miRNA-24下调S100A8蛋白表达能够抑制人喉鳞癌Hep2细胞侵袭

目的：探讨microRNA-24（miRNA-24）对喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous carcinoma,LSCC）Hep2细胞侵袭影响的分子机制。方法：应用miRanda和RNA22靶基因预测软件预测miR-24的靶基因及其结合位点,根据预测结果通过转染miR-24前体上调其在Hep2细胞中的表达,应用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-24过表达对S100钙结合蛋白A8（S100 calcium binding protein A8,S100A8）mRNA和蛋白表达变化的影响。S100A8抗体阻断方法,检测转染miR-24前体后Hep2细胞侵袭能力的变化。结果：S100A83＇非翻译区（3＇-untranslation region,3＇UTR）含有一个miR-24结合位点,而且该位点与大鼠的同源性高达95%;miR-24基因转染的Hep2细胞中miR-24的表达显著升高,S100 A8蛋白的表达显著降低,（P均〈0.05）,而S100A8 mRNA表达变化未见显著性差异,（P〉0.05）。与未阻断组相比,miR-24前体转染能明显降低阻断S100A8组的Hep2细胞侵袭能力,（P〈0.05）。结论：LSCC Hep2细胞中,miR-24可结合到S100A8基因的3＇UTR,在转录后水平上负性调控S100A8基因的表达,从而抑制Hep2细胞侵袭。     

微小RNA-181a在人食管癌EC9706细胞中对靶基因PRDM1调控作用的研究

目的:构建微小RNA(microRNA,miR)-181a的真核表达载体和靶基因PRDM1(encoding PR domain containing1,with ZNF domain)的3’非翻译区(3’-untranslated region,3’UTR)荧光素酶报告载体,在人食管癌EC9706细胞中验证miR-181a对靶基因PRDM1的调控作用。方法:根据miR-181a成熟序列在基因组中的位置及其上下游200个碱基序列,以人食管癌KYSE150细胞基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增包含miR-181a前体的序列,克隆到线性化的pMD18-T Simple载体中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pCDNA3.1(+)上,对重组质粒进行酶切鉴定和测序分析。通过实时定量PCR法检测人食管癌EC9706细胞转染重组表达载体pCDNA3.1-miR-181a后成熟miR-181a的表达水平。应用生物信息学预测软件对miR-181a的靶基因进行预测,将候选靶基因PRDM1的3’UTR融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测miR-181a对靶基因PRDM13’UTR的调控作用。将pCDNA3.1-miR-181a表达质粒转染到人食管癌EC9706细胞中,蛋白质印迹法检测其对PRDM1蛋白表达的影响。结果:成功构建miR-181a真核表达载体,实时定量PCR验证表明pCDNA3.1-miR-181a在EC9706细胞中能够过表达成熟miR-181a。生物信息学预测PRDM1可能是miR-181a的靶基因之一,于是构建了PRDM1的3’UTR荧光素酶报告载体pMIR-PRDM1,在此基础上对PRDM1的3’UTR"种子区"进行定点突变。双荧光素酶报告基因分析表明,miR-181a能够作用于PRDM1基因的3’UTR。蛋白质印迹法进一步证实,miR-181a能够抑制性调控内源性PRDM1蛋白的表达。结论:MiR-181a作用于PRDM1基因的3’UTR,在转录后水平上调PRDM1蛋白的表达,提示PRDM1是miR-181a直接调控的靶基因。     

miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

目的:探讨miR-145靶向调控SMAD3的表达对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用qRT-PCR检测miR-145和SMAD3在30例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达水平并分析其相关性。利用靶基因预测网站预测miR-145的潜在靶基因SMAD3,利用双荧光素酶报告基因实验验证。利用细胞转染实验对非小细胞肺癌A549细胞进行了miR-145 mimics、miR-145 inhibitor、siRNA SMAD3及其相关对照的细胞转染,采用Transwell实验检测转染后A549细胞侵袭能力的变化。使用Western blot检测上调或下调miR-145表达对A549细胞中SMAD3蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-145低表达,SMAD3高表达,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示miR-145可以与SMAD3 的 3'-UTR特异性结合,SMAD3是miR-145的靶基因。Western blot 结果显示,转染miR-145 mimics可以显著降低SMAD3蛋白的表达水平（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor则显著提高SMAD3蛋白的表达水平（P<0.01）。Transwell体外侵袭实验结果显示,与对照组相比,转染miR-145 mimic显著降低了A549细胞的侵袭能力（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor显著提高了A549细胞的侵袭能力（P<0.05）;与对照组相比,敲低SMAD3的表达A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.001）;与单独敲低SMAD3相比,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 mimics A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.05）,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 inhibitor A549细胞的侵袭能力无显著差异（P>0.05）。结论:miR-145在非小细胞肺癌组织中低表达,miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达发挥对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的抑制作用,为临床综合治疗提供了新的作用靶点。     

