国产乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫吸附试验试剂盒的检测效果评价

目的:评价6种国产乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的检测效果。方法:应用AXSYM全自动微粒子酶免疫化学发光分析仪检测测定后余留标本,对相关样品进行稀释,然后选取6种国产HBsAgELISA试剂盒进行检测,评价6种国产试剂盒的灵敏度、精密度、特异度、检测范围和钩状效应(Hook效应),确立临界值(cut-off)对应的浓度范围以及不同孵育时间对检测灵敏度的影响等。结果:6种试剂盒的灵敏度有一定差异,范围在0.40～0.60ng/mL之间。对低浓度标本,6种试剂盒的批内精密度变异系数(CV)分别为6.21%、9.45%、9.42%、13.04%、10.49%和4.84%;批间精密度CV分别为15.76%、19.12%、19.54%、23.89%、24.22%和14.99%。HBsAg质量浓度与临界值指数(COI)呈S型曲线关系。在本实验所分析的HBsAg浓度范围内未发现高剂量Hook效应。6种试剂盒临界值对应的质量浓度在0.3～0.5ng/mL之间。结论:国产HBsAgELISA试剂盒的灵敏度有待进一步提高。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价

目的　评价 6种国产抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体 (抗 HBs)酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒。方法　将RocheElecsys 2 0 10电化学发光免疫分析系统上检测余留的抗 HBs标本 ,用 6种国产抗 HBsELISA试剂盒进行检测 ,评价 6种试剂盒的敏感度、检测范围、精密度和特异性。结果　 6种国产试剂盒的敏感度相差较大 ,10～ 4 0IU/L不等。 5 0IU/L以下时 ,浓度与吸光度呈直线关系 ,但吸光度数值较低 ;未发现高浓度时的钩状效应。 5 0IU/L的标本 ,A、B 2种试剂的批内变异系数 (CV)分别为 10 .1%和 13.7% ;日间CV分别为 14 .1%和2 4 .8% ;阴性标本在 6种试剂盒中出现了不同程度的假阳性。结论　国产抗 HBsELISA试剂的部分性能应改进和提高。     

一种检测细菌性阴道病方法的建立及临床评价

目的评估一种国内自主建立利用唾液酸酶检测细菌性阴道病(BV)方法的临床应用价值。方法比色法探索研发试剂与酶标准品的最佳反应条件,包括底物溶液的pH值和反应的最适温度及时间。采用研发试剂、BV BLUE、临床现用国产试剂盒对临床标本进行检测,判断研发试剂的临床应用价值。结果研发试剂在pH值6.0~6.2、37℃10 min时与酶标准品达到最佳反应,与BV BLUE相比,检出限相同时研发试剂底物用量仅为BV BLUE的1/2.78。临床实验中,研发试剂与BV BLUE对BV的检测效果差异无统计学意义(P=1.000,Kappa=0.905),符合率为96%。而国产试剂盒与BV BLUE对BV的检测效果差异有统计学意义(P=0.000,Kappa=0.362),符合率为65%。结论研发试剂可以达到与BV BLUE相同的检出效果,其快速、方便、可信度高且成本较低,优于国内类似产品,更有利于在临床推广和使用。     

人癌胚抗原电化学发光免疫分析测定试剂盒的对比研究及应用

目的探讨自建人癌胚抗原(CEA)电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测结果与同类进口试剂检测结果的可比性。方法选取77例不同浓度的患者新鲜血清分别使用2种ECLIA试剂盒进行CEA检测,并采用SPSS19.0软件对结果进行分析。结果各剂量之间的差异有统计学意义(P0.05),而2种试剂测定结果之间差异无统计学意义(P0.05);该方法的灵敏度为0.3ng/mL,批内变异系数4.58%~5.83%,批间变异系数5.07%~5.97%,回收率为99.13%~107.28%,特异性鉴定显示与CA199、AFP无任何交叉反应。2种试剂测定结果间相关系数均大于0.95,以进口试剂检测作为参照,自建ECLIA检测CEA临床性能评价均可接受。结论 2种ECLIA检测CEA的精密度符合临床要求,临床性能评价均可接受,具有可比性。     

