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1.
目的:培养大鼠切牙颈环上皮细胞。方法:选择出生后(postnatal,PN)8d的SD大鼠,分离下颌切牙牙胚,切取切牙颈环结构,酶消化法细胞培养。通过差别消化法初步纯化颈环上皮细胞,抗角蛋白免疫化学染色初步鉴定颈环上皮细胞。结果:原代培养细胞为上皮和间充质混杂的细胞,经初步纯化获得铺路石样排列的,角蛋白阳性的颈环上皮细胞团。结论:实验成功培养了大鼠切牙颈环上皮细胞。 相似文献
2.
目的: 建立用自制鼠尾胶原为贴附底物的大鼠颈环上皮细胞的体外培养模式.方法: 制作鼠尾胶原,观察用自制的鼠尾胶原培养出大鼠颈环上皮细胞的效果,并对纯化的上皮细胞进行免疫组织化学染色鉴定.结果: 自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠颈环上皮细胞,呈多角形,克隆状生长,β1整合素和角蛋白免疫组织化学染色阳性.结论: 鼠尾胶原可作大鼠颈环上皮细胞的体外培养贴附底物,为今后研究牙齿发育机制提供简便的方法和途径. 相似文献
3.
富含干细胞的鼠切牙颈环上皮细胞的分离和原代培养 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:获取较纯的鼠切牙颈环上皮细胞.方法:分离出生2 d的Wistar大乳鼠下颌切牙完整的牙胚,机械剥离颈环组织,酶消化法与组织块法结合培养原代混合细胞.采用Ⅳ型胶原包被培养法纯化上皮干细胞.结果:原代培养的细胞为混杂细胞,经2~3次纯化可完全去除纤维样细胞.颈环上皮细胞呈多角形,克隆状生长.结论:Ⅳ型胶原包被培养法可以获取纯化的鼠颈环上皮细胞. 相似文献
4.
Ⅳ型胶原粘附法纯化富含干细胞的鼠切牙颈环上皮细胞 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨Ⅳ型胶原对实验室培养条件下富含干细胞的鼠切牙颈环上皮细胞纯化的影响.方法:以Ⅳ型胶原包被培养瓶,再接种颈环上皮混杂细胞,以未包被胶原的培养瓶做对照,观察贴擘细胞的生长形态;用β1整合素和CK角蛋白对贴壁细胞进行免疫组织化学染色鉴定.结果:与对照组相比,Ⅳ型胶原包被组纤维样细胞被完全抑制,贴壁生长的细胞全部为上皮细胞,形成大的克隆,β1整合索和CK角蚩白呈阳性表达.结论:Ⅳ型胶原粘附法可以获取较纯的鼠切牙颈环上皮细胞. 相似文献
5.
目的:观察大鼠切牙颈环结构种植于鼠肾被膜下形成牙齿样结构的能力。方法:取出生后3~4d的SD仔鼠切牙,将切取的颈环结构种植到母鼠肾被膜下,建立组织工程牙齿的体内培养模型。2~4周后取材,常规固定,HE染色观察。结果:下切牙颈环结构在体内形成了包含釉质和牙本质牙髓复合体的牙齿样结构,上切牙颈环结构仅形成了牙本质牙髓复合体的牙齿样结构。结论:大鼠切牙颈环结构在体内能够形成牙齿样结构,其中颈环中的上皮干细胞起着重要的作用。大鼠肾被膜下种植可以做为体内组织工程化牙齿样结构构建的立体培养模式。 相似文献
6.
釉原蛋白、釉蛋白及成釉蛋白在小鼠牙胚组织发育过程中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:比较小鼠釉原蛋白(amelogenin,AMELX)、成釉蛋白(ameloblastin,AMBN)和釉蛋白(enamelin,ENAM)在牙胚组织发育过程中表达的差异,从而揭示其不同的功能。方法:选择牙胚发育期分别位于钟状期、钟状晚期、釉质成熟期的昆明小鼠头颅切片,使用抗鼠AMELX、AMBN和ENAM多克隆抗体(由美国德州大学健康科学中心Dr.Sim-mer赠送),行免疫组织化学EnVision二步法染色,观察三种蛋白在处于三个不同发育阶段小鼠头颅切片中的表达情况。结果:免疫组化结果显示,三种蛋白在三种小鼠牙胚的成釉细胞、釉质、牙本质中的表达存在时空顺序差异,随着牙胚发育和釉质成熟,AMELX呈递减表达,而AMBN和ENAM则较恒定表达。AMELX在周围发育中的编织状骨组织中也有微弱表达。结论:AMELX、AMBN和ENAM为主要的釉质基质蛋白,在牙胚发育的不同阶段有不同的调节矿化的作用,AMELX在釉质矿化早期促进晶体生长,而其在骨中的表达则进一步表明其在骨修复中可能的作用;AMBN促进釉质基质矿化,并维持晶体形状、大小;ENAM促进和维持晶体生长,并与再矿化有关。 相似文献
7.