喉癌Hep2细胞凋亡调控中HLA-B的作用机制

目的:探讨人类白细胞抗原B(HLA-B)在喉癌Hep2细胞凋亡调控中的作用机制。方法:免疫共沉淀结合蛋白质印迹技术鉴定HLA-B与S100结合蛋白A8(S100A8)、S100A8与S100A9及HLA-B与S100A9在体外发生相互作用的情况,免疫细胞化学对HLA-B、S100A8和S100A9在Hep2细胞中的表达进行定位,同时验证三者之间可能的关系;进一步应用RNA干涉技术,通过Real-ti mePCR及蛋白质印迹评估相互作用基因的表达情况。结果:Hep2细胞中HLA-B和S100A8蛋白在体外存在相互作用,而S100A8和S100A9并没有以异源二聚体的形式存在。免疫细胞化学结果显示,Hep2细胞中S100A8蛋白主要表达于细胞质中,HLA-B主要定位于细胞质和细胞膜上,而S100A9蛋白主要分布于细胞核中。另外,与转染PBS及无义小分子干扰(si RNA)组相比,RNA干涉HLA-B基因能明显下调S100A8 mRNA和蛋白的表达水平,F值分别为553.024、603.582,P值均为0.000;而RNA干涉S100A8基因对HLA-B mRNA和蛋白表达变化无显著影响,F值分别为1.266、1....     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

转染microRNA-330-5p对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-330-5p表达对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,揭示miR-330-5p的作用机制。［方法］ 分析非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系95C和95D的 miRNA表达谱芯片中miR-330-5p的表达情况并用靶标软件预测其靶基因;转染miR-330-5p类似物（mimics）至95D、转染miR-330-5p 抑制剂(inhibitor)至95C中,应用CCK-8法、transwell小室法检测miR-330-5p对肺癌细胞增殖、侵袭迁移等生物学行为的影响;应用Western blot法检测miR-330-5p表达对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平的影响。［结果］ miRNA表达谱芯片显示miR-330-5p在95D中表达明显低于95C;靶标预测软件预测mTOR mRNA可能是miR-330-5p的靶基因;转染miR-330-5p mimics后95D细胞增殖能力显著降低,其24h侵袭穿膜细胞数明显低于对照组,mTOR蛋白表达明显下调(P<0.01);而转染miR-330-5p inhibitor后95C细胞的增殖能力增强,其24h侵袭穿膜细胞数较对照组明显增加,mTOR蛋白表达上调(P<0.01)。［结论］ 提高miR-330-5p表达能够明显抑制肺癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力,mTOR mRNA可能是其重要的靶基因。     

miR-663通过靶向TGFB1对肺癌细胞A549增殖的调控

目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统,验证miR-663的直接靶基因TGFB1,探讨miR-663促进肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法实时定量RT-PCR检测10对肺癌组织和正常肺组织中miR-663的表达水平;利用细胞计数和集落形成实验来验证细胞转染miR-663 ASO后的A549细胞增殖。选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将TGFB1 3′UTR的一段特异性序列插入该质粒中,并与miR-663及表达红色荧光蛋白质pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,转染后细胞提取的蛋白样品,荧光分光光度计进行定性和定量检测。结果 miR-663在肺癌组织中的表达高于在正常肺组织中的表达;miR-663表达明显促进了细胞A549的增殖;共转miR-663和pcDNA3/EGFP-TGFB13′UTR质粒后,绿色荧光蛋白的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-TGFB13′UTR共转组。结论 miR-663可能通过靶定靶基因TGFB1,促进了肺癌细胞A549的增殖。     

