Linc00460通过海绵吸附影响miR-320a对乳腺癌细胞的有氧糖酵解作用

目的 探讨Linc00460通过海绵吸附miR-320a对乳腺癌（BC）细胞有氧糖酵解作用的影响。方法 qRT-PCR法检测正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及5种BC细胞系中Linc00460和miR-320a表达水平。qRT-PCR检测干扰Linc00460对miR-320a表达的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-320a和Linc00460的靶向关系。将si-Linc00460和miR-320a inhibitor共转染至MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-320a表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取率;比色法检测细胞上清液中乳酸含量;酶活性试剂盒检测糖酵解关键酶的活性;Western blot检测酵解途径中关键蛋白表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,5种BC细胞系中Linc00460高表达,而miR-320a低表达。干扰Linc00460后,MDA-MB-231细胞中miR-320a表达显著升高。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-320a和Linc00460可靶向结合。干扰Linc00460表达后MDA-MB-231细胞增殖能力受到明显抑制（P=0.000）,细胞葡萄糖摄取率和细胞上清液中乳酸含量降低（均P=0.000）,PFK、PK和LDH酶活性受到抑制（均P=0.000）,PFKM、GLUT1和LDHA蛋白表达水平下调（均P=0.000）。抑制miR-320a可明显逆转si-Linc00460对MDA-MB-231细胞增殖和糖酵解的抑制作用（均P=0.000或0.001）。结论 Linc00460可能通过海绵吸附miR-320a,上调PFKM表达,从而促进BC细胞有氧糖酵解作用。     

miR-103a-3p 在乳腺癌组织和血清中的表达及通过下调PDK4 抑制乳腺癌细胞的有氧糖酵解及增殖

[摘要] 目的：探讨miR-103a-3p 在乳腺癌组织及血清中的表达及其作用机制。方法：选用2017 年3 月1 日至2017 年8 月31日在海南医学院第二附属医院肿瘤外科手术切除、经病理确诊为乳腺癌的31 例癌组织及对应的21 例癌旁组织标本、38 例乳腺癌患者及22 例健康体检者的血清标本,以及乳腺癌细胞系MCF-7 和MDA-MB-231,分别利用慢病毒载体pHBLV-U6-Luc-T2A-Puro和PLL3.7 敲低乳腺癌细胞系MCF-7 和MDA-MB-231 中的miR-103a-3p 和PDK4,qPCR法和Western blotting 法检测miR-103a-3p和PDK4 在癌组织、血清及乳腺癌细胞系中mRNA和蛋白的表达,CCK-8 细胞增殖实验检测转染的乳腺癌细胞MCF-7 和MDAMB-231 的细胞增殖水平,用Olympus AU5400 检测葡萄糖消耗与乳酸生成。结果：乳腺癌患者组织和血清中miR-103a-3p 表达水平均显著低于癌旁组织（P<0.01,P<0.05）。敲低miR-103a-3p 后,乳腺癌细胞系MCF-7 和MDA-MB-231 中葡萄糖消耗（P<0.01）与乳酸生成增多（P<0.01）、细胞增殖增强（P<0.01）、PDK4 表达上调（P<0.01）;在miR-103a-3p 沉默的MCF-7 和MDA-MB-231 细胞中,敲低PDK4 导致减弱葡萄糖消耗（P<0.01）、乳酸生成（P<0.01）和细胞增殖（P<0.01）。结论：乳腺癌细胞中miR-103a-3p 通过抑制PDK4减弱糖酵解活动,从而抑制乳腺癌细胞增殖。     

阿帕替尼通过抑制糖酵解途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制及凋亡的作用

 目的 探讨阿帕替尼体外水平抗乳腺癌作用及其机制。方法 采用CCK-8法检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用；采用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响；采用乳酸含量检测试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞内乳酸产量的影响；采用糖酵解压力试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外酸化速率的影响。结果 阿帕替尼可浓度依赖性地抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖（P<0.05），作用48 h的半数抑制浓度IC₅₀为1.56 μmol/L；阿帕替尼可浓度依赖性地诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.05）；阿帕替尼可浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞内乳酸产量（P<0.05）；阿帕替尼干预可抑制MDA-MB-231细胞的糖酵解能力值及糖酵解保留值，降低MDA-MB-231细胞外酸化速率（P<0.05）。结论 阿帕替尼可能通过抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解效应，进而诱导其凋亡。     

