卵巢癌及癌旁组织端粒酶活性与凋亡相关性研究

目的研究端粒酶活性和抗凋亡基因Bcl-2及促凋亡基因Bax在卵巢癌发生、发展过程中的变化。方法应用SP免疫组织化学方法,对50例卵巢癌及癌旁正常组织进行hTERT、Bcl-2、Bax基因蛋白的检测。结果hTERT和Bcl-2阳性表达率在卵巢癌组织中高于癌旁组织。而Bax阳性表达率在卵巢癌组织低于癌旁组织,2组间均有明显差异。hTERT蛋白表达阳性率在临床Ⅰ、Ⅱ期和临床Ⅲ、Ⅳ期分别为16/23(69.56%)和26/27(96.30%),差异有显著性(P<0.05)。高分化组织与低分化组织中阳性率分别为18/23(78.26%)和25/27(92.59%),差异也有显著性(P<0.05)。对于Bcl-2蛋白表达阳性率在临床Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期中分别为8/23(34.78%)和16/27(59.26%),高分化组织和低分化组织阳性率分别为9/23(39.13%)和18/27(66.67%),差异均有显著性(P<0.05)。卵巢癌组织凋亡指数明显低于卵巢癌旁组织,差异有显著性(P<0.05)。结论凋亡调控功能失调与肿瘤的形成有关,hTERT、Bcl-2、Bax基因蛋白的异常表达与卵巢癌发生有关;hTERT、Bcl-2在卵巢癌的发生发展中可能有协同作用,hTERT、Bcl-2与Bax在卵巢癌的发生发展中可能有拮抗作用。hTERT、Bcl-2蛋白的表达可能是反映卵巢癌生物学行为的重要参数。     

沙棘提取物通过CD68对淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨沙棘提取物对淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用终浓度为0.185 mg/ml、0.37 mg/ml、0.74 mg/ml的沙棘提取物处理细胞Raji,作为沙棘提取物低、中、高浓度(HrL-L、HrL-M、HrL-H)组;未添加药物的细胞作为正常对照(Con)组。将si-NC、si-CD68转染至细胞Raji中,记为si-NC组、si-CD68组;pcDNA3.1、pcDNA3.1-CD68转染至细胞Raji后再用0.74 mg/mL的沙棘提取物处理,记为HrL-H+pcDNA3.1组、HrL-H+pcDNA3.1-CD68组。蛋白质印迹(Western Blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、CD68蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,沙棘提取物低、中、高浓度组Cyclin D1表达水平显著降低,P21表达水平显著升高,细胞活性显著降低,且呈浓度依赖性(P0.05);沙棘提取物高浓度组中Bax表达水平显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,CD68表达水平显著降低(P0.05)。抑制CD68表达,Cyclin D1、Bcl-2表达水平显著降低,P21、Bax表达水平显著升高,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高(P0.05)。过表达CD68逆转了沙棘提取物对细胞Raji增殖抑制和凋亡促进作用。结论沙棘提取物可抑制细胞Raji增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调CD68的表达有关。     

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P0.05),miR-363-3p表达显著下调(P0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。     

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡与细胞周期的影响

目的 探讨阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡与细胞周期的影响。方法 将处于生长对数期的人脐静脉内皮细胞分为正常组(给予不含任何药物的培养基),模型组(给予33.3 mmol/L葡萄糖),阿卡波糖组(给予33.3 mmol/L葡萄糖+1μg/L,3μg/L,10μg/L阿卡波糖)。MTT法及流式双染检测细胞活力及细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p21及细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达量。结果 与正常组比较,模型组中细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞在G1期,Bax及p21表达量上调,Bcl-2及Cyclin D1表达量下调;与模型组比较,阿卡波糖组中细胞活力提高,细胞凋亡率降低,G1期延长,Bax及p21表达量下调,Bcl-2及Cyclin D1表达量上调,且呈剂量依赖性。结论 阿卡波糖能抑制高糖诱导的HUVEC凋亡,并缩短G1期,与调节细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

miRNA-9过表达对Aβ损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨micro RNA-9(mi R-9)过表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤的PC12细胞及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:PC12细胞分为mi R-9过表达组(E组)、空转染对照组(NC组)、不转染的损伤细胞模型组(NT组),采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Annexin-V-PE检测细胞凋亡;采用RT-q PCR检测Bcl-2、Bax m RNA的表达,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与NC组及NT组比较,E组的PC12细胞转染48 h后增殖增加,凋亡率降低,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P0.05)。结论:mi R-9过表达可保护Aβ损伤的PC12细胞。     