miR-138-5p靶向调控RAB22A表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-138-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:U251细胞分为miR-NC组(对照组)、miR-mimics组、miR-inhibitor组以及miR-mimics+RAB22A-pcDNA3.1组。qRT-PCR检测miR-138-5p在胶质瘤细胞中的表达量;CCK8实验检测U251细胞的增殖能力;Transwell实验检测U251细胞的迁移和侵袭能力;Targetscan数据库预测miR-138-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白RAB22A是miR-138-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中RAB22A的蛋白表达水平。结果:与正常人星形胶质细胞相比较,miR-138-5p 在胶质瘤细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8和Transwell实验结果表明,在U251细胞中,过表达miR-138-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05);运用Targetscan数据库预测miR-138-5p下游靶基因为RAB22A,miR-138-5p作用于RAB22A的3' UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与蛋白免疫沉淀实验结果证实miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;RAB22A在胶质瘤细胞中明显高表达(P＜0.05),在U251细胞中过表达miR-138-5p明显抑制RAB22A的表达(P＜0.05)。结论:miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达降低,miR-138-5p通过下调RAB22A表达而抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-211通过靶向下调SATB2表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-211及SATB2基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,探究miR-211在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及其相关机制。方法:双荧光素酶报告系统验证miR-211和SATB2的相互作用机制;qRT-PCR检测miR-211和SATB2在NSCLC组织及癌旁组织中的表达情况;向A549细胞中转染miR-211 mimics、miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2,检验转染效率及转染后A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白表达水平;采用CCK-8实验和Transwell小室分别检测miR-211和SATB2表达变化对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:双荧光素酶报告系统结果提示SATB2 3' UTR是miR-211直接结合的靶位点。NSCLC组织中miR-211表达上调,SATB2表达下调,两者表达呈线性负相关(P＜0.05)。转染miR-211 mimics显著下调A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05);转染miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2使A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。CCK-8实验显示,相较于对照组,miR-211过表达组的A549细胞增殖率显著增加(P＜0.05),miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞增殖能力下降(P＜0.05)。Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞迁移和侵袭能力明显降低(P＜0.05)。在miR-211过表达组共转染SATB2过表达,使miR-211介导的对A549细胞增殖、迁移及侵袭的促进作用受到抑制。结论:下调miR-211的表达可以增加NSCLC细胞中SATB2转录及转录后表达水平,从而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

沉默S100A4基因对人膀胱癌T-24细胞生物学特性的影响

目的:探讨应用siRNA 技术沉默S100A4基因表达后,对人膀胱癌细胞系T-24增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响。方法:设计并合成S100A4 基因特异性的siRNA 序列,转染人膀胱癌细胞系T-24,48h后应用RT-PCR 和Western blot法检测在mRNA 和蛋白水平siRNA 对S100A4的影响,MTT 法检测T-24细胞增殖能力,流式细胞术检测转染S100A4 siRNA 后T-24细胞凋亡率,Transwell 法观察siRNA 抑制S100A4 后对人膀胱癌细胞系侵袭能力的影响。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4 siRNA转染组T-24细胞的S100A4基因和蛋白表达降低(P＜0.05)。MTT法检测发现S100A4 siRNA转染组细胞增殖率明显下降（P＜0.01）;流式细胞术检测siRNA转染组细胞凋亡率高于其他各组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Transwell小室实验检测发现T-24细胞侵袭能力明显下降（P＜0.05）。结论:膀胱癌细胞中S100A4 表达与癌细胞侵袭、增殖和凋亡能力有关。S100A4 siRNA 能够抑制T-24细胞S100A4的表达,进而抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。S100A4基因和蛋白表达与膀胱癌的生物学特性密切相关,可能成为预测其发生转移和复发,以期指导临床治疗的重要指标。     

miR-21靶向抑制TIMP3表达促进肝细胞肝癌细胞侵袭

目的:探讨miR-21在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中的表达及其调控细胞增殖和侵袭的机制.方法:通过Real-time PCR检测HCC细胞株(Hep3B、HuH7、SNU398和Hep3G2)和人正常肝细胞(THLE2、THLE3)中miR-21的表达.使用miR-21-...     

