怀地黄中地黄苷A,地黄苷D及益母草苷含量快速分析方法的建立

目的:建立一种快速测定怀地黄中地黄苷A,地黄苷D,益母草苷含量的方法。方法:应用近红外光谱技术(near infrared reflectance spectroscopy,NIRS)测得85-5,北京1号,白状元,沁怀,白选,沁怀郑共6个品种108份怀地黄样品的近红外光谱图,结合高效液相法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定的样品中地黄苷A,地黄苷D,益母草苷的含量,并利用TQ软件将光谱信息与测得含量相关联,采用偏最小二乘法(partial least squares,PLS)建立怀地黄中地黄苷A,地黄苷D,益母草苷的定量分析模型。结果:模型的内部交叉验证决定系数(R2)分别为0.924 67,0.934 96,0.951 54,校正均方差(root mean square error of calibration,RMSEC)分别为0.016 6,0.015 9,0.022 8,验证均方差(root mean square error of prediction,RMSEP)分别为0.017 00,0.007 86,0.012 50,交叉验证均方差(root mean square error of cross validation,RMSECV)分别为0.032 13,0.030 36,0.069 22,以及性能指数(performance index,PI)分别为92.5,82.7,83.1;配对样本t检验显示NIR模型预测值与HPLC测得参考值的P分别为0.422,0.549,0.131,均0.05,表明两组数据无显著性差异。结论:该方法准确、快速、绿色,可用于怀地黄中地黄苷A,地黄苷D,益母草苷的定量分析。     

不同产地地黄中地黄苷A的含量比较

目的测定不同产地地黄中地黄苷A的含量。方法薄层扫描法,展开剂为氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5),显色剂为10%硫酸-乙醇,扫描波长为407。结果Y=176.42X 52.8,r=0.996,线性范围:0.5~2.5μg。平均回收率为99.33%,RSD=2.62%。结论河南温县、博爱、武陟产地黄中黄苷A的含量较高,与梓醇含量正相关。     

种苗质量对怀地黄生长及低聚糖含量的影响

目的:研究种苗质量对怀地黄生长发育以及收获期经济产量和质量的影响,为怀地黄规范化种植提供依据。方法:通过怀地黄主产区种苗质量调查,了解当前地黄种苗质量现状;进行不同等级种苗的田间小区栽培试验,检测怀地黄栽培不同阶段干物质积累及低聚糖含量,并统计收获期经济产量。结果:怀地黄主产区农民选种随意性很强,对种苗质量关注不够。优质怀地黄种苗能明显提高田间出苗率,促进地黄前期快速生长,最终增加收获期经济产量。在收获期,85-5品种一级和二级种苗经济产量分别比三级苗高63%,50%,而北京1号一级和二级种苗经济产量分别比三级苗高50%,47%。结论:选种时以直径>1.5 cm的一二级种苗为最佳。     

地黄不同炮制品的梓醇含量研究

目的：探讨地黄不同炮制品的梓醇含量。方法：采用LC-2010A型高效液相色谱仪,色谱柱：RP-C18;流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（2：98）;检测波长为210 nm,对鲜地黄、干地黄、熟地黄中梓醇的含量进行研究。结果：鲜地黄中梓醇含量较高,但随着炮制的变化其含量也在产生变化。其性、味,归经,功能主治的变化与梓醇含量的变化有一定的关系。结论：地黄不同炮制品的梓醇含量对研究地黄不同炮制品的药性和功效提供一定的理论基础。     

真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及次生代谢产物合成的影响

目的:研究分离自地黄不同部位的内生真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及其次生代谢产物含量的影响,初步探究其促生作用。方法:以2株Alternaria属内生真菌A.alternata,Penicillium属内生真菌P.axalicum制备不同类型的诱导子,发酵液滤液和菌丝降解液,分别考察其对地黄组培苗株高、鲜重、叶绿素含量、梓醇及毛蕊花糖苷含量的影响,并用SPSS 17.0进行数据分析。高效液相色谱法测定梓醇及毛蕊花糖苷含量。结果:不同菌株制备的真菌诱导子促生作用差异明显,以Penicillium属内生真菌P.axalicum制备的真菌诱导子对怀地黄组培苗促生效果较佳,且以其发酵液滤液促生效果最好。在该培养条件下,怀地黄组培苗株高、鲜重、根长、总叶绿素、梓醇及毛蕊花糖苷含量增加率分别为27.80%,29.49%,22.08%,15.05%,35.98%和68.18%。结论:内生真菌诱导子可促进怀地黄组培苗生长,并提高其次生代谢产物含量,在今后地黄内生真菌应用中可做进一步探究。     

