巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系CAII、NFAT2mRNA表达的影响

目的 探讨不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中碳酸酐酶II(CAII)、活化T细胞核因子(NFAT2)mRNA表达的影响。方法 取24h内新生SD乳鼠头盖骨分离培养成骨细胞,取5周龄SD大鼠四肢长骨骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞。采用ALP染色鉴定成骨细胞,TRAP染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜等扫描鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置高、中、低3种浓度巴戟天含药血清组和对照组,干预3d后提取各组总RNA,应用Real Time PCR(RT-PCR)方法测定各组CAII、NFAT2mRNA表达并进行统计学分析。结果 不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系CAII、NFAT2mRNA的表达均有抑制作用,且其抑制作用表现出一定的浓度依赖性;各组间差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系CAII、NFAT2mRNA表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性。     

用含药血清方法观察补肾益精方对破骨细胞功能的影响

目的探讨补肾益精方含药血清的制备条件及其对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响。方法取体重270±20g的SD大鼠,雌雄各半,每组10只,同等条件下制备补肾益精方含药血清和对照血清,分别观察不同采血时间、不同喂药时间、不同灌胃剂量和血清添加量对骨吸收陷窝数量的影响。结果末次灌胃后1h采血组的骨吸收陷窝数明显少于其他各组(P<0.05);灌胃1d和3d、7d组比较其含药血清的药效无差异,而与对照血清差异显著;随着灌胃剂量和含药血清添加量的提高,其骨吸收陷窝数明显减少。结论补肾益精方含药血清对破骨细胞骨吸收功能具有明显的抑制作用;补肾益精方用于破骨细胞药效观察的大鼠含药血清制备条件为等效剂量连续两次(间隔2h)灌胃,末次灌胃后1h采血,其血清添加浓度为30%。     

牛源乳铁蛋白对体外培养大鼠成骨细胞RANKL和OPG mRNA表达的影响

目的观察牛源乳铁蛋白对成骨细胞核因子κβ受体活化受体（RANKL）／护骨素（OPG）mRNA表达的影响。方法体外分离培养新生大鼠成骨细胞，分别观察不同浓度乳铁蛋白处理不同时间对成骨细胞RANKL／OPGmRNA表达的影响。采用半定量RT-PCR方法检测RANKL／OPGmRNA。结果乳铁蛋白呈时间和剂量依赖性地刺激大鼠成骨细胞OPGmRNA的表达，而抑制RANKLmRNA的表达，使RANKL／OPG值降低。结论乳铁蛋白通过调节成骨细胞RANKL／OPG的基因表达，从而抑制破骨细胞介导的骨吸收。     

右归饮对激素性股骨头坏死大鼠体外诱导培养成骨细胞作用的研究

目的:在右归饮对体外正常大鼠成骨细胞的增殖和分化作用研究基础上,进一步观察右归饮对激素性股骨头坏死大鼠体外诱导培育成骨细胞的增殖和分化以及基因表达的影响。方法:取体重为100～120g雄性SD大鼠20只,臀肌注射醋酸强的松龙49mg/kg·d,连用6d(造模),7d后处死,无菌条件下取造模大鼠骨髓基质细胞,诱导培养成骨细胞,然后随机分为4组:高、中、低浓度右归饮含药血清组(R1、R2、R3)和对照组(R4),分别添加高、中、低浓度右归饮含药血清及对照血清,继续培养72h后,进行成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性、骨保护素(OPG)和破骨细胞分化因子(RANKL)表达水平检测(实时荧光定量PCR检测),并进行统计学分析。结果:高、中浓度右归饮含药血清组(R1、R2)与对照组(R4)相比,成骨细胞增殖率显著升高(P0.01),碱性磷酸酶活性显著升高(P0.01),成骨细胞OPGmRNA的相对表达量显著升高(P0.01),且与浓度剂量呈一定的正相关;成骨细胞RANKLmRNA显著降低(P0.01)。低浓度右归饮含药血清组(R3)与对照组(R4)相比,成骨细胞增殖率、碱性磷酸酶活性以及OPG、RANKLmRNA相对表达量无统计学差异。结论:高、中浓度的右归饮含药血清对体外培养的SINFH大鼠成骨细胞的增殖和分化具有明显的促进作用,并可提高成骨细胞OPGmRNA的相对表达量而对其RANKLmRNA有抑制作用。右归饮含药血清对体外诱导培养成骨细胞的作用与剂量有一定相关性,在一定的浓度范围内促进成骨细胞的分化、增殖。     

