关于透射电镜样品污染问题的探讨

在透射电镜样品制备过程中,经常会遇到超薄切片被污染的问题。本文分析了造成超薄切片污染的原因,并针对超薄切片制作过程中的污染,提出了改善切片室环境、铜网支持膜、合理使用切片刀及刀槽的改进措施,针对切片电子染色过程中的污染,提出了在染液配制过程中严格遵守操作程序、在染色操作过程中严格坚持正确的方法等注意事项,并阐明了必要的防范措施,这些将有效避免电镜样品污染现象。     

避免电镜超薄切片污染的探讨

在生物学和医学的研究中 ,观察细胞超微结构的变化具有重要意义 ,目前电镜已成为临床病理诊断 ,形态学研究的必要工具。要获得清晰的电镜图像 ,电镜样品制备是重要环节 ,理想的超薄切片应具备以下几点要求 :①细胞超微结构保存良好 ,没有明显的人工假象。②反差好且分辨力高。③切片平展均匀 ,无污染、刀痕、震颤、皱褶等。样品制作过程中最容易影响切片 ,提高工作效率 ,我们必须重视一些易忽略的环节 ,保证制样工作顺利进行。切片污染可出现在样品制作的全过程及电镜观察时 ,分析如下 :1　制备包埋块过程中的污染及注意事项①取材的污染 :…     

超薄切片制备关键环节的处理

超薄切片质量是电镜技术的基础,理想的超薄切片应该是厚度适中,厚薄均匀,结构清晰,没有颤痕、皱褶、重叠、刀痕、空洞及污染.优质超薄切片的获得,与样品的取材、脱水、浸透、包埋和切片的好坏诸因素息息相关.笔者根据多年的工作经验,就样品制备的几个关键环节在实践中不断研究和探讨,摸索出一些技巧,供同行们参考.     

超薄切片技术的质量控制

超薄切片技术作为病理学诊断和组织学研究的一个重要技术 ,已广泛应用于临床病理诊断、教学和科研工作。一位出色的电镜技术工作者不仅要熟悉透射电镜样品制备的原理 ,还要熟练掌握该技术 ,能制备出一张优质的超薄切片 ,以便日常工作的顺利开展。近年来电镜用于活检和疑难病诊断也逐渐增加 ,由于电镜样品制备费用比较昂贵 ,因此有必要对超薄切片的质量进一步要求。1　标本的取材和固定如何获得 1张超微结构保存完整的超薄切片 ,固定是极为重要的过程。为了使离体组织如同活组织一样 ,这就要求生命的全过程 (包括酶促反应 )立刻停止 ,细胞及…     

提高电镜超薄切片染色效率的装置

随着电镜技术应用的普及,利用电镜观察肾小球超微结构进行临床诊断的样品日益增多.传统的超薄切片染色方法不能1次进行大批量染色操作(费时、费工,且易造成污染).为此,笔者对传统的电镜染色法作了探索和改进,最终做出了制作简便、染色量大、染色效果稳定的电镜超薄切片染色装置.     

防止电镜样品污染的几点体会

在电镜样品制备的工作中 ,常常会遇到切片污染的问题 ,甚至整个视野出现一些细小的颗粒 ,直接影响着电镜样品的观察研究。尤其是对初学者 ,当遇到切片污染时 ,如何分析污染的原因 ,少走弯路。准确找出解决污染的办法 ,我的体会是 :首先要确定是那一类污染 ,然后找出污染的原因 ,采取相应的措施 ,杜绝污染的发生。1　电镜样品污染的种类　电镜样品污染常见的有两类 :一类是铅颗粒的污染 ,另一类是灰尘的污染 ,铅颗粒污染的特征是 :形态规则 ,大小一致的细小颗粒。灰尘污染的特征是 :形态不规则 ,大小不等 ,分布不均匀的污染。2　造成电镜样品…     

生物样品电镜X射线微区分析的冷冻超薄切片技术

为了满足含水生物样品的电镜X射线微区分析的要求,国外已经使用了冷冻超薄切片技术方法.近十年来本实验室也对含水生物样品的冷冻超薄切片术进行了摸索和改进.解决了部分制样技术问题,提高了该技术的成功率.现初步总结如下,以达到共同交流和提高的目的.     

舌质超微结构与微循环

本文创新一项活检方法,用于透射电镜下舌乳头组织细胞及毛细血管内皮细胞的研究。从尸体过渡到活体取材。其方法简便,无剧烈疼痛,24小时创面消失。样品制备后,超薄切片,双重染色,电镜观察。共做健康人10例,白血病患者14例。     

常用生物材料超薄切片的制备体会

正随着科技的发展,电子显微镜技术已在生物科技、病理诊断等方面得到普遍应用。但对于整个电镜技术流程而言,超薄切片技术不仅是技术的难点,更是反映结果的关键步骤。为得到一张优质切片,越来越多的电镜工作者喜欢采用钻石刀切片,但因钻石刀价格昂贵且刀刃极易受损,操作者应注意钻石刀的维护与保养,以延长其使用期。为使初学者对生物超薄切片技术有更全面的认识,现将常用生物材料进行超薄切片制备的方法及注意事项汇总如下。     

