Notch1蛋白在小鼠下颌切牙发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌切牙牙胚发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌切牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌切牙牙胚自牙胚发育起始期至钟状晚期不同发育阶段组织Notch1的分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌切牙发育蕾状期牙胚的口腔侧上皮中表达,而在和间充质相邻的牙胚上皮中没有表达。从帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中没有表达。钟状期的唇侧颈环部位星网状层和部分牙上皮细胞也表达Notch1。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌切牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

Fibulin-7在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的时空表达

目的：观察Fibulin-7蛋白在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的时空表达特点。方法：取胚胎15.5 d、出生后第1天、第7天的C57BL/6J小鼠下颌骨标本,应用免疫组织化学方法检测Fibulin-7在下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达情况。结果：Fibulin-7蛋白在小鼠下颌第一磨牙牙胚自钟状期末期至牙胚发育成熟过程中表达量逐渐增加。结论：Fibulin-7蛋白在牙胚发育的不同阶段均有表达,推测Fibulin-7参与了牙间充质细胞分化为成牙本质细胞、牙髓-牙本质复合体的形成过程。     

小鼠磨牙牙胚发育过程中硫酸软骨素硫酸化模式的时空变化

目的:检测硫酸软骨素在小鼠磨牙牙胚发育过程中的硫酸化模式的时空变化。方法:取胎龄分别为E11.5、E13.5、E15.0、E16.5和E18.5d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果:从小鼠牙胚开始发生到帽状期,4-硫酸软骨素只在牙源性上皮外层细胞与基底膜强表达,在牙源性间充质组织中不表达,钟状早期其开始在牙源性间充质组织中表达。6-硫酸软骨素只在牙源性间充质细胞中表达,且其与4-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论:硫酸软骨素在牙胚发生过程中其硫酸化模式呈现时间-空间的特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生密切相关。     

氯离子通道CLC-3在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨CLC-3在BALB/c小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的时空表达。方法:选取E13.5、E15.5、E18.5 d的BALB/c胎鼠和P1、P5 d的BALB/c小鼠,脱颈处死后取其头部,梯度乙醇脱水,石蜡包埋后连续切片,最后对石蜡切片行CLC-3免疫组化染色。结果:当胎鼠牙胚处于蕾状期时,CLC-3在牙胚的牙板上皮中可见表达;当牙胚发育为帽状期时,在牙乳头和牙囊细胞中表达;到钟状期时,CLC-3在牙乳头、牙囊、星网状层细胞和中间层细胞中广泛表达。出生后的小鼠CLC-3在牙乳头、牙囊、成釉细胞、成牙本质细胞、星网状层细胞、中间层细胞中均广泛表达。结论:CLC-3在小鼠牙胚发育的不同时期呈现不同的时空表达。     

Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

蕾状期成釉器重建体外模型的建立

目的:研究小鼠下颌第一磨牙胚蕾状期:①牙间充质对牙胚上皮发生的控制作用;②原发釉结节对牙胚间充质的定义作用;③牙胚上皮细胞位置信息在牙齿发育中的作用.材料与方法:使用小鼠蕾状期下颌第一磨牙蕾状期牙胚,在体外利用胰蛋白酶解离后的牙间充质与混合牙胚上皮细胞进行了重组培养至14天.结果与结论:结果显示蕾状期牙胚上皮具有高度的可塑性,在丧失了全部位置信息后牙胚上皮细胞仍能在牙胚间充质的诱导下完成成釉器的重建及一系列的组织发生.这表明胚间充质在原釉结节形成时对牙胚上皮组织学发生具有可能的控制作用,即在原釉结节形成前在牙胚间充质中可能已存在有牙齿发生所需的全部信息.而在成釉器的体外重建过程中,牙胚间充质则起到了支架的作用.     

跨膜蛋白Syndecan-1在不同发育时期小鼠磨牙组织中的表达

目的以小鼠磨牙为发育模型,研究其不同发育时期跨膜蛋白Syndecan- 1的表达特点,进而分析Syndecan-1在牙齿发育中的作用。方法取不同胎龄的胎鼠,制作其下颌第一磨牙的切片,进行免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察Syndecan- 1的表达情况。结果Syndecan- 1的表达随牙胚发育的时期不同而变化：蕾状期时在牙源性上皮和间充质中有弱的阳性分布,帽状期时成釉器上皮阳性表达减弱,而牙乳头及周围的间充质的阳性反应明显增强,钟状期时成釉器上皮又呈阳性表达,并以在中间细胞层的反应更为强烈,而牙乳头间充质的染色则很弱,同时前成釉细胞以及下方的成牙本质细胞的顶端也呈Syndecan- 1的阳性表达。结论Syndecan- 1参与了成釉器和牙乳头的发育和分化过程的调节,并与牙胚细胞的增殖以及成釉细胞和成牙本质细胞的分化相关。     