巴戟天含药血清对原代破骨细胞RANK和CA II mRNA表达的影响

目的 观察巴戟天含药血清对原代破骨细胞RANK和CA II mRNA表达的影响.方法 取SPF级大鼠48只,随机分成正常组12只和去势组36只,正常组切去卵巢周围部分脂肪,去势组切除卵巢.3个月后测定两组雌激素水平并将去势组随机分为骨质疏松组,骨质疏松+雌激素组,骨质疏松+巴戟天含药血清组.采用机械分离法提取各组的破骨细胞,培养5 d后,TRAP染色及电镜扫描骨片等的方法鉴定破骨细胞.最后用雌激素或巴戟天含药血清干预3 d,以RT-PCR法检测各组RANK和CAIImRNA表达.采用单因素方差分析或多样本均数两两比较进行统计分析.结果 去势组后大鼠雌激素水平低于正常组(P＜0.01).骨质疏松组破骨细胞RANK和CAII表达均高于正常组(P＜0.05,P＜0.05);巴戟天含药血清可降低骨质疏松后大鼠破骨细胞RANK和CA II的表达(P＜0.05,P＜0.05).结论 巴戟天和雌激素均可降低骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达,从而达到抑制骨质疏松的作用.     

共育体系中成骨细胞和破骨细胞生物学特性观察

目的建立成骨细胞和破骨细胞的体外共育体系,观察在此体系中成骨细胞和破骨细胞生物学特性的变化,探讨成骨细胞和破骨细胞间的相互作用。方法取髂骨松质骨,Ⅱ型胶原酶消化,分次获得成骨细胞和破骨细胞。建立培养上清相通但二者互不接触的成骨细胞-破骨细胞共育模型。以细胞增殖(MTT法)、碱性磷酸酶(ALP)活性代表成骨细胞的成骨活性,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性、骨吸收陷窝面积代表破骨细胞的破骨能力,检测共育对成骨细胞和破骨细胞生物学特性的影响。结果成骨细胞呈饱满的梭形,ALP染色阳性;破骨细胞呈多核,TRAP染色阳性,可以吸收骨质形成骨陷窝。当成骨细胞与破骨细胞共育后,其MTT法OD值(0.60±0.08)较单独培养时(0.36±0.03)明显提高(P=0.000);其ALP活性(23.37±2.48)u/mg较单独培养时(18.33±0.34)u/mg明显提高(P=0.000)。破骨细胞与成骨细胞共育后,形成骨吸收陷窝的平均面积犤(6.55±0.34)×10-2犦μm2较单独培养时犤(5.15±0.17)×10-2犦μm2明显增大(P=0.000)。结论共育体系中成骨细胞和破骨细胞的功能相互促进,为骨组织代谢的体外研究提供了可靠的模型。     

建立成骨与破骨细胞共育体系的一种方法

目的：建立成骨细胞和破骨细胞共育的体外模型，为研究骨生理和病理提供新的方法。方法：从胎鼠和4周鼠中分离成骨和破骨细胞，并按照10：1、100：1的比例混合培养，应用碱性磷酸酶(AKP)、抗酒石酸(TRAP)、甲苯胺蓝染色法，鉴定成骨及破骨细胞，并测量碱性磷酸酶的含量，从而建立一个较稳定的共育体系。结果：破骨细胞和成骨细胞达到了相互接触培养，且随着破骨细胞数量的不同，碱性磷酸酶的含量会有不同的变化。结论：该模型可用骨形成和吸收代谢的相关研究。     

共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响（R68)

目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/ml)处理组。主要观察指标:①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝,②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG相对浓度分别为7.410±1.738、8.844±1.981、22.4272±2.058、2.445±0.2517(P0.05),对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞(OB-PBMs)共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收,CPN10通过对成骨细胞的作用,致其分泌的OPG/RANKL比例失调,并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。     