大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究

【目的】探讨大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究。【方法】肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、模型组、20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组,对照组细胞常规培养,其余组细胞均经过肺炎链球菌感染,20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组细胞在感染后24 h分别加入不同浓度的大黄素(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理。噻唑蓝(MTT)检测各组A549细胞的增殖;流式细胞术检测凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白质印迹法检测A549细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平。【结果】与对照组相比,肺炎链球菌感染的A549细胞增殖活性、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率及IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平增加(P<0.05);不同浓度大黄素促进肺炎链球菌感染的A549细胞增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05),降低IL-6、TNF-α水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05),下调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05),提高β-catenin、Cyclin D1蛋白水平(P<0.05)。【结论】大黄素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖,抑制其凋亡。     

薯蓣皂苷元对三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖及凋亡的影响

目的探讨薯蓣皂苷元对人三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖及凋亡的影响。方法对数生长期人三阴乳腺癌HCC1937细胞株分为空白组(培养液)、实验1组(培养液+10mg/L薯蓣皂苷元)、实验2组(培养液+25mg/L薯蓣皂苷元)。采用MTT法观察薯蓣皂苷元培养24、48、72h时HCC1937细胞生长抑制率;流式细胞仪检测薯蓣皂苷元培养48h时HCC1937细胞周期及细胞凋亡;Western blot法检测薯蓣皂苷元培养48h时Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、P53、caspase3蛋白表达;Transwell实验观察薯蓣皂苷元培养24h时HCC1937细胞侵袭能力。结果薯蓣皂苷元培养24、48、72h,HCC1937细胞生长抑制率在实验1组分别为(6.86±2.56)%、(15.57±1.86)%、(14.84±4.64)%,在实验2组分别为(11.78±2.16)%、(24.48±3.70)%、(31.38±3.76)%,均高于空白组[(3.34±2.56)%、(8.47±1.86)%、(7.73±4.64)%](P0.05),且实验2组高于实验1组(P0.05);薯蓣皂苷元培养48h,实验1组G_1期细胞比例、细胞凋亡率分别为(36.21±3.12)%、(21.99±2.36)%,实验2组分别为(50.26±2.36)%、(26.17±3.46)%,均高于空白组[(28.35±2.54)%、(17.25±1.23)%](P0.05),实验2组高于实验1组(P0.05);薯蓣皂苷元培养24h,实验1组、实验2组HCC1937侵袭细胞数目[(64.00±11.01)%、(30.33±6.11)%]低于空白组[(146.00±9.16)%](P0.05),实验2组低于实验1组(P0.05);薯蓣皂苷元培养48h时,实验1组、实验2组HCC1937细胞Bcl-2表达量低于空白组,Bax、caspase3表达量高于空白组(P0.05),实验1组Bcl-2表达量低于实验2组,Bax、caspase3表达量高于实验2组(P0.05),3组P53蛋白表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论薯蓣皂苷元可抑制人三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖与侵袭,可能机制为使肿瘤细胞G_1期阻滞,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax、caspase3表达。     