组蛋白去甲基化酶JMJD3在小鼠牙发育中的表达

目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在牙发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎E14~18天及出生后P1~P3磨牙牙胚中组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达.结果 JMJD3表达于细胞核内,包括上皮性细胞和间充质细胞.在小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期(E14)和帽状期(E16),JMJD3在牙蕾上皮,成釉器内釉细胞、外釉细胞、星网状细胞中弱表达.在小鼠磨牙牙胚发育的钟状期(E18),JMJD3在成釉器的外釉细胞层,内釉细胞层,中间层、星网状层及邻近间充质细胞内呈强阳性表达.在小鼠磨牙牙胚发育钟状晚期(P3), JMJD3在成釉细胞、成牙本质细胞及邻近间充质细胞呈强阳性表达.结论 JMJD3在小鼠牙发育过程中呈时空特异性表达,提示JMJD3参与小鼠磨牙的发育.     

Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达研究

目的:检测Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达分布及变化规律,初步揭示Ddit3在小鼠牙胚发育中的作用。方法:取不同胚胎时间点的ICR妊娠小鼠,制备牙胚发育标本,通过免疫荧光和免疫组化的方法显示Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时间点的表达分布。结果:Ddit3在牙胚发育的早期主要表达于胞浆中,从钟状期开始,Ddit3不仅在胞浆中有阳性表达,同时也微弱地表达于细胞核中。分布如下:在小鼠下颌第一磨牙发育的板状期,Ddit3几乎没有表达。在蕾状期,Ddit3主要表达于釉上皮的细胞质中,在牙外胚间充质细胞中几乎无表达。在帽状期,Ddit3的表达模式基本和蕾状期相同。在钟状期早期,Ddit3在成釉细胞、前成牙本质细胞和牙乳头胞质中呈阳性表达,在部分细胞核中也检测到了Ddit3的表达。钟状期晚期,Ddit3在新形成的硬组织周围的高柱状成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的胞浆中有阳性表达,在大多数成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的细胞核中也有表达。结论:Ddit3可能会调节成釉细胞和成牙本质细胞的分化及其硬组织的生物矿化。     

Shh及其受体Ptc1、Ptc2在鼠帽状期磨牙的基因表达

目的 观察信号分子Sonic Hedgehog(Shh)及其受体Ptcl、Ptc2在小鼠下颌第一磨牙帽状期的基因表达，以探讨Shh信号路径在牙胚形态发育早期的作用。方法 制备昆明小鼠磨牙形态发育早期标本(E10．5～E15．5)，常规HE染色观察组织形态。免疫组化SP法对增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)进行定位研究。原位杂交法分析Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 E14．5，内、外釉上皮，星网状层及牙乳头细胞PCNA阳性，大部分釉结细胞PCNA阴性，少量釉结细胞PCNA阳性。Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在内、外釉上皮、星网状层及釉结中均有表达。结论 在帽状期，信号分子Shh可能经自分泌或旁分泌途径作用于釉结以外的上皮和间充质，促进其增殖。     

Expression of aquaporin isoforms during human and mouse tooth development

Previously, we described the development of hyaluronan (HA) deposition in human tooth germ tissues that are consistent with water transport in different stages of tooth development. The aquaporins (AQP) constitute a family of membrane water channels that are expressed in many organs. However, there are no data available about the expression pattern of aquaporin water channels in dental structures. In the present study we have characterised the expression of six different aquaporin isoforms (AQP1-5, AQP-9) in developing human and mouse tooth germs by immunohistochemistry using isoform specific antibodies. In the "bell stage" AQP1 was expressed in endothelial cells of small vessels whereas no other structures of the tooth primordial were labeled. AQP2, AQP3 and AQP9 immunoreactivity was not observed in tooth germs, whereas strong AQP4 and AQP5 expression was observed in dental lamina, inner enamel epithelium, stratum intermedium, stellate reticulum and the outer enamel epithelium. Oral epithelium also exhibited AQP4 and AQP5 immunolabeling. During development of the matrices of the dental hard tissues AQP4 and AQP5 immunostaining was observed in the odontoblasts and their processes, as well as in the secretory ameloblast and their apical processes. Immunolabeling controls were negative. In conclusion, AQP4 and AQP5 are expressed in tooth germ tissues in early development in cells that previously have been shown to express HA and/or CD44, indicating that AQP water channels may play a role for ECM hydration during tooth development.     

