吡柔比星诱导结肠癌细胞株SW-260的凋亡

目的：观察吡柔比星（pirarubicin,ＴＨＰ）对结肠癌细胞株ＳＷ－２６０凋亡的影响。 方法：将ＴＨＰ加入ＳＷ－２６０细胞培养液,Ｈoechst３３２５８荧光染色、透射电镜观察ＳＷ－２６０细胞形态学变化;ＤＮＡ抽提琼脂糖电泳观察ＤＮＡ的“梯状”条带;并测定细胞ＤＮＡ断裂百分率,以探讨ＴＨＰ能否引起人结肠癌细胞株ＳＷ－２６０发生凋亡。结果：不同浓度ＴＨＰ（５,１０,１５umol/Ｌ）作用于ＳＷ－２６０细胞２４小时及１     

肿瘤抗原致敏树突状细胞协同CD3AK细胞的抗肿瘤作用

目的:观察雷公藤内酯醇是否能抑制肿瘤细胞增殖,并探讨其是否通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.方法:选择人宫颈癌细胞株HeLa为研究对象,以MTr实验检测肿瘤细胞的增殖,以AnnexinV/PI染色检测细胞的凋亡,R123染色检测线粒体膜电势的变化.Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳检测染色体DNA断裂.结果:雷公藤内酯醇能明显抑制HeLa细胞的增殖;AnnexinV/PI染色结果证明雷公藤内酯醇能诱导HeLa细胞凋亡,R123染色结果说明雷公藤内酯醇诱导的细胞凋亡与线粒体膜电势的变化有关.雷公藤内酯醇处理的HeLa细胞可见凋亡特有的形态学及生物化学改变,DNA电泳呈梯状条带.结论:雷公藤内酯醇可以通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

原花青素诱导人肺癌细胞A549凋亡作用研究

目的研究原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响并探讨其抗癌机制。方法以不同浓度的原花青素与人肺癌细胞株A549细胞共同培养,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258/PI染色荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特异性梯状DNA条带;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果原花青素可体外抑制肺癌A549细胞生长,抑制率呈浓度、时间依赖性,药物浓度达25 mg/L时作用48小时,A549细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型凋亡改变;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带;Western blot检测结果显示,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量与药物浓度的增加呈增加趋势,Bcl-2与药物浓度呈负相关。结论原花青素能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肺癌细胞增殖,其凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

三氧化二砷对食管癌细胞系EC9706作用的研究

目的探讨不同浓长三氧化二砷（As2O3）对食管癌细胞系EC9706的生长抑制作用及其机理。方法不同浓度三氧化二砷作用于细胞EC9706,采用MTT法检测细胞生长,倒置显微镜观察细胞形态,并通过DNA梯状电泳和流式细胞仪检测凋亡。结果三氧化二砷剂量依赖性抑制细胞生长;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析。细胞株EC9706存在明显的G0／C1期阻滞。结论As2O3具有抑制食管癌细胞株EC9706生长作用,其机理是诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

FHIT抑癌基因对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制作用

目的:探讨FHIT(fragilehistidinetriad)基因对人皮肤淋巴瘤细胞的影响。方法:应用本室构建的真核表达载体pcDNA30FHIT,用脂质体转染培养的Hut78细胞,通过RTPCR、细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验观察细胞受抑情况;用荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况。结果:Hut78FHIT细胞生长速度明显慢于Hut78vect细胞和亲本Hut78细胞,F=362,P<005;Hut78FHIT软琼脂集落形成率为223%,F=431,P<005。吖啶橙荧光染色可见Hut78FHIT细胞内有凋亡小体形成,DNA琼脂糖凝胶电泳可见有凋亡特征的“梯状”条带形成。结论:FHIT基因对Hut78细胞有明显的抑制其增殖的作用,并诱导该细胞的凋亡。     

冰茶栓含药血清诱导人胃癌SCC-7901细胞凋亡

[目的]观察冰茶栓含药血清对体外培养的胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用。[方法]通过血清药理学的方法制备冰茶栓含药血清。将冰茶栓含药血清与体外培养的人胃癌SGC-7901细胞共同培养48h后，应用光学显微镜观察细胞形态的变化：用DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的梯状条带：用流式细胞术检测凋亡峰（亚G1峰）来分析研究冰荼栓含药血清诱导的细胞凋亡。[结果]经过冰荼栓含药血清作用后，SGC-7901细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变；DNA琼脂糖凝胶电泳有特异性梯状条带出现；流式细胞仪检测出现凋亡峰，并显示凋亡率为27．44％，而空白血清组凋亡率仅为4．71％。[结论]冰茶栓含药血清可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡，为冰茶栓临床抗胃癌治疗提供实验依据。     