血清肌红蛋白光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定技术(LIC I)建立定量检测肌红蛋白(Mb)的方法。方法使用针对Mb不同表位的2株单克隆抗体,一株包被发光微粒,另一株进行生物素化,与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果该方法的灵敏度为1.36 ng/m l,在33.8~1 521.0ng/m l的范围内线性良好。批内和日间变异系数分别为3.05%~4.41%和5.80%~6.56%。在血红蛋白浓度<2.6 g/L,总胆红素浓度<342μmol/L、三酰甘油浓度<11.3 mmol/L时的干扰率无临床意义。与Roche E lecsys电化学发光法有较好的相关性(r=0.997 1)。结论血清Mb LIC I的建立有助于进一步对检测试剂盒的研制。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价

目的 评价6种国产抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体(抗-HBs)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒。方法 将Roche Elecsys 2010电化学发光免疫分析系统上检测余留的抗-HBs标本，用6种国产抗-HBs ELISA试剂盒进行检测，评价6种试剂盒的敏感度、检测范围、精密度和特异性。结果 6种国产试剂盒的敏感度相差较大，10～40IU／L不等。50IU／L以下时，浓度与吸光度呈直线关系，但吸光度数值较低；未发现高浓度时的钩状效应。50IU／L的标本，A、B2种试剂的批内变异系数(CV)分别为10．1％和13．7％；日间CV分别为14．1％和24．8％；阴性标本在6种试剂盒中出现了不同程度的假阳性。结论 国产抗-HBs ELISA试剂的部分性能应改进和提高。     

ARCHITECT i2000免疫分析仪糖类抗原CA-15-3分析性能验证

目的使用ARCHITECT i2000型免疫分析仪对糖类抗原CA-15-3(CA153)进行性能验证。方法根据NCCLS-EP5文件要求进行重复性试验、根据NCCLS-EP9文件要求进行灵敏度验证、根据NCCLS-EP7文件要求进行回收试验、根据NCCLS-EP6文件要求进行干扰试验,并对其可报告范围进行评估。结果CA153的批内、批间变异系数均小于5%,回收率在97%~103%之间,检测低限达到0.5 U/mL,脂浊、溶血、黄疸对测定结果的影响度均小于3.0%,其可报告范围为0~800 U/mL。结论ARCHITECT i2000型化学发光微粒子免疫分析仪对CA153的分析性能及重复性、灵敏度、准确度以及可报告范围与其说明书提供之性能相符合。     

国产谷胱甘肽还原酶试剂盒分析性能验证与评价

目的验证某国产谷胱甘肽还原酶试剂盒的分析性能。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)相关系列文件,在HITACHI 7600-120全自动生化分析仪上对该国产谷胱甘肽还原酶试剂盒的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间和抗干扰能力进行验证以及评价。结果批内精密度(CV)为0.34%~1.65%、0.41%~1.38%,批总CV为2.32%、0.76%;相对偏差为-2.38%;线性范围在4.9~277.4 U/L内良好(R2=0.9983>0.95);最大稀释倍数为4,临床可报告范围为4~1200U/L;生物参考区间验证符合厂家要求;游离胆红素≤20mg/dL、结合胆红素≤20mg/dL、甘油三酯≤20mmol/L、血红蛋白≤50mg/dL,对试剂检测无明显干扰。结论该国产谷胱甘肽还原酶试剂盒在HITACHI 7600-120全自动生化分析仪上的分析性能符合厂家申明以及CLSI相关文件的要求,可应用于临床分析。     

基于荧光免疫技术检测降钙素原的方法建立和性能评估

目的研发一种应用荧光免疫层析法检测降钙素原的试剂盒,并对其进行性能评估。方法以羧基荧光微球标记鼠抗人PCT单克隆抗体及羊抗兔IgG抗体,PCT多克隆抗体和兔IgG分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。用VIDAS公司的降钙素原检测试剂盒与本研究的降钙素原检测试剂盒同时对125例临床样本进行检测,并通过线性实验、精密度实验、准确度等实验对降钙素原检测试剂盒进行性能评价。结果两种检测试剂的相关系数为0.9951,两者差异无统计学意义(P0.05);准确度实验中平均回收率是104%;精密度实验中批内和日间的变异系数均小于7%;PCT浓度在0.05～53.21ng/ml内呈良好线性。结论本研究的降钙素原检测试剂盒具有较好的精密度且结果准确可靠。     

