金雀异黄素对胃癌细胞增殖的影响及对microRNA-27a和FOXO1的调控

目的 探讨人微小RNA-27a(microRNA-27a,miR-27a)及其靶基因FOXO1在胃癌组织、癌旁组织中的变化及其在金雀异黄素抑制胃癌细胞增殖中的作用.方法 利用Real Time PCR方法检测10对胃癌癌旁/癌组织中microRNA-27a及其靶基因FOXO1 mRNA的表达.不同浓度(5、10、20、40 μmol·L-1)的金雀异黄素作用于胃癌细胞SGC 7901 72 h后,用噻唑兰比色法(MTT)检测细胞增殖,并采用Real Time PCR方法检测细胞中miR-27a及其靶基因FOXO1 mRNA的表达.结果 胃癌组织较癌旁组织miR-27a表达升高(1.566±0.206 5),其靶基因FOXO1 mRNA表达降低(0.298±0.156 6).Pearson线性分析表明:miR-27a与FOXO1 mRNA呈负相关(r=-0.701 8).金雀异黄素作用于SGC-7901细胞后,细胞增殖得到了抑制,尤其在20与40μmol·L-1浓度下,细胞抑制率明显降低.不同浓度的金雀异黄素处理72 h后,miR-27a表达与对照组比较明显降低;其靶基因FOXO1mRNA表达水平较对照组增加(均P＜0.05).结论 金雀异黄素可能通过抑制miR-27a表达,促进FOXO1 mR-NA的表达,进而抑制胃癌细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用.     

Celecoxib抑制胃癌发生发展的实验研究

目的:研究胃癌组织与癌旁组织中的环氧化酶-2(COX-2)的表达,COX-2抑制剂Celecoxib对胃癌发展的影响。方法:采用SP免疫组织化学染色检测胃癌组织与癌旁组织中的COX-2表达;细胞计数法检测Celecoxib对胃癌细胞SGC7901和BGC823生长曲线的影响;MTT比色法检测Celecoxib对SGC7901细胞和BGC-823存活率的影响;ELISA法测定Celecoxib对胃癌细胞SGC7901细胞和BGC823分泌释放VEGF蛋白的影响。结果:胃癌组织与癌旁组织中的COX-2表达存在显著差异。Celecoxib对胃癌细胞SGC7901、BGC823均有抑制作用,表现出剂量依赖性和时间依赖性。Celecoxib对胃癌细胞SGC7901、BGC823分泌VEGF均有抑制作用,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,其VEGF分泌量也相应降低。结论:胃癌组织中的COX-2表达高于癌旁组织,Celecoxib可以抑制胃癌组织的发生发展。     

miR-21调控HTN1蛋白对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-21调控HTN1蛋白对胃癌细胞迁移和侵袭能力的作用.方法 定量聚合酶链反应检测胃癌组织和胃癌细胞中miR-21的表达情况,过表达miR-21后蛋白免疫印迹法检测HTN1的表达,双荧光素酶实验检测miR-21和HTN1表达在胃癌细胞中的关系,划痕实验检测过表达miR-21对胃癌细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测过表达miR-21对胃癌细胞侵袭能力的影响.结果 miR-21在胃癌组织及胃癌SGC7901细胞中表达水平均降低(P<0.05).miR-21的表达与病理分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05).过表达miR-21胃癌SGC7901细胞株荧光素酶活性、HTN1基因和蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05).过表达miR-21胃癌SGC7901细胞的迁移速率较对照组减慢,侵袭细胞数目少于对照组(P<0.05).结论 miR-21在胃癌中表达下调,其可以调控HTN1表达影响胃癌细胞迁移和侵袭能力.     

金雀异黄素通过调控miR-27a及其靶基因对卵巢癌细胞SKOV3生长的影响

目的：研究金雀异黄素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用及其可能的机制。方法：收集卵巢癌组织及良性组织,应用RT-PCR法检测miR-27a的表达。用不同浓度的金雀异黄素处理细胞,通过SRB法检测金雀异黄素单用或加入miR-27amimics后对细胞株生长的抑制作用;经RT-PCR和Western blot检测miR-27a及靶基因Sprouty2表达的变化。结果：miR-27a在卵巢癌组织中的表达高于良性组织（P〈0.05）。金雀异黄素可呈浓度和时间依赖的方式抑制卵巢癌细胞SKOV3生长;金雀异黄素浓度依赖性地下调miR-27a,上调Sprouty2的表达,且miR-27amimics能够部分拮抗金雀异黄素抑制细胞生长的作用。结论：金雀异黄素可能通过下调致癌miR-27a的表达,发挥抑制卵巢癌细胞生长的作用。     