地黄的质量研究

对不同产地的地黄作了梓醇、水醇浸出物,灰分、酸不溶性灰分,总还原糖及无机元素的含量测定。结果表明:道地药材怀地黄的质量优于其它产地的地黄。商品药材地黄的质量与产地及贮存时间等关系密切。     

高效液相色谱法测定地黄中腺苷含量

目的:建立地黄中腺苷含量的测定方法,测定不同品种地黄中腺苷的含量。方法:采用高效液相色谱法测定地黄中腺苷含量。以KYWG-C₁₈为固定相,6%乙腈为流动相,检测波长为260nm。结果:腺苷在0.002mg/ml～0.01mg/ml线性良好。回归方程为Y=1.7742×10-4+8.9021×10-7X,r=0.9995。平均回收率为94.1%。RSD=1.86%(n=5)。结论:本法简便、快速、结果可靠。     

怀地黄新品种选育研究

目的:选育综合性状优良的怀地黄新品种。方法:通过85-5×北京1号杂交种子的太空诱变,并经系统选育筛选出综合性状优良的地黄新品种怀地81,对新品种与主栽品种在单株鲜质量、指标成分含量、抗病性、叶绿素和花青素含量及光合特性等方面进行了测定分析。结果:(1)单株鲜质量怀地81高于5个主栽品种且差异达到极显著水平,产量怀地81(82 353 kg/hm2)高于5个主栽品种29.7%以上;(2)不同品种地黄中梓醇的含量依次是:北京3号(1.601%)沁怀(1.588%)怀地81(1.314%)金九(1.277%)85-5(1.073%)怀丰(0.924%),怀地81梓醇含量居中,与金九差异不显著,与其他品种之间差异达到极显著水平;不同品种地黄中毛蕊花糖苷的含量依次是:怀地81(0.096%)沁怀(0.069%)85-5(0.047%)北京3号(0.035%)怀丰(0.023%)金九(0.022%),怀地81高于5个主栽品种,且差异达到极显著水平;(3)怀地81高抗斑枯病,中抗轮纹病,对叶类病害抗性较高;(4)怀地81叶绿素含量较主栽品种高,花青素含量适中,光合速率较主栽品种高。结论:新品种怀地81具有优良的综合性状,适宜作为怀地黄新品种推广。     

鲜地黄及不同干燥条件下的生地黄中麦角甾甙的含量测定

采用高效液相色谱法对地黄鲜品及其不同干燥条件下的样品中麦角甾甙进行了含量测定。结果表明，鲜地黄中麦角甾甙的含量在0.1％以上，而干燥后的生地黄中其含量明显降低。     

HPLC法测定地黄中地黄苷D含量

目的　建立地黄中地黄苷 D的 HPLC测定方法 ,提出地黄苷 D的含量限度。方法　 Hypersil C1 8分析柱(2 5 0 mm× 4.6mm,5μm) ,流动相为乙腈 -水 (4∶ 96) ,流速为 1m L /m in,柱温为室温 ,检测波长为 2 0 5 nm。结果　地黄苷 D回收率为 10 0 .6% ,RSD为 2 .1% ,8个产地的 16份完整药材中地黄苷 D的含量为 0 .13 7%～ 0 .691%。结论　方法快速、简便、准确 ,可用于地黄质量控制 ,建议地黄苷 D的含量应不低于 0 .15 %。     

鲜地黄中环烯醚萜甙的分离鉴定

目的:分离鉴定鲜地黄化学成分.方法:反复硅胶柱层析色谱分离,理化性质和光谱分析鉴定化合物结构.结果:从鲜地黄乙醇提取物中,分离鉴定了8个化合物,分别为地黄甙A;地黄甙D;地黄甙E;梓醇等.     

