微生物检定法用于抗癌药物—单克隆抗体交联物药物活性测定的评价

多种抗肿瘤抗生素包括MMC、ADM、BLM、DAC、NCS等已广泛用于肿瘤抗体导向化疗研究,微生物抑菌效价方法常用来测定药物与抗体交联物中药物的活性。文献资料显示交联物抗菌活性仅保留2.45至50％,此与细胞毒实验结果存在明显的不一致。本实验对MMC与抗胃癌McAb 3H11交联物3H11-HSA—MMC体外细胞毒作用及抗菌活性进行了研究,交联物对胃癌靶细胞杀伤作用较游离MMC提高5倍,而抑菌活性仅保留6％,用Pronase E处理交联物后其抑菌活性基本恢复到接近游离MMC的水平。提示传统的微生物检定法不能真实地反映药物与抗体交联物药物活性,其活性测定应直接采用细胞毒实验。     

以人血清白蛋白为中间载体的胃癌单克隆抗体与丝裂霉素交联物对人胃癌细胞的选择性杀伤效应

为了提高丝裂霉素C(MMC)与胃癌单克隆抗体(McAb)3H11的交联比,减少McAb用量并保持抗体活性,本文选用人血清白蛋白(HSA)为中间载体,制备了M-MC与3H11的间接交联物,并与直接交联物     

苯丁酸氮芥-抗人直肠癌单抗免疫偶联物对人直肠癌细胞的特异杀伤作用

苯丁酸氮芥(CBL)的活性酯通过共价联接的方式与抗人直肠癌单克隆抗体5OH.19偶联,形成的免疫偶联物CBL一5OH.19具有较高的药物/抗体比率(25～30∶1)以及很好的导向活性。在体外30分钟试验和24小时试验中,CBL—50H.19对人直肠癌LoVo细胞均具有很强的体外杀伤活性.其效果比游离的CBL强。CBL—50H.19对人膀胱癌E—J细胞无杀伤活性;CBL与正常小鼠IgG偶联组成的免疫偶联物对LoVo细胞和E—J细胞均无杀伤作用。这表明CBL—50H.19对人直肠癌细胞不但具有较强的杀伤能力.而且具有好的杀伤特异性.     

C1q结合十二肽的活性研究

目的研究5个C1q结合十二肽及其牛血清白蛋白(BSA)偶联物对C1q的结合活性和溶血活性的影响。方法人工合成十二肽，将其与BSA偶联，分别用U937细胞配体结合抑制试验、多聚IgG(AJgG)竞争抑制试验、CH50抑制试验测试其生物学活性。结果游离的线性肽对C1q的结合活性和溶血活性几乎无影响，而偶联肽对C1q与U937细胞表面受体、AJgG的结合以及C1q介导的溶血均有抑制作用。结论本实验获得5个C1q受体模拟肽，它们能抑制C1q与免疫复合物结合，从而阻断补体经典途径的激活，其对于补体异常激活有关疾病的防治具有潜在应用价值。     

血卟啉衍生物-癌胚抗原单抗偶联物抗肿瘤特性的研究

目的 研究血卟啉衍生物－癌胚抗原单抗偶联物对表达癌胚抗原（CEA）的肿瘤细胞的特异性杀伤作用。方法 将血卟啉衍生物（HPD）与一种癌胚抗原单克隆抗体－C50单抗，通过碳二亚胺（EDCI）偶联，制备HPD－C50单抗偶联物。以表达CEA的SW1116细胞株和不表达CEA的Hep-2 细胞株用MTT法进行体外肿瘤细胞的杀伤实验。结果 被鉴定偶联物的免疫活性与标准单抗差异无显著性（P＞0．01）。偶联物较游离HPD对表达CEA的肿瘤细胞杀伤效果明显增强（P＜0．05）；显微镜下可见CEA阳性细胞死亡，对非表达CEA细胞，二者的作用无明显差异。对各摩尔比的偶联物进行测定，发现摩尔比为66：1时，杀伤效果最好，其HPD的半数杀伤浓度＜2．2μg/ml。结论 HPD－C50单抗免疫偶联物可特异性地杀伤CEA阳性细胞。     

全国第三届单克隆抗体暨肿瘤学术讨论会论文摘要索引

一免疫导向治疗I单杭与药物的交联物001肝癌单克隆抗体导向阿霉素的实验研究······························……何志龙等(16)002肝癌单克隆抗体一氨甲二喋岭结合物对肝癌导向治疗的实验研究……郭卫平等〔16)003单克隆抗体与抗癌抗生素C1027组建偶联物及强化偶联物对肝癌细 胞的活性··································································……邵荣光等(17)。04单抗Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联物对肝癌细胞的作用··…     

