细胞克隆化对CTLL-2细胞纯化的研究

本文介绍CTLL-2细胞在培养中出现不正常,影响检测效果时,利用细胞克隆化方法、克服因重新复苏细胞等条件延误检测结果。提高克隆化纯度细胞,优选细胞最佳期,从而使CTLL细胞检测更敏感,更准确。     

沙培林增强人外周血淋巴细胞抗瘤效应的探讨

为了研究沙培林对人 PBL杀瘤活性的影响 ,探讨沙培林增强人 PBL 杀瘤产应的最适浓度和时间 ,使用不同浓度沙培林分别诱导正常人和肺癌患者 PBL于不同时间杀伤 K56 2和 Raji细胞 ,并以 MTT法测定其对肿瘤细胞的杀伤率。结果显示 ,不同浓度的沙培林增强 PBL杀瘤作用的效应不同 ,在 0 .0 2 KE/ml、72小时时杀瘤率最高 ,浓度过度或过低免疫活化作用均不理想     

赤芍总苷对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

目的：探讨赤芍总苷对ＰＣ１２细胞缺血样损伤模型的保护作用及其机制。方法：采用组织培养法,以肾上腺嗜瘤克隆化细胞株ＰＣ１２细胞为材料,制备缺糖损伤、缺氧损伤、自由基损伤、咖啡因损伤、一氧化氮（ＮＯ）损伤及谷氨酸毒性损伤模型。结果：形态学检查发现赤芍总苷对６种脑缺血样损伤模型中的ＰＣ１２细胞具有明显保护作用,ＭＴＴ染色提示赤芍总苷可显著提高损伤模型中ＰＣ１２细胞的存活数,降低胞浆释放的ＬＤＨ水平。结论：赤芍总苷对上述６种ＰＣ１２细胞缺血损伤均有显著的保护作用,其作用机制可能主要针对损伤后期出现ＮＯ毒性损伤及胞内钙超载等环节。     

Livin在子宫颈鳞状细胞癌癌变中的表达及其意义

目的探讨凋亡抑制基因Livin在宫颈鳞状细胞癌癌变中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法（EliVision TM plus两步法）检测22例正常宫颈鳞状上皮、75例宫颈上皮内瘤变和42例宫颈鳞状细胞癌中Livin的表达情况，分析其在子宫颈鳞状上皮癌变及其进展中的可能意义。结果Livin基因在正常宫颈上皮、CIN和宫颈鳞状细胞癌组的阳性表达率分别为0、50．67％和71．43％。随宫颈癌分化程度降低，Livin表达率呈增高趋势，有淋巴结转移者其阳性表达率高于无淋巴结转移者（P〈0．05）。结论Livin在宫颈鳞状细胞癌癌变过程中可能发挥一定作用。     

双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用研究

目的 观察双氢青蒿素对肺腺癌A549细胞的体外抑瘤效应，并对其抗癌机理作出初步探索。方法 双氢青蒿素对体外培养肺腺癌A549细胞的生长抑制作用采用MTT检测法，细胞凋亡率检测用流式细胞术，并用荧光显微镜及透射电镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果 双氢青蒿素半数抑瘤浓度为230nM，双氢青蒿素作用后细胞出现凋亡形态改变，流式细胞术结果出现凋亡峰。结论 双氢青蒿素有较明显抑瘤效应，其抗癌机理可能与诱导细胞凋亡有关。     

CIK细胞杀瘤实验前后细胞表型与细胞毒性相关性研究

目的为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞在体外杀瘤实验中的细胞表型变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据。方法采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,用CCK-8试剂检测培养14d的CIK细胞对SPC-A-1和BGC-823肿瘤细胞的细胞毒活性,应用流式细胞术测定杀瘤实验前后CD3＋等6种不同表型细胞百分率的变化。结果在与效靶比成正比的条件下,体外实验CIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤率都与CD3＋CD4＋,CD3＋CD4-CD8-细胞比例变化呈正相关（P〈0.05）,都与CD3＋CD25＋,CD3＋CD28＋,CD3＋CD25＋CD28＋细胞比例变化呈负相关（P〈0.05）,对SPC-A-1细胞的杀瘤率与CD3＋CD16＋CD56＋呈正相关（P〈0.05）。结论本研究表明靶细胞抗原在活化细胞中起重要作用,测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。     

