鲍曼不动杆菌外膜蛋白CarO的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的鲍曼不动杆菌杆菌外膜蛋白Caro(-binding protein)融合蛋白并制备抗Caro多克隆抗体,为研究临床鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制奠定基础.方法 构建pET23d-CarO重组表达质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His-CarO融合蛋白表达,经镍离子金属螯合树脂纯化后,用纯化出的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western印迹检测多克隆抗体的特异性.结果 在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的His-CarO融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫新西兰大白兔,获得了高特异性的抗CarO抗血清.结论 成功构建pET23d-CarO原核表达质粒,表达并纯化出目标蛋白,制备出高特异性的多克隆抗体.     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3和乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达与鼻咽癌组织放疗敏感的相关性

目的 检测肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)和乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(Maspin)在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中的表达差异,探讨该表达差异与放疗抗拒发生发展的关系。方法 采用TNFAIP3和Maspin多点标记的DIG探针原位杂交方法检测TNFAIP3 mRNA和Maspin mRNA在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中的表达。结果 放疗敏感和放疗抗拒鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度和强阳性表达率分别为27.50%和48.33%(P=0.037),Maspin mRNA中度和强阳性表达率分别为67.50%和46.67%(P=0.040)。放疗抗拒鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关(P=0.005),有远处转移者表达率显著高于无远处转移者(70.00%比37.50%,P=0.018);Maspin mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关(P=0.039),与T分期亦呈正相关(P=0.021),有远处转移者表达率显著高于无远处转移者(65.00%比37.50%,P=0.044)。结论 TNFAIP3可能参与放疗抗拒鼻咽癌的发生和发展,Maspin可能参与放疗抗拒鼻咽癌的侵袭与转移。     

冠心病心绞痛患者血清内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂、不规则趋化因子、单核细胞趋化蛋白-1与心功能、心肌损伤指标相关性分析

目的:探讨冠心病(CHD)心绞痛患者血清内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、不规则趋化因子(Fractalkine)与心功能、心肌损伤指标的相关性。方法:选取150例CHD心绞痛患者作为观察组(不稳定型心绞痛患者64例为A组、稳定型心绞痛患者86例为B组),同期收治的164例非CHD患者为C组。比较三组血清Fractalkine、Vaspin、MCP-1水平、心功能指标及心肌损伤指标,相关性采用Pearson相关性分析。结果:A组血清Vaspin水平低于B组、C组,且与C组比较,B组更低;A组血清Fractalkine、MCP-1水平高于B组、C组,且与C组比较,B组更高(均P<0.05)。A组左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)低于B组、C组,且与C组比较,B组更低;A组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)高于B组、C组,且与C组比较,B组更高(均P<0.05)。A组各心肌损伤指标水平均高于B组、C组,且与C组比较,B组更高(均P<0.05)。Pearson相关性分析：CH...     

卵巢上皮性肿瘤组织中细胞周期蛋白B1、P27和泛素的表达

目的:检测卵巢上皮性肿瘤组织中细胞周期蛋白(Cyclin)B1、P27及泛素的表达.方法:选择卵巢组织标本共102例,其中恶性上皮性卵巢肿瘤组织44例(高分化13例,中分化12例,低分化19例;Ⅰ～Ⅱ期16例,Ⅲ～Ⅳ期28例;有淋巴结转移25例,无淋巴结转移19例)、良性上皮性卵巢肿瘤组织30例、正常卵巢组织28例,应用免疫组织化学SP法检测3种组织中Cyclin B1、P27及泛素的表达情况.结果:正常及良、恶性卵巢肿瘤组织中Cyc-lin B1和泛素的表达水平逐渐升高(P均<0.05),P27表达水平逐渐降低(P均<0.05).恶性卵巢肿瘤组织中Cyc-lin B1与泛素的表达水平成正相关(r=0.574,P<0.001),Cyelin B1与P27的表达成负相关(r=-0.549,P<0.001),P27与泛素的表达成负相关(r=-0.493,P<0.001).恶性卵巢肿瘤组织中Cyclin B1和泛素的表达与临床分期、病理学分级、淋巴结转移均相关(P均<0.05),P27的表达仅与病理学分级相关(P<0.05).结论:Cyclin B1、泛素的高表达及P27的低表达是导致卵巢恶性肿瘤发生发展的机制之一.     