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的：观察钠氢交换蛋白1（Na＋／H＋,exchanger 1,NHE1）在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC‐7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应（real time PCR ,RT‐PCR）和免疫印迹（Western Bloting）技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES‐1和胃癌细胞株SGC‐7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5‐（N‐乙基‐N‐异丙基）]阿米洛利[5‐（N‐ethyl‐N‐isopropyl） amiloride （EIPA ）]处理胃癌 SGC‐7901细胞24 h ,MTT法检测其对SGC‐7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和 SGC‐7901胃癌细胞中,其mRNA 和蛋白表达水平均明显增高（P＜0．05）;EIPA10μm／mL ,20μm／mL ,30μm／mL处理,均能抑制胃癌SGC‐7901细胞的过度增殖（P＜0．05）,且呈现良好的剂量‐效应关系。结论 NHE1 mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC‐7901细胞的增殖,N H E1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。     

胃癌多药耐药细胞中FOXC1的表达及其意义

目的探讨FOXC1在胃癌耐药细胞中的表达情况及对胃癌细胞药物敏感性的影响。方法采用q RT-PCR、Western Blot法检测胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR及亲本细胞SGC7901中FOXC1的表达;应用si RNA下调胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR中FOXC1的表达后以MTT法检测上述细胞IC50值的变化。结果 FOXC1在胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR表达显著高于亲本细胞SGC7901,当下调其表达后,SGC7901/ADR、SGC7901/VCR对多种化疗药物的敏感性显著升高。结论 FOXC1参与胃癌多药耐药过程,但其相关分子机制有待进一步深入研究。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞的差异microRNA表达

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达。方法采用miRNAs芯片与qRT-PCR检测DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达。结果 microRNA芯片检测显示,30 mg·L~(-1)DADS处理24 h后,MGC803细胞的差异miRNAs表达中,miR-200b、miR-22、miR-7、miR-143、miR-138、miR-34a、miR-150等7个miRNA表达明显上调,miR-222、miR-21、miR-15b、miR-182、miR-18a等5个miRNA下调。q PCR证实,30 mg·L~(-1)DADS处理MGC803细胞后,miR-200b、miR-22、miR-7、miR-143、miR-138、miR-34a、miR-150等表达较未处理组明显上调(P <0. 05)。且q PCR检测显示,miR-200b与miR-22在MGC-803、BGC-823、MKN-28、SGC-7901、HGC-27等各种人胃癌细胞表达较正常人胃癌GES-1细胞明显下调(P <0. 05)。miR-200b与miR-22在胃癌组织中表达较正常胃组织明显下调(P <0. 05)。结论DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达有7个miRNA明显上调,5个miRNA下调。miR-200b与miR-22在胃癌组织与细胞中表达下调。DADS可上调MGC803细胞miR-200b与miR-22表达。     

胃癌组织中miRNA-200家族的表达

目的探讨胃癌组织及其癌旁组织的miR-200家族及E-cadherin表达量与胃癌进展的关系。方法采用实时荧光定量PCR分析25例胃癌组织中miR-200家族及E-cadherin的表达。结果与癌旁正常组织相比,胃癌组织中miR-200家族有不同程度的表达下调(P<0.05),在TNMⅢ期胃癌组织中miR-200b,miR-200c表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。胃癌组织中的miR-200家族表达与E-cadherin的表达下调呈正相关(P<0.05)。结论胃癌组织中miR-200家族表达下调可能与胃癌侵袭转移有关。     

金雀异黄酮对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及EGFR/PI3K/Akt通路的影响

目的研究金雀异黄酮(genistein)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其机制。方法 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞核凋亡形态学的影响;qRT-PCR法观察金雀异黄酮干预MDAMB-231细胞36 h后,EGFR mRNA表达水平的变化;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3,EGFR、Akt、p-Akt蛋白的变化;Akt激活剂胰岛素(insulin)、金雀异黄酮单独及联合胰岛素干预乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白表达量的变化。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间浓度依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;Hoechst 33258染色结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDAMB-231细胞36 h后细胞核呈现典型凋亡形态学改变;qRTPCR结果显示,经金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,EGFR的mRNA表达水平明显下降(P<0.01);Western blot结果显示金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组对比,Bcl-2、EGFR、Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Akt激活剂胰岛素可以明显激活p-Akt(P<0.01),金雀异黄酮可以明显下调被激活的p-Akt(P<0.01)。结论金雀异黄酮能抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。     

API-2抑制胃癌细胞株SGC7901生长及其机制探讨

目的检测不同浓度API-2作用后磷酸化AKT（p-AKT）在胃癌细胞株SGC7901中的表达及细胞生长情况,并探讨Akt信号转导通路与消化道肿瘤发生发展的机制。方法胃癌细胞株SGC7901传代培养;MTT方法检测不同浓度API-2（0,2,4,6,8μmol/L）对胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用;免疫细胞化学染色和Western blot检测经API-2作用24h后胃癌细胞株SGC7901中p-AKT的表达。结果不同浓度API-2均可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性;不同浓度API-2作用24h后,p-AKT蛋白表达均减少。结论API-2作用Akt信号转导通路的位点,减少p-AKT的表达。Akt信号转导通路与胃癌细胞株SGC7901的发生、发展有关。