RNA干扰沉默Ki67基因对裸鼠肾癌细胞移植瘤生长及凋亡的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术沉默Ki67基因,探讨其对裸鼠人肾癌细胞移植瘤细胞生长及凋亡的影响。方法建立裸鼠人肾癌细胞移植瘤模型,随机分组,于肿瘤内分别注射生理盐水0.2 ml(C组)、pSilencer空质粒20μg/只(P组)、pSilencer-Ki67重组质粒20μg/只(PK组),每隔2天注射一次,共7次。取肿瘤测量体积,免疫组化染色检测Ki67的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 PK组移植瘤体积明显小于C、P组,移植瘤细胞Ki67表达率也明显降低,肿瘤细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论应用RNAi技术沉默Ki67基因可以降低人肾癌细胞裸鼠移植瘤Ki67基因表达,同时引起细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。     

饲养细胞促进人胚脑神经细胞体外扩增的动物实验

目的探讨饲养细胞对人胚脑神经细胞体外培养的作用。方法取妊娠12～16周合法人工流产胎儿大脑皮层,用DMEM培养液制备神经细胞悬液。接种于预先制备的饲养细胞、铺有聚L-赖氨酸和没有经过上述处理的培养板上进行原代人胚脑神经细胞培养。倒置显微镜下观察神经细胞的生长发育、增殖分化、细胞迁移、形态学变化等,免疫组织化学Streptavidin peroxidase(SP)法鉴定神经细胞。结果饲养细胞组神经细胞贴壁时间早于对照组(P<0．05),神经细胞迁移速度、胞体大小、突起长度均高于对照组(P<0．05)。结论饲养细胞具有促进人胚脑神经细胞贴壁、生长以及迁移的作用。     

人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌SW480细胞移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性。方法将处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞接种于10只裸鼠右侧背部皮下,待瘤体生长至直径1～2 cm时处死裸鼠,取出肿瘤组织,将其磨碎并与培养基混合、过滤,滤液与基质胶混合,再将基质胶细胞悬液接种于30只裸鼠右侧背部皮下7,d后处死裸鼠,观察肿瘤大体特征,光镜及电镜下观察肿瘤病理学特征。结果接种SW480细胞的裸鼠于接种后4周有3只成瘤。接种基质胶细胞悬液的裸鼠在接种后7 d有28只成瘤,瘤体形状规则,肿瘤组织呈现典型癌变特征。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,该模型成瘤率高,瘤体形状规则,病理学改变与临床非常相似,为研究人结肠癌干预措施提供了较为理想的动物模型。     

中华芦荟多糖对非瘤细胞辐射后细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的　研究中华芦荟多糖 (AP)对X射线照射后人非瘤细胞株CLiver和 2 93细胞凋亡及细胞凋亡蛋白 p5 3,bax ,Bcl 2 ,Bad ,survivin表达的影响。方法　流式细胞仪检测细胞凋亡 ,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果　X射线照射后 72h ,CLiver细胞可见典型的DNA梯形条带 ,照射前加入AP 2 5或 5 0mg·L-1均能使DNA片段减少 ;AP预处理使CLiver细胞在照后 6h和72h凋亡率分别由 5 0 %和 4 3 0 %降至 2 2 %和 10 9% ,使2 93细胞照后 6h凋亡率由 8 6 %降至 4 0 % ;AP预处理可使CLiver细胞p5 3、Bad、Bax蛋白表达量下调 ,Bcl 2和sur vivin蛋白表达则上调。结论　AP对X射线辐射后非瘤细胞凋亡的抑制作用与对凋亡蛋白表达的调节有关     