miR-3612靶向SEMA4C调控肝细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-3612靶向信号素（SEMA）4C对肝细胞癌细胞增殖与侵袭能力的影响。方法:收集2020年5月至2021年9月间在皖南医学院第一附属医院弋矶山医院手术切除的肝细胞肝癌的40对癌组织和相应癌旁组织,常规培养肝细胞癌Hep3B和Huh7细胞,将其分为对照组、miR-3612 mimics-NC组、miR-3612 mimics组、miR-3612 inhibitor-NC组、miR-3612 inhibitor组、si-NC组、si-SEMA4C组、mimics-NC+pcDNA-NC组、miR-3612 mimics+pcDNA-NC组和miR-3612 mimics+pcDNA-SEMA4C组,用转染试剂将相应的核酸和质粒转染各组细胞。qPCR法检测miR-3612和SEMA4C mRNA在肝细胞癌组织和Hep3B和Huh7细胞中的表达,双荧光素酶报告基因实验和免疫共沉淀（RIP）实验验证miR-3612与SEMA4C的结合及调控关系,qPCR法和WB法检测转染后各组Hep3B和Huh7细胞中miR-3612、SEMA4C mRNA和蛋白的表达,CCK-8法、细胞划痕...     

肝癌细胞 miR-183表达及上下游调控机制探讨

目的： miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征,但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明。本研究探讨肝癌细胞 Hep3B 中 miR-183的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白变化。方法 MTT 法检测人正常肝细胞株 LO2及人肝癌细胞株 HepG2、Hep3B 的细胞增殖活性。提取细胞的总 RNA 和蛋白,采用 RT-qPCR 和蛋白印迹法分别检测细胞株中 miR-183的表达和细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal-regulated kinase 1／2,ERK1／2）、磷酸化 ERK1／2（phospho-ERK1／2,p-ERK1／2）、磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶（phospho-phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶 B（phospho-protein kinase B,p-AKT）、NF-κB 抑制蛋白α亚基（nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα）和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4,PDCD4）的蛋白水平。用抑制剂分别抑制 Hep3B 细胞 ERK、PI3K、AKT 和 NF-κB 信号分子的活性并检测 miR-183的表达水平及 PD-CD4蛋白表达水平。结果 LO2、HepG2和 Hep3B 细胞在48 h 的增殖倍数分别为8．76±0．22、16．61±1．59和19．86±0．69,F ＝159．90,P ＜0．001。与 LO2（41．68±9．62）和 HepG2（41．53±1．20）细胞相比,Hep3B（69．15±11．02）的 miR-183细胞表达水平显著升高,F ＝10．250,P ＝0．012。与 LO2相比,Hep3B 细胞的 p-ERK1、ERK1、p-AKT 和 IκBα的蛋白水平明显升高,分别为 LO2的10．87、24．68、6．67和1．92倍;PDCD4的蛋白水平明显下降,为 LO2的0．14倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的 IκBα和 PDCD4蛋白表达明显升高,分别为 LO2的4．46和7．90倍。抑制 ERK 的活性后24 h,miR-183表达水平显著上升,F ＝215．459,P ＜0．001;抑制 Hep3B 细胞的 PI3K 活性后12和24 h,miR-183表达水平显著降低,F ＝80．215,P ＜0．001;抑制 AKT 的活性后12和24 h,miR-183表达水平显著下降,F ＝101．947,P ＜0．001;抑制 NF-κB 的活性后12和24 h,miR-183表达水平没有显著变化,F ＝1．826,P ＝0．216。抑制 ERK 和 NF-κB 信号分子活性对 PDCD4的蛋白表达没有显著影响。抑制 PI3K 和 AKT 信号分子活性可明显提升 PDCD4的蛋白表达水平。结论在 Hep3B 细胞中,PI3K／AKT 对 miR-183的表达有显著的促进作用,而 ERK 对 miR-183的表达有显著的抑制作用,NF-κB 不是调控 miR-183表达的主要信号分子。PDCD4是 miR-183的重要下游靶蛋白。     

miR-24 functions as a tumor suppressor in Hep2 laryngeal carcinoma cells partly through down-regulation of the S100A8 protein

microRNAs, a family of small non-coding RNAs, regulating approximately 30% of all human genes are deeply involved in the pathogenesis of several types of cancers, including laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). Here, we demonstrate that miR-24 is down-regulated in human LSCC tissues. Ectopic expression of miR-24 in Hep2 cells significantly induced cell morphology changes and inhibited cell proliferation and invasion ability in vitro by targeting S100A8 at the translational level. Meanwhile, miR-24 could significantly inhibit Hep2 cell invasion after S100A8 protein blockade. In conclusion, our results suggest that miR-24 may function as a tumor suppressor in LSCC through down-regulation of S100A8, which suggests that miR-24 could serve as a novel potential maker for LSCC therapy.     