游离甲状腺素时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

目的研制一种人游离甲状腺素(FT4)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)试剂盒。方法采用直接竞争法建立FT4检测方法(固相包被T4-复合物,与样本中的FT4竞争结合Eu标记的T4单克隆抗体),并对该试剂盒各项性能指标进行评价。结果该试剂盒的分析灵敏度为不高于2.0pmol/L,工作范围为2.0～120.0pmol/L。分析内变异系数为4.4%～5.7%、分析间变异系数为6.5%～8.2%,其总变异系数小于9.0%。与T3、FT3、rT3和rT4的交叉反应率分别为:1.12%、0.34%、0.56%和1.51%。稳定性试验表明该试剂盒可以在2～8℃稳定1年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份健康人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是11.5～22.7pmol/L。200份血清标本用本试剂盒与国外的化学发光试剂盒同时检测FT4,其相关系数为0.993。结论该试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外化学发光法的同类产品试剂盒。     

白细胞介素-6量子点荧光免疫层析法的建立及性能验证

目的 研发出快速检测白细胞介素(IL)-6的量子点荧光免疫层析法试剂盒.方法 通过量子点荧光材料标记IL-6抗体,研发出一种能快速定量检测IL-6浓度的量子点免疫荧光层析法试剂盒,验证其灵敏度、回收试验、精密度、特异度、稳定性及其与贝克曼化学发光IL-6检测试剂盒的相关性.结果 试剂盒线性范围为10～4000 pg/mL,试剂盒决定系数R2≥0.950;最低检出限为2 pg/mL;在低、中、高浓度范围内的回收率均值分别为95.68％、101.23％、104.45％;批内精密度的变异系数(CV)为2.21％～3.93％,批间精密度的CV为2.42％～5.36％;特异度试验中交叉反应率均小于0.1％.结论 该研究自制的试剂盒灵敏度、准确性、精密度、特异度及稳定性都较好,能够准确、快速地完成临床样品IL-6浓度的定量检测.     

应用CLSI EP12-A2文件评价HBsAg酶联免疫吸附试验试剂盒的分析性能

目的：应用CLSI EP12-A2文件评价乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒的性能,并比较2个不同厂家试剂盒之间的性能差异。方法按照CLSI发布的EP12-A2文件,对实验室使用的2个不同厂家的 HBsAg ELISA试剂盒的性能进行评价。结果2个厂家的试剂盒对分析物浓度为120％临界值的标本的检测阳性率均大于或等于95％,对分析物浓度为80％临界值浓度的标本的检测阴性率大于或等于95％,批内变异系数小于或等于15％,批间变异系数小于或等于20％。2个厂家试剂盒的灵敏度分别为94．2％（95％CI：84．3％∽98．0％）和92．3％（95％CI：81．8％∽97．0％）;特异性分别为98．0％（95％CI：89．5％∽99．6％）和100．0％（95％CI：92．8％∽100．0％）。2个厂家试剂盒灵敏度差值95％区间为-5．46％∽10．19％,特异性差值95％区间为-2．00％∽5．32％。结论2个厂家试剂盒检测 HBsAg 临界值＆#177;20％的浓度范围之外标本,能够得到稳定、可靠的检测结果,并具有较高的灵敏度和特异性,两者的检测灵敏度和特异性相近。     

一种血浆肿瘤型M2-丙酮酸激酶检测方法——酶联免疫吸附试验的临床评价

目的评价一种血浆肿瘤型M2-丙酮酸激酶（TUM2-PK）检测方法——酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定性能和临床适用性。方法对新的自主开发的TU M2-PK检测方法进行偏倚测定、不精密度测定、回收试验以及对371例临床标本进行测定。结果TU M2-PK检测方法有良好的准确度（偏倚〈5 U/mL）和精密度[变异系数（CV）〈10%]。371份临床标本的TUM2-PK水平测定结果与＂金标准＂病理结果对照,TUM2-PK的敏感性和特异性分别为69.7%（106/152）和86.8%（190/219）,准确度达到80.0%（296/371）。此外,该试剂盒所测得的恶性肿瘤患者的TU M2-PK水平明显高于良性肿瘤患者及正常对照者,差异具有统计学意义（P均〈0.01）。结论TU M2-PK ELISA测定性能良好,具有较好的临床应用价值。     