林蛙油含药血清对成骨细胞和破骨细胞增殖和活性的影响

目的探讨林蛙油含药血清对成骨细胞(Osteoblast,OB)增殖、分化和矿化能力的影响,及其对破骨细胞(Osteoclast,OC)分化的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代OB中加入不同浓度的林蛙油含药血清进行干预。MTT法观察林蛙油含药血清对OB增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察林蛙油含药血清对OB碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,茜素红(alizarin red S,ARS)进行矿化结节染色并计算面积以观察林蛙油含药血清对OB矿化能力的影响。RANKL诱导前破骨细胞株RAW264.7细胞6d后,加入林蛙油含药血清,用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞。结果林蛙油含药血清可使体外培养OB的增殖率明显提高(P0.01),并可明显促进OB的矿化能力(P0.05),但其对OB的ALP活性影响作用不明显(P0.05)。此外,林蛙油含药血清对RANKL诱导体外培养的破骨前体细胞RAW264.7形成的成熟多核破骨细胞有抑制作用,表现为TRAP(+)成熟多核破骨细胞数明显减少(P0.01)。结论林蛙油含药血清可促进OB的增殖能力和矿化能力,并可抑制破骨细胞的形成。     

健骨颗粒含药血清对体外破骨细胞CA Ⅱ、CK、MMP- 9mRNA表达的影响

目的 通过观察补肾健脾中药健骨颗粒含药血清对体外破骨细胞CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达的影响,进一步揭示健骨颗粒有效防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法 用M-CSF和RANKL诱导破骨前体细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞,alamar Blue法检测破骨细胞血清干预的最佳浓度,于破骨细胞培养第7天开始干预,分别用25%浓度的健骨颗粒含药血清和25%浓度的生理盐水血清干预,培养48小时后抽提总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR)、实时荧光定量SYBR GREEN法检测CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,计算分析骨陷窝数和骨吸收面积,同时运用氧化显色法检测破骨细胞培养液中TRAP含量,ELISA法检测骨磨片培养液中CTX含量。结果 健骨颗粒含药血清组破骨细胞CA Ⅱ、 CK、MMP-9mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组（P <0. 05),含药血清组骨磨片的骨陷窝数和骨吸收面积以及TRAP和 CTx含量均低于生理盐水血清组（P<0.05)。结论 健骨颗粒能有效抑制破骨细胞CAII、CK、MMP-9mRNA表达,降低破骨细胞功能活性,抑制破骨细胞对骨基质的分解,从而抑制骨吸收。     

Rheoencephalography and the study of the pulsation of the cervical vascular network in the diagnosis of goiter and neck and mediastinal tumors

The authors have applied rheography of the brain and sphygmography of the vessels of the neck and mediastinum for the diagnosis of compression of the neck vessels and organs in goiter and tumors of retrosternal and deep cervical localization. The methods allow to recognize stenosing of the vessels in early stages and facilitate the diagnosis of these conditions.     

Ocular immunopathological characteristics and the involvement of the platelet-aggregation factor and the anti-PAF at the level of the eye

This lecture tries to systematize the data about PAF (platelet activating factor) complex implications in the different ocular immune responses, and about the therapeutical results of PAF antagonists ?n experimental and clinical inflammatory conditions.     

Relation between the structure of the annulus fibrosus and the function and failure of the intervertebral disc

A simple model is presented that explains the observed function and failure of the intervertebral disc in compression, torsion, and bending; this model is based upon the observed arrangement of collagenous fibers in the annulus fibrosus. The fibers are considered to have the same mechanical properties as tendon; thus the stresses required to produce a given deformation and which irreversibly damage the fibers can be predicted. Predictions of the mechanical behavior of the disc are in good agreement with published results for compression and torsion; no comparable experiments have been performed for bending. It is further predicted that torsion and bending are likely to cause annular failure and protrusion. Failure is likely to occur posteriorly because of the effect of forward bending and because in the flattened and reentrant discs of the lumbar spine, torsional stress is concentrated at the points of maximum curvature. The structure of the disc tends to protect the collagenous fibers in forward bending and torsion. Compression is predicted to cause end-plate fracture rather than annular failure.