高迁移率族蛋白B1、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子-C在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的研究甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中高迁移率族蛋白B1（high mobility group box1,HMGB1）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）和血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF—C）的表达及与PTC临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法和原位杂交技术联合检测58例PTC、20例甲状腺腺瘤、25例结节性甲状腺肿和10例正常甲状腺组织HMGB1、MMP-9、VEGF—C蛋白和HMGB1 mRNA的表达。结果HMGB1、MMP-9、VEGF-C蛋白和HMGB1 mRNA在PTC中的表达显著高于3种非癌组织（P〈0．05）。HMGB1、MMP-9蛋白和HMGB1 mRNA表达的阳性率与肿瘤的直径及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。VEGF-C蛋白表达的阳性率与淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。HMGB1、MMP-9、VEGF—C蛋白和HMGB1 mRNA表达的阳性率与患者的性别、年龄无关（P〉0．05）。HMGB1、MMP-9和VEGF—C蛋白的表达均呈两两正相关（P〈0．05）,HMGB1蛋白与HMGB1 mRNA的表达也呈正相关（P〈0．05）。结论HMGB1、MMP-9、VEGF—C蛋白和HMGB1 mRNA的表达与PTC的发生发展及浸润、转移有关,检测其表达对判断临床进展及推测预后有一定参考价值。     

肿瘤翻译调控蛋白在人乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人肿瘤翻译控制蛋白(TCTP)在浸润性乳腺癌组织中的表达情况并分析TCTP表达与临床病理特征的关系。方法采用链霉素-生物素过氧化物酶免疫组织化学法检测94例浸润性乳腺癌及正常乳腺组织中TCTP蛋白的表达水平。结果浸润性乳腺癌组织中TCTP蛋白的阳性表达率显著高于癌旁正常乳腺组(P<0.001),TCTP的表达水平与乳腺癌肿瘤直径、临床分期、组织分级以及淋巴结转移情况密切相关(P<0.05),而与乳腺癌患者年龄、不同组织学类型之间的关系无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌肿瘤直径愈大、临床分期愈高,乳腺癌组织中TCTP的表达阳性率也愈高;且有淋巴结转移者的TCTP阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P=0.003)。生存期分析显示,TCTP表达阳性的患者生存时间(52.0±3.7)月明显短于阴性表达的患者(88.6±3.6)月,(P<0.001)。结论 TCTP的异常表达参与了乳腺癌的演进过程,并且是乳腺癌患者预后不良的一个独立指标。     

Proteomic analysis identifies translationally controlled tumor protein as a mediator of phosphatase of regenerating liver-3-promoted proliferation, migration and invasion in human colon cancer cells

Background  Considerable evidence suggests that phosphatase of regenerating liver-3 (PRL-3) plays multiple roles in cancer metastasis; however, the molecular mechanisms remain largely unknown. The aim of this study was to identify proteins associated with PRL-3-promoted colon cancer metastasis, by comparative proteomic analysis.

Methods  Proteomes of human colon cancer LoVo cells transfected with PRL-3 gene (LoVo-PRL-3) or empty vector PAcGFP-C3 (LoVo-control) were compared using 2D gel electrophoresis. Proteins that varied significantly in concentration were selected and identified using mass spectrometry. Expression of translationally controlled tumor protein (TCTP) mRNA and protein in LoVo-PRL-3 and LoVo-control cells was detected by real-time PCR and Western blotting. Small interfering RNA (siRNA) targeting TCTP was used for silencing TCTP expression in LoVo-PRL-3 cells. Functional significance of TCTP in PRL-3-promoted colon cancer cell proliferation, migration and invasion was investigated by Cell Counting Kit-8 assay and transwell chamber.