抑制PKM2介导的糖酵解在蛇葡萄素抗乳腺癌增殖中的作用

目的 蛇葡萄素是存在于植物藤茶中含量非常高的黄酮类化合物，本研究主要探讨抑制Akt-mTOR/PKM2介导的糖酵解在蛇葡萄素诱导乳腺癌细胞增殖抑制中的作用。方法 不同浓度蛇葡萄素（20、40、60和80μmol/L）分别处理MDA-MB-231、MCF-7人乳腺癌细胞24h后，CCK-8检测乳腺癌细胞活力，2-NBDG法检测细胞糖摄取能力，比色法检测细胞培养液中乳酸含量，Western blot 检测相关分子蛋白的表达。结果 蛇葡萄素可显著抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05），且随着蛇葡萄素处理剂量的增加，乳腺癌细胞增殖抑制增强（P<0.05），提示蛇葡萄素诱导乳腺癌细胞增殖抑制作用存在明显的剂量效应关系。进一步研究发现，蛇葡萄素可剂量依赖性的降低乳腺癌细胞的糖摄取能力（P<0.05），并显著减少乳腺癌细胞乳酸生成（P<0.05）。Western blot 检测发现，蛇葡萄素在显著下调Akt-mTOR信号通路中p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白表达水平的同时下调与糖酵解相关分子GLUTI、LDHA、PKM2的蛋白表达水平。预先给予Akt-mTOR信号通路诱导剂IGF-1，以上作用均可被显著削弱。结论 蛇葡萄素可抑制乳腺癌增殖，该作用与其抑制Akt-mTOR信号通路、进而抑制乳腺癌细胞糖酵解有关，本研究结果可为蛇葡萄素抗肿瘤作用机制提供了一种新的解释。     

糖酵解在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用研究

目的 探讨糖酵解在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）吉非替尼（Gefitinib）耐药中的变化及作用。方法 体外培养NSCLC亲本细胞PC-9和A549,并采用浓度递增法构建NSCLC吉非替尼耐药细胞PC-9-GR和A549-GR,通过CCK-8和平板克隆形成实验鉴定细胞耐药性,葡萄糖摄取检测试剂盒和乳酸测试盒分别检测葡萄糖代谢和乳酸产出水平,qRT-PCR和Western blot实验检测细胞糖酵解关键酶的mRNA和蛋白表达水平。采用糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-deoxy-D-glucose,2-DG）抑制细胞糖酵解后,观察细胞活力及吉非替尼耐药性的变化情况。结果相较于各自亲本细胞,耐药细胞PC-9-GR和A549-GR对吉非替尼抵抗性增强（均P<0.01）,葡萄糖代谢速率和乳酸产出水平提高（均P<0.01）;糖酵解关键酶HK2、LDHA和PFK的mRNA表达水平升高（均P<0.001）,HK2、LDHA、PFKP和PKM2的蛋白表达水平增加（均P<0.001）。2-DG对耐药细胞活力的抑制作用较各自亲本...     

PPAPDC1A在体内外对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的:通过构建稳定过表达和干扰PPAPDC1A的乳腺癌细胞株,探讨PPAPDC1A对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:利用CCK-8和Transwell实验检测PPAPDC1A稳定过表达和干扰后对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验检测PPAPDC1A对乳腺癌细胞体内增殖和裸鼠致瘤性的作用。利用免疫组织化学染色法检测各组肿瘤组织中Ki-67的表达。通过裸鼠尾静脉注射实验检测PPAPDC1A对乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体内转移能力的影响。结果:成功建立稳定过表达PPAPDC1A的乳腺癌MCF-7细胞株和稳定干扰PPAPDC1A的乳腺癌MDA-MB-231细胞株;CCK-8和Transwell实验结果显示,与MCF-7和MCF-7-Vector细胞株相比,MCF-7-PPAPDC1A细胞株的生长速度显著增快,穿膜细胞数量多（P＜0.05）;与此相反,MDA-MB-231-shPPAPDC1A组细胞的生长速度和穿膜细胞数明显少于MDA-MB-231-shNC和MDA-MB-231 细胞株（P＜0.05）。动物实验结果显示,与MCF-7-Vector组相比,MCF-7-PPAPDC1A组的肿瘤生长速度较快,肿瘤的体积较大,Ki-67的阳性率高,肺转移灶的数目增多（P＜0.05）;与此相反,与MDA-MB-231-shNC组相比MDA-MB-231-shPPAPDC1A组的肿瘤生长速度较慢,肿瘤的体积较小,Ki-67的阳性率低,肺转移灶的数目减少（P＜0.05）。结论:PPAPDC1A对乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移有促进作用。     

lncRNASNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞线粒体途径凋亡的影响

目的：探讨lncRNASNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其凋亡机制。方法: 用实时荧光定量 PCR（qPCR）检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、BT-549 和 MCF-7中SNHG15表达水平。将MDA-MB-231 细胞分为对照（Ctrl） 组、si-NC组、si-SNHG15组、si-SNHG15+anti-NC组及si-SNHG15+anti-miR-153组， 用MTT法及流式细胞术分别检测细胞的增殖 活力和凋亡率。用双荧光素酶报告基因实验验证SNHG15和miR-153的靶向关系。用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）染色法检测 细胞线粒体膜电位， 用Western blotting检测线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3、cleaved caspase3（c-caspase3）和Cyt-C 的表达水平。结果:SNHG15在3种乳腺癌细胞中的表达水平均明显高于人正常乳腺上皮细胞MCF10A（均P<0.01）。SNHG15与 miR-153存在靶向关系。沉默SNHG15后，与对照组比较，si-SNHG15组MDA-MB-231细胞增殖活力明显降低、凋亡率升高、线 粒体膜电位降低（均P<0.01）；细胞中Bcl-2和caspase3表达降低，Bax、c-caspase3和Cyt-C表达升高（均P<0.01）。si-SNHG15与 anti-miR-153共同转染 MDA-MB-231 细胞后，可减弱 si-SNHG15 对细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位及 Bcl-2、Bax、caspase3、 c-caspase3和Cyt-C表达的影响（均P<0.01）。结论: lncRNASNHG15可靶向调控miR-153诱导MDA-MB-231细胞凋亡，其机制 可能与调控细胞线粒体途径凋亡有关。     

人乳腺癌组织中miR-34a的表达及其在乳腺癌细胞系中的功能研究

目的 探讨miR-34a在人乳腺癌组织和细胞中的表达情况及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移侵袭和凋亡等生物学行为的影响,为研究乳腺癌组织中miR-34a的作用及深入了解乳腺癌发生发展的分子机制奠定理论基础。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-34a在20例人乳腺癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异并比较其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达差异;体外利用脂质体转染技术,转染miR-34a的模拟物（miR-34a mimic）和标记FAM（绿色荧光）的阴性对照(negative control ,miR-NC)进入MDA-MB-231细胞,研究miR-34a对细胞增殖活性、迁移和侵袭能力以及凋亡和周期分布的影响。结果 miR-34a在乳腺癌组织中的表达量较正常癌旁组织下调(P＜0.01);在MDA-MB-231、MCF-7和MCF-10A中的表达呈依次增高的趋势(P＜0.01);转染miR-34a mimic与转染miR-NC的MDA-MB-231相比,其增殖活力、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01),凋亡增加(P＜0.01),细胞周期被阻滞在G1/G0期（P＜0.01）。结论 miR-34a在乳腺癌组织和细胞系MDA-MB-231及MCF-7中的表达较正常组织和MCF-10A中都明显下调;miR-34a能够抑制肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭迁移,增加细胞凋亡率,使细胞周期阻滞在G0/G1;miR-34a可能起到抑癌作用,其表达水平与乳腺癌的发生发展密切相关。     

LRRK2在乳腺癌细胞增殖和耐药中的作用及其机制研究

目的:探讨LRRK2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药的作用和分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测了48例乳腺癌组织及其配对正常组织中LRRK2表达;并检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A、乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、BT-483及阿...     

Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的：检测4次穿膜蛋白29（tetraspanins-29，Tspan29）在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平，探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition，EMT）的影响。方法：收 集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本，以及乳腺癌细胞系 MCF-7、MDA-MB-231 和人乳腺上皮细胞 MDA-kb2，用 qPCR 和 Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29 的表达水平。通过 siTspan29 对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中 Tspan29 进行干扰，用 qPCR 法检测转染细胞中 Tspan29mRNA 和蛋白的表达水平，PCR 芯片法检测 MCF-7 细胞中 EMT 相关基因的表达，用 CCK-8 法、Transwell 实验检测 MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织（均 P<0.01），MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞（均P<0.01）。siTspan29干扰后，MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降（均P<0.05）；MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调， 有7个基因显著下调；MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.05）。结论：Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调，敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。     

鱼藤素通过FZD7调控Wnt通路抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭、迁移、EMT的实验研究