重组抗B细胞淋巴瘤嵌合抗体的构建及鉴定

目的:构建重组抗B细胞淋巴瘤嵌合抗体SM03,并进行特性鉴定。方法:分别克隆鼠抗人CD22单抗轻/重链可变区基因VL/VH,构建重组SM03嵌合抗体轻链表达载体(SM03pEkappa)和重链表达载体(SM03pEgamma)。转染细胞经选择培养和克隆化,筛选出高效表达细胞株。采用SDS-PAGE、ELISA、流式细胞仪和免疫组化分析,检测纯化产物的相对分子质量、特异性和亲和力、淋巴瘤细胞毒效应,以及人体组织交叉反应性。结果:构楚了重组人CD22嵌合抗体SM03表达系统,SM03嵌合抗体相对分子质量约1．5×10~5,还原为轻链和重链两条带,相对分子质量分别为2．7×10~4和5．0×10~4。SM03嵌合抗体特异于B细胞CD22抗原,对恶性淋巴瘤细胞具有生长抑制效应。结论:成功构建重组人CD22单克隆抗体,为恶性B细胞淋巴瘤的临床治疗和应用奠定了基础。     

A-NK细胞抗口腔舌鳞状细胞癌的实验研究

目的 观察黏附性自然杀伤(A-NK)细胞体外生长与增殖能力,探讨其治疗裸鼠舌鳞状细胞癌移植瘤的效果及其作用机制,为临床治疗鳞癌提供理论依据。方法 抽取健康人外周血,分选出A-NK细胞和非黏附性自然杀伤(NA-NK)细胞体外培养,镜下观察细胞生长情况。建立裸鼠舌鳞癌皮下移植瘤模型,随机分成3组,每组7只小鼠,分别瘤旁注射生理盐水、A-NK细胞和NA-NK细胞,观察肿瘤体积变化,33 d后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤质量,绘制肿瘤生长曲线。结果 镜下观察,A-NK细胞在第15天达到增殖高峰,NA-NK细胞于第12天达到增殖高峰。培养3周后,A-NK细胞共增加39.33倍,NA-NK细胞仅增加16.33倍。生理盐水组裸鼠口腔舌鳞癌移植瘤体积大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组,3组裸鼠肿瘤体积在组间、时间和交互效应上差异均有统计学意义(P<0.01)。第33天,生理盐水组裸鼠瘤质量大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组(P<0.05)。结论 A-NK细胞和NA-NK细胞均可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,且A-NK的抑瘤作用大于NA-NK细胞。     

细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）是将人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞,又称自然杀伤样T淋巴细胞,具有自然杀伤（NK）细胞的非主要组织相容性复合体（MHC）限制性杀瘤特点和T淋巴细胞强大的抗瘤活性,杀伤活性强,被认为是肿瘤过继免疫治疗的新希望,越来越受到人们的重视。     

月腺大戟水提物诱导P388白血病细胞的凋亡

目的：研究月腺大戟水提物抗R388白血病及对瘤细胞凋亡的作用。方法：以一级清洁DBA／2型小鼠为实验对象，腹腔接种R388白血病细胞，胃饲10,2．5g·L^-1的月腺大戟溶液0．3mL，连续6d，检测外周血白细胞总数和腹腔瘤细胞总数，分离外周血淋巴细胞，观察瘤细胞及凋亡特征，计算细胞凋亡率，并检测bcl-2和bax凋亡相关基因的表达情况。结果：月腺大戟高剂量组外周血白细胞数量显著低于模型对照组（P〈0．01）。月腺大戟低剂量组外周血白细胞虽低于模型对照组，但差异无显著性（P〉0．05）。两剂量组的细胞凋亡率均明显高于模型对照组，两剂量组间的细胞凋亡率差异显著（P〈0．01）。凋亡细胞中可见核质浓缩、数个圆形凋亡小体位于胞浆，或呈半月形、块状靠近胞膜边缘，还可见核质松散呈网状，细胞膜不完整的退化淋巴细胞，表明高剂量明显诱导细胞凋亡（P〈0．01），低剂量虽能诱导细胞凋亡，但差异无显著性（P〉0．05）。结论：高剂量月腺大戟可通过诱导细胞凋亡明显抑制R388白血病瘤细胞的恶性增殖。     

多发性骨髓瘤细胞超微结构的观察

用透射电镜对4例多发性骨髓瘤患者的瘤细胞进行了观察,比较了骨髓瘤细胞与正常浆细胞的异同点。不同患者的瘤细胞形态变化不尽相同,可能导致不同的临床过程。对瘤细胞释放异常球蛋白的形式进行了探讨。     