Results  Seventeen proteins displaying significant and reproducible differences between LoVo-PRL-3 and LoVo-control cells were identified. Ten proteins were upregulated and seven were downregulated in LoVo-PRL-3 cells when compared with LoVo-control cells. Eight identified proteins are associated with distinct steps of tumor metastasis: ubiquitin-like protein ISG15, interleukin-18, TCTP, serpin B5, annexin A3, macrophage-capping protein, ATP-dependent RNA helicase DDX3X, and cathepsin D. Real-time PCR and Western blotting results showed that both TCTP mRNA and protein were significantly increased in LoVo-PRL-3 cells compared to LoVo-control cells. Transfection with TCTP siRNA significantly reduced the expression of both mRNA and protein levels of TCTP in LoVo-PRL-3 cells. Knockdown of TCTP by siRNA inhibited PRL-3-promoted proliferation, migration and invasion of LoVo-PRL-3 cells.

Conclusion  Our results imply that TCTP might be a mediator of PRL-3-promoted proliferation, migration and invasion of human colon cancer cells.

     

过氧化物酶1,6和GFAP在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及临床意义

目的确定星形胶质细胞瘤中过氧化物酶1(Prx1)、过氧化物酶6(Prx6)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,探讨其表达水平与星形胶质细胞瘤恶性程度的关系。方法采用Western blot、RT-PCR和免疫组化检测52例星形胶质细胞瘤(Ⅱ级23例、Ⅲ级15例、Ⅳ级14例)和12例正常脑组织标本中Prx1、Prx6和GFAP的表达情况。结果 Prx1、Prx6在正常脑组织、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平逐渐升高,具有统计学意义(P<0.05);GFAP在Ⅲ、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅱ级星形胶质细胞瘤和正常脑组织(P<0.05)。结论 Prx1、Prx6和GFAP可能是临床评价星形胶质细胞瘤恶性程度和侵袭性的潜在生物标志物,可作为星形胶质细胞瘤生物治疗的潜在靶分子。     

胃癌患者外周血Serpin B1水平及其基因多态性检测的意义

目的 检测胃癌患者外周血中丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(Serpin B1)基因H67Q位点多态性的情况及Serpin B1蛋白的水平,并对其关系进行探讨.方法 选取2013年1月至2015年12月在本院就诊并确诊为胃癌的350例患者为病例组,同期健康体检者350例为对照组.留取外周血,应用PCR扩增联合DNA直接测序法检测Serpin B1基因H67Q位点在2组中的分布情况,同时检测Serpin B1蛋白的水平.将病例组和对照组按基因型再次分组,观察各基因型与Serpin B1浓度的关系.Logistic回归分析探讨Serpin B1基因H67Q位点多态性与胃癌的关系.结果 Serpin B1基因H67Q位点存在T和G2种等位基因,共发现3种基因型:野生型纯合子(TT)、杂合突变型(GT)、纯合突变型(GG).病例组GG、GT基因型频率及G等位基因均显著高于对照组(P＜0.05).病例组外周血Serpin B1浓度水平明显高于对照组(P＜0.05).按基因型分组后,病例组和对照组中GG基因型者外周血Serpin B1浓度水平明显高于GT、TT基因型者,GT基因型者外周血Serpin B1浓度高于TT基因型(P＜0.05).Logistic分析结果显示,GG基因型及G等位基因是胃癌的独立危险因素(OR值为9.485,95％CI为2.169 ～ 44.283,P=0.006;OR值为5.105,95％ CI为1.847～13.360,P=0.014).结论 Serpin B1基因H67Q位点多态性与胃癌有关.     