地黄中地黄苷A的含量测定

地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosaLibosch.的干燥块茎,具清热凉血、养阴、生津之功效.地黄苷A为环烯醚萜双糖苷,实际研究中发现其较梓醇(环烯醚萜单糖苷)稳定,且地黄苷A的量亦不低于梓醇.本实验采用薄层扫描法测定了地黄中地黄苷A含量,为控制地黄质量提供了另一可行测定方式.     

HPLC法测定地黄中地黄苷含量

目的　建立地黄中地黄苷D的HPLC测定方法,提出地黄苷D的含量限度。方法HypersilC18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(4:96),流速为1mL/min,柱温为室温,检测波长为205nm。结果　地黄苷D回收率为100.6%,RSD为2.1%,8个产地的16份完整药材中地黄苷D的含量为0.137%～0.691%。结论　方法快速、简便、准确,可用于地黄质量控制,建议地黄苷D的含量应不低于0.15%。?     

怀地黄不同主栽品种叶形态特征比较

目的:通过观察怀地黄不同主栽品种叶的形状,非腺毛和气孔器大小、密度等特征,为怀地黄主栽品种的鉴定及优良品种的选育提供依据。方法:用直尺测量叶片的长度和宽度,在扫描电镜下计数不同主栽品种怀地黄叶表面非腺毛和气孔的密度,测量其长度。结果:叶片长度、宽度及长宽比,非腺毛和气孔的长度、密度等,在怀地黄不同主栽品种间具有差异。结论:叶的形状,非腺毛和气孔的密度、长度等叶的形态特征可以作为怀地黄不同品种间鉴别的依据。     

不同种质地黄块根菊花心与非菊花心部位有效成分特征分析

目的:比较沁怀,85-5,北京1号,QH-1,1706,白选6种地黄生育期内菊花心与非菊花心中梓醇,毛蕊花糖苷,地黄苷A,D,益母草苷,多糖等指标性成分的含量,分析不同地黄种质资源菊花心的成分差异及质量特征,为地黄的质量评价及道地性揭示提供科学依据。方法:梓醇、毛蕊花糖苷含量测定参考2015年版《中国药典》;地黄苷A,D及益母草苷含量测定采用HPLC法,Dikma Diamonsil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(4∶96),流速1 mL·min~(-1),检测波长205 nm,柱温30℃,进样量20μL;多糖含量测定采用苯酚-硫酸法。结果:不同种质地黄块根各指标性成分在菊花心与非菊花心部位富集量差异很大。85-5与1706地黄菊花心部位中梓醇含量远高于非菊花心部位,而北京1号与QH-1地黄则是非菊花心部位明显高于菊花心部位;85-5,1706及QH-1地黄中毛蕊花糖苷在菊花心部位中的含量明显高于非菊花心部位,其他3个种质分布相对均匀;沁怀和北京1号地黄块根非菊花心部位中地黄苷A的含量明显高于菊花心部位;85-5,北京1号,1706地黄块根非菊花心部位中地黄苷D的含量均明显高于菊花心中的含量,其他种质差异不大;85-5,白选和1706地黄菊花心与非菊花心部位益母草苷含量差异不大,而北京1号,沁怀,QH-1地黄则为菊花心部位远高于非菊花心部位,差异达2~4倍;6种地黄块根非菊花心部位中的多糖含量明显高于菊花心部位。结论:种质在一定程度上决定了地黄块根次生代谢产物在地黄菊花心与非菊花心部位的积累与分布。     

地黄不同炮制品中梓醇的含量测定研究

目的：测定地黄不同炮制品中梓醇的含量。方法：运用薄层扫描法．采用反射锯齿扫描法测定，薄层色谱条件为：硅胶G薄层板，醋酸乙酯-甲醇-水-醋酸(10：2：0．5：0．5)为展开剂，λs 540nm，λR 650nm。结果：地黄不同炮制品中梓醇的含量差异很大．含量依次为鲜地0．55%．生地0．22％，熟地0．13％。结论：该法简便易行，灵敏度高，重现性好．可用于地黄药材及其制剂的质量控制。     