抗HSV单克隆抗体－阿糖胞苷特异性导向药物的制备及对实验性HSK的疗效观察

本文报道了抗ＨＳＶＭｃＡｂ与抗病毒药物阿糖胞苷偶联物的制备及鉴定。首先用高碘酸钠氧化葡聚糖为多醛基葡聚糖，使之作为中间载体将阿箱胞苷与ＭｃＡｈ偶联，经鉴定偶联物中ＭｃＡｂ含量为１０ｍｇ／ｍｌ，阿糖胞苷含量为１．０５ｍｇ／ｍｌ，阿糖胞苷与ＭｃＡｂ的充分子比为１：６０，偶联物的ＥＬＩＳＡ效价为１：２５６与偶联前效价相同。应用偶联物和阿糖胞苷分别结膜下注射治疗免眼ＨＳＫ模型共３６只眼，表明偶联物的疗效优于阿糖胞苷。     

米托蒽醌-胰岛素偶联物及其冻干粉针性能研究

设计以胰岛素为抗癌药物肿瘤导向载体，合成了米托蒽醌含量为11．68％的米托蒽醌－胰岛素偶联物。体外稳定性试验表明，偶联物在37℃不同pH值缓冲液中及小鼠血浆中稳定。将偶联物制成冻干粉针剂，考察了制剂的药剂学性质，并通过动物实验证实偶联物中的胰岛素仍保持生物活性。     

天花粉蛋白与抗CEA单抗偶联物实验性抗肿瘤研究

本文报道天花粉蛋白(TCS)为弹头药物经 SPDP 法与抗 CEA 单抗连接制备成免疫偶联物即免疫毒素,通过凝胶过滤和离子梯度层析纯化后,仍保留特并识别靶细胞抗原的免疫活性。体外毒性试验证实免疫毒素具有杀伤肿瘤细胞作用,它比 TCS 和正常小鼠 Ig 与 TCS 偶联物对 IOVO 细胞的毒性作用(I.C.50)分别增强150和2000倍左右。对不同肿瘤细胞 CEA 含量分析,发现这一作用与肿瘤细胞表面 CEA 含量成正比.体内实验结果同样表明,免疫毒素对潜伏期和生长期的人结肠癌裸鼠移植瘤有明显的抑瘤作用,其抑瘤率分别为76—80%和68—72%,并能延长荷瘤裸鼠生存时间,而对于宿生来出现明显的毒付作用.     

抗免疫排斥反应中抗体药物偶联物的突破性进展

背景：宿主与移植物间的免疫排斥反应是器官移植失败的主要原因之一,传统的免疫抑制剂已无法满足临床治疗的需求,抗体药物偶联物作为一类新型药物,可能为免疫排斥反应的治疗带来希望。目的：综合分析抗体药物偶联物的构成、作用机制、临床研究进展以及未来的发展趋势。方法：以“抗体药物偶联物、免疫抑制剂、免疫毒素、器官移植、移植物排斥”,“ADCs,immunosuppressive agents,immunotoxins,organ transplantation,graft rejection”为检索词,应用计算机检索CNKI 和 PubMed 数据库。同一领域文献选择近期发表或发表在权威杂志文章,排除与研究目的无关和内容重复者,保留43篇文献做进一步分析。结果与结论：抗体药物偶联物以其高效低毒的特性在靶向治疗肿瘤方面已取得突破性进展,而在抗免疫排斥反应中仍处于摸索阶段。以同种胰岛移植为研究对象,寻找一种更有效阻断CD8效应T细胞CD103/E-Cadherin通路的抗体药物偶联物,将可能成为同种器官移植抗排斥反应的新颖研究药物。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