miR-4465 通过靶向下调HMGA1的表达抑制肝细胞癌Hep3B细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-4465 靶向高迁移率族蛋白A1（HMGA1）对肝细胞癌 Hep3B 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：收集2020 年5 月至2021 年9 月在皖南医学院第一附属医院确诊为肝细胞癌患者的16 对癌组织和癌旁组织样本，采用qPCR 分析miR-4465 在肝细胞癌组织和Hep3B、Huh7细胞中的表达情况，双荧光素酶报告基因实验验证miR-4465 与HMGA1的调控关系。按转染物的不同将 Hep3B 细胞分为 mimics-NC 组 、miR-4465-mimics 组、inhibitor-NC 组、miR-4465 inhibitor组、si-NC 组、si-HMGA1 组；另外分组转染mimics-NC+pcDNA-NC、miR-4465 mimics+pcDNA-NC 和miR-4465 mimics+pcDNA-HMGA1进行回复实验。采用qPCR和WB法检测各组细胞中HMGA1 mRNA和蛋白水平的变化，CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化，划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化，Transwell 实验检测各组细胞侵袭能力的变化。结果：miR-4465 在肝细胞癌组织和细胞中的表达水平显著低于癌旁组织和正常肝细胞（P<0.05或P<0.001）。转染48 h后，过表达miR-4465 的Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降（P<0.05、P<0.01或P<0.001）；敲低miR-4465 后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显升高（P<0.05、 P<0.01或P<0.001）。双荧光素酶报告实验验证了HMGA1-3''UTR 与miR-4465 的靶向结合关系，miR-4465 可以靶向下调HMGA1 mRNA 和蛋白质的表达（均P<0.01）。过表达HMGA1 能部分逆转过表达 miR-4465 对细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及HMGA1 表达的抑制作用（均P<0.05）。结论：miR-4465 通过靶向下调HMGA1 在肝细胞癌Hep3B 细胞中的表达，从而抑制Hep3B细胞的恶性生物学行为。     

肝癌细胞系中miR-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系

目的:研究肝癌细胞系中微小RNA（microRNA,miR）-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系。方法:体外培养肝细胞系HL-7702，肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7，处理细胞分miRNA NC组、miR-9 inhibitor组、顺铂（CDDP）组、CDDP+miRNA NC组、CDDP+miR-9 inhibitor 组。实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测miR-9表达水平；免疫印记（Western blot,WB）法检测E2F1蛋白水平；CCK-8法检测miR-9对细胞存活的影响；克隆计数检测miR-9对细胞数量的影响。结果:与正常肝细胞系HL-7702相比，肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9、E2F1蛋白水平升高（P＜0.05）。在HepG2、Hep3B2.1-7细胞系中，与miRNA NC组相比，miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低（P＜0.05）。与miR-9 inhibitor组相比，CDDP组、CDDP+miRNA NC组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量升高（P＜0.05）；CDDP+miR-9 inhibitor组细胞克隆数量、48 h细胞OD450降低（P＜0.05）；与CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比，CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低（P＜0.05）。在HepG2细胞系中，与miRNA NC组、CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比，miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）。在Hep3B2.1-7细胞系中，与miRNA NC 组相比，miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）、CDDP+miR-9 inhibitor组（6、12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）；与CDDP组相比，miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）、CDDP+miR-9 inhibitor组（3、6、12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）；与CDDP+miRNA NC组相比，miR-9 inhibitor组（24、48 h）、CDDP+miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）。结论:肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9和E2F1表达上调；干扰miR-9可抑制E2F1表达，抑制细胞增殖、抑制细胞克隆形成，提高药物敏感性。     