生长激素释放肽对高糖诱导下胰岛β细胞凋亡的影响

目的 探讨生长激素释放肽(Ghrelin)对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响.方法 根据不同的培养基将胰岛β细胞株NIT-1细胞划分为四组:A组(5.6 mmol/L葡萄糖全程),B组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,5.6 mmol/L葡萄糖72 h),C组(5.6 mmol/L葡萄糖24 h,33.3 mmol/L葡萄糖72 h),D组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,33.3 mmol/L葡萄糖培养72 h).流式细胞仪Annexin V/PI双染色法测定四组NIT-1细胞早期凋亡率;Hoechst 33258标记细胞核并在荧光显微镜下测各组细胞总凋亡率;RT-PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA水平.结果 (1)与A组比较,B组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均无统计学意义(P均>0.05),而C组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均显著增加(P均<0.01);与C组比较,D组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均降低(分别P<0.01,P<0.05).D组较A组细胞早期凋亡率有增加(P<0.05),而总凋亡率无统计学意义(P>0.05).(2)与A组比较,B组NIT-1细胞Bax、Bcl-2、Bcl-2/Bax表达水平无变化,而C组Bcl-2、Bcl-2/Bax水平显著下降(P<0.05);与C组比较,D组Bcl-2、Bcl-2/Bax表达有升高趋势,但无统计学意义;各组Bax表达水平无差别.结论 Ghrelin对葡萄糖生理浓度下的胰岛β细胞凋亡无影响,但可抑制高浓度葡萄糖诱导的β细胞凋亡.Ghrelin可能不通过Bcl-2、Bax抑制高糖诱导的β细胞凋亡.     

DOCK1通过AMPK/mTOR通路对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的调控机制研究

目的　探讨胞质分裂作用因子 1（dedicator of cytokinesis 1,DOCK1）在多发性骨髓瘤（ multiple myeloma, MM）中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及相关机制。方法　选取 MM患者骨髓组织及人 MM细胞株 U266和 RPMI 8266进行研究,采用实时荧光定量 PCR（real time-quantitative PCR,RT-qPCR）法检测 MM骨髓组织及细胞中 DOCK1相对表达;构建敲低 DOCK1表达细胞系,采用 CCK-8法和流式细胞术检测 DOCK1对 MM细胞增殖与凋亡的影响; Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白（ c-Myc,cyclin D1）、凋亡相关蛋白（ Bax,Bcl-2）、自噬相关蛋白（ LC3-II/LC3-I,P62）及 AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果　LV-DOCK1-shRNA2组的 U266和 RPMI 8266细胞增殖率在 24,48和 72h均显著低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义（ FU266=21.130～ 100.108, FRPMI8266=35.067～ 95.677,均 P<0.001）。LV-DOCK1-shRNA2组的 U266和 RPMI 8266细胞增殖相关蛋白 c-Myc, cyclin D1表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组（ FU266=56.061,71.584;FRPMI8266=93.248, 62.146, 均 P<0.001）。 LV-DOCK1-shRNA2组的 U266,RPMI 8266细胞 24h,48h凋亡率显著高于阴性对照组和空白对照组（ FU266=77.051, 61.533;FRPMI8266=60.868, 68.306, 均 P<0.001）。与空白对照组和阴性对照组比较, LV-DOCK1-shRNA2组 U266和 RPMI 8266细胞凋亡相关蛋白 Bax表达水平明显升高, Bcl-2表达水平明显降低（ FU266=92.588,21.940;FRPMI8266=82.736, 14.511, 均 P<0.05）;自噬相关蛋白 LC3-II/LC3-I表达水平明显升高, P62表达水平明显降低（ FU266=147.1,26.342; FRPMI8266=173.300, 31.477, 均 P<0.05）。LV-DOCK1-shRNA2组 U266,RPMI 8266细胞 AMPK/mTOR通路相关蛋白 p-AMPK表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组（ FU266=40.542,FRPMI8266=40.892,均 P<0.05）;p-mTOR表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组（ FU266=38.707,FRPMI8266=43.002,均 P<0.05）。在 LV-DOCK1-shRNA2组再次转染 DOCK1过表达质粒使其表达恢复后, p-AMPK和 p-mTOR表达水平也被逆转得到恢复。结论　DOCK1在多发性骨髓瘤细胞中具有促癌作用,其机制可能与通过抑制 AMPK/mTOR通路,抑制多发性骨髓瘤细胞的凋亡和自噬有关。     

RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响

目的探讨RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响。方法将RRM2基因的特异性小干扰(siRNA)转染SKOV3/DDP设为干扰组,SKOV3/DDP细胞、SKOV3/DDP-RRM2非特异性阴性细胞设为空白组、阴性组。检测细胞增殖抑制率,计算RI、耐药转染率,荧光PCR技术检测RRM2基因mRNA表达,并分析siRNA转染对SKOV3/DDP耐药指数、RRM2蛋白的影响,采用Transwell观察SKOV3/DDP细胞侵袭能力。结果空白组、阴性组及干扰组转染率均90%。DDP对SKOV3/DDP细胞属低度耐药,吉西他滨对SKOV3/DDP细胞仍较为敏感。DDP、吉西他滨对干扰组、阴性组、空白组的DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)值比较,差异有统计学意义(P0.05),DDP、吉西他滨对干扰组细胞的IC50值显著低于阴性组、空白组(P0.05)。SKOV3/DDP细胞、SKOV3细胞RRM2蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P0.05),且转染Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相对表达量均显著低于阴性组、空白组,其中以转染Ⅰ组细胞的RRM2蛋白相对表达量下降最显著(P0.05)。干扰组细胞凋亡率显著高于空白组、阴性组,穿膜细胞数显著低于空白组、阴性组(P0.05)。结论 siRNA可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的增殖与侵袭性,增加耐药细胞的药物敏感性,尤其是促进DDP诱导的耐药细胞凋亡。     

4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达

背景:研究显示,纯钛材料对人牙龈成纤维细胞的影响不明显,而镍铬合金、含钛镍铬合金明显影响了细胞的炎性表达。目的:比较4种烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。方法:用组织块法分离培养人牙龈成纤维细胞,实验组分别用4种烤瓷冠基底合金浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养液中,空白对照组用含体积分数10%小牛血清的DMEM培养液,Western-blot法检测人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的改变。结果与结论:金合金组对Bcl-2和Bax表达的影响接近空白对照组,纯钛组和钴铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响较小,镍铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响最大,与其他各组相比差异有显著性意义(P<0.05)。提示镍铬合金可通过影响Bcl-2与Bax的表达水平,抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

Bcl-2和Bax的表达与乳腺癌转移及预后的关系

目的　探讨Bcl 2和Bax基因在乳腺癌中的表达及与乳腺癌淋巴结转移、预后的关系。方法　应用SP免疫组化染色方法 ,检测 4 0例乳腺癌组织中Bcl 2、Bax的表达情况。结果　无淋巴结转移组Bcl 2阳性表达率与淋巴结转移组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,10年以上存活组Bcl 2阳性表达率与 10年以下存活组有显著差异 (P <0 .0 1)。无淋巴结转移组Bax阳性表达率与淋巴结转移组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,10年以上存活组Bax阳性表达率与 10年以下存活组有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　Bcl 2和Bax表达与乳腺癌淋巴结转移、预后关系密切 ,Bcl 2提示高表达、Bax低表达的乳腺癌患者有低的转移率及好的预后。     