脑膜炎奈瑟菌A群荚膜多糖与B群外膜蛋白复合物偶联物的制备和免疫原性

目的　脑膜炎奈瑟菌 (Nm)A群荚膜多糖与B群菌株 34 0 7或 5 42 85 2外膜蛋白复合物偶联 ,希望获得 1种对A和B群Nm感染皆有预防效果 ,并可提高A群荚膜多糖对婴幼儿免疫力的偶联物。方法　用饱和硫酸铵沉淀细菌培养上清液 ,沉淀物再经SephacrylS 30 0纯化获得外膜蛋白复合物。通过碳化二亚铵 (EDC)介导的缩合反应将B群外膜蛋白复合物与A群荚膜多糖偶联。偶联物、未偶联的荚膜多糖、B群外膜蛋白复合物及A群荚膜多糖和B群外膜蛋白复合物简单混合物按相同程序免疫小鼠获得抗体 ,经ELISA、杀菌力试验和Westernblotting测定了偶联物的免疫原性。结果　偶联物比未偶联的荚膜多糖或者荚膜多糖同B群外膜蛋白复合物简单混合抗原的免疫原性增强 2 1～32 0倍 ;其中以B群 34 0 7菌株的外膜蛋白复合物与A群荚膜多糖偶联的效果更好。偶联物免疫血清不仅对A群代表菌株 (2 90 19)和B群菌株 (34 0 7,5 42 85 2和 2 90 2 1)均有较强的杀菌活性 ,而且还对所试的具有不同菌型特征的其它 8株B群菌株仍有较强的交叉反应性。Westernblotting初步分析发现上述两种偶联物免疫的血清与各自的外膜蛋白复合物在相对分子质量约 42× 10 3 、39× 10 3 和 2 6× 10 3 处有相同的反应带 ,其中 42× 10 3 左右的条带为 1类外膜蛋白。结论     

右美托咪定减轻氧化应激改善H9C2细胞缺氧/复氧损伤

目的 探讨右美托咪定减轻氧化应激改善H9C2细胞缺氧/复氧损伤的作用。方法 H9C2心肌细胞随机分为三组,正常对照组（Control）、缺氧/复氧组（H/R）、Dex（5 μmol/L）干预H/R组。Dex干预H/R组先用Dex预处理6 h后,再经缺氧/复氧处理。检测各组细胞培养基中LDH的含量,CCK-8法检测各组H9C2心肌细胞的存活率,试剂盒检测caspase-3活性,试剂盒检测MDA的含量和SOD活性。结果 与Control组相比,H/R组细胞活力降低,培养基中LDH含量增加,caspase-3活性增加,MDA含量升高而SOD活性降低,统计学意义显著（P＜0.01）;Dex预处理提高H/R处理后的细胞活力,减少LDH含量和caspase-3活性,降低MDA含量,增加SOD活性,统计学意义显著（P＜0.01）。结论 Dex可通过减轻氧化应激改善H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

Cdk活化激酶(Cak)亚单位与转录因子有关

为进一步证明Cak是否确与TF Ⅱ H有关,作者对大鼠肝TF Ⅱ H纯化物进行了一系列研究。SQS-PAGE分析发现肝TF Ⅱ H纯化物中至少含有8种多肽,它们与TF Ⅱ H转录活性物同时被洗脱。Western blot分析发现:M015和cyclin H抗体识别的多肽与TF Ⅱ H的p89和p62亚单位共纯化。激酶分析发现:RNA多聚酶Ⅱ的磷酸化CTQ和Cak2活性与CTQ激酶、Cak2激酶和TF Ⅱ H转录活性物同     

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析

目的:制备环丙沙星单克隆抗体,并分析其免疫学特性,为建立环丙沙星残留的免疫学检测方法服务。方法:用人工抗原环丙沙星-小牛血清白蛋白偶联物免疫BALB/c小鼠,产生预期免疫应答后,将小鼠脾细胞与瘤细胞融合,经初筛、复筛和再克隆,筛选得到1C9、3F6、6H2、6A7、6G11和8F56株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果:1C9、3F6和6A7的抗体亚型为IgG2a;6H2和8F5的抗体亚型为IgG1;6G11的抗体亚型为IgG3。SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50kD,轻链分子量约为25kD。6株细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中,细胞株1C9细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6.4×102和1∶5.6×105,亲和力常数可达2.85×109L/mol,IC50值可达245.86ng/ml,最低检测限为45.25ng/ml,对氧氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林等药物几乎不存在交叉反应,与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为84.6%。结论:本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性,可用于环丙沙星残留免疫学检测。     