目的:探讨鱼藤素对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的抑制作用及可能的机制。方法:体外培养人TNBC细胞系（MDA-MB-231和BT-20）,加入鱼藤素（5、10、20 μmol/L）诱导后,采用CCK-8法检测MDA-MB-231和BT-20细胞的存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测细胞中卷曲同源物7（FZD7）、Ki-67、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、β-连结蛋白（β-catenin）、c-myc蛋白表达。利用FZD7过表达载体质粒（pcDNA-FZD7）转染建立FZD7过表达细胞,进一步研究FZD7过表达对鱼藤素抗TNBC作用的影响;裸鼠成瘤实验检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞体内生长的影响。结果:与对照组（0 μmol/L）相比,鱼藤素（5、10、20 μmol/L）呈剂量依赖性的显著降低MDA-MB-231和BT-20细胞存活率,并显著增加MDA-MB-231和BT-20细胞的凋亡率（P＜0.05）。与对照组相比,鱼藤素可显著降低MDA-MB-231和BT-20细胞增殖活力、克隆形成能力、迁移与侵袭能力和细胞内Vimentin、FZD7、β-catenin、c-myc蛋白表达,升高细胞凋亡率和细胞内E-cadherin蛋白表达（P＜0.05）;过表达FZD7可逆转鱼藤素对TNBC细胞恶性表型的影响。体内实验中,与对照组相比,鱼藤素组裸鼠的肿瘤体积和肿瘤质量、肿瘤中FZD7蛋白表达和FZD7、Ki-67阳性表达显著降低（P＜0.05）,与鱼藤素组和鱼藤素+pcDNA-NC组相比,鱼藤素+pcDNA-FZD7组肿瘤体积和肿瘤质量、肿瘤中FZD7蛋白表达和FZD7、Ki-67阳性表达显著升高（P＜0.05）。结论:鱼藤素可抑制TNBC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调FZD7的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

三阴性乳腺癌细胞源性外泌体活化的巨噬细胞促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化作用以及经外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法:提取TNBC细胞BT-549和MDA-MB-231外泌体,透射电镜、纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）、蛋白质印记(Western blot)鉴定外泌体;流式细胞术检测经外泌体处理后巨噬细胞分子标志物CD206、CD80的表达;实时荧光定量PCR检测单核细胞THP-1、巨噬细胞M0及外泌体处理后巨噬细胞中CD163、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的mRNA水平;Transwell实验分析外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭的影响,Western blot方法检测MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin的蛋白水平。结果:透射电镜下BT-549和MDA-MB-231细胞的外泌体具有膜结构囊状小泡并表达外泌体的分子标记物CD81、CD63;BT-549细胞来源的外泌体直径分布为80~150 nm,MDA-MB-231细胞来源的外泌体直径分布为100~200 nm;经BT-549和MDA-MB-231细胞源性外泌体处理的巨噬细胞与M0相比,CD206均有稳定表达（P＜0.05),而CD80表达未见明显差异;外泌体处理后巨噬细胞的CD163、TGF-β mRNA表达水平均增加（P＜0.01),iNOS mRNA表达水平降低（P＜0.05),TNF-α mRNA表达水平未见明显变化;外泌体处理后的巨噬细胞使得TNBC细胞的迁移、侵袭穿膜数目增加(P＜0.01),N-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白表达增加（P＜0.05),E-cadherin 蛋白表达降低（P＜0.05)。结论:TNBC细胞分泌的外泌体可以诱导巨噬细胞向M2极化,进而促进TNBC细胞间质转化,增强TNBC细胞的迁移和侵袭能力。     

Correlation of estrogen receptors and charge alterations of regulatory subunits of cAMP-dependent protein kinases in human mammary tumor cells

The soluble cAMP-dependent protein kinase activities of two estrogen receptor-containing (MCF-7 and ZR-75-1) and two estrogen receptor-lacking (BT-20 and MDA-MB-231) established human mammary tumor cell lines were analyzed by DEAE-cellulose chromatography and photoaffinity labeling with 8-azido-[32P]cAMP. Predominantly, type I isoenzyme was present in MDA-MB-231 cells, type II protein kinase was the main form in ZR-75-1 and BT-20 cells; whereas MCF-7 cytosols contained equal amounts of both protein kinase types. No correlations between estrogen receptor content and cAMP-dependent protein kinase holoenzyme ratios of isoenzymes were found. A distinctly greater heterogeneity of charge isomers of cAMP-binding proteins (regulatory subunits) was observed in estrogen receptor-containing cells.     