基于 GEO数据筛选卵巢癌细胞对紫杉醇耐药基因及相关分子机制与治疗药物实验探讨

目的　基于 GEO数据筛选卵巢癌患者对紫杉醇耐药的基因分子机制和治疗药物并进行实验验证。方法　利用 GEO数据库下载卵巢癌紫杉醇耐药基因芯片 GSE28784和 GSE15372,通过 R和 Bioconductor筛选共同差异表达基因并进行 GO和 KEGG分析。分析卵巢癌紫杉醇耐药的基因分子机制,采用 ConnectivityMap筛选紫杉醇耐药卵巢癌患者的治疗药物并进行验证。结果　GSE15372和 GSE28784数据集筛选共同差异表达基因,其中上调 143个,下调 83个。 GO分析显示,共同差异表达基因参与 DNA复制和代谢过程、胆固醇代谢、染色体细胞组分、辅酶结合及腺嘌呤核苷酸结合等分子功能。 KEGG结果显示,共同差异表达基因参与细胞周期、蛋白酶体及萜类化合物骨架生物合成等肿瘤信号通路。与紫杉醇耐药卵巢癌相关的关键基因有 CDK2,MCM4,hMSH2,JUN及 AREG。根据 ConnectivityMap模块分析结果,确定潜在候选药物为血根碱。 1.0,3.0及 5.0 μmol/L血根碱组、紫杉醇组及空白对照组的卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目比较,差异具有统计学意义 (F=189.265,95.127,均 P<0.001)。不同浓度血根碱组的卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目显著低于紫杉醇组和空白对照组,差异均有统计学意义 (t=2.341~8.720,均 P<0.05)。紫杉醇组与空白对照组的卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目比较差异均无统计学意义 (t=0.543,0.389,均 P>0.05)。不同浓度血根碱组组间卵巢癌细胞增殖率和侵袭数目比较,差异具有统计学意义 (t=2.380~5.677,均 P<0.05)。结论　卵巢癌紫杉醇耐药与 CDK2, MCM4,hMSH2,JUN及 AREG关键基因有关,血根碱能有效抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭,有望成为紫杉醇耐药卵巢癌患者的治疗新药。     

CXCL12/CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶抵抗的机制

目的探究趋化因子CXCL12/趋化因子受体CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶(5-FU)抵抗的机制。方法选择人肝细胞癌细胞系Huh7,分为7组:对照组(正常培养的肝细胞癌系),CXCR4转染组(CXCR4模拟转染超表达),CXCR4沉默组(CXCR4低表达或者不表达),miR-125b转染组(miR-125b超表达),CXCL12+125b抑制剂组(CXCL12超表达的+抑制miR-125b的表达),5-FU处理组(10μg/L的5-FU处理细胞),5-FU+miR-125b转染组(10μg/L的5-FU处理+miR-125b超表达的细胞)。聚合酶链式反应分析miR-125b mRNA表达;蛋白质印迹法检测E-钙粘蛋白、波形蛋白、CXCR4蛋白、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表达;Transwell分析各组细胞中的细胞迁移、侵袭测定;MTT检测细胞存活力;细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞增殖。结果与对照组相比,CXCR4转染组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著升高,E黏着蛋白表达显著降低(P<0.05);与CXCR4转染组相比,CXCR4沉默组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著降低,E黏着蛋白表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,miR-125b转染组细胞迁移、侵袭数量、细胞活力均显著增加,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与miR-125b转染组相比,CXCL12+125b抑制剂组,细胞迁移、侵袭数量、细胞活均显著减少,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU处理组细胞增殖率、Bcl-2表达显著降低,caspase-3、Bax的蛋白表达显著升高(P<0.05),与5-FU处理组相比,5-FU+miR-125b转染组细胞增殖率、Bcl-2表达显著升高,caspase-3、Bax的蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论MiR-125b通过激活CXCL12/CXCR4轴而被上调,miR-125b增强CXCR4的表达,这在触发肿瘤侵袭和进展中形成了正反馈回路。这些结果为miR-125b在肝癌进程和化学抗性的发展中的作用提供了新的线索,为肝癌的治疗提供了潜在的治疗靶点。     

MiRNA-326抑制人椎间盘退变髓核细胞活力和凋亡的机制

目的:探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:构建miRNA-326慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miRNA-326-NP,同时设置空载体GV369-NP组与空白组。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]的表达,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测miRNA-326的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miRNA-326与FasL的靶向关系,蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD,caspase-3,Bcl-2及Bax的表达,使用试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果:荧光显微镜下示,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白组未见绿色荧光。与空白组相比,GV369-miRNA-326-NP组中miRNA-326的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率,FADD,caspase-3和Bax的表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);GV369-NP组与空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miRNA-326与FasL存在靶向关系。结论:MiRNA-326可抑制IDD NP细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。     