目的:观察釉蛋白在大鼠切牙发育不同时期的表达和分布情况.方法:采用免疫荧光法观察釉蛋白在大鼠切牙发育不同时期的表达与分布.结果:在成釉器增殖期、分化早期,未见釉蛋白表达;在分化晚期,前成釉细胞有弱阳性表达;在成熟早期,成釉细胞和成牙本质细胞均阳性表达;在成熟中期,成釉细胞及其基质呈强阳性表达,而成牙本质细胞阳性表达;在成熟晚期,成釉细胞和成牙本质细胞弱阳性表达.在成釉器各期,釉蛋白在外釉细胞、星网状细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达.结论:釉蛋白参与釉基质和牙本质基质的形成,可能与牙发育中基质形成的信息传递有关. 相似文献
8.
目的通过观察过量氟、硼以及氟硼联合作用对大鼠切牙釉蛋白表达的影响,初步探讨硼在预防氟斑牙中的作用。方法选择32只Wistar大鼠,随机分为4组。Ⅰ组常规饮用蒸馏水;Ⅱ组饮用含氟化钠质量浓度为220 mg/L的氟化水;Ⅲ组饮用含硼质量浓度为382 mg/L的水;Ⅳ组饮用含氟、硼质量浓度分别为220 mg/L、382 mg/L的水。8周后处死动物,获取切牙标本,利用免疫组织化学法和HE染色观察大鼠切牙成釉细胞和釉蛋白的表达。结果Ⅱ组釉蛋白的表达明显弱于Ⅰ组(P<0.01),Ⅲ组与Ⅰ组表达差异无统计学意义,Ⅳ组与Ⅰ组表达差异无统计学意义,Ⅳ组与Ⅱ组表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论过量氟可抑制釉蛋白的表达,而经硼与氟的联合作用后,釉蛋白表达所受影响降低。硼可降低氟对牙齿的危害性。 相似文献
9.
人牙源性上皮细胞的体外培养研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:建立人牙源性上皮细胞的体外培养方法,为牙齿组织工程研究提供可靠的种子细胞来源。方法:采用组织块法原代培养人牙源性上皮细胞,用更换培养液类型、多次差别消化法和反复贴壁法进行纯化,在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况,用免疫荧光法检测细胞表达角蛋白和成釉蛋白的情况。结果:原代培养的人牙源性上皮细胞生长良好,但有少量成纤维细胞混杂,经纯化后明显好转,上皮细胞呈片状生长,表达角蛋白及成釉蛋白。传至第5代后,细胞逐渐变为长梭形,失去上皮细胞形态。结论:体外培养的人牙源性上皮细胞在较长时间内可保持其特性,有望作为牙齿组织工程研究的种子细胞。 相似文献
10.
过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。实验组每日饲以F-质量浓度为100mg/L的氟化水,对照组饲以蒸馏水,两组均用常规饲料喂养8周。饲养8周后处死大鼠,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)观察过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响。结果实验组大鼠下切牙釉原蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。结论过量氟可能通过抑制釉原蛋白的表达来影响釉质发育。 相似文献
11.
目的:研究小鼠切牙颈环上皮细胞的培养方法。方法:提取出生后7~8 d的小鼠下颌切牙唇侧根尖端组织,采用酶消化组织块法进行细胞培养。用角蛋白免疫化学染色对细胞来源进行鉴定。结果:组织块酶消化后接种于培养板,3~7 d左右可见细胞爬出,原代培养细胞为成纤维细胞及上皮细胞混杂,胰酶差别消化后,获得纯化的上皮细胞。角蛋白染色阳性,证明其为上皮来源细胞。结论:采用酶消化组织块法成功培养小鼠切牙颈环上皮细胞。 相似文献
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Characterization of dental epithelial progenitor cells derived from cervical-loop epithelium in a rat lower incisor 总被引:10,自引:0,他引:10
Kawano S Saito M Handa K Morotomi T Toyono T Seta Y Nakamura N Uchida T Toyoshima K Ohishi M Harada H 《Journal of dental research》2004,83(2):129-133
Dental epithelial progenitor cells differentiate into various cell types during development of tooth germs. To study this mechanism, we produced immortalized dental epithelial progenitor cells derived from the cervical-loop epithelium of a rat lower incisor. The expression patterns of cytokeratin 14, nerve growth factor receptor p75, amelogenin, Notch2, and alkaline phosphatase were examined by immunohistochemistry in both lower and higher cell densities. The patterns of each were compared in the dental epithelium of rat lower incisors. The results demonstrated that these cells could produce ameloblast lineage cells, stratum intermedium cells, stellate reticulum, and outer enamel epithelium. Furthermore, fibroblast growth factor 10 stimulated proliferation of dental progenitor cells and subsequently increased the number of cells expressing alkaline phosphatase. These results suggest that fibroblast growth factor 10 plays a role in coupling mitogenesis of the cervical-loop cells and the production of stratum intermedium cells in rat incisors. 相似文献
14.