miR-1243通过靶向hnRNPA2B1调控肝癌HepG2细胞增殖和迁移

目的：探讨miR-1243通过靶向调控核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNPA2B1）表达对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响及其分子机制。方法：用qPCR和WB法检测40例肝癌组织及其癌旁组织（2019年1月至2021年8月在武汉市第三医院首义院区手术切除标本）和正常人肝细胞 QSG-7701 与肝癌细胞 HepG2、Hep3b、HuH-7 中 miR-1243、hnRNPA2B1 mRNA 水平及hnRNPA2B1、cyclin D1、MMP-2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-1243和hnRNPA2B1的靶向关系。HepG2细胞分为对照组（不转染）、miR-NC 组（转染 miR-NC）、miR-1243 mimic 组（转染 miR-1243 mimic）、miR-1243 mimic+pcDNA3.1 组（转染miR-1243 mimic 和 pcDNA3.1）、miR-1243 mimic+pc-hnRNPA2B1 组（转染 miR-1243 mimic 和 pc-hnRNPA2B1）后进行相应转染;WB 法检测肝癌组织及细胞和转染后各组细胞的 hnRNPA2B1、cyclin D1、MMP-2 蛋白表达水平;CCK-8 法检测转染后各组HepG2细胞的增殖能力;划痕愈合实验检测转染后各组HepG2细胞的迁移能力。结果：与癌旁组织或正常人肝细胞QSG-7701相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-1243呈低表达、hnRNPA2B1 mRNA及其蛋白呈高表达（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-1243与hnRNPA2B1间存在靶向关系,且miR-1243通过靶向hnRNPA2B1负调控其表达。转染miR-1243 mimic后HepG2细胞中hnRNPA2B1蛋白表达、细胞增殖能力、划痕愈合率及cyclin D1、MMP-2蛋白表达均显著降低（均P<0.05）;而同时过表达 hnRNPA2B1 和 miR-1243 可逆转过表达 miR-1243 对 HepG2 细胞增殖、迁移的抑制作用。结论：miR-1243 通过靶向hnRNPA2B1表达调控肝癌HepG2细胞的增殖和迁移。     

肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8+T细胞抗肿瘤的功能及机制研究

目的:探究肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8+T细胞抗肿瘤的功能及机制。方法:将16HBE exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo、miR-NC exo、miR-24-3p exo与CD8+T细胞共孵育（16HBE exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组、miR-NC exo组、miR-24-3p exo组），与PBS共孵育组（PBS组）作为对照，CD8+T与miR-24-3p exo共孵育后转染FGF11质粒（miR-24-3p exo+FGF11组）。CCK8法检测CD8+T细胞的增殖能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p和FGF11的靶向关系。将各组CD8+T细胞与A549细胞以20∶1的比例共孵育4 h（16HBE exo/CD8+T组、A549 exo/CD8+T组、H522 exo/CD8+T组、H460 exo/CD8+T组、miR-NC exo/CD8+T组、miR-24-3p exo/CD8+T组、PBS/CD8+T组、miR-24-3p exo+FGF11/CD8+T组），Elisa检测共孵育后细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度，LDH法检测CD8+T细胞对A549细胞的杀伤能力。结果:相比于PBS组，A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组CD8+T细胞增殖能力显著降低（P＜0.05）。A549 exo/CD8+T组、H522 exo/CD8+T组、H460 exo/CD8+T组细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度显著下降（P＜0.001），CD8+T细胞杀伤能力亦显著下降（P＜0.001）。双荧光素报告基因检测结果显示FGF11为miR-24-3p的靶基因。miR-24-3p exo组CD8+T细胞增殖能力显著低于miR-NC exo组，miR-24-3p exo+FGF11组CD8+T细胞增殖能力显著高于miR-24-3p exo组（P＜0.05）。miR-24-3p exo/CD8+T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8+T细胞杀伤能力均显著低于miR-NC exo/CD8+T组（P＜0.001）， miR-24-3p exo+FGF11/CD8+T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8+T细胞杀伤能力显著高于miR-24-3p exo/CD8+T组（P＜0.001）。结论:肺癌细胞外泌体miR-24-3p可通过靶向抑制FGF11而抑制CD8+T细胞的抗肿瘤功能。