抗肝癌大鼠单克隆抗体3A5的特性及其平阳霉素偶联物的抗肿瘤活性

以人肝癌BEL－7402细胞免疫LOU／C大鼠，取其脾细胞与大鼠IR983F骨髓瘤细胞融合，获得稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体3A5杂交瘤细胞株。ELISA交叉反应检测3A5对人肝癌BEL－7402、7721和Q3细胞皆呈强阳性，对人胚肺2BS细胞、人口腔鳞癌KB细胞和小鼠正常肝细胞等呈阴性。免疫电镜研究显示，肝癌细胞对单抗3A5胶体金粒的内化为44％，而B细胞为185，平均每个肝癌细胞含有金颗粒族数为0．89，KB细胞为0．22，相差4倍，肝癌细胞对胶体金颗粒的内化能被预先加入的单抗3A5特异性地封闭，将单抗3A5与平阳霉不进行偶联，用克隆生成法观察偶联物和游离平阳霉素对肿瘤细胞的杀伤作用，当药物与细胞接触为1小时，单抗3A5与平阳霉素偶联物对肝癌细胞有选择性杀伤作用，按IC50比较，偶联物对靶细胞肝癌细胞的杀伤作用（IC50＝0．0075μgmol/L)比对非靶细胞KB细胞的作用（IC50＝0．70μmol/L）约强100倍，偶联物对靶细胞的作用比游离平阳霉素（IC50＝0．31μmol/L)约强50倍。     

竞争ELISA测定单抗衍生物的抗原结合活性

应用简易的测定单抗衍生物抗原结合活性的竞争ＥＬＩＳＡ方法。不同浓度的抗铁蛋白单克隆抗体Ａ－ｈＦ－ｃ及其衍生物与一定浓度的Ａ－ｈＦ－Ｃ－ＨＲＰ偶联物一起竞争固相铁蛋白抗原，以５０％偶联物被竞争抑制时的抗体浓度作为活性相互比较的依据，所得到的结果能够较真实地反映单抗衍生物活性保留的百分比。     

冷适应对大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白与嘌呤核苷三磷酸结合的影响

目的:探讨冷适应对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白(UCP)活性与含量的影响。方法:用[³H]标记的鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)与解偶联蛋白相结合,用液体闪烁仪测定其放射性活性,经Scatchardplot分析得出两者结合的解离常数(Kd)和最大结合量(Bmax)。结果:冷适应能使棕色脂肪增加;冷适应组Bmax显著高于对照组,Kd值显著低于对照组。结论:冷适应不仅能使棕色脂肪线粒体内膜UCP含量增加,而且能使其活性增加。     

胃癌单克隆抗体-羟基喜树碱免疫偶合物的制备及其细胞毒特征

采用共价交联法将胃癌单克隆抗体RSF_9与羟基喜树碱进行交联,交联物中每分子抗体可引入13±4.2分子的药物,而抗体活性保持85％以上。体外细胞毒试验显示交联物RSF_9-HCPT对胃癌细胞的杀伤是游离药物的4.7倍,而对非靶细胞的杀伤只有游离药物的1/11,表明交联物对胃癌靶细胞具较强的选择性杀伤作用。     

右美托咪定对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察右美托咪定对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法 H9C2心肌细胞随机分为三组:正常对照组（Control）、缺氧/复氧组（H/R）、Dex（5 μmol/L）干预H/R组。Dex干预H/R组先用Dex预处理6 h后,再经缺氧/复氧处理。采用倒置显微镜观察各组H9C2心肌细胞形态的变化,检测各组细胞培养基中LDH的含量,CCK-8法检测各组H9C2心肌细胞的存活率,试剂盒检测caspase-3活性,TUNEL法检测细胞凋亡并计算凋亡指数。结果 与Control组相比,H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力降低,培养基中LDH含量增加,caspase-3活性增加,细胞凋亡指数增加,统计学意义显著（P＜0.01）;Dex预处理可明显改善H/R处理后细胞形态,提高细胞活力,减少LDH含量和caspase-3活性,降低细胞凋亡指数,统计学意义显著（P＜0.01）。结论 Dex可通过减少H9C2心肌细胞缺氧/复氧引起的细胞凋亡减轻损伤。     

用于肿瘤导向治疗的新型“弹头”药物

抗肿瘤导向药物一般由靶向载体和“弹头”物质两部分构成。由于单克隆抗体(单抗)具有高度特异性,是最受重视并已进行广泛研究的靶向载体。各种杀伤肿瘤细胞的活性物质包括化疗药物、毒素、放射性核素等均被用作“弹头”物质,与单抗连接。近10年来,以单抗为载体的抗肿瘤导向药物研究已取得了重要进展。研究已证明:单抗偶联物对肿瘤靶细胞显示选择性杀伤作用,对