铜绿假单胞菌脓毒症大鼠肝组织中TLR4／SIGIRR的表达与静脉血中IL-6和IL-12水平的变化

目的探讨铜绿假单胞菌（P—seudomonasaeruginosa,PA）脓毒症肝组织中单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白（SingleimmunoglobinIL-1receptorrelatedprotein,SIGIRR）表达对TLR4的表达及IL-6、IL-12合成的影响。方法将60只SD级大鼠随机分为两组,对照组lO只不做处理,试验组50只再细分为5组,分别在腹腔内注射PA,构建PA脓毒症模型;对照组、试验组分别于注射PA1h、2h、4h、8h、12h后无菌取肝脏,下腔静脉无菌抽血。采用实时荧光定量PCR仪检测肝组织中TLR4、SIGIRR的mRNA相对含量;采用双抗夹心ELISA法检测大鼠血清中IL-6、IL-12浓度。结果试验组TLR4表达均大于对照组（P〈0．05）,但试验组各组间TLR4表达差异无统计学意义（P〉0．05）;1h组、2h组、4h组IL-6、IL-12水平均低于对照组（P〈0．05）,8h组、12h组IL-6、IL-12水平均高于对照组（P〈0．05）,组间差异比较具有统计学意义（P〈0．05）。结论SIGIRR的上调表达可抑制大鼠血清IL-6、IL—12的产生,但对TLR4表达无影响,提示SIGIRR对TLR4信号通路的负调节作用不是通过直接抑制TLR4表达实现的。     

ET-1、MMP-3、TIMP-1在人肾小球中的表达及意义

目的　研究内皮素 1(Endothelin 1,ET 1)、基质金属蛋白酶 3 (Matrixmetalloprotevnase 3 ,MMP 3 )、金属蛋白酶组织抑制剂 1(Tissueinhibitorofmelalloproteinase ,TIMP 1)在人肾小球中的表达变化及意义。方法　应用免疫组化技术检测3 2例原发性系膜增生性肾炎患者及 5例对照组肾小球中ET 1、MMP 3、TIMP 1、LN蛋白的表达。结果　在中、重度系膜增生性肾炎患者的肾小球中 ,ET 1、MMP 3、TIMP 1、LN蛋白表达增强 ,MMP 3 /TIMP 1比值下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;ET 1的表达与MMP 3 /TIMP 1比值负相关 (r =-0 70 3 ,P <0 0 1) ,与LN表达正相关 (r =0 880 ,P <0 0 1) ;MMP 3 /TIMP 1比值与LN表达负相关 (r=-0 62 3 ,P <0 0 1)。结论　ET 1可能是肾小球MMP 3 /TIMP 1下降的原因之一 ,这与肾小球细胞外基质 (Exlracellularmatrix ,ECM)降解受抑密切相关。     

IL-6、HMGB1、S100B及NSE与新生儿窒息后脑损伤的相关性分析

目的 研究白细胞介素-6（IL-6）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、星形胶质原性蛋白（S100B）及神经元特异性烯醇化酶（NSE）与新生儿窒息（NA）后脑损伤的相关性。方法 回顾性分析2017年2月—2019年2月三亚市人民医院收治的符合入选标准的120例NA患儿的病历资料,按照不同窒息程度分成轻度窒息组92例与重度窒息组28例,另选取同期于该院分娩的足月新生儿100例作为对照组。比较各组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平。此外,对120例NA患儿进行头颅CT检查,按照头颅CT检查结果分成头颅CT正常组57例与头颅CT异常组63例,比较两组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平,采用Spearman法分析血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平与NA后脑损伤的相关性。对所有NA患儿均进行为期1年的随访,将其按照随访结果分成预后良好组88例与预后不良组32例,比较两组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平。结果 对照组、轻度窒息组、重度窒息组新生儿血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平整体比较,差异有统计学意义（P <0.05）,轻度窒息组、重度窒息组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平均高于对照组（P <0.05）,且重度窒息组高于轻度窒息组（P <0.05）。NA患儿头颅CT异常组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平高于头颅CT正常组（P <0.05）。Spearman相关性分析显示：血清IL-6、HMGB1、S100B、NSE水平与NA后脑损伤均呈正相关（r_s =0.428、0.442、0.385和0.430,均P <0.05）。NA后脑损伤预后不良组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平均高于预后良好组（P <0.05）。结论 血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平与NA程度及NA后脑损伤密切相关,可能作为NA患儿病情评估及预后预测的辅助指标。     