目的 建立人釉原蛋白(amelogenin,AMG)成熟肽基因原核表达和纯化的技术路线,获得纯化的人AMG成熟肽蛋白,以期为牙周炎的基础治疗提供依据.方法 通过已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1-AMG,转化BL21大肠杆菌,原核表达后利用谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白纯化系统(glutathione S-transferase fusion protein purification system,GSTrapFF)亲和层析柱进行重组人AMG的纯化.结果 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳图和蛋白质印迹法分析结果显示,获得纯化的相对分子质量为45 000大小GST-AMG融合蛋白和19 000大小的目的 蛋白AMG.结论 利用pGEX-4T-1-AMG-BL21体系成功获得了人AMG成熟肽基因在大肠杆菌中的原核表达和纯化. 相似文献
15.
目的建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线。方法利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX- 4T- 1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基- β- D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达条件下,分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的蛋白表达进行分析,在可溶性蛋白中发现大量目的蛋白,随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化。结果pGEX- 4T- 1/AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致。最佳诱导时间为14.5 h、最佳诱导剂浓度为1.0 mmol/L、最佳诱导温度为20 ℃,在此条件下目的蛋白的表达量达到峰值。在最佳诱导条件下,胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的蛋白。提取大量胞质蛋白,经GSTrapFF亲和层析柱纯化,收集纯化液,进行SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,显示成功纯化了AMG融合蛋白,在提取液洗涤2次后,可获得高纯度的融合蛋白。结论利用pGEX- 4T- 1/AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白。 相似文献
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T. G. H. Diekwisch X. Wang J. L. Fan Y. Ito X. Luan 《European journal of oral sciences》2006,114(S1):86-92
Amelogenin, the major protein of developing enamel matrix, controls enamel crystal growth via unique supermolecular features. While much has been contributed to our understanding of mammalian amelogenin function, little is known about how amelogenin and its unique physico-chemical features have evolved among vertebrates. Here we report, for the first time, amphibian amelogenin recombinant protein expression and characterization in Rana pipiens . In order to characterize R. pipiens amelogenin, the newly discovered amelogenin coding sequence was amplified, subcloned, and expressed in Eshcerichia coli . Our newly generated R. pipiens amelogenin-specific antisera resolved a major 19-kDa band on western blots of frog tooth extracts and revealed an enamel organ tissue-specific localization pattern using immunohistochemistry. Using mass spectroscopy, a single major compound with a molecular weight of 21.6 kDa was detected, which corresponded to the amino acid sequence-based molecular weight prediction of the His fusion recombinant protein. Dynamic light scattering studies resolved 41-nm radius subunits compared with 14-nm radius subunits from mouse recombinant amelogenin controls. Transmission electron microscopy revealed defined spherical subunits in R. pipiens matrix self-assembly in contrast with a homogeneous 'stippled' matrix in mouse amelogenin matrix self-assembly. Our data suggest that R. pipiens amelogenin is distinguished from mammalian amelogenins by a number of unique physico-chemical properties which may be related to specific modes of crystal formation in frog enamel. 相似文献
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目的:探讨釉原蛋白的作用机制,为临床应用釉原蛋白进行龋病的治疗奠定基础。方法:采用细胞培养、放射免疫测定和碱性磷酸酶(AKP)检测等实验技术,探讨釉原蛋白Am对牙髓外胚间充质细胞的作用。结果:通过观察Am纯化蛋白可溶性上清液对体外培养的牙髓细胞的骨钙素含量和碱性磷酸酶活性的影响,发现Am可增加骨钙素含量,增强碱性磷酸酶活性,并呈剂量依赖性,在100ng/ml浓度下两者分别增加3和4倍。结论:Am可促进人牙髓细胞的分化和矿化。 相似文献