二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖和能量代谢的影响

目的:探讨二甲双胍对甲状腺未分化癌（anaplastic thyroid cancer,ATC）细胞增殖及能量代谢的影响,并检测糖酵解途径相关蛋白GLUT1、PKM2、LDHA表达的变化。方法:体外培养人ATC细胞和人正常甲状腺细胞,分为对照组和不同浓度二甲双胍（1、5、10mmol/L）处理组,并分别培养24h、48h。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,Seahorse能量代谢分析仪检测细胞糖酵解及线粒体呼吸的变化。Western blot检测各组细胞GLUT1、PKM2和LDHA蛋白表达变化。结果:与对照组相比,二甲双胍可抑制ATC细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性（P<0.05）。二甲双胍可改变ATC细胞能量代谢模式,随二甲双胍处理浓度增加和时间延长,糖酵解和线粒体呼吸水平均可出现抑制,呈剂量-时间依赖性（P<0.05）。GLUT1、PKM2和LDHA在ATC细胞中过表达,而二甲双胍对ATC细胞中GLUT1、PKM2和LDHA蛋白的表达无明显影响。结论:二甲双胍可抑制ATC细胞增殖和能量代谢,但其机制仍有待于进一步研究。     

Inhibition of breast cancer cell growth and induction of cell death by 1,1-bis(3'-indolyl)methane (DIM) and 5,5'-dibromoDIM

1,1-Bis(3'-indolyl)methane (DIM) and the 5,5'-dibromo ring substituted DIM (5,5'-diBrDIM) inhibited growth of MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells, and IC50 values were 10-20 and 1-5 microM, respectively, in both cell lines. DIM and 5,5'-diBrDIM did not induce p21 or p27 protein levels or alter expression of Sp1 or Sp3 proteins in either cell line. In contrast, 10 microM 5,5'-diBrDIM downregulated cyclin D1 protein in MCF-7 and MDA-MB-231 cells 12 and 24 h after treatment. DIM (20 microM) also decreased cyclin D1 in MCF-7 (24 h) and MDA-MB-231 (12 h), and the DIM/5,5'-diBrDIM-induced degradation of cyclin D1 was blocked by the proteasome inhibitor MG132. Both DIM and 5,5'-diBrDIM induced apoptosis in MCF-7 cells and this was accompanied by decreased Bcl-2, release of mitochondrial cytochrome c, and decreased mitochondrial membrane potential as determined by the red/green fluorescence of JC-1. DIM and 5,5'-diBrDIM induced extensive necrosis in MDA-MB-231 cells; however, this was accompanied by decreased mitochondrial membrane potential primarily in cells treated with 5,5'-diBrDIM but not DIM. Thus, DIM and 5,5'-diBrDIM induce cell death in MCF-7 and MDA-MB-231 cells by overlapping and different pathways, and the ring-substituted DIM represents a novel class of uncharged mitochondrial poisons that inhibit breast cancer cell and tumor growth.     

Role of polyamines in the growth of hormone-responsive and -resistant human breast cancer cells in nude mice.

Recent in vitro data suggest that at least some hormone-independent breast cancer cells exhibit increased polyamine biosynthesis and resistance to antipolyamine therapy. To address this issue under conditions of in vivo growth, we tested the antiproliferative effect of the polyamine synthetic inhibitor alpha-difluoromethyl-ornithine (DFMO) on hormone-dependent (MCF-7) and -independent (MDA-MB-231, BT-20) breast cancer cell lines growing in nude mice. We observed that DFMO significantly inhibited the growth of established tumors to a similar extent in all cell lines, even though tumor regression was only observed with MCF-7 cells. DFMO, while inhibiting E2-supported MCF-7 breast cancer growth, did not inhibit E2-stimulated progesterone receptor synthesis. Cellular levels of polyamines were highest in MCF-7 cells and lowest in the BT-20 cell line. Tumor content of spermidine was similarly suppressed by DFMO treatment in the 3 cell lines, while the spermine level was unaffected. Cellular putrescine levels were suppressed in MCF-7 and BT-20 cells. Administration of DFMO prior to implantation of fragments of MCF-7 or MDA-MB-231 tumors in nude mice significantly inhibited tumor development to a similar extent. The action of DFMO seemed to be predominantly tumoristatic since new tumors develop in some mice upon discontinuation of the drug. We conclude that the hormone-independent breast cancer cell lines tested do not exhibit increased polyamine biosynthesis or resistance to antipolyamine therapy when grown in vivo in nude mice.