抗坏血酸对糖尿病大鼠肾脏TIMP-1mRNA和蛋白表达的影响

目的 :探讨抗坏血酸对糖尿病大鼠肾脏金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP - 1)mRNA和蛋白表达的影响。方法 :实验大鼠随机分为 3组 :对照组 (C组 )、糖尿病组 (D组 )、糖尿病 +抗坏血酸 90mg/kg/d(DT组 ) ,实验第 9周检测血浆、肾脏抗坏血酸水平和醛糖还原酶 (AR)活性 ,同时用原位杂交和Western -blot检测TIMP - 1mRNA和蛋白表达水平。结果 :与正常对照组比较 ,糖尿病组血浆、肾脏抗坏血酸水平显著下降 (P <0 .0 5 ) ,肾脏AR活性明显升高 ,TIMP - 1mRNA和蛋白表达明显增加 (P均 <0 .0 1)。抗坏血酸治疗组血浆、肾脏抗坏血酸水平和正常对照组比较差异无显著性 ,AR活性、TIMP -1mRNA和蛋白表达水平较糖尿病组明显降低 (P均 <0 .0 1)。结论 :补充抗坏血酸可显著增加糖尿病大鼠血浆、肾脏抗坏血酸水平 ,明显降低糖尿病大鼠肾皮质AR活性、TIMP - 1mRNA和蛋白表达水平 ;多元醇途径可能部分介导了糠尿病大鼠肾脏TIMP - 1mRNA和蛋白表达。     

帕金森病患者血清一氧化氮、胰岛素样生长因子1及S-100B蛋白水平关系的研究

目的观察帕金森病患者血清中一氧化氮(NO)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和S-100B蛋白的水平及关系。方法选取112例帕金森病患者作为观察组,依病变程度分为轻度37例、中度45例,重度30例。选择体检证实为健康的成年人70例作为健康对照组,检测2组血清NO、IGF-1和S-100 B的水平,并进行比较。结果观察组血清NO、S-100B水平均明显高于健康对照组[分别为(5.92±1.45)μmol/L vs.(3.80±1.65)μmol/L,(80.57±16.20)ng/L vs.(67.54±22.41)ng/L],而IGF-1水平显著低于健康对照组[(138.14±35.46)mg/ml vs.(168.73±39.75)mg/ml]。观察组随着病变程度加重,NO、S-100B水平升高、IGF-1水平下降,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组NO、IGF-1和S-100B水平未见相关性。结论帕金森病患者血清中NO、IGF-1和S-100 B的异常表达对促进患者病程的进展可能有一定作用。     

脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4基因的表达及相关性

目的 探讨脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达变化及其相互关系.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制成脓毒症大鼠模型.将50只Wistar大鼠分成正常对照组(10只)和CLP组(40只),CLP组分别于CLP术后6、12、18、24 h各处死10只大鼠,应用实时聚合酶链反应检测肝脏组织HMGB1和TLR4 mRNA的表达.结果 正常对照组大鼠肝脏组织存在微量的HMGB1、TLR4 mRNA表达.脓毒症组大鼠CLP术后各时间点的HMGB1、TLR4 mRNA表达均显著高于正常对照组(P值均<0.01),CPL术后6 h HMGB1、TLR4 mRNA表达开始升高,至12 h达峰值,18 h后开始下降,各时间点间HMGB1、TLR4 mRNA表达的差异均有统计学意义(P值均<0.05).直线相关分析表明,脓毒症大鼠肝脏组织HMGB1 mRNA与TLR4 mRNA的表达呈正相关(r=0.90,P=0.04).结论 HMGB1可能通过TLR4进一步激活炎性细胞,引起下游炎性因子释放的瀑布效应.