The expression pattern of hyaluronan synthase during human tooth development

In previous studies, hyaluronan (HA) and its major cell surface receptor CD44 have been suggested to play an important role during tooth development. HA synthases (HASs) are the enzymes that polymerize hyaluronan. Data on the expression pattern of HASs during tooth development is lacking and the aim of the present study was to investigate the localisation of HAS by immunohistochemistry in human tooth germs from different developmental stages. The distribution pattern of HAS in the various tissues of the "bell stage" tooth primordia corresponded to that of hyaluronan in most locations: positive HAS immunoreactivity was observed in the dental lamina cells, inner- and outer-enamel epithelium. On the stellate reticulum cells, moderate HAS signal was observed, similar to the layers of the oral epithelium, where faint HAS immunoreactivity was detected. At the early phase of dental hard tissues mineralization, strong HAS immunoreactivity was detected in the odontoblasts and their processes, as well as in the secretory ameloblasts and their apical processes and also, the pulpal mesenchymal cells. The HAS signals observed in odontoblasts and ameloblasts gradually decreased with age. Our results demonstrate that hyaluronan synthesised locally by different dental cells and these results provide additional indirect support to the suggestion that HA may contribute both to the regulation of tooth morphogenesis and dental hard tissue formation.     

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用。方法 :选择胎龄分别为 7、8、10、14周自愿终止妊娠的新鲜人胚胎各 4例 ,制作牙胚切片 ,将蕾状期、帽状期和钟状期牙胚切片 ,做免疫组化检测。结果 :bFGF在蕾状期上皮细胞强染 ,外胚间充质细胞少量弱染色 ;帽状期 ,bFGF在上皮细胞呈整体弱染色 ,牙乳头细胞染色更弱 ;钟状期 ,bFGF在内釉细胞呈强染色 ,牙乳头近切缘的外层细胞亦呈阳性染色 ,星网状层少量细胞弱染色。结论 :bFGF对人牙胚上皮细胞的增殖和分化起着促进作用 ;在人牙胚的钟状期 ,bFGF在促进内釉上皮细胞向成釉细胞转化以及牙乳头细胞向成牙本质细胞转化中起重要作用 ,促进牙胚发育成熟     

Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达研究

目的:检测Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达分布及变化规律,进一步揭示Pik3cb对牙形态发生的影响。方法:制备原位杂交探针,及小鼠牙胚发育标志时间点的牙胚冰冻切片,通过原位杂交方法进一步显示Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时期的表达情况。结果:蕾状期Pik3cb明显表达于牙板上皮,帽状期开始大量表达于釉上皮与牙乳头,进入钟状期表达部位趋于集中,尤以内釉上皮及后续新形成硬组织周围的高柱状成釉细胞处最为明显。结论:Pik3cb在牙源性上皮及成釉细胞表达,并可能通过PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路与成釉细胞瘤行为相关。     

乙酰基亚硝基脲对体外培养小鼠牙胚的作用研究

目的:观察化学致畸、致癌物乙酰基亚硝基脲(ethylnitrosourea,ENU)对体外培养牙胚发育、分化的影响.方法:通过体外牙胚器官培养模型观察培养液中不同浓度的ENU对17天胎龄的小鼠下颌第一磨牙牙胚形态发育的影响.结果:牙胚培养6天后,在含10%小牛血清的BGJb培养液中,牙胚的内釉上皮细胞分化为成釉细胞并分泌牙釉质基质,而其下方的牙乳头细胞分化为成牙本质细胞并分泌前期牙本质.当BGJb培养液中含0.025%ENU时,牙胚成釉器的星网层发生液化、囊性变.当BGJb培养液中含0.05%ENU时,牙胚发育受到抑制,其完整性被破坏,部分细胞溶解坏死.结论:一定量的ENU可使发育中的牙胚发生囊肿样变,过量的ENU对发育中的牙胚产生毒性作用.     

C-Met在ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚中的表达

目的探讨c-Met在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达情况。方法采用孕12d、13d、14d、16d、18d ICR胎鼠及出生后2d ICR仔鼠的头部制作冰冻切片,以抗小鼠c-Met多克隆抗体对冰冻切片进行免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察。结果 c-Met在牙胚蕾状期、帽状期的上皮、钟状期的内釉上皮、成釉细胞和成牙本质细胞中有表达;牙胚和口腔黏膜连接区域两侧的间充质中、牙乳头及蕾状早期颊侧下方下颌的间充质中c-Met也有表达。结论 C-Met对于牙齿的形态发生,成釉细胞和成牙本质细胞的分化,牙乳头细胞的发育可能具有重要作用。