组（切除卵巢组），C组（切除卵巢＋尼尔雌醇组），D组（切除卵巢＋红景天混合饲料组）。每组15只，高原组术后在海拔3100m地区饲养，术后3个月处死，取出实验鼠的腰椎和股骨，行骨密度和生物力学测定，常规石蜡切片，HE染色观察腰椎和股骨骨组织病理学变化。并与平原组进行对照。结果：高原B组腰椎和股骨骨密度和生物力学值与A组比较显著降低。与C和D组比较也有明显降低。C、D组腰椎和股骨骨密度和生物力学值与A组比较统计学处理无明显差异，平原组B组腰椎和股骨骨密度和生物力学与A组比较显著降低，与C和D组比较也明显降低。C和D组腰椎和股骨骨密度和生物力学值与A组比较无明显差异。高原A、B、C和D组腰椎和股骨骨密度和生物力学值（除股骨生物力学部分内容外）与平原相应组比较均明显降低。骨组织学观察：高原B组股骨和腰椎与A组比较骨皮质变薄，骨髓腔扩大，骨小梁分布稀疏，骨小梁变细，见断裂现象。平原B组股骨和腰椎组织变化同高原B组。结论：高原环境可引起骨密度、生物力学改变，复方红景天具有明显抑制骨吸收作用。     

气管食管沟淋巴结转移放疗中气管支架置入时机的探讨

目的分析食管癌气管食管沟淋巴结(TGLN)转移放疗中不同气管受压面积发生呼吸困难比例,探讨气管支架置入时机。方法 103例行普通放疗或三维适形放疗食管癌TGLN转移患者,按气管受压面积分成A、B、C、D 4组(<30%、30%～50%、>50%～70%、>70%),统计放疗开始至放疗结束不同组间呼吸困难发生例数,并于放疗后4周统计因气道梗阻死亡例数。结果发生呼吸困难:A组1例;B组6例;C组15例,6例放置支架;D组24例,14例放置支架。因气道梗阻死亡:A组0例;B组未放置支架者死亡1例;C组9例未放置支架者中死亡4例,6例放置支架者无死亡;D组12例未放置支架者死亡6例,14例放置支架者死亡1例,放置与未放置支架死亡率比较差异有统计学意义(χ2=6.032,P<0.05)。结论放射治疗是TGLN转移的有效治疗方法之一,建议气管受压面积>70%时,先行置入支架,再行放疗;>30%时,可先行放疗,但须密切观察,对>50%者更应小心。     

谷氨酰胺对正加速度暴露后大鼠肠道屏障损伤的修复作用

目的 观察正加速度(+Gz)暴露对大鼠肠黏膜机械屏障及免疫屏障的损伤,探讨谷氨酰胺(Glutamine,Gln)对损伤的修复作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分成3组,每组8只,分别标记为A组(对照组)、B组(+10 Gz组)、C组(+10 Gz+Gln组)。采用动物离心机模拟+Gz暴露,B组大鼠以+10Gz值旋转5 min,每日暴露1次,持续5 d,C组训练方法同B组,训练前灌服用生理盐水配置的Gln溶液。实验结束后次日麻醉大鼠,取大鼠肠黏膜标本及外周血清,镜下观察大鼠肠道组织形态特点,并检测各组大鼠血清D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平以及用酶联免疫吸附测定肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(s Ig A)含量。结果 A组大鼠小肠组织无明显损伤;B组+Gz暴露后的小肠组织损伤最严重;C组小肠组织损伤程度不及B组。与A组相比,B组大鼠血清D-乳酸、DAO水平明显升高(P0.01),s Ig A水平明显降低(P0.01);C组大鼠血清D-乳酸、DAO水平高于A组(P0.05),但s Ig A水平与A组相比差异无统计学意义。B组大鼠血清D-乳酸、DAO水平高于C组(P0.05),s Ig A水平明显低于C组(P0.01)。结论 +Gz暴露可增加大鼠肠道黏膜通透性,破坏大鼠肠道屏障。加速度暴露过程中补充Gln,对屏障损伤有较好的修复作用。