检测血浆D-二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性

目的比较2种金标斑点渗滤法(DIGFA)试剂盒在测定D-二聚体浓度中的临床适用性。方法同时采用NycoCard公司与国产奥普D-二聚体检测试剂盒(D-D DOT)对234份血浆样本进行测试,比较2种方法的一致性。结果D-D DOT线性范围内相关系数(r)=0.998;总批内、批间变异系数(CV)分别为10.77%和12.81%;总回收率为101.3%。配对χ2检验、Kappa检验(0.95)及Spearman系数(0.87)均显示D-D DOT与NycoCard检测结果有良好的一致性。结论新的DIGFA D-二聚体检测试剂盒与进口NycoCard试剂盒有良好的一致性,能够满足临床需要。     

3种缺血修饰清蛋白试剂盒分析性能的验证试验

目的验证3种缺血修饰清蛋白(IMA)检测试剂盒的主要分析性能。方法在Olympus AU5800全自动生化分析仪上对上海艾康生物技术有限公司、浙江夸克生物科技有限公司和北京九强生物技术有限公司的比色法IMA试剂(试剂A、B、C)进行性能验证,参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6-A、EP15-A、EP7-A文件和《WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》要求对3种试剂的精密度、线性范围、正确度、抗干扰能力进行评估。结果试剂A、B、C的批内变异系数(CV)分别为0.59%~0.82%,0.27%~0.54%,0.62%~0.69%,批间CV分别为0.98%~1.74%,0.99%~1.01%,0.71%~0.78%,均小于试剂盒声明的不精密度;线性范围分别为11~142U/mL(相关系数r~2=0.993)、10~120U/mL(r~2=0.996)、14~123U/mL(r~2=0.992),试剂A、B、C的线性范围均良好。当干扰物维生素C小于或等于10mg/dL,血红蛋白小于或等于200mg/dL,总胆红素小于或等于40 mg/dL,三酰甘油小于或等于500 mg/dL时,3种IMA试剂检测结果偏差均不超过±10%,对3种试剂无明显干扰。结论 3种IMA检测试剂盒均具有较高的精密度,可满足临床要求,但抗干扰能力存在一定的差异。     

基于CLSI EP12-A2文件要求的乙型肝炎五项定性检测性能验证

目的对昆明医科大学第一附属医院检验科免疫室酶联免疫吸附试验(ELISA)定性项目乙型肝炎(乙肝)五项进行性能验证。方法采用ELISA,通过稀释乙肝五项各项目强阳性标本得到临界值浓度(C50)并验证其是否正确;采用各个项目C50-20%~+20%浓度范围的重复性实验验证其结果是否包含C5~C95区间;用C50+20%浓度验证检测限;常规手工操作试验和TECAN全自动酶免检测两种方法检测10例阳性和10例阴性标本,对其结果进行方法学比较及分析。结果 5个项目C50验证正确;C50-20%~+20%浓度范围包含了C5~C95区间;检测限验证通过;5个项目两种方法检测结果一致性检验Kappa系数均为1。结论本实验室乙肝五项定性检测使用方法及试剂盒相关性能均验证合格,常规手工操作试验方法和TECAN全自动酶免检测方法两种方法学比较结果一致性较好。     