不同品种地黄中毛蕊花糖苷的动态积累规律变化

目的:对大田生长期间不同品种地黄块根和叶片中的毛蕊花糖苷含量进行测定,研究道地产区不同品种地黄块根和叶片中毛蕊花糖苷的积累规律。方法:以栽培地黄85-5,北京1号,沁怀,金九和白选为材料,于2015年和2016年在河南温县大田栽培,以HPLC检测不同采收期不同品种地黄块根和叶片中的毛蕊花糖苷的含量。并以85-5为材料,于2014年进行遮阴处理,以HPLC检测遮阴后地黄块根和叶片中的毛蕊花糖苷含量。结果:不同品种地黄块根和叶片中毛蕊花糖苷含量有较大差异,块根中毛蕊花糖苷含量较高的2个品种是白选和沁怀,两年内毛蕊花糖苷含量变化分别为0.023%~0.620%和0.018%~0.796%;叶片中毛蕊花糖苷含量较高的品种为85-5和北京1号,毛蕊花糖苷含量变化分别为1.955%~5.968%和0.681%~5.941%。不同发育阶段的地黄叶片中,展开叶和衰老叶较幼嫩叶含有较高的毛蕊花糖苷。遮阴对地黄块根中毛蕊花糖苷含量有促进作用,对叶片中毛蕊花糖苷含量有抑制效应。结论:该研究为毛蕊花糖苷高含量地黄新品种的选育提供实验材料和依据,同时也为明确地黄毛蕊花糖苷积累变化的分子机制奠定基础。     

微波干燥对鲜地黄中地黄苷A,D和益母草苷含量的影响

目的:比较不同微波干燥方法对鲜地黄中地黄苷A,D和益母草苷含量的影响,为地黄产地加工与炮制一体化工艺研究提供参考。方法:采用HPLC测定地黄苷A,D和益母草苷含量,Aichrombond-AQ C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(5∶95),流速1 m L·min-1,柱温30℃,检测波长203 nm,进样量10μL。以冷冻干燥法为参考,考察微波干燥对鲜地黄中指标成分含量的影响。结果:地黄苷A以5 k W微波切3~4 mm片时含量为最高(0.249 mg·g-1),地黄苷D及益母草苷以3 k W微波切1~2 mm片时含量为最高,分别为3.461,6.857 mg·g-1。结论:微波干燥对益母草苷的含量影响最大,对地黄苷D的影响最小;以微波干燥方法来制备鲜地黄饮片具有一定的可行性,对该药材产地加工与炮制一体化有一定参考意义。     

怀药熟地黄地黄苷ARP-HPLC定量及TLC定性评价方法

目的:建立怀药熟地黄中地黄苷A的反相高效液相色谱(RP-HPLC)含量测定法及薄层色谱(TLC)定性鉴别法。方法:采用RP-HPLC法对不同产地样品中地黄苷A成分的含量进行测定,采用TLC法进行定性鉴别。结果:HPLC含量测定地黄苷A在0.336².016μg范围内呈良好线性关系,r=0.999773,平均加样回收率为98.51%,RSD为1.23%(n=6),样品中地黄苷A精密度RSD为1.72%(n=6);采用该方法测定了10批次怀药熟地黄中地黄苷A。结论:所建方法快速、简便、准确,可作为怀药熟地黄中地黄苷A的定量控制方法,并建议怀药熟地黄按干燥品计算,含地黄苷A应不低于0.12%。     

怀地黄营养器官中梓醇的积累动态

目的 揭示梓醇在怀地黄不同营养器官中的积累规律。方法 高效液相色谱法。结果 在怀地黄根、茎和叶3种营养器官中都含有梓醇，但不同器官中梓醇含量有显著差异。其中，茎、叶中梓醇含量较高，块根中梓醇含量较低。在同一营养器官中梓醇积累呈现规律性变化。幼叶梓醇含量低，随着叶发育成熟，其梓醇含量逐渐增高。在块根中梓醇含量随着块根的发育增粗逐渐增高。结论 怀地黄块根有效成分的含量高峰与其产量高峰一致，都在11月初地上部分枯萎时，因此，此时应为怀地黄的适宜采收期，与传统的怀地黄采收期相吻合。叶和茎中也含有梓醇，且含量高于块根，因此，建议对怀地黄地上部分进行综合开发利用。