6型肺炎链球菌荚膜多糖-外膜蛋白A结合物的表征及免疫原性*

目的:表征肺炎链球菌荚膜多糖-外膜蛋白A结合物,并研究其免疫原性。方法:采用凝胶色谱及电泳分析鉴定肺炎链球菌荚膜多糖-外膜蛋白A结合物,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平及交叉反应。结果:结合物相对相对分子质量大于游离多糖或外膜蛋白A,结合物中荚膜多糖和外膜蛋白A的质量比为3.89∶1,结合物诱生的特异性IgG,IgG1和IgG2 a抗体滴度均增强,并且与3种血清型肺炎链球菌具有不同程度的交叉反应。结论:证实多糖和蛋白的有效交联,所制备的多糖-蛋白结合物具有良好的免疫原性。     

胡芦巴胶降解工艺研究

目的优选胡芦巴胶的降解方法及工艺,获得质量稳定可控的低分子量多糖。方法以总糖和还原糖含量以及黏度为评价指标,比较酸水解、超声辅助、酶解等工艺,优选最佳条件。并依据紫外、红外及差示扫描热图谱对产物进行初步评价。结果不同降解工艺所得还原糖得率分别为酶解52.41%、超声辅助42.19%、酸解24.59%;以纤维素酶用量10 U·mg-1、50℃处理150 min时,降解效果最佳。重复实验表明该工艺稳定可控,紫外、红外及DSC图谱无明显差异,峰位基本不变。结论酶法降解胡芦巴制备低分子量多糖,方法简便、高效、易于控制。     

竞争ELISA法测定19A型肺炎链球菌发酵物中的多糖含量

 目的  建立检测19A型肺炎链球菌荚膜多糖的竞争ELISA方法,检测细菌发酵过程中多糖的表达量。方法   以19A型肺炎链球菌多糖为包被物,待测多糖为竞争物,建立间接竞争ELISA方法,并验证该方法的准确性和精密度。用建立的方法检测不同培养条件下发酵物中的多糖表达量。 结果   最佳多糖包被质量浓度为10 mg/L,多糖抗血清稀释度为1：4×104。当检测范围为39.06~5 000.00 μg/L时,决定系数为0.995。批内和批间相对标准差分别为5.08%~9.58%和5.28%~12.93%。培养物样品加标回收率为95.84%~110.07%。两种不同培养条件下培养物中的多糖表达量分别为312.17 mg/L和1 056.42 mg/L。 结论  新建的方法能用于19A型肺炎链球菌发酵物中多糖表达量的检测,对于优化培养条件及掌握培养物收获时间具有指导意义。     

CDAP活化多糖制备1型肺炎链球菌荚膜多糖-蛋白结合物原液的稳定性评价

目的 评价以1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化多糖制备的1型肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物原液的稳定性.方法 以CDAP作为活化剂,连续制备3批多糖-蛋白结合物原液,分别放置于(37±2)℃和2～8℃,定期取样检测,并评价其稳定性.结果 多糖-蛋白结合物原液在(37±2)℃条件下保存21 d,2～8℃条件下保存12个月,其主要检测指标均符合质量要求,游离多糖和游离蛋白含量分别低于30.0％和5.0％,分配系数≤0.35的多糖回收率均＞65％.结论 确定了不同条件下1型肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物原液的有效保存时间.     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的 研制23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.方法 大罐培养1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F型肺炎链球菌并进行各型荚膜多糖的纯化,制备23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.结果 经检定各型精制多糖主要质量指标均符合<欧洲药典>(2005年版)要求.结论 已建立起成熟的细菌培养和多糖纯化工艺.     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的 研制23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.方法 大罐培养1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F型肺炎链球菌并进行各型荚膜多糖的纯化,制备23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.结果 经检定各型精制多糖主要质量指标均符合<欧洲药典>(2005年版)要求.结论 已建立起成熟的细菌培养和多糖纯化工艺.     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的  研制23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。方法  大罐培养1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F型肺炎链球菌并进行各型荚膜多糖的纯化,制备23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。 结果  经检定各型精制多糖主要质量指标均符合《欧洲药典》（2005 年版）要求。 结论  已建立起成熟的细菌培养和多糖纯化工艺。     

8型肺炎球菌荚膜多糖分子大小对结合效果及结合物抗原性的影响

目的评价8型肺炎球菌荚膜多糖(capsular polysaccharide ofStreptococcus pneumoniae type 8, CPS8)分子大小对多糖蛋白结合物物理化学(理化)性质的影响, 并对结合效果最优的多糖蛋白结合物进行抗原一致性评价。方法采用高压均质法制备不同分子大小的CPS8;采用1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯活化法, 制备以白喉类毒素无毒突变体CRM197为载体的CPS8蛋白结合物CPS8-CRM197, 并检定其理化性质;采用核磁共振氢谱及核磁共振碳谱分析降解前后多糖糖链结构的变化情况, 同时采用抑制ELISA评价CPS8-CRM197结合物的抗原一致性。结果高压均质法制备的CPS8相对分子质量在69 000～268 000;CPS8相对分子质量>200 000时会过度交联, <100 000时结合效果较差;CPS8在相对分子质量100 000～200 000之间的CPS8-CRM197结合物游离多糖含量均<10%, 游离蛋白含量均<5%。核磁共振氢谱及核磁共振碳谱结果表明, 降解前后多糖糖链结构未发生改变, 特异基团得...     

B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究

目的为提高荚膜多糖抗原得率,降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量,提高荚膜多糖抗原纯度,优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件。方法研究pH值,沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度,乙醇沉淀多糖所需的温度和时间;比较蛋白酶K法、Sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果。结果建立起25%乙醇沉淀去核酸,冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖,55%乙醇沉淀多糖的方法。3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12.4%~14.8%;分配系数(Kav)≤0.5的多糖回收率达90%以上;荚膜多糖得率为0.021~0.027 g/L,抗原纯度较高。结论从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的。     

超声波辅助过氧化氢氧化降解制备相对低分子质量异枝麒麟菜硫酸多糖

目的 制备相对低分子质量异枝麒辟菜硫酸多糖。方法 采用超声波辅助过氧化氢氧化降解异枝麒辟菜硫酸多糖，并测定各多糖样品的相对分子质量及硫酸基、3，6-内醚半乳糖含量。结果 制备了相对分子质量为5000～40000的硫酸多糖，其硫酸基含量均在18．5％以上。结论 该方法适合于制备相对低分子质量高水溶性多糖，后处理简单，并能较好地保持多糖中的硫酸基。