有脱钙骨组织标本超薄切片的制作方法

在骨超微结构研究和临床外检工作中，我们利用Epon812含钙盐的骨组织标本来制备超薄切片。由于不脱钙的超薄切片在电镜下显示了骨组织的真实结构，更利于深入地研究骨组织的形态学。     

基于定位技术的脑组织超薄电镜切片制作方法

随着科学研究的深入,需要对不同脑区的功能及超微结构分别研究[1,2],大脑纹状体分为两个区域,尾壳核区和伏隔核区,海马区分为CA1,1CA2,CA3,DG区等,而这些区域在解剖结构上非常接近,传统的取材方法是无法做到准确的定位某一区域.超薄切片的质量是电镜技术的基础,理想的超薄切片应该是厚度适中,厚薄均匀,结构清晰,没有颤痕、皱褶、重叠、刀痕、空洞及污染.优质超薄切片的获得,与样品的取材、脱水、浸透、包埋和切片等环节息息相关.脑组织电镜标本的制作一直是一大难题,制作过程中往往很难很好地保存脑组织的超微结构,经常会出现组织自溶现象.本实验旨在建立一套行之有效的方法,在能够很好的保存大脑的超微结构的基础上,可以精确地定位脑组织某一区域进行取材,然后进行后续的操作.     

介绍一种改良承载超薄切片制膜法

用于透射电镜的超薄切片往往需要有支持膜的铜网承载,有支持膜就能有效地吸附切片,并能加强切片承受电子束的轰击,但却有影响分辨率、易污染等弊端。近年来,许多电镜工作者采用无膜铜网承载超薄切片,虽能增强切片反差、提高图     

不脱钙骨组织标本超薄切片的制作方法

在骨超微结构研究和临床外检工作中,我们利用Epon-812含钙盐的骨组织标本来制备超薄切片.由于不脱钙的超薄切片在电镜下显示了骨组织的真实结构,更利于深入地研究骨组织的形态学.     

人植入前胚胎细胞超薄电镜切片制作

目的改进人植入前胚胎细胞超薄切片的制备方法,观察不同时期人早期胚胎细胞超微结构的变化。方法选取我院生殖中心试管婴儿助孕技术后异常受精的3原核胚胎,于2~8细胞期进行固定,改进透射电镜的常规操作方法,使用3%~4%琼脂进行预包埋,制成超薄切片后在镜下观察植入前胚胎细胞凋亡的超微结构。结果使用本方法可以对少量胚胎进行超薄切片的制作。结论使用3%~4%琼脂预包埋的方法可以成功的制作人植入前胚胎细胞的超薄电镜切片。     

骨组织超薄切片法的技术改进

骨组织超薄切片法的技术改进赵玉珍李向印郭建坤＊（河北医科大学电镜室＊第三附属医院检验科）如何利用常规手段，进行骨组织的超薄切片，一直是电镜工作者广为关注的问题之一，当然，利用钻石刀进行该种硬组织的超薄切片，未尝不能完成，但是钻石刀昂贵的造价确令人望而...     

电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

超薄切片传统液滴漂浮染色法改进

利用传统的液滴漂浮法进行超薄切片染色,难以避免铅染液造成的污染.通过裸网捞片,我们对液滴漂浮法的操作进行改进,使超薄切片的两面同时进行染色,此方法不仅缩短了染色时间,提高了工作效率,还可以最大程度避免染液与切片及空气的接触,减少了染色污染的发生机率.     

包埋前免疫金电镜标记的使用难点及解决方法

根据免疫标记与标本之间的不同关系,免疫电镜技术可分为包埋前、包埋后及冷冻超薄切片免疫电镜技术。本文仅介绍包埋前免疫金电镜标记在使用过程中的一些难点及解决方法。     

病变细胞定位超薄切片方法的建立CSCD

目的建立一种针对感染病毒病变细胞的定位超薄切片方法。方法选取适于进行定位切片的细胞培养皿作为包埋模具,以人腺病毒5型（humanadenovirustype5,Ad5）、A／HN／SWL3／09（H1N1）流感病毒分别感染HEK293细胞和MDCK细胞为模型,当细胞出现病变时,原位包埋细胞,通过修块暴露病变细胞,并针对病变细胞进行超薄切片,以透射电子显微镜观察病变细胞的超薄切片。结果通过定位超薄切片技术成功对目标病变细胞进行切片,病变细胞的切片上可以容易地观察到病毒颗粒。结论建立了一种针对病变细胞的定位超薄切片方法,该方法定位准确、能够快速检测病变细胞,提高了电镜检测效率。     

骨髓活检标本的透射电镜样品制备

在骨髓活检标本的透射电镜样品制备中,对固定与脱钙问题进行了实验研究,结果表明,标本先经固定、再同时固定并脱钙所制备的样品,超薄切片顺利,细胞微细结构优良。