时间分辨荧光免疫法和电化学发光法检测AFP的比较

目的 对时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA法)国产试剂盒与电化学发光免疫分析法(ECLIA法)检测血清AFP作比较分析,了解两种方法 特点.方法 分别采用国产TRFIA法试剂盒与ECLIA法检测正常人50例、肝癌患者40例血清AFP的含量:用高、中、低3种浓度AFP标准品采用两种方法 进行批内测定,n=10,观察重复性,所得结果 计算CV值;将高值标准品血清(250 ng/ml)按1:1比例加入每份正常对照组血清中,肝癌组病人血清与生理盐水按1:1稀释后再按1:1比例加入高值标准品血清(250ng/ml).每份检测2 次(TRFIA法)取平均值,计算回收率.结果 肝癌组AFP值(TRFIA法:558±319.10ng/ml;ECLIA法:552.31±302.67g/ml)明显高于正常组(TRFAIA:6.51+5.42ng/ml;ECLIA法:6.32±5.14ng/m)(P<0.05),两种方法 结果 无显著差异(P>0.05).其相关系数为0.9150,测定结果 呈正相关.高、中、低3种浓度标准品的重复性试验TRFIA法与ECLIA批内变异系数分别低于7.9%和3.1%,后者优于前者,两种方法 略有不同.无明显差异(P>0.05).回收试验结果 ,TRFIA法回收率在92.3%～103.9%.结论 国产TRFIA法试剂盒和ECLIA法检测AFP相比较具有良好的相关性,灵敏度和稳定性也较好,可应用于临床血清AFP检测.     

利用甲型流感病毒阳性标本制备质控品的研究

目的 制备一种能适用于甲型流感病毒核酸提取、PCR检测的全程质控品。方法 采用TRIzol试剂灭活高中低三种浓度的甲型流感病毒阳性的临床标本,分析TRIzol试剂对检测结果的影响;放置于不同温度以及反复冻融,评估灭活后标本的稳定性。结果 TRIzol试剂对核酸检测无明显影响,处理后的高、中、低浓度标本反复冻融40次病毒浓度无明显降低,变异系数分别为1.26%、1.54%、1.54%,均低于试剂盒批间精密度。TRIzol试剂处理的标本在35℃环境保存40天开始有下降趋势,高中低浓度变异系数分别为3.13%、2.77%、2.20%,变异系数均低于试剂盒批间精密度。TRIzol试剂处理的标本在25℃环境、保存40天的过程中病毒浓度无明显降低,变异系数均低于试剂盒批内精密度。结论 临床实验室可采用TRIzol试剂灭活甲型流感病毒阳性标本制备质控品。     

2种检测乙型肝炎病毒表面抗原的酶联免疫吸附试验试剂盒的性能比较

目的:比较2种不同孵育时间的检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的性能差异。方法:使用同一厂商生产的2种不同孵育时间(30min和60min)的HBsAgELISA试剂盒同时检测血清样本,比较2种试剂盒的检测精度、抗干扰能力和检测结果的一致性。结果:2种试剂盒的检测精度没有统计学差异,批内变异系数(CV)均小于10%,批间CV均小于15%;血红蛋白     

流式荧光法检测血清胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的应用评价

目的：评价流式荧光法在血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ/Ⅱ检测中的临床应用价值。方法评价流式荧光法检测 PGⅠ/Ⅱ的精密度,通过检测临床血清标本与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒进行方法学比对,初步建立健康人群 PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ比值的参考值范围,并应用流式荧光法检测浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃癌患者血清。结果PGⅠ检测批内变异系数(CV批内)为4.26%~5.35%,批间变异系数(CV批间)为6.73%~7.75%。PGⅡ检测 CV批内为5.48%~6.42%,CV批间为8.46%~8.85%。与 ELISA 方法进行方法学比对存在线性关系,线性方程分别为 PGⅠ：Y =0.911X -22.635(r =0.966,P <0.05);PGⅡ：Y =0.892X -0.548(r=0.980,P <0.05)。PGⅠ和 PGⅠ/PGⅠ比值的参考区间下限分别为32.77 ng/mL、4.16。萎缩性胃炎和胃癌患者血清 PGⅠ水平和 PGⅠ/PGⅡ比值明显低于浅表性胃炎患者,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论流式荧光法可以实现PGⅠ、PGⅡ的并行测试,方法学性能良好,可以提高检测效率,流式荧光法对血清 PGⅠ和 PGⅡ的测定可以为早期胃癌和萎缩性胃炎的筛查及诊断提供实验室依据。