苦马豆素对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用

目的研究苦马豆素(Sw)对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用。方法采用体外抑瘤试验培养人源性肝癌HHCC细胞的方法,通过MTT法等试验测定其体外抑癌浓度;体内试验采用小鼠的鼠源性肝癌H22移植瘤法,通过对抑瘤率及病理切片的观测,探讨其抑瘤作用。结果3.84μg.ml-1的Sw体外作用72 h后,HHCC细胞的存活率明显下降(P<0.05),其24 h的IC50为0.4μg.ml-1;SW在3、61、2 mg.kg-1时,对肝癌H22实体移植瘤的抑制率分别为13.2%、28.9%、27.3%;对腹水型H22的小鼠生命延长率分别为48.40%、64.16%、58.22%,病理切片显示,用药后肿瘤组织明显出血、坏死和炎症细胞浸润。结论苦马豆素对人源性和鼠源性肝癌生长都有一定的抑制作用。     

体外构成杂交病毒及其可能用于生产特殊病毒或细胞蛋白

本文阐述原核细胞分子克隆化(cloning)技术的近展及在真核细胞中建立类似系统的可能性。从长远来看,上述两种系统有可能大量生产特殊的细胞或病毒蛋白,供治疗或预防接种用。     

人rIL-2对鼠脾细胞杀瘤功能的影响

目的探讨ｒＩＬ－２抗肿瘤机制。方法用“ＬＤＨ释放法”检测经不同处理的脾细胞对其敏感的靶细胞ＹＡＣ－１，不敏感的ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）及耐受的ＬＬＣ肺转移细胞（ＬＬＣＦ１）体外杀伤功能。结果正常脾细胞对３种靶细胞的杀伤能力有明显差异（Ｐ＜０．０１）；经人ｒＩＬ－２体外激活后（ＬＡＫ细胞），杀瘤能力明显增强，并对ＬＬＣ、ＬＬＣＦ１细胞的杀伤作用已无明显差异；对ＬＬＣ血道转移也有明显抑制作用；激活时间对脾细胞杀瘤能力也有影响。结论人ｒＩＬ－２能激活小鼠脾细胞，使其杀瘤尤其是对具有抗ＮＫ细胞的肿瘤杀伤能力明显增强，对肿瘤转移也有疗效。     

无明确诊断意义的宫颈非典型鳞状细胞的临床意义

目的探讨无明确诊断意义的宫颈非典型鳞状细胞对宫颈病变及处理的临床意义。方法对2009年1月至2010年12月间在我院进行宫颈细胞涂片检查的患者资料进行回顾性分析。结果共有86例患者为无明确诊断意义非典型鳞状细胞（ASCUS）,结合阴道镜检查、病理检查、人乳头瘤病毒（HPV）检测,诊断为慢性宫颈炎的45例（52.3％）,诊断为明确官颈上皮内瘤变（CIN）的有41例（47．7％）。HPV检测呈阳性的有49例（57．0％）,在HPV阳性患者中,宫颈上皮内瘤变CINⅡ级及以上的有16例,占阳性患者的32．3％。宫颈癌2例,占4．1％,而阴性患者中无CINⅡ级及以上和癌变病例。结论结合阴道镜、病理检查以及HPV检测有利于对ASC患者的分流管理,对患者具重要的临床意义。     

三氧化二砷诱导实体瘤细胞凋亡的研究进展

近年来国内学者在研究三氧化二砷（As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病的作用机理时，发现其具有诱导白血病细胞凋亡的效应，而且更多的研究证实，这种效应不仅存在于血液肿瘤细胞，还存在于某些实体瘤，如胃癌细胞、胰腺癌细胞、食管癌细胞等，提示三氧化二砷具有一个相对较广的诱导凋亡效应谱。本文综述了近年来国内学者对三氧化二砷诱导某些实体瘤细胞，如肺癌细胞、肝癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、食管癌细胞、胃癌细胞、舌癌细胞、宫颈癌细胞、恶性淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞、神经母细胞瘤细胞凋亡的研究状况。