转染 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体体外诱发 Tca8113细胞凋亡的研究

背景与目的: Fas/FasL与口腔鳞癌的发生、发展相关.本研究旨在探讨 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体诱导舌鳞癌 Tca8113细胞凋亡的作用.方法:用基因工程方法分别构建 pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas( pCCF)和 pAdTrack-cdc25A-Fas( pCF)嵌合基因表达载体;脂质体法将 pCCF、 pCF、 pAdTrack-CMV分别转染 Tca8113细胞;报告基因绿色荧光蛋白( GFP)观察转染效率; Northern blot、 RT-PCR、 Western blot、免疫组化技术检测 Fas基因的转录及表达时序; DNA凝胶电泳带型分析( DNA agarose gel electrophoresis)、原位缺口末端标记 (TUNEL)、 Annexin V、流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 Tca8113细胞凋亡.结果:( 1)嵌合基因表达载体 pCCF、 pCF转 染 Tca8113细胞的转染率为 15%左右,出现在转染后第 5～ 7天.( 2)转染第 3天, pCCF、 pCF组 Fas表达显著上调;第 3、 5、 7天均表达 Fas蛋白, Fas蛋白主要在胞膜和胞浆表达;表达 Fas蛋白的 Tca8113细胞呈现部分凋亡的形态特征. (3)pCCF和 pCF转染 2.5天 (60 h), Tca8113细胞开始出现凋亡,第 3天凋亡率达到最高约 25%,与对照组细胞比较具有显著性差异( P< 0.05), pCCF和 pCF比较无显著性差异( P >0.05). (4)流式细胞仪检测到绿色荧光蛋白表达细胞峰与凋亡细胞峰一致.结论:嵌合基因表达载体 pCCF和 pCF转染口腔鳞癌 Tca8113细胞可诱导细胞凋亡.     

放线菌酮和硫酸锌对儿茶素诱导大肠癌细胞凋亡的拮抗作用

目的 探讨儿茶素诱导体外培养的ＬｏＶｏ大肠癌细胞株凋亡及放线菌酮和硫酸锌对儿茶素诱导细胞凋亡的拮抗作用。方法：用儿茶素处理ＬｏＶｏ细胞，加或不加放线菌酮和硫酸锌，用琼溪糖凝胶电泳，荧光显微镜和流式细胞仪方法。观察Ｌｏｖｏ细胞生化和形态学方面的改变。结果：荧光显微镜下可见ＬｏＶｏ细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩，碎裂等凋亡细胞的形态学改变３，琼脂糖凝胶电泳呈典型的“梯状”（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）带，     

舌癌转移淋巴结中舌癌细胞耐药性的实验研究

目的:观察舌癌淋巴结转移模型中舌癌细胞耐药特性,探讨舌癌转移与耐药相关性。方法:在建立舌癌淋巴结转移模型的基础上,取淋巴结转移的舌癌细胞进行HE染色与免疫组化检测P-gp和LRP耐药相关蛋白,并分离纯化其细胞进行耐药特性检测,包括半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数(re-sistance index,RI)与细胞内多柔比星荧光强度。结果:转移淋巴结中舌癌细胞表达P-gp和LRP蛋白,其分离纯化的子代细胞对多柔比星IC50为(1.86±0.026)μg/mL,对照的亲本(Tca8113)舌癌细胞IC50为(0.26±0.005)μg/mL,RI为7.15;进一步检测淋巴结转移舌癌细胞内多柔比星浓度,其多柔比星荧光强度为6.13±2.48,明显低于亲本Tca8113舌癌细胞的12.36±3.59,P<0.05。结论:淋巴结转移的舌癌细胞有一定的耐药特性。     

β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导LoVo细胞凋亡及活性对Bax与bcl-2基因表达和Caspase-3的影响

目的：观察苦杏仁苷被β-葡萄糖苷酶特异激活后对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法：分别将不同浓度的苦杏仁苷加β-葡萄糖苷酶作用于大肠癌LoVo细胞株24h，通过细胞形态学、DNA凝胶电泳、流式细胞仪观察细胞凋亡变化，RT—PCR方法检测细胞bcl-2、Bax mRNA表达变化，Caspase-3试剂盒检测细胞Caspase-3酶活性的变化。结果：0．1～1．0mmol／L的苦杏仁苷与250nmol／L的β葡萄糖苷酶作用于细胞24h后，可见到以凋亡为主的形态变化：细胞核固缩、染色质凝集及核碎裂、染色质片段化，琼脂糖凝胶电泳见DNA断裂成有规律的特征性梯状条带，流式细胞仪分析显示在G1期细胞前出现亚二倍体峰；RTPCR检测显示Bax mRNA表达升高，而bcl-2mRNA表达无变化；Caspase-3酶活性呈剂量依赖性增加。结论：苦杏仁苷被β葡萄糖苷酶特异性激活后能导致LoVo细胞凋亡，这一过程中，Bax基因表达上调及Caspase-3酶活性增加与LoVo细胞凋亡有关。