冠心病猝死者心肌细胞凋亡与Bcl-2和Bax 基因蛋白表达及其临床意义

目的：探讨Bcl-2和Bax基因蛋白在冠心病心脏性猝死者心肌细胞凋亡中的作用，为冠心病生物治疗提供理论依据。方法；用凋亡原位末端标记检测（TUNEL）法检测16例冠心病心性猝死者和10例心脏正常其他原因死亡者心肌细胞凋亡，用免疫组化法检测Bcl-2和Bax基因蛋白在心肌细胞中表达水平，并探讨其相互关系。结果：（1）冠心病心性猝死者梗死区心肌细胞凋亡数与Bax蛋白表达阳性细胞数均明显高于正常对照组（P〈0．05）；且于梗死区心肌细胞凋亡数及冠状动脉病变支数成明显正相关性。Bcl-2基因蛋白表达则与之相反，梗死区心肌细胞Bcl-2基因蛋白表达明显低于对照组（P〈0．05），且与梗死心区肌细胞凋亡数、冠状动脉病变支数成明显的负相关性。结论：冠心病心性猝死者梗死心肌细胞存在明显的凋亡现象，且受Bax蛋白与Bcl-2基因蛋白下调影响，Bax蛋白与Bcl-2蛋白共同调节心肌细胞凋亡，诱导心肌细胞表达Bcl-2将可能成为探索心肌生物治疗措施的新途径。     

Bcl-2和Bax在胆管癌中的表达及意义

【目的】检测胆管癌中Bcl 2和Bax的表达,以探讨胆管癌的发生、发展规律。【方法】免疫组化ABC 法检测49例肝外胆管癌和10例正常胆管Bcl 2和Bax的表达。【结果】Bcl 2在胆管癌中阳性表达(48.98%)显 著高于正常胆管(10.00%)(P<0.05);高、中分化胆管癌Bcl 2阳性表达显著高于低分化癌(P<0.05);胆管癌 Bax阳性表达(53.06%)与正常胆管(80.00%)相比无统计学意义(P>0.05),正常胆管Bax阳性表达显著高于 Bcl 2阳性表达(P<0.01),而胆管癌中Bcl 2与Bax阳性表达无显著性差异(P>0.05)。【结论】Bcl 2过度表 达对胆管癌的发生可能起促进作用;胆管癌中Bcl 2低表达可能是预后不良的预测指标之一。     

miR-802对叉头框转录因子M1抑制A549/DDP细胞顺铂耐药性的靶向调控作用

目的探讨miR-802抑制非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性及其对叉头框转录因子M1(forkhead box protein M1, FoxM1)的靶向调控作用。方法 A549、A549/DDP细胞采用反转录PCR法检测miR-802相对表达量。将A549/DDP细胞分为空白转染组和miR-802过表达组(过表达组),分别转染miR-NC和miR-802类似物(miR-802 mimics),转染24、48、72、96 h后,采用反转录PCR法检测2组细胞miR-802相对表达量,并采用CCK-8法检测2组细胞增殖率;转染48 h后,CCK-8法检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性,采用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率和细胞周期,采用Western blot法检测转染后A549/DDP细胞内FoxM1蛋白相对表达量。结果 A549/DDP细胞miR-802相对表达量(0.21±0.03)低于A549细胞(0.85±0.12)(P<0.05);转染24、48、72、96 h,过表达组细胞miR-802相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于空白转染组(P<0.05);转染48、72、96 h,空白转染组细胞增殖率依次增高(P<0.05),且均高于过表达组(P<0.05);转染48 h,过表达组细胞半数抑制浓度[(35.28±2.17)mg/L]和细胞早期凋亡率[(17.2±1.1)%]均高于空白转染组[(14.22±1.28)mg/L、(9.0±0.8)%](P<0.05),S期和G2/M期细胞比率[(21.30±0.20)%、(8.35±0.33)%]及细胞内FoxM1蛋白相对表达量(0.21±0.04)均低于空白转染组[(27.54±0.52)%、(14.67±0.70)%、0.44±0.06](P<0.05)。结论 miR-802可能通过抑制FoxM1表达而降低非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性。